Master instrumentation & Analyse Biomédical

Néphélométrie-Turbidimétrie
Principes & Applications Médicales

Realisé par : Encadré par :

 Oualaddane Mohammed  Pr.Admou

 Flaouti Nouhaila
 Fakhri Oumaima
 Sordi Bouchra
 Zyati Zahira

Année Universitaire : 2021-2022

 Remerciement

Nous tenons à adresser nos profonds remerciements à notre Professeur de nous avoir encadré pour
diriger ce travail d’où nous nous permettons de bénéficier d’une formation concernant
l’Instrumentation et analyses Biomédicale et laborantin. Ceci nous donnera la commodité dans le futur
pour une manipulation aisée.

Nous tenons de les remercier sincèrement pour son excellence supervisions, à nos apprentissage, ainsi
que son expérience qui nous avons été d’une aide inestimable dans la réalisation et l’accomplissement
de ce travail.

On tient à remercier nos chers parents Pour leurs sacrifices, leurs soutiens moreaux, et leurs aides
durant toute cette période d’études

Nos sincères et chaleureux remerciements envers toutes personnes ayant contribué de près ou de loin
à la réussite de notre projet.

2
 Table des matières
Résumé................................................................................................................................................................................. 5
Introduction générale .......................................................................................................................................................... 6
Généralité sur la turbidité .................................................................................................................................................... 7
Introduction ..................................................................................................................................................................... 7
Définition ......................................................................................................................................................................... 7
Turbidité d’un fluide .................................................................................................................................................... 7
Germes pathogènes et les matières en suspension. .................................................................................................. 7
La mesure de la turbidité ................................................................................................................................................. 8
Conclusion ........................................................................................................................................................................ 8
La Turbidimétrie ................................................................................................................................................................... 9
Introduction ..................................................................................................................................................................... 9
Définition ......................................................................................................................................................................... 9
Objectif............................................................................................................................................................................. 9
Rôle ................................................................................................................................................................................ 10
Principe de mesure ........................................................................................................................................................ 10
Turbidimètre ................................................................................................................................................................. 11
Applications.................................................................................................................................................................... 12
Conclusion ...................................................................................................................................................................... 12
La Néphélométrie .............................................................................................................................................................. 13
Introduction ................................................................................................................................................................... 13
Principe de la Néphélométrie ........................................................................................................................................ 13
La Diffusion et la Concentration des particules : ....................................................................................................... 14
Longueur d'onde de la source lumineuse : ................................................................................................................ 14
Néphélométrie au point final ......................................................................................................................................... 15
Néphélométrie cinétique ............................................................................................................................................... 15
Instrumentation de Néphélométrie............................................................................................................................... 15
Les Avantages et les Inconvénients ............................................................................................................................... 16
Les avantages ............................................................................................................................................................. 16
Les inconvénients ....................................................................................................................................................... 17
Application ..................................................................................................................................................................... 17

3
 Applications Cliniques : .................................................................................................................................................. 17
Conclusion ...................................................................................................................................................................... 17
Néphéloturbidométrie ....................................................................................................................................................... 18
Définition ....................................................................................................................................................................... 18
La Différence entre la Néphélométrie et la Turbidimétrie ............................................................................................ 18
Choix De La Méthode ..................................................................................................................................................... 19
Conditions de fonctionnement de la Néphélométrie et de la Turbidimétrie ................................................................ 19
Instrumentation ............................................................................................................................................................. 19
Conclusion générale ........................................................................................................................................................... 20
Bibliographie ...................................................................................................................................................................... 21

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 Résumé

Les techniques néphélémétriques et turbidimétriques sont très développées dans les laboratoires de
biologie médicale principalement pour le dosage des protéines.

Elles ont bénéficié des progrès de l'automatisation des appareillages (que ce soit sur des appareils
dédiés à ces dosages ou sur des automates multiparamétriques de biochimie) et de l'amélioration de la
stabilité des réactifs.

De plus, le développement de tests utilisant des microparticules recouvertes d'anticorps a permis

d'améliorer la sensibilité des tests.

Toutefois, ce type de dosage nécessite l'utilisation d'immunsérums et de sérums de calibration de

qualité. Les tests doivent avoir un large domaine de mesure recouvrant les situations rencontrées en
pathologie ainsi qu'une zone de sécurité importante pour éviter tout effet crochet.

5
 Introduction générale

Le mesurage de la turbidité en assainissement urbain est intéressant du fait que, dans les effluents
bruts, les polluants sont majoritairement présents sous forme de particules et/ou liés aux particules.

De plus, il s’agit d’un mesurage en temps réel et en continu, contrairement aux prélèvements
d’échantillons d’eau limités en nombre et analysés en temps différé au laboratoire. Ses utilisations
possibles vont de la commande en temps réel d’ouvrages (alimentation-vidange
de bassins d’orage, gestion de stations de traitement, dérivation nocturne en rivière d’eaux claires
d’infiltration) ou de préleveurs d’échantillons, à la modélisation des transferts
de polluants, en passant par l’auto surveillance des rejets de
polluants en rivière et en réseau.

Cette communication est consacrée à la précision du mesurage de la turbidité en tant que telle, sans
aborder la corrélation entre ce paramètre et d’autres paramètres de pollution
plus classiques tels que les matières en suspension (MES) et la demande chimique en oxygène (DCO).
Et bien que l’intérêt principal de la turbidité corresponde à un mesurage en continu in situ, on se situe
ici dans un contexte de mesurage de la turbidité sur échantillon. Ce contexte présente l’avantage de
pouvoir maîtriser la stabilité du mesurande dans le temps.

Il correspond à des situations pratiques, telles que la vérification des appareils sur le terrain, ou
l’établissement de relations entre turbidité et MES, ou turbidité et DCO.

Il permet surtout d’aborder en détail le problème de l’étalonnage des appareils, et de la reproductibilité

des résultats.

Après une présentation des différentes composantes de l’évaluation des incertitudes de mesure, on
commente les résultats obtenus avec différentes stratégies d’étalonnage et d’échantillonnage, et avec
différents principes et caractéristiques de matériels de mesure de la turbidité.

6
 Généralité sur la turbidité
Introduction
La turbidité est une caractéristique optique de l’échantillon, à savoir sa capacité à diffuser ou absorber
la lumière incidente. La turbidité est donc un des facteurs de la couleur de l'eau.
La turbidité est due à la présence dans l'eau de particules en suspension minérales ou organiques,
vivantes ou détritiques. Ainsi, plus une eau est chargée en biomasse phytoplanctonique ou en
particules sédimentaires, plus elle est turbide.
Les conséquences de la turbidité concernent la pénétration de la lumière et des ultra-violets dans l'eau,
et donc la photosynthèse et le développement des bactéries. Par ailleurs, la couleur de l'eau affecte
aussi sa température et donc sa teneur en oxygène, son évaporation et sa salinité.

Définition
La turbidité est une mesure de la clarté d’une solution. Elle décrit la quantité de lumière dispersée ou
bloquée par les particules flottant dans l’eau. Ces particules donnent à l’eau un aspect opaque ou
trouble. Dans les rivières et les lacs, ces particules peuvent provenir d’algues et d’autres matières
végétales, de sols, de limon et d’argile, et d’autres substances présentes dans l’eau comme les sels, les
minéraux et les métaux.
Elle peut également être causée par des activités telles que l’exploitation forestière, minière, agricole
ou le dragage.

Turbidité d’un fluide

La turbidité du fluide peut être modifiée suite à des évolutions de ses propriétés physiques,
microbiologiques, chimiques et radiologiques.
Ces évolutions peuvent avoir des effets importants sur la qualité microbiologique de l'eau potable suite
à la présence de bactéries et de virus.
La croissance microbienne dans l'eau est particulièrement marquée à la surface des particules et à
l'intérieur des flocs à faible cohérence.

Germes pathogènes et les matières en suspension.

Il existe une coïncidence entre l’existence de germes pathogènes et les matières en suspension.
Une turbidité excessive altère l'aspect de l'eau traitée et peut nuire au processus de désinfection ainsi
qu'au maintien d'une concentration de chlore résiduel suffisante dans le réseau de distribution.
Une turbidité excessive altère l'aspect de l'eau traitée et peut nuire au processus de désinfection ainsi
qu'au maintien d'une concentration de chlore résiduel suffisante dans le réseau de distribution.
La mesure de turbidité peut être utilisée comme substitut d’autres paramètres et à titre d’exemples,
nous pouvons citer :
 la détection des bactéries et des virus ;
 l’arsenic dans l’eau naturelle dont la turbidité donne une image de la teneur ;

7
La mesure de la turbidité
En ce qui concerne la mesure de la turbidité en traitement des solutions , elle est destinée à estimer la
charge en entrée pour adapter les traitements, et en sortie pour vérifier les filières et contrôler l’eau
produite.
Cette mesure est également effectuée sur les unités d’épuration physico-chimiques de rejets
industriels.
La mesure de la turbidité est donc l’un des paramètres permettant de caractériser la qualité d’un fluide
en entrée, lors de traitements internes et en sortie d’usines.
La turbidité de l’échantillon est affectée par la présence de diverses matières en suspension telles que
limon, argile, matières organiques et inorganiques en fines particules, composés organiques colorés
solubles, plancton et autres micro-organismes.
Elle est définie comme étant la « réduction de la transparence d'un liquide due à la présence de
matières non dissoutes.
Elle correspond à la propriété de l’échantillon de diffuser et d’absorber la lumière incidente,
contrairement à l’eau pure qui la transmet intégralement.
Le résultat de la mesure dépend beaucoup de la technique de mesure utilisée. L'intensité totale et la
distribution angulaire de la lumière diffusée par de l'eau trouble sont le résultat des effets cumulés par
des interactions avec une ou plusieurs particules (diffusion multiple), et sont liées par un ensemble de
relations complexes à des facteurs comme la quantité de matières non dissoutes, leur taille, leur forme
et leur indice de réfraction ainsi que la longueur d'onde de la lumière incidente

Conclusion
La mesure de la turbidité est développées dans les laboratoires de biologie médicale principalement
pour le dosage des protéines.
De plus, le développement de tests utilisant des microparticules recouvertes d'anticorps a permis
d'améliorer la sensibilité des tests.
Ce mesurage peut être réalisé selon deux techniques qui s’intéressent toutes deux à la modification d’un faisceau
lumineux traversant une eau chargée en particules : la turbidité et la néphélométrie.

8
 La Turbidimétrie

Introduction
La turbidimétrie fait partie de la photométrie industrielle, elle représente l’un des principaux
paramètres de détermination de la qualité de l’eau de boisson/potable. En effet, la clarté et la
transparence de l’eau sont l’image d’une haute qualité de l’eau pour la plupart des personnes.
Les études réalisées dans les laboratoires de l’hôpital Royal Hallamshire, département d'immunologie
Sheffield en Angleterre avec des particules de latex montrent que la néphélométrie est plus sensible
aux petites particules que la turbidimétrie. Il en résulte des caractéristiques de comportement
différentes pour les deux systèmes lorsqu'ils sont utilisés pour mesurer les complexes antigène-
anticorps.

Définition
Le turbidimétrie c'est une technique de mesure analytique qui détermine à quel point un faisceau de
lumière qui traverse une suspension est atténué. Cette atténuation se produit en raison des phénomènes
d'absorption et de dispersion subis par la lumière due aux particules.
Ensuite, les dimensions des particules présentes dans une suspension peuvent être déduites en
mesurant la turbidité dans celles-ci. En ce sens, cette procédure est utilisée pour quantifier l'absorption
et la dispersion de la lumière: sa dépendance vis-à-vis des dimensions des particules et de leur
concentration dans la suspension est démontrée.
C’est la mesure de la diminution de la lumière transmise à travers une suspension de particules. La
lumière a été perdue en raison de l'absorption, de la réflexion et de la diffusion. Elle nécessite des
concentrations relativement élevées de particules et obéit à la loi de Beers dans une gamme limitée de
concentrations de particules. Dans ces circonstances, la majeure partie de la lumière incidente est
transmise (95%), ce qui donne un signal très important avec une diminution relativement faible due à
la turbidité

Objectif

La mesure de l'intensité du rayonnement lumineux transmis par un milieu constitué de particules

présentant une certaine dispersion, dont l'indice de réfraction diffère de celui de la suspension où elles
se trouvent.
Comme décrit précédemment, une atténuation de l'intensité lumineuse due au phénomène de
dispersion se manifeste, pour laquelle on étudie un rayonnement lumineux qui ne subit pas cette
dispersion.

9
Rôle
La turbidimétrie est le processus consistant à mesurer la perte d'intensité de la lumière transmise due à
l'effet de dispersion des particules qui y sont en suspension.
 Fait partie de la photométrie industrielle, elle représente l’un des principaux paramètres
de détermination de la qualité de l’eau de boisson/potable
 La clarté et la transparence de l’eau sont l’image d’une haute qualité de l’eau pour la
plupart des personnes.
 Utilisée en microbiologie dans le but d'effectuer une numération bactérienne totale, par
la détermination de la biomasse d'un échantillon.
 Utilisée en complément à la néphélométrie qui se base plutôt sur la diminution de
l'intensité par diffusion de la lumière

Principe de mesure
Cette technique consiste à faire passer la lumière à travers un filtre au moyen duquel est produit un
rayonnement dont on connaît la longueur d'onde; alors, ce rayonnement traverse un seau dans lequel se
trouve une solution et est recueilli par une cellule de nature photo-électrique. Cela donne une
quantification de la lumière qui a été absorbée.
En d'autres termes, cette technique est utilisée pour quantifier la turbidité d'une solution, basée sur la
mesure des effets que cette propriété exerce sur les processus de dispersion et de transmission du
rayonnement lumineux.
Il convient de noter que pour ces analyses, il est essentiel que la suspension soit uniforme, car le
manque d'uniformité peut affecter les résultats de la mesure

Figure 1: Principe de turbidimétrie

10
cette mesure repose sur le fait que l’intensité lumineuse incidente est absorbée ou diffusée par les particules
rencontrées sur son trajet vers le récepteur .
Le récepteur reçoit donc une intensité lumineuse plus faible que celle qui est émise : on parle d’atténuation

Figure 2: mesure de turbidité par atténuation

Pour une suspension et un capteur donnés, l’atténuation est proportionnelle à la surface projetée cumulée des
particules présentes dans le faisceau. Elle dépend donc du nombre de particules et de leur nature (taille,
forme). Si la taille et la forme des particules sont fixées, l’atténuation est proportionnelle à la concentration
volumique des particules (exprimée en %). Si leur masse volumique est fixée, l’atténuation est proportionnelle
à la concentration massique des particules (exprimée en mg/L). Pour un capteur conforme à la norme, cette
atténuation est exprimée en FAU (Formazine Attenuation Unit)

Turbidimètre

Le turbidimètre est l'instrument utilisé pour mesurer la clarté relative d'un fluide, en quantifiant le
rayonnement lumineux dans un échantillon de fluide ayant subi une dispersion provoquée par des
particules en suspension.
Ces particules en suspension rendent difficile la transmission du rayonnement à travers les fluides,
empêchant leur passage.
La turbidité d'une substance pourrait alors être causée par une seule espèce ou un ensemble d'espèces
chimiques.
Les turbidimètres mesurent cet obstacle, afin d'estimer la turbidité ou l'intensité du rayonnement
lumineux présent dans l'échantillon, appelés NTU les unités de turbidité néphélométrique avec
lesquelles il est représenté. Cependant, ces instruments ne sont pas utilisés pour estimer les dimensions
des particules.
La structure des turbidimètres est constituée d'une source de rayonnement lumineux, une lentille qui
permet de focaliser et de conduire un faisceau de lumière à travers un fluide et un dispositif de nature
photoélectrique chargé de détecter et d'estimer la quantité de rayonnement lumineux diffusé. .
De plus, il existe une sorte de piège qui empêche la détection d'autres rayonnements lumineux
susceptibles d'interférer avec la mesure.

11
 Applications
Cette technique de mesure a un grand nombre d'applications parmi lesquelles :

 La détection des contaminants sous forme de traces dans divers échantillons

 L'estimation des dimensions des particules dans divers fluides se distinguent.
 De plus, la turbidimétrie est utilisée dans le domaine de la biologie pour :
Quantifier les cellules présentes dans certaines solutions
Dans l’observation de cultures microbiologiques pour la fabrication de médicaments antibiotiques.
 Dans le domaine de la chimie dans l’étude le diagnostic de type clinique,
 La méthode d'immuno-turbidimétrie est utilisée pour estimer les structures protéiques du type sérique
qui ne peuvent être détectées par d'autres techniques cliniques.
 En revanche, la turbidimétrie est utilisée dans le contrôle de la qualité de l’eau pour estimer la quantité
de particules en suspension dans les eaux d’origine naturelle, ainsi que dans les eaux de traitement.
 De même, cette méthode analytique est utilisée pour estimer la quantité de soufre présente dans les
échantillons de pétrole, de charbon et d’autres substances de nature organique; dans ce cas, la
précipitation du soufre se produit sous forme de sulfate de baryum.

Conclusion
La turbidimétrie apparaît aujourd’hui comme un véritable outil de gestion des réseaux
d’assainissement. Les premières expériences montrent néanmoins qu’elle nécessite une maintenance et
un contrôle permanents, donc des moyens et des budgets adaptés. Ces aspects financiers imposent une
réflexion préalable à l’installation de ces instruments. En effet, la mise en place d’un capteur doit
s’inscrire dans une démarche métrologique qui inclut sur le long terme toutes les opérations
d’étalonnage, de maintenance et de validation. Des turbidimètres spécifiquement adaptés au contexte
de l’assainissement avec des systèmes de nettoyage efficaces sont disponibles sur le marché. Ils n’en
restent pas moins relativement intrusifs et demandent une implantation soignée et un entretien régulier
pour maitriser le macro-encrassement. La fiabilisation de la mesure passe également par une stratégie
d’acquisition comportant un traitement du signal adapté et si possible, une redondance de capteurs et
la prise en compte de l’incertitude associée à la mesure

12
 La Néphélométrie

Introduction
La néphélométrie est une des techniques de mesure
de la teneur en particule en suspension, ou de la
turbidité d'un milieu (respectivement gazeux ou
liquide). Elle est membre de la photométrie des
milieux troubles. Elle consiste à mesurer la lumière
diffusée à 90° d'angle comparé à la lumière
incidente. L'instrument utilisé pour faire les
mesures est le néphélomètre. Il est le plus souvent
constitué d'une source de lumière blanche ou de
lumière infra-rouge. Lorsque la lumière est dirigée
à travers une solution turbide contenant des
particules solides en suspension, elle est transmise,
absorbée (bloquée) et diffusée (réfléchie par les
particules ; fig.1). La quantité de lumière diffusée
dépend de la taille, de la forme et de la
concentration des particules insolubles dans la
solution, ainsi que de la longueur d'onde de la
lumière incidente

Figure 3: light directed through a turbid solution containinsuspended solid

particles can be transmitted, absorbed (blocked) and scattered.

Principe de la Néphélométrie

La diffusion de la lumière dans les liquides suit les règles de la diffusion élastique de la physique des
particules, dans laquelle aucune énergie n'est absorbée par les deux particules pendant la "collision".
L'énergie d'un photon avant et après l'événement de diffusion n'est pas modifiée. La diffusion élastique
est différente pour les grandes et les petites particules. Pour les grandes particules, la lumière est
diffusée principalement dans la direction avant (angle avant). Lorsque la taille des particules est
inférieure à 5 % de la longueur d'onde de la lumière par laquelle elles sont frappées, la diffusion est
répartie de manière symétrique.

13
 Les molécules solubles sont généralement de
petite taille (par rapport aux longueurs d'onde de
la lumière incidente) et diffusent de manière
presque symétrique. Les molécules solubles sont
généralement de petite taille (par rapport aux
longueurs d'onde de la lumière incidente) et
diffusent de manière presque symétrique. En
revanche, les précipités et les complexes en
solution ont généralement une taille plus grande
(plus proche des longueurs d'onde de la lumière
incidente), produisant principalement une
diffusion à angle droit. La détection
néphélométrique se concentre généralement sur
la mesure de la diffusion vers l'avant.
Figure 4: light scattering for small (A) and large (B) particles

La Diffusion et la Concentration des particules :

L'intensité de la lumière diffusée (IS) et la concentration du précipité (C) sont liées par l'équation
suivante :

Is= Ks*I0*C
Où k est une constante déterminée à partir d'un étalonnage du système et est l'intensité à la source
lumineuse. Les propriétés physiques d'une suspension de particules sont influencées par différentes
variables. Bien que la diffusion soit liée à la concentration des particules solides en solution, l'intensité
de la lumière diffusée dépend également de leur taille et de leur forme. Des échantillons de
concentration égale contenant des précipités de tailles différentes présenteront des niveaux de
diffusion différents. De plus, la taille et la forme des précipités sont affectées par la température, le pH
et la concentration des réactifs, ainsi que par l'ordre de mélange, l'agitation et l'intervalle entre la
formation du précipité et la détection. Pour obtenir des conditions et des résultats reproductibles entre
les échantillons et les tests, il est nécessaire de prendre en compte toutes ces différentes variables.

Longueur d'onde de la source lumineuse :

La sélection de la longueur d'onde n'est généralement pas pertinente car l'absorption de la lumière
incidente par les particules en suspension n'est généralement pas prise en compte, à condition qu'elle
n'induise pas de fluorescence de l'échantillon. Ainsi, si des échantillons non fluorescents sont utilisés,
il n'y a pas de besoin spécifique de sélection de la longueur d'onde. Le choix de la longueur d'onde est
basé principalement sur la nécessité de minimiser les interférences potentielles et affecte plutôt
l'intensité de la lumière incidente ou de la diffusion elle-même.

14
Néphélométrie au point final

Cette technique peut être utilisée pour l'analyse du point final, dans lequel l'anticorps de l'échantillon
biologique étudié est incubé pendant vingt-quatre heures. Le complexe Ag-Ac est mesuré à l'aide d'un
néphélomètre et la quantité de lumière diffusée est comparée à la même mesure effectuée avant la
formation du complexe.

Néphélométrie cinétique :
Dans cette méthode, le taux de formation de complexes est surveillé en continu. La vitesse de réaction
dépend de la concentration de l'antigène dans l'échantillon. Ici, les mesures sont prises en fonction du
temps, de sorte que la première mesure est prise à l'heure "zéro" (t = 0). La néphélométrie cinétique est
la technique la plus utilisée, car l’étude peut être réalisée en 1 heure, en comparaison avec la longue
période de temps de la méthode du point final. Le rapport de dispersion est mesuré juste après l'ajout
du réactif. Par conséquent, tant que le réactif est constant, la quantité d'antigène présente est
considérée directement proportionnelle au taux de variation.

Instrumentation de Néphélométrie Bien que les fluoromètres puissent être utilisés

pour la détection néphélométrique, la
dépendance angulaire de la diffusion a
encouragé le développement de dispositifs
dédiés. Les turbidimètres dont les détecteurs sont
situés à un angle par rapport au faisceau incident
sont appelés Néphélomètres et sont considérés
comme l'instrument standard pour la mesure des
faibles valeurs de turbidité. Un néphélomètre est
un instrument autonome dédié qui mesure
l'intensité de la lumière diffusée. La lumière
transmise n'est pas détectée.
Le néphélomètre est un instrument utilisé pour
mesurer les particules en suspension dans un
échantillon liquide ou dans un gaz. Ainsi, une
cellule photoélectrique placée à un angle de 90 °
par rapport à une source de lumière détecte le
rayonnement par les particules présentes dans la
suspension. En outre, la lumière réfléchie par les
particules vers la cellule photoélectrique dépend
de la densité des particules.
Figure 5 Un néphélomètre de la National Oceanic and

Atmospheric Administration à Kosan, île de Jejudo,

Corée du Sud

15
 A. Source de rayonnement
En néphélométrie, il est extrêmement important
d'avoir une source de rayonnement avec un
rendement lumineux élevé. Il existe différents types
de lampes: lampes au xénon, lampes à vapeur de
mercure, lampes halogènes au tungstène, rayons
laser, etc.

B. Système de monochromateur
Ce système est situé entre la source de rayonnement
et la cuvette, ce qui permet d'éviter l'incidence de Figure 6: Composants de base d'un néphélomètre.
rayonnements de différentes longueurs d'ondes sur
la cuvette par rapport au rayonnementsouhaité.
Sinon, des réactions de fluorescence ou des effets
de chauffage dans la solution provoqueraient des
écarts par rapport à la mesure.

C. Cuvette de lecture

C'est un récipient généralement prismatique ou cylindrique, et peut avoir différentes tailles. En cela, c'est la
solution à l'étude.
D. Détecteur
Le détecteur est situé à une distance spécifique (généralement très proche du réservoir) et est chargé de
détecter le rayonnement dispersé par les particules de la suspension.

E. Système de lecture
Généralement, il s’agit d’une machine électronique qui reçoit, convertit et traite les données, qui sont dans ce
cas les mesures obtenues à partir de l’étude réalisée.

Les Avantages et les Inconvénients

Les avantages
La néphélémétrie est un système automatisé rapide, reproductible, relativement simple à utiliser et
courant dans les laboratoires à fort volume. Elle a de nombreuses applications dans le laboratoire
d'immunologie. Actuellement, des instruments utilisant une méthode de taux et une approche à temps
fixe sont disponibles dans le commerce avec des tests pour l'immunoglobuline G (IgG), l'IgA, l'IgM, le
C3, le C4, la properdine, la protéine C-réactive (CRP), le facteur rhumatoïde, la céruloplasmine, l'α1-
antitrypsine, les apolipoprotéines et les haptoglobines.

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Les inconvénients
Le coût initial élevé de l'équipement et les substances interférentes telles que la contamination
microbienne, qui peuvent entraîner une dénaturation des protéines et des résultats de test erronés. La
turbidité ou la lipémie intrinsèque de l'échantillon peut dépasser les limites prédéfinies. Dans ces cas,
un agent de clarification peut être nécessaire avant de pouvoir effectuer un test précis. En outre, les
immunoglobulines de faible poids moléculaire, les immunoglobulines monoclonales et les anticorps
bovins peuvent également produire des résultats erronés en néphélémétrie.

Application

Depuis les années 1970, la néphélémétrie est appliquée dans les laboratoires cliniques pour l'analyse
des immunodosages. Elle était à l'origine utilisée pour détecter la formation et la précipitation de
complexes immuns (antigène-anticorps), une application qui est toujours d'actualité.
L'immunophélémétrie est également utilisée pour déterminer la concentration des protéines sériques,
notamment l'immunoglobuline, ainsi que dans les coagulomètres automatisés à haut volume. Ces
appareils quantifient les facteurs de coagulation dans les échantillons de sang et permettent d'établir
des profils de coagulation à essais multiples. Dans les laboratoires pharmaceutiques, la néphélométrie
est principalement utilisée pour évaluer la solubilité des médicaments ou des composés. En outre, il
s'agit d'une méthode.
Prometteuse pour la quantification de la croissance microbienne et elle est couramment utilisée pour
déterminer le nombre de cellules dans les suspensions de micro-organismes tels que les levures.

Applications Cliniques :
 Protéines : albumine dans le sérum, le LCR et l'urine
 Compléments : alpha-antitrypsine, bêta 2 , microglobuline.
 Immunoglobulines : (IgG, IgA et IgM), chaînes légères libres.
 Protéines du complément : C3 et C4 , CRP, hs-CRP transferrine, haptoglobine, etc.
 Haptènes : médicaments libres
 La turbidimétrie peut être utilisée en biologie pour déterminer le nombre de cellules dans une
solution

Conclusion
La technique laser en néphélométrie est une technique fiable et reproductible. Les études prouvent que
l’analyse néphélométrique comparée à l’analyse turbidimétrique est non seulement comparable, mais
nettement supérieure en terme de sensibilité. L’avantage principal de la néphélométrie est la capacité
de détecter la lumière diffractée, même si la concentration des particules reste très faible.

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 Néphéloturbidométrie

Définition
Phénomène où les faisceaux de lumière lorsqu'ils heurtent des particules de matière changent dans son
direction de propagation d'un à plusieurs plans sans modifier la puissance rayonnante nette ou énergie.

Figure 7: Représentation schématique pour la mesure néphro-turbidimétrique

La Différence entre la Néphélométrie et la Turbidimétrie

La turbidité ou la nébulosité peut être détectée soit par
néphélométrie, soit par turbidimétrie. Ces deux techniques sont
non destructives et se basent sur la diffusion de la lumière causée
par une suspension de particules solides. Bien que ces deux termes
soient parfois utilisés comme synonymes, ils ne le sont pas
techniquement parlant. La turbidimétrie consiste à mesurer la
perte d'intensité de la lumière transmise à travers un échantillon,
causée par l'effet de diffusion des particules insolubles. De même
que l'absorbance, la turbidimétrie quantifie l'intensité de la lumière
transmise à travers l'échantillon, en particulier son atténuation. En
turbidimétrie, on fait passer la lumière d'une longueur d'onde
connue à travers un échantillon contenant des particules insolubles
en solution. Un détecteur placé en ligne avec la source lumineuse
recueille la lumière qui traverse l'échantillon. La diminution de la
transmission lumineuse est mesurée par rapport à une référence, et
la lumière absorbée est quantifiée en unités de densité optique
(DO). 2 Ainsi, la turbidité peut être mesurée par exemple à l'aide
d'un lecteur de microplaques à absorbance.
Figure 8: différence entre la détection
Turbidimétrique et

En revanche, la néphélométrie détermine la turbidité d'une solution en quantifiant directement l'intensité de la

lumière diffusée par les particules insolubles de l'échantillon. Habituellement, la lumière diffusée est mesurée
à un angle par rapport à la source de lumière incidente, pour éviter l'interférence de la lumière éventuellement
transmise. À cet égard, elle présente des similitudes avec la mesure de l'intensité de la fluorescence.

18
 Choix De La Méthode

Le choix de la méthode dépend de la quantité de lumière diffusée par les particules en suspension
présentes dans la solution.
 TURBIDIMÉTRIE : suspensions très concentrées.
 NEPHELOMETRIE :suspensions faiblement concentrées - résultats plus précis.

Conditions de fonctionnement de la Néphélométrie et de la Turbidimétrie

Dans les analyses turbidimétriques et néphélométriques, un certain nombre de conditions doivent être
remplies pour que le travail soit réussi.
Comme la quantité de lumière diffusée ou absorbée dépend de la taille des particules dans la solution,
des résultats corrects dépendront de la méthode de préparation des suspensions et de la reproductibilité
de leurs propriétés optiques. Les facteurs suivants influencent les propriétés optiques de la suspension
et la taille des particules :
a) Le rapport de concentration des solutions mélangées,
b) Ordre de mélange des solutions,
c) Concentration des ions formant le précipité,
d) La température,
e) Vitesse de mélange,
f) Présence d'électrolytes étrangers,
g) Stabilité de la dispersion,
h) Présence de non-électrolytes,
i) Présence de colloïdes protecteurs,
j) le temps nécessaire pour atteindre la turbidité maximale.

Instrumentation
Tout photomètre (visuel ou photoélectrique) peut être
un turbidimètre sans modification. Cependant, pour une
plus grande sensibilité, un filtre bleu peut être ajouté à
la conception de l'instrument. Le même instrument que
celui décrit ci-dessus peut également être utilisé
comme néphélomètre, mais dans ce cas, les instruments
doivent être équipés de dispositifs permettant de régler
la source et le détecteur à angle droit l'un par rapport à
l'autre.

Figure 9: Composants du turbidimètre (ligne droite) et du néphélomètre

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 Conclusion générale

Le mesurage de la turbidité sur échantillon, réalisée au laboratoire ou sur le terrain à l’aide de capteurs
à immersion utilisables en continu in situ, est une opération indispensable pour : - obtenir des valeurs
fiables de turbidité, comparables entre elles si elles sont issues de capteurs basés sur le même principe
(atténuation ou diffusion) et de préférence du même modèle ;
- si l’application le requiert, établir des relations entre turbidité et paramètres réglementaires, en
particulier la concentration en matières en suspension.

La précision des estimations qui pourront être obtenues par ces relations restera tributaire des
variations de caractéristiques des particules transportées par l’effluent. L’application du protocole
proposé de mesurage de la turbidité sur échantillon aboutit, pour le mesurage en atténuation, à des
incertitudes de l’ordre de 2 % de la valeur mesurée, avec un minimum de 5 FAU, sur les suspensions
de référence comme sur les eaux résiduaires urbaines.

Pour obtenir cette précision, une attention particulière doit être portée à la non-linéarité des appareils
et dans une moindre mesure à la précision des étalons. Pour les mesurages in situ, l'incertitude
expérimentale peut être plus élevée et ne pourrait alors plus être négligée devant l'incertitude
d'étalonnage.
Ces résultats correspondent à un mesurage sur échantillon à court terme.
L’évaluation de la précision in situ sur le long terme, intégrant l’aspect traitement du signal et
l’influence des facteurs d’environnement et de la dérive, fera l’objet d’un article ultérieur.

Les turbidimètres utilisables en eaux résiduaires ont atteint aujourd’hui un niveau de fiabilité
relativement satisfaisant, permettant d’envisager une généralisation de leur emploi. Naturellement, des
progrès technologiques sont toujours souhaitables, en termes de nettoyage et de traitement du signal.
Cet article propose des protocoles rigoureux d’étalonnage et de vérification, assortis d’une évaluation
complète des incertitudes. Leur mise en œuvre, par des personnels opérationnels formés, permettra
rapidement d’obtenir des informations reproductibles et très utiles sur les réseaux d’assainissement et
leur fonctionnement.

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