Université M’Hamed Bougara Boumerdes Faculté des Sciences Département de Biologie L2 S Bio

MSTEV Mme Nemiri

Résumé TD MSTEV

Organisation des animaleries

L’animalerie qui est sensée protégé les animaux de laboratoire doit être conçue selon des
normes internationale. La conception de l’animalerie doit répondre aux besoins de l’animal du
coté confort et bien être.

-L’animalerie doit être battis dans des endroits loin des milieux publiques

-L’animalerie doit être conçue de manière à faciliter le nettoyage et la désinfection.

Pour se faire : -les mures, le plafond, et les surfaces doivent être en matériaux résistants
imperméables, facile à nettoyer et désinfecter à fin d’éviter le développement de certains
parasites, champignons et autres.

-l’animalerie doit contenir plusieurs pièces ou box où sont maintenus les animaux séparément
selon les espèces pour éviter les contaminations, et le stress crée par certaines espèces.

- L’animalerie doit être munie de salles de réception de nouveaux animaux avant de le faire
intégrer dans l’expérimentation, de prélèvement, de manipulation et de stockages d’aliment.

-veiller sur les conditions d’ambiance de l’animalerie en respectant les exigences de chaque
espèce *température ambiante qui est à peu près de 20-24 C0, *éclairage de 12h/jour *
humidité tolérée est de 40-60% *Les pièces doivent être équipées de système de ventilation
pour une meilleure circulation et renouvellement d’air. *l’animalerie doit être équipée d’un
système d’isolation phonique à fin de réduire le stress causé par certaines espèces tel que
l’aboiement des chiens. Les personnel doit se protéger en portant une blouse, une bavette des
gans …etc.

L’éthique de l’expérimentation animale :

Remplacer ; Réduire ; Raffiner.

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Prélèvement d’organe pour étude cyto-histologique

Etape de l’étude histologique

Prélèvement
- Il doit être pratiqué le plus tôt possible après la mort, parfois sur le vivant (biopsie).

Fixation
L’échantillon est fixé dans l’ordre pour préserver les tissus et ralentir la dégradation des
tissus. Liquide fixateur :
Acide acétique, méthanol, Liquide de BOUIN (formol + acide picrique) et le Formol.

Déshydratation
Le but de cette étape est d’éliminer l’eau intracellulaire, pour pouvoir réaliser une coupe
fine. Ceci par passage du prélèvement dans des bains d’alcool de concentrations
croissantes (de l’alcool 50° jusqu’à l’alcool 100°).Cette étape prépare l’inclusion, vu
que la paraffine est hydrophobe.

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Imprégnation
Par le passage du prélèvement dans un liquide intermédiaire afin d’en éliminer les
traces d’alcool absolu. On utilise dans cette étape d’imprégnation le xylène ou le
toluène.

Inclusion
Le milieu d’inclusion utilisé est la paraffine.

Mise en bloc
Après 4 heures d’inclusion, la paraffine liquide est coulée dans un petit moule en métal
«Barres de Leuckart ».

Confection des coupes histologiques

Le passage du bloc de paraffine dans un microtome permet de réaliser des sections de
2 à 5 µm disposées en séries régulières sous forme d’un ruban.

Déparaffinage
Le déparaffinage consiste, comme son nom l’indique, à éliminer la paraffine, c'est-à-
dire le milieu d’inclusion.

Réhydratation
La réhydratation permet l’élimination de la paraffine intracellulaire, en immergeant les
lames dans des bains d’alcool de degrés décroissant

(De l’alcool à 100° jusqu’à l’alcool à 50°).

Coloration

Montage et Observation microscopique

Les coupes colorées sont montées entre lame et lamelle
Une lame histologique prête à être observée au microscope optique.

Etude cytologique

1/Le prélèvement

2/ La fixation est l’étape qui permet de maintenir le tissu dans un état proche de l’état natif.

3/ La post-fixation consiste à utiliser des fixateurs (par exemple le tétroxyde d’osmium et

aldéhydes).

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4/La déshydratation est l’étape qui prépare le tissu à l’étape suivante de l’inclusion.

Elle est réalisée sur des bains d’alcool à concentration croissante (50°,70°,90°,100°).

5/ L’inclusion : Elle se fait dans des matières plastiques qui deviennent très dures
lorsqu’elles polymérisent. Les matières les plus utilisées sont les résines d’époxy (telles que
l’épon ou l’araldite).

6/ L’ultramicrotomisation est l’étape qui permet de découper l’échantillon durci en

tranches ultrafines (environ 50 nm, les coupes ne peuvent dépasser les 0,1 µm).

7/L’augmentation de contraste : est l’étape qui permet de contraster les constituants

cellulaires par l’utilisation d’éléments tels que l’acétate d’uranyle ou le citrate de plomb.
Lorsque les cellules sont fixées au tétroxyde d’osmium, ce fixateur agit aussi comme «
colorant » mais souvent le contraste est renforcé pendant cette étape.

8/ L’observation.

Micrographie de contraste Photo de coloration