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Effet protecteur deLitchi chinoisNanoparticules préparées à l'extrait de peau sur

des lapins infectés expérimentalement parEimeria stiedae

Dina M. Metwally1,* , Afrah F. Alkhuriji2, Ibrahim AH Barakat3, Hanadi B. Baghdadi4,5, Manal

F. El-Khadragy6, Wafa Abdullah I. Al-Megrin6, Abdullah D. Alanazi7 et Fatemah E. Alajmi8

1
Department of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, Zagazig University, Zagazig 44519, Egypt
2
Department of Zoology, College of Science, King Saud University, Riyad 11451, Arabie Saoudite
3
Cell Biology Department, National Research Center, 33 Bohouth St., Dokki, Giza 12622, Egypt Biology
4
Department, College of Science, Imam Abdulrahman Bin Faisal University, Dammam City
31441, Arabie Saoudite
5
Centre de recherche scientifique fondamentale et appliquée, Université Imam Abdulrahman Bin Faisal,
Dammam City 31441, Arabie saoudite
6
Département de biologie, Collège des sciences, Université Princess Nourah bint Abdulrahman,
PO Box 84428, Riyad 11671, Arabie saoudite
7
Département des sciences biologiques, Faculté des sciences et des sciences humaines, Université de
Shaqra, Ad-Dawadimi 11911, Arabie saoudite
8
Département de biologie, Collège des sciences, Université Hafr Al Batin, Hafr Al Batin 39524, Arabie saoudite
* Correspondance : mdbody7@yahoo.com

Résumé simplifié :Le but de cette étude était de déterminer l'efficacité des nanoparticules fabriquées à partir
deLitchi chinoisextrait de pelure sont à traiter la coccidiose hépatique du lapin. Trente-cinq lapins ont été
séparés en sept groupes : lapins infectés, sains, prétraités infectés après deux semaines de traitement avec 10
mg/kgL. chinensisAgNPs biosynthétisés par extrait de peau et lapins post-traités infectés avant traitement avec
Citation:Metwally, DM; Alkhuriji, AF ;
50 mg/kg d'amprolium. Les découvertes ont montré queL. chinensisles AgNP biosynthétisés par extrait de peau
Barakat, IAH ; Baghdadi, HB ; El-
Khadragy, MF; Al-Megrin, WAI; Alanazi,
sont une thérapie nouvelle et sûre pourEimeria stiedaeinfection chez le lapin.

AD ; Alajmi, FE Effet protecteur deLitchi

chinoisNanoparticules préparées à Abstrait:La présente étude a utiliséLitchi chinoisextrait de peau pour synthétiser des nanoparticules d'argent (AgNPs). Cette

l'extrait de peau sur des lapins infectés technique est écologique et peut être réalisée en une seule étape ; ainsi, il a attiré une grande attention pour la biosynthèse des

expérimentalement par Eimeria stiedae. NP. Ici, nous avons biosynthétisé des AgNPs avecL. chinensisextrait de peau et ont examiné leur activité anticoccidienne dans la
Animaux2022,12, 3098. https://doi.org/ coccidiose hépatique du lapin induite parE. stiedaeinfection. Trente-cinq lapins ont été répartis en sept groupes : un groupe sain
10.3390/ani12223098 (G1), un groupe témoin infecté (G2), quatre groupes infectés avant traitement à 10 mg/kgL. chinensisAgNPs biosynthétisés par
extrait de peau (G3, G5) ou 50 mg/kg d'amprolium (G4, G6), et lapins infectés après deux semaines de prétraitement avec 10 mg/

Rédacteur académique : Pablo Diaz

kgL. chinensisAgNPs biosynthétisés à l'extrait d'anguille (G7). Dans cette étude, le pré-traitement et le post-traitement avec les
AgNPs ont produit une réduction substantielle de la production d'oocystes fécaux, des niveaux d'enzymes hépatiques et des
Reçu : 3 octobre 2022
lésions hépatiques histopathologiques par rapport au groupe infecté. En conclusion,L. chinensisles AgNPs préparés avec des
Accepté : 8 novembre 2022
extraits de peau doivent être considérés comme inoffensifs et efficaces dans la guérison de la coccidiose hépatique chez le lapin.
Publié : 10 novembre 2022

Note de l'éditeur :MDPI reste neutre en ce qui

concerne les revendications juridictionnelles dans Mots clés:Eimeria stiedae;Litchi chinois; lapins; activité anticoccidienne
les cartes publiées et les affiliations

institutionnelles.

1. Introduction
Eimeria stiedaeest l'un des protozoaires coccidiens les plus pathogènes chez le lapin domestique (
Droits d'auteur: © 2022 par les auteurs.
Oryctolagus cuniculus), provoquant une coccidiose hépatique sévère, un taux de croissance réduit, une
Licencié MDPI, Bâle, Suisse. Cet
diminution de la conversion alimentaire et une mortalité accrue [1–6]. Les limitations de certains médicaments
article est un article en libre accès
chimiques et promoteurs de poids ont augmenté les troubles digestifs et la survenue de décès chez les lapins.
distribué selon les termes et
Cependant, de nombreuses herbes sont connues pour avoir des effets anticoccidiens et antioxydants chez les
conditions de la licence Creative
lapins et peuvent réduire leur consommation de produits chimiques.7].
Commons Attribution (CC BY) (https://
creativecommons.org/ licenses/by/
Lors de l'examen post-mortem, les lapins atteints de coccidiose hépatique présentent des taches
4.0/). laiteuses sur la surface hépatique et dans tout le parenchyme et une vésicule biliaire hypertrophiée.

Animation als2022,12, 3098. https://doi.org/10.3390/ani12223098 https://www.mdpi.com/journal/animaux

Animaux2022,12,

Des analyses microscopiques ont trouvé différents stades de développement deE. stiedaedans les taches
laiteuses du foie du lapin [6,8]. L'hépatomégalie et l'ascite associée peuvent être détectées chez les lapins
infectés du 21ème au 24ème jour post-infection (PI) [9]. Des indices de santé normaux concernant le
nombre d'hétérophiles et de lymphocytes sont observés chez ces lapins [dix], mais en général, les
pourcentages d'hémoglobine (Hb) et de lymphocytes sont diminuésE. stiedae- lapins infectés. De plus, les
diminutions du nombre de leucocytes, de granulocytes, d'aminotransférase sérique (AST), d'alanine
aminotransférase (ALT) et d'albumine étaient plus sévères.3]. Les changements dans le nombre
différentiel de leucocytes sont de meilleurs marqueurs de la santé que les changements dans le
nombre total de globules blancs lors de l'étude des maladies infectieuses chez les lapins.11]. En général,
les études visant à déterminer l'efficacité des composés anticoccidiens contre la coccidiose hépatique
du lapin évaluent les symptômes cliniques ; nombre d'oocystes fécaux ; gain de poids corporel (BWG);
lésions hépatiques macroscopiques et histopathologiques ; modifications des paramètres
immunologiques, biochimiques ou antioxydants [8,9]. Des études d'immunité sur la coccidiose du
lapin ont déjà été menées [12,13]. Une étude a montré que la population de lymphocytes T CD8+ dans
l'intestin grêle augmentait chez les lapins infectés parEimeria intestinalemais nonEimeria flavescens[13].
La principale réponse immunitaire adaptative à l'infection par Eimeria chez le lapin est une
immunité à médiation cellulaire plutôt qu'une réaction d'anticorps [12]. La présente étude a examiné
l'efficacité de l'utilisation de nanoparticules d'argent (AgNPs) biosynthétisées avecL. chinensisdans le
traitement de lapins infectés expérimentalement parE. stiedaepar rapport au traitement de lapins
infectés par l'amprolium.
L'utilisation continue et l'abus de médicaments anticoccidiens ont conduit au développement de parasites
Eimeria résistants aux médicaments. Cependant, l'utilisation de plantes médicinales sûres et efficaces peut réduire les
coûts des intrants des agriculteurs, préserver les ressources et protéger la santé animale.12–14].
Des études scientifiques sur les plantes médicinales ont conduit à l'utilisation de plusieurs métabolites
phénoliques et flavonoïdes dans le traitement des maladies parasitaires protozoaires. Les avantages, tels que la
sécurité, les effets secondaires nocifs limités et le coût abordable, ont plaidé pour l'utilisation d'extraits naturels
comme médicaments anticoccidiens efficaces.15,16].
Ici, nous rapportons la capacité des AgNPs biosynthétisés parL. chinensis(L. chinensisSonner)
extrait pour traiterE. stiedaeinfection dans un modèle in vivo.
L'écorce de litchi (péricarpe), bien que non comestible, est une partie importante du fruit qui
peut être une source de composés biologiquement intéressants. En particulier, le péricarpe contient
des flavonoïdes et des anthocyanes bioactifs. Les principaux flavonoïdes contenus dans cette partie du
fruit sont la proanthocyanidine B2, la proanthocyanidine B4 et l'épicatéchine ; cyanidine-3-
rutinoside, cyanidine-3-glucoside, quercétine-3-rutinoside et quercétine-3-glucoside sont des
anthocyanines importantes isolées dePéricarpe de litchi[17–19].
Les flavonoïdes et les anthocyanes présentent des propriétés antioxydantes et peuvent exercer des effets
anticoccidiens. Litchi chinoisa de nombreux effets pharmacologiques et biologiques, notamment des
caractéristiques hypoglycémiques, hypolipidémiques, antioxydantes, antiparasitaires, anticancéreuses et anti-
inflammatoires [1].20].
La synthèse d'AgNPs utilisant des extraits de plantes est apparue comme une approche
synthétique alternative. Il existe plusieurs raisons d'intérêt pour les méthodes vertes de biosynthèse des
AgNPs, notamment la simplicité et la rentabilité, la production de grandes quantités, l'innocuité et le
respect de l'environnement.21–23].
En conséquence, ce travail visait à évaluer le rôle protecteur des AgNPs préparés à l'aide de
L. chinensisextrait en tant que nouveau médicament anticoccidien dans un modèle d'infection expérimentale in vivo.

2. Matériels et méthodes
2.1. Animaux
Avant l'expérience, 35 lapins domestiques (O. cuniculus, race Baladi) des deux sexes
Des animaux âgés de 1,5 à 2,5 mois et pesant de 1,1 à 1,5 kg ont été achetés sur les marchés locaux de
Riyad et acclimatés pendant deux semaines aux environs du laboratoire. Pendant ces deux semaines, un
examen fécal a été effectué pour détecter d'éventuels parasites internes (helminthes et protozoaires). Les
lapins ont eu libre accès à l'eau et à la nourriture, et les aliments granulés ne comprenaient aucun
médicament. Les animaux n'ont reçu aucun médicament avant l'essai. Les animaux étaient
Animaux2022,12,

logés dans des cages en acier inoxydable (une par cage), et la température ambiante (25-28 ◦C) et le cycle
lumineux (14 h de lumière/jour) étaient strictement encadrés. Avant l'infection parE. stiedaeet un traitement
à base de plantes, un échantillon de sang (2 ml) a été prélevé dans la veine marginale de l'oreille de chaque
lapin et une enquête fécale a été effectuée. Après trois jours consécutifs de résultats négatifs en utilisant la
technique de flottation par concentration, les échantillons fécaux de lapin ont été jugés exempts
d'helminthes et de protozoaires (oocystes de coccidies) [24].

2.2. Préparation du matériel végétal et de l'extrait

Trois kilogrammes de fraisL. chinensisLes fruits de Sonn ont été achetés dans un supermarché de
Riyad, en Arabie saoudite. Le Département de botanique et de microbiologie, Collège des sciences,
Université Helwan, Le Caire, Égypte, a validé l'identification de la plante. Pour éliminer les particules de
poussière, le fruit a été rincé plusieurs fois avec de l'eau déminéralisée. Alors,L. chinensisL'extrait de peau
de Sonn a été produit en utilisant la technique standard décrite dans [25].

2.3. Composés phénoliques totaux

La teneur totale en composés phénoliques duL. chinensisextraits a été déterminée en utilisant la

technique de Folin-Ciocalteu telle que décrite précédemment par Abdel Moneim [26]. En bref, 0,1 ml
d'extrait d'échantillon a été combiné avec 2,5 ml d'eau distillée dans un tube à essai, puis 0,1 ml de réactif
Folin – Ciocalteu non dilué (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) a été ajouté. Après avoir soigneusement
mélangé la solution, on la laisse reposer pendant 6 minutes avant d'ajouter 0,5 mL d'une solution de
carbonate de sodium à 20 %. La solution a été équilibrée pendant 30 min à température ambiante (20 ◦C)
pour développer la couleur, et l'absorbance de la solution a été mesurée à 760 nm avec un
spectrophotomètre (spectrophotomètre UV PD 303, Apel Co., Limited, Saitama, Japon). Un échantillon à
blanc a été préparé en utilisant 0,1 ml de méthanol au lieu de l'extrait. La valeur mesurée a été comparée
à une courbe d'étalonnage construite avec des solutions d'acide gallique, et les résultats sont donnés en
mg d'acide gallique par gramme d'extrait sec.

2.4. Flavonoïdes totaux

La teneur totale en flavonoïdes duL. chinensisl'extrait a été déterminé par la méthode

colorimétrique au chlorure d'aluminium publiée par Abdel Moneim [26]. Cinquante microlitres de l'extrait
ont été combinés avec 4 ml d'eau distillée dans un tube à essai, suivis de 0,3 ml de NaNO à 5%2solution
et 0,3 mL d'AlCl à 10 %3·6H2O. Après 6 min, 2 mL de NaOH 1 mol/L ont été ajoutés au mélange, et le
volume total de la solution a été porté à 10 mL en utilisant de l'eau distillée. Après repos pendant 15
minutes supplémentaires, l'absorbance à 510 nm a été mesurée. La teneur totale en flavonoïdes a été
calculée à l'aide d'une courbe d'étalonnage et est exprimée en mg de rutine par gramme de poids sec.

2.5. Activité de piégeage des radicaux 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle (DPPH)

La capacité duL. chinensisextrait pour piéger les radicaux DPPH a été déterminé en utilisant
la technique de Karakaya et Akillioglu [27]. Une solution radicale DPPH fraîche (0,08 mM) dans du
méthanol a été produite et 950 ml de solution DPPH ont été combinés avec 50 ml d'extrait et
incubés pendant 5 min. Cinq minutes plus tard, l'absorbance du mélange a été mesurée à 515 nm
(spectrophotomètre UV PD 303, Apel Co., Limited, Saitama, Japon). L'activité antioxydante (AA)
est exprimée en pourcentage de suppression des radicaux DPPH à l'aide de l'équation AA = 100 –
(100(A sample/A control)), où A sample est l'absorbance de l'échantillon à t = 5 min, et A contrôle
est l'absorbance du contrôle.

2.6. Activité de piégeage des radicaux 2,4,6-Tri(2-Pyridyl)-s-triazine (ABTS)

L'ABTS+test a été réalisé selon la méthode de Gouveia et Castilho [16]. Cinquante millilitres d'ABTS
2 mM+solution a été mélangée avec 200 L de solution de persulfate de potassium 70 mM pour faire
l'ABTS+ solution radicale. Ce mélange a été stocké dans l'obscurité pendant 16 heures à température
ambiante et a été stable pendant deux jours. L'ABTS +La solution a été diluée avec une solution saline
tamponnée au phosphate (PBS) à pH 7,4 pour chaque analyse jusqu'à une absorbance initiale de 0,700
à 0,021 à 734 nm. Pour chaque série d'analyses, cette solution était fraîchement produite. Un
Animaux2022,12,

une aliquote de 100 L de la solution méthanolique a été combinée avec 1,8 mL d'ABTS+solution
pour évaluer l'activité de piégeage des radicaux, et la diminution de l'absorbance à 734 nm
(spectrophotomètre UV PD 303, Apel Co., Limited, Saitama, Japon) a été enregistrée pendant 6
min. Comme déterminé à l'aide d'une courbe d'étalonnage Trolox, les résultats sont présentés
en équivalents mol Trolox par gramme d'extrait sec (mol Trolox/g).

2.7. Pouvoir antioxydant réducteur ferrique (FRAP)

Le dosage FRAP a été réalisé selon la procédure d'Abdel Moneim [28]. Le réactif FRAP était
composé de 300 mM de tampon acétate avec un pH de 3,6, 10 mM de 2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine
(TPTZ) dans 40 mM HCl et 20 mM FeCl3dans un rapport de 10:1:1 (v/v/v). Dans un tube à essai,
trois millilitres de réactif FRAP ont été bien combinés avec 100 L deL. chinensisextraire et secouer à
37◦C pendant 30 min au bain-marie. Après 4 min de réduction de ferrique-TPTZ en complexe
ferreux, l'absorbance a été mesurée avec un spectrophotomètre UV-vis (spectrophotomètre UV PD
303, Apel Co., Limited, Saitama, Japon) à 593 nm. Les résultats sont donnés en moles de Trolox
par gramme de matière séchée (moles de Trolox/g).

2.8. Synthèse de nanoparticules d'argent (AgNPs)

BrutL. chinensisl'extrait d'écorce (0,25 g) a été soigneusement mélangé avec 50 ml d'eau distillée.
Pour optimiser la synthèse des AgNPs dans la plage de pH de 5 à 7, une aliquote de solution de nitrate
d'argent 0, 1 mM a été ajoutée. La taille moyenne des NP d'argent a été déterminée à l'aide d'un
Zetasizer (série Nano, HT Laser, ZEN 3600, Malvern Instruments, Malvern, Royaume-Uni), tandis que
la microscopie électronique à transmission (TEM ; JEM-1011, JEOL, Tokyo, Japon) avec une
accélération tension de 100 kV a été utilisée pour déterminer la forme, la taille et la morphologie des
AgNPs synthétisés.

2.9. Analyse biochimique

Au 28ème jour PI, des échantillons de sang (n = 7) ont été prélevés dans les veines auriculaires de
chaque lapin. La mesure colorimétrique des marqueurs d'enzymes hépatiques a été effectuée sur les
échantillons de sérum séparés à l'aide de kits disponibles dans le commerce (Sigma-Aldrich Co. St.
Louis, MO, USA) conformément aux instructions du fabricant. Les taux sériques d'AST et d'ALT ont été
déterminés en utilisant la méthode établie par Reithman et Frankel en 1957 [29].

2.10. Conception expérimentale

Trente-cinq lapins domestiques ont été séparés en 7 groupes de 5 lapins chacun (tableau1).
Le premier groupe de lapins (G1) a servi de groupe témoin négatif ; ces lapins n'ont été ni infectés
ni traités. Les lapins du second groupe (G2) ont été inoculés par voie orale avec 5×dix4oocystes d'un
isolat de champ local deE. stiedaepar lapin et a servi de groupe témoin positif infecté non traité.
Les lapins du troisième groupe (G3) ont été infectés avec la même dose deE. stiedaepar lapin
comme les lapins G2, mais ils ont également reçu 10 mg/kg PC des AgNPs biosynthétisés avecL.
chinensis[30]. Le traitement a commencé le jour 10 PI et a duré trois jours, suivis de quatre jours de
relaxation, de trois jours de traitement et de dix jours de tests fécaux quotidiens. Les lapins du
quatrième groupe (G4) ont reçu la même dose deE. stiedaepar lapin comme les lapins G2, mais ils
ont également reçu de l'amprolium à une concentration de 50 mg/kg de poids corporel. Le
traitement a commencé le jour 10 PI et a duré trois jours, suivis de quatre jours de relaxation, de
trois jours de traitement et de dix jours de tests fécaux quotidiens. Les lapins du cinquième groupe
(G5) ont été infectés et traités avec des AgNPs biosynthétisés avecL. chinensis[31] aux mêmes
doses que les lapins G3, mais le traitement a débuté au jour 18 PI et a suivi le même protocole. Les
lapins du sixième groupe (G6) ont été infectés et traités avec de l'amprolium aux mêmes doses que
les lapins G4, mais le traitement a commencé au jour 18 PI et a suivi le même protocole. Les lapins
du septième groupe (G7) ont été infectés et traités avec des AgNPs biosynthétisés avec
L. chinensisaux mêmes doses que les lapins G3, mais le traitement a été administré pendant trois jours
en commençant le 14e jour avant l'infection et poursuivi pendant 28 jours PI.
Animaux2022,12,

Tableau 1.La conception des groupes expérimentaux.

Jour Groupes

G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7
Des lapins ont été infectés par voie oraleE. stiedaeoocystes suivis quotidiennement
Jour 1
examen fécal jusqu'à l'apparition d'oocystes dans les matières fécales Lapins reçus
AgNPs

Jour 10 Commencer le traitement Commencer le traitement

quotidiennement pour
avec AgNPs pour à l'amprolium 14 jours
3 jours pour 3 jours

Jour 12 Infection buccale

suivie par
fécale quotidienne

Arrêter le traitement pendant 4 jours avec un quotidien examen pour

Jour 14 Fécale examen fécal 18 jours pour le
Examen fécal quotidien
examen présence ou
absence de
oocystes
Commencer Commencer

traitement traitement
Jour 16
avec AgNPs à l'amprolium
Lapins en bonne santé pour 3 jours pour 3 jours
(négatif Fécale
contrôle Arrêt Arrêt
examen
groupe) Euthanasie, traitement traitement
Commencer le traitement Commencer le traitement
examen de avec les à l'amprolium,
Jour 18 avec AgNPs pour à l'amprolium
le foie et AgNPs, commencer quotidiennement
3 jours pour 3 jours
intestin commencer les selles quotidiennes examen fécal
examen pour pour 10 jours
10 jours

Arrêtez le traitement et continuez une selle

Fécale
Jour 21 examen pendant 4 jours pour le
examen
présence d'oocystes
Examen fécal quotidien

Jour 25 Commencer le traitement Commencer le traitement

Fécale
avec AgNPs pour à l'amprolium
examen
3 jours pour 3 jours

Arrêter le traitement, Arrêter le traitement,

Fini commencer les selles quotidiennes commencer les selles quotidiennes Fécale
Jour 28 Euthanasie
examen pour examen pour examen
10 jours 10 jours

Fécale
Fécale Fécale
Jour 32 examen et
examen examen
euthanasie

Fécale Fécale
Jour 37 Euthanasie examen et examen et
euthanasie euthanasie

Tous les groupes ont été surveillés quotidiennement pour les symptômes cliniques et la mort. Le BW
moyen et le BWG ont été mesurés à 0 et 28 jours PI. Aux jours 0, 21 et 28 PI, les matières fécales ont été
recueillies pour déterminer le nombre d'oocystes par gramme (OPG). Des échantillons de sang ont été prélevés
sur les lapins (n = 5) à 28 jours PI pour analyse hématologique. De plus, les lapins des groupes expérimentaux
(n = 5) ont été euthanasiés pour les mesures du poids du foie, les calculs du poids relatif du foie et l'évaluation
des lésions hépatiques macroscopiques. De plus, des tissus hépatiques ont été prélevés pour analyse
histologique. Tous les lapins ont été éliminés sans cruauté à la fin de l'expérience en utilisant du CO 2- la
privation d'oxygène médiée. Tous les paramètres ont été comparés dans les sept groupes.

2.11. Infection expérimentale de lapins par E. stiedae isolée et identifiée

LeE. stiedaeLa souche de terrain a été obtenue à partir de lapins naturellement infectés avec des taches
laiteuses inégales d'un blanc jaunâtre réparties sur leur tissu hépatique. Les oocystes ont été collectés, mesurés
pour la concentration, purifiés et sporulés en utilisant la procédure de flottation rapportée précédemment [32].
Les oocystes sporulés ont été conservés à 4◦C dans le dichromate de potassium (2,5 %).
Les lapins ont été infectés en administrant la suspension par voie orale par une sonde gastrique à
une dose de 5×dix4oocystes pour chaque lapin [33].

2.12. Efficacité de l'extrait de peau de L. chinensis

2.12.1. Signes cliniques, lésions post-mortem et taux de mortalité
Comme moyen le plus essentiel d'évaluer l'efficacité du produit, les lapins ont été évalués deux fois
par jour PI jusqu'à la fin de l'essai (28 jours PI) pour enregistrer les principaux symptômes cliniques,
Animaux2022,12,

lésions post-mortem et les taux de mortalité associés à la coccidiose hépatique, et ces

paramètres ont été comparés dans tous les groupes.

2.12.2. Poids corporel (BW) et poids relatif du foie (RLW)

Les PC moyens des lapins ont été calculés au début (0 jours PI) et à la fin de l'essai (28
jours PI). A 28 jours PI, le gain de poids corporel (BWG) a également été calculé. Le PC
moyen des lapins de chaque groupe a été déterminé au jour 0 avant l'infection expérimentale.
Les poids des lapins ont été utilisés pour calculer le PC moyen et le PC moyen dans chaque
groupe en soustrayant la valeur du PC à 0 jours PI de la valeur équivalente à 28 jours PI [33–
35]. De plus, les foies des lapins euthanasiés (n = 5 par groupe) ont été obtenus pour peser
et déterminer les poids relatifs des foies, comme décrit précédemment par Gómez-Bautista et
al. [34].

2.12.3. Scores bruts des lésions hépatiques

Pour mesurer le succès du traitement à base de plantes, la gravité de chaque lésion hépatique
macroscopique causée parE. stiedael'infection a été notée comme décrit par Peeters et Geermos [35].
Des scores allant de 0 à +4 ont été attribués.

2.12.4. Nombre d'oocystes fécaux (FOC)

Les échantillons fécaux ont été obtenus à partir de lapins infectés pour la détection des oocystes
d'Eimeria au début de l'expérience (0 jours PI) et 21 à 28 jours PI. A chaque jour choisi, 10 boulettes
fécales fraîchement expulsées ont été déposées dans un sac de collecte (une pour chaque groupe) et
pesées le matin (10h00). La technique de flottation a été utilisée pour concentrer les échantillons et le
nombre d'oocystes d'Eimeria a été compté. La méthode sensible de McMaster [36,37] a été utilisé pour
déterminer le nombre d'oocystes par gramme (OPG) dans les matières fécales, et le % de réduction
des oocystes a été calculé [38] comme suit:

Réduction% = OPG du groupe infecté−OPG du groupe traité/OPG du groupe infecté×100

2.12.5. Histopathologie et notation des lésions

A 28 jours PI, les tissus hépatiques (n = 5 par groupe) ont été prélevés pour évaluation histologique.
Conformément aux bonnes pratiques, les échantillons ont été examinés à l'aveugle. Les tissus ont été fixés dans
du formaldéhyde à 10 % et colorés à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E) sur des coupes incluses en paraffine [39].
Les diapositives et les photos ont été capturées à l'aide d'un microscope Nikon à un grossissement de 400 ×. Les
coupes de tissu hépatique de tous les groupes expérimentaux ont été examinées histopathologiquement et
notées pour les lésions. Des scores allant de 0 à +5 ont été attribués.

2.13. Analyses statistiques

Les données de performance de croissance collectées ; nombre d'oocystes fécaux ; et les valeurs
des paramètres biochimiques, antioxydants et hématologiques ont été analysées à l'aide de tests F et du
logiciel SPSS (v. 20.0, IBM SPSS Inc., Chicago, IL, États-Unis) pour produire des valeurs moyennes, des
erreurs standard etpvaleurs [40]. Les scores histologiques des lésions hépatiques ont été analysés
statistiquement à l'aide d'une analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA), suivie du test de
comparaison multiple de Tukey pour les comparaisons par paires. Dans le modèle expérimental, chaque
groupe expérimental a été comparé au groupe témoin et à tous les autres groupes.

3. Résultats
3.1. Déterminations des teneurs totales en phénols et flavonoïdes dans l'extrait de L. chinensis
Les teneurs totales en composés phénoliques et flavonoïdes présents dans l'extrait étudié
sont présentées dans (tableau2) et ont été trouvés à 10,457±0,843 mg d'acide gallique/g et 0,819±
0,045 mg de rutine/g, respectivement. De plus, les résultats ont révélé que l'extrait a une puissante
activité de piégeage des radicaux libres. Les résultats des tests DPPH, ABTS et FRAP étaient de
39,91±1,86, 6,887±0,053 et 0,375±0,0033µmol Trolox/g, respectivement.
Animaux2022,12,

Tableau 2.Déterminations expérimentales des teneurs totales en composés phénoliques et flavonoïdes dans le
L. chinensis extrait et les résultats des tests de capacité antioxydante (ABTS, DPPH et FRAP).

Paramètre Moyenne±Dakota du Sud

Composés phénoliques totaux (mg eq. acide gallique/g échantillon) 10.457±0,843

Flavonoïdes totaux (mg éq. rutine/g échantillon) 0,819±0,045
DPPH (%) 39,91±1,86
ABTS (µmol éq. Trolox/g 6.887±0,053
échantillon) FAB (µmol éq. Trolox/g 0,375±0,003
échantillon)

Chiffre1représente la taille moyenne des AgNPs calculée par diffusion dynamique de la lumière
avec un équipement Zetasizer (ZEN 3600, Malvern, Royaume-Uni). Le profil de distribution de taille de
L. chinensisavec AgNPs a été déterminée en utilisant cette technique, et la taille a été
déterminée à 91,38 nm. Ce résultat a démontré que les NP avaient une distribution de taille
homogène et une variation sans agglomération, comme en témoigne l'émergence d'un pic
unique. De plus, l'image TEM (Figure2) a révélé que la majorité des AgNPs avaient une
morphologie sphérique. La couleur des AgNPs dans la solution aqueuse n'a pas changé
indiquant leur stabilité.

Figure 1.Un Zetasizer a été utilisé pour déterminer la taille moyenne des AgNPs biosynthétisés avec
L. chinensisextrait.
Animaux2022,12,

Figure 2.Image TEM des AgNP résultants.

3.2. Effets des différents traitements sur les symptômes cliniques, les lésions post-mortem et le taux de mortalité

Tout au long de l'expérience, il n'y a eu aucun symptôme clinique chez les lapins des groupes
contrôle (G1) et infectés traités (G3-G7) ; les animaux ont bien mangé et n'ont montré aucun signe
de diarrhée. Les lapins du groupe infecté non traité (G2) ont présenté divers symptômes cliniques à
28 jours PI, notamment une perte d'appétit et un pelage rugueux (Figure3a), et la diarrhée (Figure3
b). L'autopsie n'a révélé aucune lésion macroscopique identifiable chez les lapins du groupe témoin
(G1). Les foies de lapins infectés non traités (G2) étaient considérablement hypertrophiés, avec des
voies biliaires dilatées et des nodules de couleur jaune à blanche de différentes tailles sur la
surface du foie (Figure3c). Il n'y avait pas de lésions macroscopiques sur le foie des lapins dans les
groupes de traitement infectés (G3-G7).

Figure 3.Lapins domestiques infectés par la coccidiose hépatique (G2) : (un) pelage rugueux ; (b) diarrhée (flèche noire) ;
(c) nodules irréguliers blanc jaunâtre de tailles variables à la surface du tissu hépatique (flèche blanche).

3.3. Effets des différents traitements sur le poids corporel et le poids relatif du foie
Tableau3révèle des différences significatives entre le groupe infecté et les autres groupes
expérimentaux. La valeur moyenne des oocystes était significativement plus élevée tous les jours dans ce
groupe, et la moyenne nunombre d'oocystes était de 110,40±1,72 au jour 28 (p≤0,05). Alors que le
groupe expérimentals ne différaient pas significativement du groupe témoin ou entre eux , le
traitement AgNPs au jour 10 avait les valeurs moyennes les plus basses, et le nombre moyen d'oocystes
Animaux2022,12,

était plus petit (0,40±0,24) (99,64 %) au jour 28. Les valeurs moyennes de réduction des ovocytes étaient
significativement plus élevées aux jours 27 et 28 dans chaque groupe expérimental, et la valeur moyenne
de tous les jours était la plus élevée dans le groupe protégé par rapport à celles des autres groupes
expérimentaux. . À l'exception des jours 27 et 28, les valeurs moyennes de réduction des oocystes
variaient de 85,77±1,13 (83,69 %) le 21e jour dans le groupe amprolium et le jour 18 à 100,00 (100 %)
tous les jours dans le groupe protégé.

Tableau 3.Effets des différents traitements sur le nombre d'oocystes/gram fèces (OPG) et pourcentage de
réduction (%) chez les lapins infectés parE. stiedae.

Traitement Jour
OPG Réduction des oocystes (moyenne±SE) (%)

Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 0.0±0.0k -
Jour 22 0.0±0.0k -
Jour 23 0.0±0.0k -
Contrôle négatif
Jour 24 0.0±0.0k -
Jour 25 0.0±0.0k -
Jour 26 0.0±0.0k -
Jour 27 0.0±0.0k -
Jour 28 0.0±0.0k -
Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 65,00±1.4F -
Jour 22 73,00±1.14e -
Jour 23 88,80±0,66d -
Témoin infecté Jour 24 94,00±1.14CD -
Jour 25 95,80±1.28CD -
Jour 26 98,80±1.02avant JC -
Jour 27 105.20±1.02un B -
Jour 28 110.40±1,72un -
Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 7,80±0,37hijk 87,98±0,62Je suis(88.00)

Jour 22 7h40±0,51hijk 89,83±0,78cl(89.86)

Jour 23 6h40±0,51hijk 92,80±0,55ghij(92.79)
Traité avec AgNPs au jour 10
PI Jour 24 5.20±0,58hijk 94,49±0,58efg(94.47)
Jour 25 4,80±0,58hijk 94,99±0,60efg(94,99)
Jour 26 3,80±0,49hijk 96.16±0,49cde(96.15)
Jour 27 1,80±0,37hijk 98,28±0,37abc(98.29)
Jour 28 0,40±0,24jk 99,63±0,23un B(99.64)
Animaux2022,12,

Tableau 3.Suite.

Traitement Jour
OPG Réduction des oocystes (moyenne±SE) (%)

Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 9h20±0,58hijk 85,77±1.13Non(85.85)
Jour 22 9.00±0,71hijk 87,64±1.05mn(87.67)
Jour 23 7.20±0,58hijk 91,90±0,64hijk(91.89)
Traité à l'amprolium au jour 10 PI Jour 24 6,80±0,58hijk 92,78±0,57hijk(92.77)
Jour 25 6h40±0,51hijk 93,32±0,52fghijk(93.32)
Jour 26 5.20±0,37hijk 94,55±0,37efg(94.53)
Jour 27 2,60±0,24hijk 97,52±0,25bdc(97.53)
Jour 28 1.20±0,49ijk 98,90±0,45un B(98.91)
Jour 0 0.0±0.0kk -
Jour 21 10.00±0,45Salut 84,57±0,83op(84.62)
Jour 22 9.60±0,24hij 86,83±0,48mn(86.85)
Jour 23 7,80±0,37hijk 91,20±0,48jk(91.22)
Traité avec AgNPs au jour 18 PI Jour 24 6h40±0,93hijk 93.16±1.04ghij(93.19)
Jour 25 6.20±0,37hijk 93,52±0,42fghi(93.53)
Jour 26 5.20±0,73hijk 94,75±0,73efg(94.74)
Jour 27 2,60±0,60hijk 97,51±0,59bdc(97.53)
Jour 28 1,00±0,45ijk 99.08±0,41un B(99.09)
Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 9h20±0,58hijk 85,77±1.13Non(83,69)
Jour 22 9.00±0,71hijk 87,64±1.05mn(87.67)
Jour 23 7.20±0,58hijk 91,90±0,64hijk(91.44)
Traité à l'amprolium au jour 18 PI Jour 24 6,80±0,58hijk 92,78±0,57hijk(93.40)
Jour 25 6h40±0,51hijk 93,32±0,52fghijk(93.95)
Jour 26 5.20±0,37hijk 94,55±0,37efg(95.55)
Jour 27 2,60±0,24hijk 97,52±0,25bdc(97.91)
Jour 28 1.20±0,49ijk 98,90±0,45un B(99.46)
Jour 0 0.0±0.0k -
Jour 21 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Jour 22 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Jour 23 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Protégé avec AgNPs Jour 24 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Jour 25 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Jour 26 0.0±0.0k 100,00±0,00un(100)
Jour 27 1.40±0,60hijk 98,66±0,58un B(98.67)
Jour 28 1,60±0,51hijk 98,52±0,48un B(98.55)
Valeurs moyennes avec différentes lettres en exposant (a–p) dans la même colonne étaient significativement différents àp≤0,05.
Animaux2022,12,

Tableau4montre qu'il n'y avait pas de différences significatives dans le poids corporel le
premier jour et le poids relatif du foie (p≤0,05) entre les traitements expérimentaux. Cependant, les
paramètres restants ont montré des variations substantielles en fonction du traitement
expérimental. Le traitement avec AgNPs au jour 10 s'est avéré être le meilleur traitement
expérimental, avec le poids corporel moyen le plus élevé au jour 28 (1934,00±42,50) et BWG
(626,00
±45.56). Le traitement avec AgNPs au jour 10 a également montré un poids moyen du foie (64,56±
0,85) qui ne différait pas de celle des autres groupes de traitement expérimental. Le poids moyen
du foie était significativement plus élevé dans le groupe infecté (105,10±0,55), suivi des groupes
expérimentaux, et enfin du groupe témoin négatif (35,30±0,26). Tableau4ne montre également
aucune différence significative entre les moyennes des trois traits susmentionnés (BW au jour 28,
BWG et poids du foie) dans tous les groupes de traitement expérimentaux, à l'exception des AgNPs
du groupe de traitement au jour 10 àp≤0,05.

Tableau 4.Effets des différents traitements sur le poids corporel moyen (BW), le gain de poids corporel (BWG), le
poids du foie (LW) et le poids relatif du foie (RLW) des lapins normaux, infectés et traités.

Traitement PC (g) Jour 1 PC (g) Jour 28 BWG (g) LW (g) RLW (g) (%)
Contrôle négatif 1240.00±25.05 1636.00±25.17avant JC 396,00±26.57b 35h30±0,26c 1,47±0,34c(1.47)
Témoin infecté 1345.00±54,85 1520.00±64,29c 175,00±13.23c 105.10±0,55un 6,73±0,60un(6.73)
Traité avec AgNPs sur
jour 10 PI 1308.00±16.85 1934.00±42,50un 626,00±45,56un 64,56±0,85b 3.07±0,48b(3.07)

Traité à l'amprolium
au jour 10 IP 1295.00±19.88 1687.00±39,93avant JC 392,00±23.54b 63.16±2.05b 3,56±0,70b(3.56)

Traité avec AgNPs sur

jour 18 PI 1236.00±17h49 1660.00±79,69avant JC 424,00±89,92b 65,62±0,81b 4.06±0,46b(4.06)

Traité à l'amprolium
au jour 18 PI 1261.00±16.91 1744.00±81.15b 483,00±69,64un B 66,74±1,70b 3,98±0,25b(3,98)

AgNPs protégés 1250.00±31.46 1620.00±46,80avant JC 370,00±31.46b 62,98±1,47b 3.62±0,41b(3.62)

Valeurs moyennes avec différentes lettres en exposant (un, b, c) dans la même colonne étaient significativement différents àp≤0,05.

Les valeurs moyennes en pourcentage du RLW ont révélé une différence significative entre le
groupe infecté, le groupe témoin négatif et les autres groupes expérimentaux. La valeur moyenne du
pourcentage de RLW était significativement plus élevée dans le groupe infecté et significativement plus
faible dans le groupe témoin négatif.
Concernant le score de lésion, il y avait une différence significative de score de lésion
entre tous les groupes de traitement et le groupe témoin négatif et entre le groupe protégé et
tous les groupes expérimentaux, sauf le groupe infecté. En revanche, il n'y avait pas de
différence significative entre le score lésionnel du groupe infecté et ceux de tous les groupes
de traitement, sauf le groupe protégé. L'analyse des traits de lésions macroscopiques a
confirmé que le traitement avec des AgNPs au jour 10 était le meilleur traitement (2,4±1,5), car
cette valeur différait significativement (p≤0,05) de celle du groupe infecté (35,0±14h35). Bien que
les résultats des lésions macroscopiques des lapins recevant le traitement aux NP au jour 10 ne
différaient pas significativement des résultats des lapins recevant les autres traitements
expérimentaux, ils avaient la moyenne la plus faible (tableau5).
Animaux2022,12,

Tableau 5.Effet des différents traitements sur les valeurs moyennes du score lésionnel, des lésions macroscopiques et du taux de mortalité.

Traitement Score de lésion Lésions macroscopiques Taux de mortalité (%)

Contrôle négatif 0.0±0.0C 0.0±0.0B 0/5 (0.0)

Témoin infecté 2.40±0,98UN B 35,00±14h35UN 2/5 (40)
Traité avec AgNPs au jour 10 PI 2,00±0,00UN 2.4±1.5B 0/5 (0.0)
Traité à l'amprolium au jour 10 PI 2,00±0,00UN 4.4±2.23B 0/5 (0.0)
Traité avec des AgNPs au jour 18 PI 2,00±0,00UN 4.8±0,66B 0/5 (0.0)
Traité avec de l'amprolium au jour 18 PI 2,00±0,00UN 3.4±1,47B 0/5 (0.0)
Protégé avec AgNPs 1,00±0,00B 0.0±0.0B 0/5 (0.0)

Valeurs moyennes avec différentes lettres majuscules en exposant (A, B, C) dans la même colonne étaient significativement différents àp≤0,05.

3.4. Effets des différents traitements sur les lésions histopathologiques

Les échantillons du groupe témoin négatif (G1) présentaient des structures tissulaires normales des
hépatocytes, de la zone porte et des voies biliaires au jour 28 PI (Figure4un). Les échantillons du groupe
infecté non traité (G2) ont montré différentsE. stiedaestades de développement (macrogamétocytes,
microgamétocytes et oocystes commençant à se former) postérieurs aux noyaux des cellules épithéliales,
et une éosinophilie modérée dans les cellules sous-épithéliales a également été observée (Figure4avant
JC). Les lésions des lapins infectés parE. stiedaeet traités avec des AgNPs biosynthétisés avecL.
chinensisà une dose de 10 mg/kg de poids corporel au jour 10, les IP (G3) ont été examinés avant et
après le traitement. Avant le traitement, les premiers stades de développement deE. stiedae(peut-être des
schizontes précoces) en arrière des noyaux des cellules épithéliales (ainsi que certaines antérieures aux
noyaux), une éosinophilie dans les cellules sous-épithéliales et une muqueuse épithéliale saine (Figure4d)
ont été observées. Après traitement, l'hyperplasie de certaines cellules épithéliales et l'absenceE. stiedae
stades de développement sont présents (Figure4e). De plus, les lésions des lapins traités avec de
l'amprolium (50 mg/kg de poids corporel) au jour 10 PI ont été observées. Avant le traitement, infiltration
par divers stades de développement deE. stiedae(peut-être des trophozoïtes) en arrière des noyaux, une
desquamation de certaines cellules épithéliales et une infiltration éosinophile dans les cellules sous-
épithéliales ont été trouvées (Figure4F). Après le traitement, quelquesE. stiedaedes trophozoïtes étaient
présents en arrière des noyaux des cellules épithéliales et des éosinophiles ont été notés (Figure4g). De
plus, les différents stades de développement deE. stiedaeétaient complètement absents des tissus
examinés des lapins traités avec AgNPs au jour 18 PI (G5) et une petite quantité d'hyperplasie (Figure4h).
Les lapins G6 ont montré peuE. stiedaetrophozoïtes postérieurs aux noyaux et faible infiltration
éosinophile dans les cellules sous-épithéliales et les cellules épithéliales saines (Figure4je). Les lapins G7
présentaient peu d'infiltrations éosinophiles dans les cellules sous-épithéliales et les cellules épithéliales
saines (Figure4j). Par conséquent, des lésions hépatiques histopathologiques significativement plus
sévères ont été observées dans G2 que dans G1 et G3–G7.
Animaux2022,12,

Figure 4.Histopathologie hépatique : (un) Structures tissulaires normales des hépatocytes, de la zone porte et des voies
biliaires au jour 28 PI (G1); (b)E. stiedaeles stades de développement [macrogamétocytes (flèche blanche),
microgamétocytes (flèche noire) et oocystes (flèche bleue)] commencent à se former en arrière des noyaux des cellules
épithéliales en G2 ; (c)E. stiedaeles stades de développement [trophozoïte (flèche blanche) et microgamètes (flèches
bleues)] sont affichés ; (d) éosinophilie (flèche blanche) dans les cellules sous-épithéliales et la muqueuse épithéliale
saine (G3) ; (e) hyperplasie (flèches blanches) et nonE. stiedaedes stades de développement sont présents (G3); (F)
infiltration avec unE. stiedaestade de développement (trophozoïtes) (flèches blanches) postérieur aux noyaux de la
muqueuse épithéliale, desquamation de certaines cellules épithéliales et infiltration éosinophile dans les cellules sous-
épithéliales (G4) ; (g) quelques nombres deE. stiedaestades de développement (trophozoïte) (flèches blanches) (G4); (h)
hyperplasie (flèches blanches) et nonE. stiedaedes stades de développement sont présents (G5); (je) peuE. stiedaeles
stades de développement (trophozoïtes) (flèches blanches) sont présents en arrière des noyaux, avec une infiltration
éosinophile (flèche noire) dans les cellules sous-épithéliales et les cellules épithéliales saines (G6) ; (j) peu d'infiltrations
éosinophiles dans les cellules sous-épithéliales (flèche blanche) et les cellules épithéliales semblent saines (G7).

3.5. Effets des différents traitements sur les paramètres biochimiques et hématologiques
E. stiedael'infection a causé une hépatotoxicité chez le lapin, ce qui a été indiqué par une activité élevée
d'ALT et d'AST sériques, alors que la supplémentation avec les AgNPs vertes a produit une augmentation
significative (p <0,05) diminution des niveaux de ces enzymes et les a restaurés aux valeurs de contrôle, comme
indiqué dans (Figure5). Fait intéressant, nos données indiquent que ces AgNPs biosynthétisés avec
L. chinensisétaient plus efficaces que l'amprolium dans les deux groupes de traitement.

(un) (b)

Figure 5.Histogrammes montrant les effets des nanoparticules sur les transaminases sériques dans les groupes
contrôle et expérimental infectés parE. stiedae. Les valeurs sont les moyens±SEM (n = 7). (un) Différence
significative àp <0,05 concernant le groupe contrôle négatif (a,b). (b) Différence significative àp <0,05
concernant le groupe contrôle positif.
Animaux2022,12,

4. Discussion
Les nanoparticules de synthèse vertes sont très préoccupantes en raison de leur large utilisation en
nanomédecine, car elles présentent des actions antioxydantes, antiparasitaires et anti-inflammatoires
une fois synthétisées par les technologies vertes dans la plage de taille de 1 à 100 nanomètres. Une
caractéristique distinctive de la synthèse de nanoparticules à l'aide de plantes est appelée
(photosynthèse), car elle a un taux plus élevé de formation de nanoparticules et se compose d'une
gamme variée de biomolécules telles que des composés polyphénoliques et flavonoïdes.41,42].
L'espèce végétale d'extrait de litchi a été une source de synthèse d'AgNPs dans cette étude,
comme en témoignent le changement de couleur et la stabilité de la solution. L'analyse TEM a révélé que
la gamme de tailles de particules était d'environ 100 nm et qu'elles étaient de forme sphérique. Les
composés polyphénoliques et flavonoïdes contenus dans l'extrait de Litchi, ainsi que d'autres
constituants, agissent comme des molécules tensioactives stabilisatrices pour la synthèse d'AgNPs aux
propriétés antioxydantes et antiparasitaires.
Les travaux en cours ont examiné la qualité de la biosynthèse des AgNPs avecL.
chinensiscoccidiose hépatique contrôlée chez des lapins infectés parE. stiedae. Les oocystes ont été
donnés aux lapins dans leur eau de boisson 7 jours avant le traitement qui a duré 28 jours. Le traitement
avec des AgNPs biosynthétisés avecL. chinensisefficacement suppriméE. stiedae infection chez les
lapins dans cette étude et amélioration du développement et de la fonction hépatique. Lorsqu'ils sont
administrés en continu avant et pendant l'infection, les AgNPs sont biosynthétisés avecL. chinensis
réduit les effets cliniques, parasitologiques et liés à la production de la coccidiose hépatique
expérimentale. Au 28ème jour de PI, les lapins infectés parE. stiedaedéveloppé une variété de
symptômes cliniques, y compris un manque d'appétit, de la diarrhée et une émaciation. Les foies de
lapins infectés étaient également considérablement hypertrophiés, avec des voies biliaires dilatées et des
nodules de couleur jaune à blanche de tailles variables à la surface. Cam et al. [3], Al-Mathal [4], et Eladl
et al. [33] ont observé des nodules blancs variés à la surface du foie deE. stiedae- des lapins infectés et
ont signalé des symptômes cliniques et des lésions post-mortem similaires. Les symptômes de la maladie
et les lésions post-mortem étaient absents chez les lapins traités avec des AgNPs biosynthétisés à l'aide
de
L. chinensisdans cette enquête.
Les symptômes de la maladie étaient absents chez les lapins traités dans notre étude, et le poids
corporel a augmenté, comme dans le groupe témoin négatif, indiquant une récupération aprèsE. stiedae
infection. Cet effet pourrait être attribué à la composition deL. chinensis, car il a été démontré que les
extraits de plantes augmentent l'apport alimentaire et le BWG. L'absence de lésions hépatiques évidentes
dans le groupe traité par AgNPs avecL. chinensissuggère que les ingrédients à base de plantes étaient
très efficaces. De même, Singh et al. [43] a établi qu'un extrait éthanolique deAegle marmelos Les feuilles
de lin stimulent une réponse immunologique naturelle. Eladl et al. [33] ont également observé une
diminution significative de la production d'oocystes et l'élimination des oocystes fécaux chez les lapins
traités avec Herba Cox®.E. stiedaedes oocystes ont été trouvés dans les excréments de lapin 21 à 28
jours après l'infection. Hassan et al. [44] découvertE. stiedaedans les fèces pour la première fois à 18
jours PI, et le maximum d'OPG dans les fèces a été trouvé entre 17 et 21 jours PI [31]. La réduction du
rendement en oocystes et la disparition des oocystes fécaux chez les lapins traités dans cette étude
pourraient être dues aux effets anticoccidiens des AgNPs biosynthétisés avecL. chinensis, ce qui peut
avoir réduit la croissance et le développement deE. stiedaestades, entraînant une réduction de la
formation d'oocystes et de l'excrétion fécale.
L'hépatotoxicité induite parE. stiedaeest le système modèle le plus couramment utilisé pour le
dépistage de l'activité hépatoprotectrice des extraits de plantes/médicaments. Infection parE. stiedae
induit des augmentations significatives des taux sériques d'AST et d'ALT, qui reflètent la gravité de
l'atteinte hépatique [28,45]. Ces enzymes marqueurs sont d'origine cytoplasmique et sont libérées dans
la circulation après des dommages cellulaires [28,46]. Une élévation du niveau d'AST s'accompagne
généralement d'une élévation du niveau d'ALT, qui joue un rôle vital dans la conversion des acides
aminés en acides céto.46]. La fuite de grandes quantités d'enzymes dans la circulation sanguine est
associée à une nécrose centrolobulaire et à une dégénérescence en ballon du foie. Cependant, les
niveaux accrus de ces enzymes ont été significativement diminués par le traitement avec le
L. chinensis-AgNPs générés, ce qui implique que les AgNPs verts ont empêché les dommages au foie ;
cette conclusion a été confirmée par le nombre réduit de lésions histopathologiques.
 Animaux2022,12,

Seddiek et Metwally [38] ont rapporté des résultats similaires, démontrant que les lapins ayant reçuNigelle sativa
l'huile de graines avait des diminutions considérables des niveaux d'enzymes hépatiques.

5. Conclusions
Nos résultats suggèrent que les AgNPs biosynthétisés à partir deL. chinensisl'extrait de peau pourrait être utilisé
pour créer un nouvel agent thérapeutique candidat avec une plus grande efficacité dans la suppression de la coccidiose
hépatique chez les lapins en modulant le poids corporel, la dynamique du poids du foie et en diminuant la
production d'oocystes fécaux, les niveaux d'enzymes hépatiques et les lésions hépatiques histopathologiques. Nos
résultats montrent que ces AgNPs biosynthétisés avecL. chinensisétaient plus efficaces que l'amprolium.

6. Limites
Les limites évidentes sont la petite taille de l'échantillon, le manque de contrôles sur l'extrait ou les
AgNPs seuls, et la nécessité de détecter l'immunité médiée (cellules T, cellules B et autres cellules) pour
déterminer l'efficacité de ces traitements.

Contributions d'auteur:Conceptualisation, DMM ; méthodologie, DMM, HBB et FEA ; logiciels,

IAHB et HBB ; validation, DMM, HBB et ADA ; analyse formelle, DMM, IAHB et MFE-K. ; enquête,
DMM, AFA, HBB, ADA et FEA ; ressources, DMM, AFA, IAHB, MFE-K., HBB, ADA, FEA ; conservation
des données, DMM, AFA, IAHB, HBB et ADA ; rédaction - préparation du projet original, DMM, IAHB,
MFE-K., HBB et FEA ; rédaction—révision et édition, DMM, IAHB, HBB et WAIA-M.; visualisation,
DMM ; supervision, DMM et AFA ; gestion de projet, DMM ; et ADA ; acquisition de financement,
AFA et WAIA-M. Tous les auteurs ont lu et accepté la version publiée du manuscrit.

Financement:Les auteurs tiennent à remercier le Researchers Supporting Project (numéro : RSP-2021/97) de

l'Université King Saud pour le financement de cette étude, à Riyad, en Arabie saoudite. En outre, cette étude a
été soutenue par le numéro de projet de soutien des chercheurs de l'Université Princesse Nourah bint
Abdulrahman (PNURSP2022R39), Université Princesse Nourah bint Abdulrahman, Riyad, Arabie saoudite.

Déclaration du comité d'examen institutionnel :Cette étude (numéro IRB : SH 25-2020) a été approuvée par le Comité
d'éthique officiel de la Faculté des sciences et des sciences humaines, Université de Shaqra, Arabie saoudite.

Déclaration de consentement éclairé :N'est pas applicable.

Déclaration de disponibilité des données :Toutes les données pertinentes sont dans le document.

Les conflits d'intérêts:Les auteurs déclarent que cette recherche a été menée en l'absence de toute
relation commerciale ou financière pouvant être interprétée comme un conflit d'intérêts potentiel.

Les références

1. Cédric, Y. ; Payne, VK ; Nadia, NA ; Kodjio, N.; Kollins, E.; Léonelle, M.; Kuiate, JR; Mbida, M. Activités anticoccidiennes et antioxydantes in
vivo dePsidium guajavaExtrait de méthanol.EUR. J. Med. Végétaux2017,21, 1–12. [RéfCroisée]
2. KN, AM ; NM, AE ; Abdel-Rahman, EH Effet protecteur deEimeria stiedaecoproantigène contre la coccidiose hépatique chez le lapin.
J. Égypte. Soc. Parasitol.2005,35, 581–595.
3. Çam, Y. ; Atasever, A.; Eraslan, G.; Kibar, M.; Atalay, Ö.; Beyaz, L.; Inci, A.; Liman, C.-B.Eimeria stiedae: Infection expérimentale chez le lapin
et effet d'un traitement au toltrazuril et à l'ivermectine.Exp. Parasitol.2008,119, 164–172. [RéfCroisée]
4. Al-Mathal, EM Coccidiose hépatique du lapin domestique (Oryctolagus cuniculus domesticus L.) en Arabie Saoudite.Monde J. Zool. 2008,3,
30–35.
5. Al-Mathal, EM Efficacité deCommiphore molmolcontre la coccidiose hépatique (Eimeria stiedae) chez le lapin domestique.J. Alimentaire Agric.
Environ.2010,8 Partie 2, 1072-1080.
6. Al-Naimi, RA ; Khalaf, Ohio ; Tano, SY ; Al-Taee, EH Étude pathologique de la coccidiose hépatique chez des lapins naturellement infectés.
Al-Qadisiyah J. Vet. Méd. Sci.2012,11, 63–69.
7. Dalle Zotte, A. ; Célia, C.; Szendrő, Z. Inclusion d'herbes et d'épices comme aliment ou additif dans l'alimentation des lapins en croissance et comme
additif dans la viande de lapin : un examen.Vivre. Sci.2016,189, 82–90. [RéfCroisée]
8. Darzi, MM; Mir, MS ; Kamil, SA; Nashiruddullah, N.; Munshi, ZH Changements pathologiques et réaction de défense locale survenant dans la
coccidiose hépatique spontanée chez le lapin (Oryctolagus cuniculus).Lapin du monde. Sci.2007,15, 23–28. [RéfCroisée]
9. Mousa, WM; Arafa, WM; Aboelhadid, SM Diagnostic moléculaire deEimeria stiedaedans le tissu hépatique de lapins infectés expérimentalement
par rapport aux méthodes traditionnelles originales.Egypte. Vétérinaire. Méd. Soc. Parasitol. J2015,11, 51–57. [RéfCroisée]
10. Hinton, M.; Jones, DR ; Festing, MF Résultats hématologiques chez des lapins sains et malades, une analyse multivariée.Laboratoire. Anim. 1982,
16, 123–129. [RéfCroisée]
 Animaux2022,12,

11. Harkness, JE; Turner, photovoltaïque ; VandeWoude, S.; Wheler, CLHarkness, et la biologie et la médecine de Wagner des lapins et des rongeurs; John Wiley
& Sons : Hoboken, NJ, États-Unis, 2013.
12. Nidaullah, H. ; Durrani, FR; Ahmad, S.; janvier, UI ; Gul, S. Extrait aqueux de différentes plantes médicinales comme anticoccidien, promoteur de croissance
et immunostimulant chez les poulets de chair.J. Agric. Biol. Sci.2010,5, 53–59.
13. Wunderlich, F. ; Al-Quraishy, S.; Steinbrenner, H.; Sies, H.; Dkhil, MA Vers l'identification de nouveaux agents anti-Eimeria : oligo-
éléments, vitamines et produits naturels à base de plantes.Parasitol. Rés.2014,113, 3547–3556. [RéfCroisée]
14. Hong, S.; Oh, GW ; Kang, WG; Kim, O. Effets anticoccidiens de laPlantago asiaticaextrait sur expérimentalEimeria tenella infection.
Laboratoire. Anim. Rés.2016,32, 65–69. [RéfCroisée]
15. Steinfeld, B. ; Scott, J.; Vilander, G.; Marx, L.; Bizarre, M. ; Lindberg, J.; Koerner, K. Le rôle de l'amélioration des processus lean dans la mise en
œuvre de pratiques fondées sur des preuves dans les soins de santé comportementale.J. Behav. Service de santé Rés.2015,42, 504–518.
[RéfCroisée]
16. Gouveia, S. ; Castilho, PC Potentiel antioxydant deArtemisia argentéeL'Hér extrait alcoolique et sa relation avec la composition
phénolique.Rés alimentaire. Int.2011,44, 1620–1631. [RéfCroisée]
17. Wang, X. ; Yuan, S.; Wang, J.; Lin, P.; Liu, G.; Lu, Y.; Zhang, J.; Wang, W.; Wei, Y. Activité anticancéreuse de l'extrait de péricarpe de fruit de litchi
contre le cancer du sein humain in vitro et in vivo.Toxicol. Appl. Pharmacol.2006,215, 168–178. [RéfCroisée]
18. Contreras-Castro, AI ; Oidor-Chan, VH; Bustamante-Camilo, P.; Pelayo-Zaldjevar, C.; Djeaz de LeónSunnchez, F.; Mendoza-
Espinoza, JA Caractérisation chimique et évaluation de l'effet antihyperglycémique du litchi (L. chinensisFils.) cv. Brasseur.J.
Med. Nourriture2022,25, 61–69. [RéfCroisée]
19. Bai, XY ; Yang, ZM; Shen, WJ; Shao, YZ; Zeng, JK; Li, W. Le traitement aux polyphénols retarde le brunissement despéricarpes de litchiet favorise la
capacité antioxydante totale du fruit du litchi.Sci. Hortique.2022,291, 110563. [RéfCroisée]
20. Kong, F. ; Zhang, M.; Liao, S.; Yu, S.; Chi, J.; Wei, Z. Activité antioxydante des fractions enrichies en polysaccharides extraites du tissu
pulpaire deL. chinensisfils.Molécules2010,15, 2152–2165. [RéfCroisée]
21. Mohanpuria, P. ; Rana, NK; Yadav, SK Biosynthèse des nanoparticules : Concepts technologiques et applications futures.
J. Nanoparticle Res.2008,dix, 507–517. [RéfCroisée]
22. Kulkarni, N. ; Muddapur, U. Biosynthèse des nanoparticules métalliques : Une revue.J. Nanotechnol.2014,2014, 510246. [RéfCroisée]
23. Rauwel, P. ; Kuünal, S.; Ferdov, S.; Rauwel, E. Une revue sur la synthèse verte des nanoparticules d'argent et leurs morphologies
étudiées via TEM.Adv. Mater. Sci. Ing.2015,2015, 682749. [RéfCroisée]
24. Heelan, JS ; Ingersoll, FW ; Ingersoll, FWL'essentiel de la parasitologie humaine; Éditeurs Delmar : Albany, NY, États-Unis, 2002.
25. Safdar, N. ; Yasmin, A. Enquêtes antimicrobiennes à partir d'extraits bruts et peptidiques de Glycine max Linn. Merr variétés.Arabe. J.
Sci. Ing.2017,42, 105–113.
26. E Abdel Moneim, A. Les effets neuroprotecteurs du pourpier (Portulaca oleracea) sur les changements biochimiques induits par la roténone et l'apoptose dans le cerveau
du rat.Neurol du SNC. Désordre. Cibles médicamenteuses (anciennement. Cibles médicamenteuses actuelles CNS Neurol. Disord.)2013,12, 830–841. [RéfCroisée]

27. Akillioglu, HG ; Karakaya, S. Modifications des phénols totaux, des flavonoïdes totaux et des activités antioxydantes des haricots communs et des haricots pinto après le
trempage, la cuisson et le processus de digestion in vitro.Sci alimentaire. Biotechnol.2010,19, 633–639. [RéfCroisée]
28. Abdel-Moneim, AE ; Dkhil, MA; Al-Quraishy, S. Le statut redox chez les rats traités avec de l'huile de lin et l'hépatotoxicité induite par le plomb.
Biol. Trace Elem. Rés.2011,143, 457–467. [RéfCroisée]
29. Reitman, S.; Frankel, S. Une méthode colorimétrique pour la détermination des transaminases glutamique oxalacétique et glutamique pyruvique
sériques.Suis. J.Clin. Pathol.1957,28, 56–63. [RéfCroisée]
30. Dkhil, MA; Al-Quraishy, S.; Wahab, R. Activités anticoccidiennes et antioxydantes des nanoparticules d'oxyde de zinc surEimeria
papillata- infection induite dans le jéjunum.Int. J. Nanomed.2015,dix, 1961. [RéfCroisée]
31. Abou-Akkada, SS ; Oda, SS ; Ashmawy, KI Ail et coccidiose hépatique : prophylaxie ou traitement ?Trop. Anim. produits de santé
2010,42, 1337–1343. [RéfCroisée]
32. El Sayed Ahmed, S. ; Abdel Razek, M.; El Sherbeny Ramadan, M.; Esmail Mohamed Esmail, E. Coccidiose hépatique chez le lapin et étude
comparative sur le traitement par la phytothérapie.Vétérinaire de Zagazig. J2014,42, 41–50. [RéfCroisée]
33. Eladl, AH; Mahgoub, HA ; El-Shafei, RA; Al-Kappany, YM Effets comparatifs de Herba Cox®, un extrait de plantes commerciales, sur des lapins (
Oryctolagus cuniculus) expérimentalement infecté parEimeria stiedae.Comp. Immunol. Microbiol. Infecter. Dis.2020,68, 101378. [RéfCroisée]
[ PubMed]
34. Gomez-Bautista, M. ; Rojo-Vazquez, FA ; Alunda, JM L'effet de l'âge de l'hôte sur la pathologie deEimeria stiedaeinfection chez le lapin.
Vétérinaire. Parasitol.1987,24, 47–57. [RéfCroisée]
35. Peeters, JE ; Geeroms, R. Efficacité du toltrazuril contre la coccidiose intestinale et hépatique chez le lapin.Vétérinaire. Parasitol.1986,22, 21–35. [RéfCroisée]

36. Longue, PL ; Millard, BJ; Joyner, LP; Norton, CC Un guide des techniques de laboratoire utilisées dans l'étude et le diagnostic de la coccidiose
aviaire.Vétérinaire Folia. Lat.1976,6, 201–217.
37. Vadlejch, J. ; Petrýl, M. ; Lukešovun,D.; Cadkovun,Z. ; Kudrnuncovun,M. ; Jankovskun,JE.; Langrovun,I. La technique de concentration McMaster convient à la
quantification des oocystes de coccidies dans les excréments d'oiseaux.Pack. Vétérinaire. J2013,33, 291–295.
38. Un Seddiek, SH; MM Metwally, AM Activité anticoccidienne du cumin noir (Nigelle sativa) chez le lapin.Vétérinaire d'Assiout. Méd. J2013,59, 85–96.
39. Bancroft, JD ; Gamble, M. (Eds.)Théorie et pratique des techniques histologiques; Elsevier Health Sciences : Amsterdam, Pays-
Bas, 2008.
40. Snedecor, G. ; Cochran, W.Méthode statistique, 8e éd.; Low State University Press : Ames, IA, États-Unis, 1989.
 Animaux2022,12,

41. Farag, RS ; El-Baroty, GS ; Basuny, AM Évaluation de la sécurité des composés phénoliques d'olive en tant qu'antioxydants naturels.Int. J. Food Sci. Nutr.2003,
54, 159–174. [RéfCroisée]
42. Salomon, A. ; Golubowicz, S.; Yablowicz, Z.; Grossman, S.; Bergman, M.; Gottlieb, HE; Altman, A.; Kerem, Z.; Flaishman, MA Activités antioxydantes
et teneur en anthocyanes des fruits frais de la figue commune (Ficus caricaL.).J. Agric. Chimie alimentaire.2006,54, 7717–7723. [RéfCroisée]

43. Singh, K.; Agrawal, KK; Gupta, JK Activité anthelminthique comparative deAegle marmelosFeuilles et pulpe de lin.J.Pharm.2012,2, 395–397. [
RéfCroisée]
44. Hassan, KM ; Arafa, WM; Mousa, WM; Shokier, KA; Shany, SA ; Aboelhadid, SM Diagnostic moléculaire deEimeria stiedaedans le
tissu hépatique de lapins infectés expérimentalement.Exp. Parasitol.2016,169, 1–5. [RéfCroisée]
45. Srivastava, A.; Shivanandappa, T. Effet hépatoprotecteur de l'extrait aqueux des racines deDecalepis hamiltoniicontre le stress
oxydatif induit par l'éthanol chez le rat.Hépatol. Rés.2006,35, 267–275. [RéfCroisée] [PubMed]
46. Lin, SC; Chung, TC ; Lin, CC; Ueng, TH; Lin, YH; Lin, SY; Wang, LY ; Sharma, N.; Shukla, S. Potentiel hépatoprotecteur de l'extrait aqueux
deButéa monospermacontre les dommages induits par le CCl4 chez le rat.Exp. Toxicol. Pathol.2011,63, 671–676.