REPUBLIC OF CAMEROON

REPUBLIQUE DU CAMEROUN
Peace-Work-Fatherland
Paix-Travail-Patrie
---------------
-----------------------
Ministry of Higher Education
Ministère de l’Enseignement Supérieur
-------------
-----------------
University of Ngaoundere
Université de Ngaoundéré

ECOLE DE GENIE CHIMIQUE ET DES INDUSTRIES MINERALES

DIVISION DES AFFAIRES ACADEMIQUES DE LA RECHERCHE ET DE LA COOPERATION

BP: 454 NGAOUNDERE

TRAVAIL PERSONNEL DE L’ETUDIANT

FILIERE: GENIE DES PROCEDES ET CHIMIE FINE (GPCF)

UE: GENIE GENETIQUE ET MOLECULAIRE

Niveau: V
GROUPE: VII

THEME:
ETUDE DU POLYMORPHISME DE L’ADN

Rédigé par les élèves-ingénieurs formés de:

Nom (s) et prénom (s) Matricule

NKOUNGA FOKWA URIEL ALEX 19A118CM
NLOUBOULI BILOUER LYDIE LUCRECE 21B023C M
NYETAM DIMA JOYCE ERIKA 19A122CM
NZOUEBET MBATCHOU DERRICK EVRAD 19A123CM
OUSSOUMANOU OTTO EMMANUEL 21B024CM
SIPING MOUAFO EMELINE 19A136CM
SONFACK TATSEDA CLEMENTINE 19A137CM
TAIKI TENONE BENJAMIN 19A141CM

Sous la supervision de:

Pr DJITIE

Année académique: 2023-2024

1
 TABLE DES MATIERES

INTRODUCTION ................................................................................................................... 2
I. Type de polymorphisme de l’ADN ................................................................................. 3
1. Translocations, inversions, délétions, fusions et insertions ...................................... 3
2. Mutations ponctuelles ................................................................................................. 4
3. Séquences répétées en tandem (VNTR: Variable Number of Tandem Repeats) .. 4
a. Satellites .................................................................................................................... 4
b. Minisatellites ............................................................................................................ 5
c. Microsatellites (ou STR: Short Tandem Repeats) ................................................ 6
II. LES TECHNIQUES DE DETECTION DU POLYMORPHISME DE L’ADN .... 7
1. PCR-RFLP (Polymerase Chain Réaction - Restriction Fragment Length
Polymorphism)..................................................................................................................... 7
2. PCR en Temps Réel (qPCR) ....................................................................................... 9
3. ELECTROPHORESE DE GEL .............................................................................. 11
4. SEQUENÇAGE DE L'ADN ..................................................................................... 13
5. SNP Arrays (Single Nucleotide Polymorphism Arrays) ........................................ 18
6. MALDI-TOF (Matrix-AssistedLaser Désorption/Ionisation Time-of-Flight) ..... 20
III. Utilisation du polymorphisme de l’ADN en recherche génétique et médicale ..... 22
IV- limitations et controverses liées au polymorphisme de l'ADN.................................... 23
1. Fiabilité des techniques de détection........................................................................ 23
2. problèmes éthique et de confidentialité des données génétiques ........................... 23
3. Confidentialité Des Banques De Données ................................................................ 25
CONCLUSION ...................................................................................................................... 26
REFERENCES ...................................................................................................................... 27
QUESTIONNAIRES GENIE GENETIQUE TPE 2 .......................................................... 30

1
 INTRODUCTION
Le polymorphisme de l'ADN sont les différentes variations dans la séquence
nucléotidique de l'ADN entre les individus d'une même espèce. Ces variations peuvent
se manifester par des changements d'un seul nucléotide (polymorphisme nucléotidique
ou SNP) ou par des réarrangements plus importants de segments d'ADN
(polymorphisme de structure). L'étude du polymorphisme de l'ADN revêt une grande
importance dans de nombreux domaines de la science à l'instar de comprendre
l'évolution et la diversité génétique au sein des populations, étudier les variations
génétiques présentes dans une population et est essentielle en génétique et en médecine.
Dans notre travail nous présenterons d'abord les types de polymorphisme de l'ADN
ensuite les techniques de détection du polymorphisme de l'ADN et enfin l'utilisation du
polymorphisme de l'ADN en recherche et limitation et controverce liée au
polymorphisme de l'ADN.

2
 I. Type de polymorphisme de l’ADN
1. Translocations, inversions, délétions, fusions et insertions
Les études cytogénétiques de cas pathologiques humains ou animaux ont révélé
l’existence d’altérations plus ou moins importantes des molécules d’ADN, conduisant
à la formation de remaniements chromosomiques (Popescu 1989). Dans certaines
populations naturelles, certains remaniements chromosomiques se maintiennent à des
fréquences élevées et, par conséquent, peuvent être considérés comme des
polymorphismes: les fusions centriques chez les gazelles (Gazella subgutturosa) et
l’oryx d’Arabie (Oryx leucorix) ou les inversions paracentriques chez Drosophila
melanogaster, les passereaux et les pigeons. Chez les animaux d’élevage certaines
translocations Robertsoniennes (1/29 chez les bovins, translocations Massey 5/26, 8/11
et 7/25 dans certaines races ovines) peuvent être considérées comme un
polymorphisme chromosomique. Des polymorphismes consécutifs à des inversions
ont également été décrits, dans la régionq13 du chromosome 2 humain par exemple
(inversion péricentrique). Les délétions/insertions, qui sont généralement la cause
d’anomalies phénotypiques graves, peuvent cependant être des polymorphismes,
comme dans le cas de la variation de taille du chromosome Y chez l’Homme, les
bovins ou le cheval. A l’échelle moléculaire, ces remaniements chromosomiques
peuvent provoquer des fusions de gènes, en orientation directe ou inversée, souvent
associées à des délétions allant de quelques nucléotides à une centaine de bases. Dans
le cas de la leucémie myéloïde chronique par exemple, une translocation apparemment
réciproque entre les chromosomes 9 et 22 entraîne la fusion du gène bcr (Hsap22) et du
proto-oncogène c-abl (Hsap9), avec perte variable d’une partie de la région 5’ de c-abl.
L’analyse moléculaire a mis en évidence l’existence d’événements de délétions,
fusions, inversions ou insertions à l’échelle de quelques bases à quelques kilobases.
Toute insertion ou délétion d’un nombre de bases non multiple de trois entraîne une
modification du cadre de lecture (mutation frameshift lorsqu’elle se produit dans un
exon traduit). Ce type de mutation fait généralement apparaître en aval un codon non
sens prématuré conduisant à la formation d’une protéine tronquée. Une variation d’un
nombre de bases multiple de trois maintient le cadre de lecture, mais entraîne la perte
ou l’addition d’acides aminés, comme dans le cas de la délétion ∆F508 de la
mucoviscidose.

3
 2. Mutations ponctuelles
Les mutations ponctuelles, qui n’intéressent qu’une région très limitée du génome
(quelques nucléotides, au maximum), sont la source prépondérante de polymorphisme.
En effet, les estimations réalisées chez l’Homme suggèrent qu’un individu non
consanguin présente une base à l’état hétérozygote tous les 200 à 1000 nucléotides.
La modification la plus simple est le remplacement d’une base par une autre. La
substitution d’une base purique par une base purique (A / G) ou d’une base
pyrimidique par une base pyrimidique (C / T) constitue une transition. Les
remplacements d’une base purique par une base pyrimidique et réciproquement (A,G /
C,T) sont des transversions. Il existe donc quatre transitions et huit transversions
possibles. Dans les régions codantes, ces substitutions peuvent modifier la nature de
l’acide aminé codé, en fonction principalement de leurs positions dans le codon. En
effet, compte tenu de la dégénérescence du code génétique et en ne considérant que les
triplets codant pour des acides aminés, 5 % des mutations de la première base, 0 % des
mutations de la seconde et 72 % des mutations de la troisième base n’entraînent pas de
changement d’acide aminé (mutations silencieuses). Pour la troisième base, près de 90 %
des transitions sont silencieuses, contre 30 % des transversions. Par exemple, le
glutamate est codé par les deux codons GAA et GAG. Une transition de la troisième
base du codon (A→G) est silencieuse, alors que les transversions (A→C ou A→T)
entraînent le remplacement du glutamate par l’aspartate. Dans l’hypothèse d’une
pression de sélection visant à conserver la fonction du peptide codé, les transitions sont
donc probablement mieux tolérées que les transversions. C’est sans doute pourquoi les
différences observées entre les séquences des gènes orthologues de différentes espèces
de mammifères sont plus souvent causées par des transitions. Des bases peuvent
également être délétées ou ajoutées, conduisant à une modification du cadre de lecture.

3. Séquences répétées en tandem (VNTR: Variable Number of Tandem

Repeats)

Les séquences répétées en tandem (ou VNTR pour Variable Number of Tandem
Repeats) sont de taille variable, constituées de répétitions en tandem d’un motif
unitaire de taille également variable. Selon la taille du motif et de la répétition, on
distingue les satellites (Csink et Henikoff 1998), les minisatellites (Jarman et Wells
1989) et les microsatellites (Karlin et Burge 1995)

a. Satellites
La centrifugation en gradient de densité d’ADN génomique a mis en évidence des
bandes mineures (ou satellites) d’une densité différente de la bande majeure
4
représentant la fraction principale de l’ADN. Classiquement, trois bandes peuvent être
identifiées, chacune comportant différentes familles de séquences répétées appelées
séquences satellites. Le motif répété en tandem comporte de 2 à 100 nucléotides. Il
existe dans les unités de répétition une organisation hiérarchisée de séquences où l’on
peut reconnaître des motifs de plus en plus courts. Chez les primates par exemple, les
satellites II contiennent une répétition en tandem du motif AATTCC, alors que al’ADN
satellite alpha, constituant principal de l’hétérochromatine centromérique, est
caractérisé par une répétition d’une unité de 171 paires de bases. La variation du
nombre de répétitions des satellites entraîne un polymorphisme de quantité
d’hétérochromatine constitutive en région péricentromérique, visualisé par la
technique de bandes C chez certaines espèces comme les bovins chez lesquels huit
satellites ont été décrits. Ces séquences ne sont généralement pas transcrites et sont
considérées comme de l’ADN ‘poubelle’ ou ‘camelote’ (junk DNA). Le tableau 1
résume les principales caractéristiques des satellites.

b. Minisatellites
Les minisatellites hypervariables sont extrêmement polymorphes, tant du point de vue
du nombre de répétitions que de la taille des unités répétées. Les unités partagent
cependant un motif central (ou core) GGGCAGGANG. Ce motif présente une
homologie avec la séquence chi, séquence signal de recombinaison chez E. Coli et
serait de ce fait susceptible de favoriser les recombinaisons et donc le polymorphisme
des minisatellites. Le tableau 2 en présente les principales caractéristiques. L’ADN
télomérique constitue une autre famille majeure de minisatellites. Le motif
hexanucléotidique TTAGGG est répété sur environ 10 à 15 kb chez l’Homme et 30 kb
chez la souris. De même que pour les satellites, le rôle biologique des minisatellites
n’est pas élucidé, sauf dans le cas de l’ADN télomérique dont une fonction supposée
est de protéger l’extrémité des chromosomes de la dégradation et d’en permettre la
réplication.

5
 c. Microsatellites (ou STR: Short Tandem Repeats)
Les microsatellites comportent des séries de répétitions d’un motif de base court (1
à 4 pb) et sont répartis sur l’ensemble du génome. Le nombre de répétitions ne dépasse
pas 25 et la taille de la séquence n’excède généralement pas 150 paires de bases. Le
tableau 3 présente la fréquence des principales séries chez les mammifères. Bien que
les répétitions alternées purine-pyrimidine (comme dans le cas des répétitions CA)
soient capables de modifier la conformation de l’ADN invitro (ADN-Z), la fonction in
vivo des microsatellites reste inconnue. Les répétitions de trinucléotides en tandem
constituent un cas particulier, dans la mesure où un coportement anormal de
microsatellites (CAG)n ou (CCG)n a pu être montré, en liaison avec certaines maladies
humaines. En effet, au dessus d’une certaine longueur critique, les répétitions sont
instables au cours de la mitose et de la méiose et ne sont pratiquement jamais
transmises sans modifications à la descendance: des extensions ou des délétions
peuvent apparaître, en fonction de la longueur de la répétition et du sexe du parent.
Chez les patients atteints de la maladie de l’X fragile, le motif CGG, normalement
répété de 6 à 54 fois, est présent de 200 à plus de 1000 fois. Par un mécanisme inconnu,
ces extensions affectent la méthylation de l’ADN et la structure chromatidienne,
conduisant à l’inactivation des gènes adjacents. D’autres sites fragiles n’entraînant
aucun effet phénotypique ont également été observés sur d’autres chromosomes
humains, ovins et bovins (constrictions achromatiques)

6
II. LES TECHNIQUES DE DETECTION DU POLYMORPHISME
DE L’ADN
L'étude du polymorphisme de l'ADN constitue une pièce maîtresse dans la
compréhension de la diversité génétique au sein des espèces, y compris la nôtre. Les
polymorphismes, qu'ils soient sous la forme de SNP (Single Nucleotide
Polymorphisms) ou de variations plus complexes, portent des informations cruciales
sur l'évolution, la susceptibilité aux maladies et la réponse aux traitements. IL existe
ainsi plusieurs techniques de détection du polymorphisme de l'ADN, dont certains
sont :

1. PCR-RFLP (Polymerase Chain Réaction - Restriction Fragment Length

Polymorphism)

La PCR-RFLP représente une méthode ingénieuse dans le domaine de la

génétique moléculaire, combinant la puissance de la PCR pour l'amplification
spécifique de l'ADN et l'analyse des polymorphismes par la variation des sites de
restriction.
➢ Principes Fondamentaux:
- PCR (Polymérase Chain Réaction): Amplification sélective d'une région d'ADN
contenant le polymorphisme d'intérêt.
- RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism): Utilisation d'enzymes de
restriction pour cliver l'ADN à des sites spécifiques, créant des fragments de longueurs
variables.

➢ Étapes de la PCR-RFLP:

• Amplification par PCR: La région génomique d'intérêt est amplifiée par PCR,
produisant de multiples copies spécifiques

• Digestion par une Enzyme de Restriction: L'ADN amplifié est traité avec une
enzyme de restriction, clivant l'ADN à des sites prédéfinis.

• Électrophorèse de Gel: Les fragments résultants sont séparés en fonction de

leur taille lors d'une électrophorèse sur gel.

• Détection des Polymorphismes: Les motifs de bandes résultants révèlent les

variations alléliques, chaque motif correspondant à une variante spécifique.

7
Figure 1:PCR-RFLP (Polymerase Chain Réaction - Restriction Fragment Length Polymorphism)

➢ Applications de la PCR-RFLP:

- Génotypage de SNP: Identification de variations d'une seule paire de bases.

- Études d'Associations Génétiques: Exploration des liens entre variations génétiques

et phénotypes.

➢ Avantages de la PCR-RFLP:

- Accessibilité: Utilise des techniques bien établies, largement accessibles dans les
laboratoires.

- Coût Abordable: Relativement économique par rapport à certaines technologies plus

récentes.

8
 ➢ Limitations:

- Sensibilité Limitée: Peut ne pas détecter des variations subtiles.

- Multiplexage Limité: La détection simultanée de plusieurs polymorphismes peut

être complexe.

2. PCR en Temps Réel (qPCR)

La PCR en temps réel (qPCR) a révolutionné la détection des polymorphismes

d'ADN en introduisant une approche quantitative et hautement précise. Cette
technique offre une mesure en temps réel de l'amplification de l'ADN, permettant une
analyse dynamique et sensible des variations génétiques.

➢ Principes Fondamentaux:

- Fluorescence Quantitative: La qPCR utilise des marqueurs fluorescents liés à des

sondes spécifiques pour suivre l'amplification en temps réel.

- Amplification Cyclique: Comme dans la PCR conventionnelle, la qPCR amplifie

sélectivement la région d'ADN contenant le polymorphisme.

➢ Etapes de la qPCR pour la Détection des Polymorphismes:

• Préparation de l’Échantillon: L'ADN est préparé, souvent par PCR, pour

servir de matériau de départ.

• Réaction de qPCR: L'amplification de l'ADN est surveillée en temps réel à

chaque cycle par des sondes fluorescentes.

• Analyse des Courbes de Fusion: Les variations de séquence sont identifies

par l'analyse des courbes de fusion, révélant la température à laquelle les
sondes spécifiques se détachent de l'ADN amplifié.

9
 Figure 2:Agents se liant à l’ADN double brin (Double-stranded DNA binding dyes: Lightcycler
assay).

(a) Durant la dénaturation, le SYBR Green I libre exhibe peu de fluorescence. (b) À la
température d’appariement, quelques molécules se lient au double brin d’ADN naissant
résultant en une émission de fluorescence lors de l’excitation. (c) Durant la phase de
polymérisation, de plus en plus de molécules se lient au brin naissant et l’accroissement de la
fluorescence peut-êtresuivi en temps reel.

➢ Applications de la qPCR dans la Détection des Polymorphismes:

- Génotypage de SNP (Single Nucleotide Polymorphisms): Identification de

variations d'une seule paire de bases.

- Quantification d’Allèles: Mesure précise de la quantité relative des différentes

variantes alléliques.

➢ Avantages de la qPCR:

- Haute Sensibilité: Détecte des variations même à faible abondance d'ADN.

- Quantification Précise: Fournit des mesures quantitatives de l'amplification.

- Coût: Peut être plus onéreuse que des méthodes moins quantitatives.

10
 3. ELECTROPHORESE DE GEL

L'électrophorèse de gel demeure une technique fondamentale et polyvalente utilisée

pour la détection des polymorphismes d'ADN. Cette méthode repose sur la séparation
des fragments d'ADN en fonction de leur taille dans un gel, permettant ainsi
l'observation visuelle des variations génétiques.

➢ Principes Fondamentaux:

- Mobilité Électrophorétique: Les fragments d'ADN, chargés négativement, migrent

à travers un gel sous l'influence d'un champ électrique, se séparant selon leur taille.

- Coloration des Fragments: Une fois la migration terminée, le gel est coloré avec
des agents spécifiques pour visualiser les fragments d'ADN.
En raison de son squelette chargé négativement, l'ADN est fortement attiré par une électrode
positive. Lors de l'électrophorèse sur gel d'agarose, le gel est orienté horizontalement dans une
solution tampon. Les échantillons sont chargés dans des puits situés sur le côté du gel le plus
proche de l'électrode négative, puis extraits à travers le tamis moléculaire de la matrice d'agarose
en direction de l'électrode positive. La matrice d'agarose empêche le mouvement des plus grosses
molécules à travers le gel, tandis que les molécules plus petites le traversent plus facilement. Ainsi,
la distance de migration est inversement corrélée à la taille du fragment d'ADN, les fragments
plus petits parcourant une plus grande distance à travers le gel. La taille des fragments d'ADN
d'un échantillon peut être estimée en la comparant à des fragments de taille connue dans une
échelle d'ADN également traitée sur le même gel. Pour séparer de très gros fragments d'ADN, tels
que des chromosomes ou des génomes viraux, l'électrophorèse sur gel d'agarose peut être
modifiée en alternant périodiquement l'orientation du champ électrique pendant l'électrophorèse
sur gel en champ pulsé (PFGE). Dans la PFGE, les petits fragments peuvent se réorienter et
migrer légèrement plus rapidement que les fragments plus grands. Cette technique peut donc
servir à séparer de très gros fragments qui se déplaceraient autrement ensemble lors d'une
électrophorèse standard sur gel d'agarose. Dans n'importe laquelle de ces techniques
d'électrophorèse, les emplacements des fragments d'ADN ou d'ARN dans le gel peuvent être
détectés par différentes méthodes. Une méthode courante consiste à ajouter du bromure
d'éthidium, un colorant qui s'insère dans les acides nucléiques à des endroits non spécifiques et
qui peut être visualisé lorsqu'il est exposé à la lumière ultraviolette. D'autres colorants plus sûrs
que le bromure d'éthidium, un cancérogène potentiel, sont désormais disponible

11
 12
Figure 3:électrophorèse du gel
 ➢ Applications de l'Électrophorèse de Gel:

- Détection de Polymorphismes: Visualisation des variations de taille associées à des

polymorphismes.

- Séparation d’ADN: Utilisée pour séparer les fragments d'ADN en préparation de

clonage ou de séquençage.

- Contrôle de Qualité: Vérification de la qualité et de la quantité d'ADN après une

réaction de PCR.

➢ Avantages de l'Électrophorèse de Gel :

- Simplicité: La méthode est relativement simple et peu coûteuse.

- Polyvalence: Peut être utilisée pour diverses applications en génétique moléculaire.

➢ Limitations:

- Résolution Limitée: La résolution dépend de la taille des fragments et du type de gel

utilisé.

- Temps de Traitement: Peut-être plus long comparé à des méthodes automatisées

4. SEQUENÇAGE DE L'ADN

Le séquençage de l'ADN s'est érigé en une méthode incontournable pour

la détection des polymorphismes d'ADN, offrant une précision remarquable dans la
cartographie des variations génétiques au niveau moléculaire.

➢ Principes Fondamentaux:

- Identification des Bases Nucléotidiques: Le séquençage permet de lire l'ordre exact

des bases (A, T, C, G) dans une séquence d'ADN.

- Polymorphismes d’ADN: Les variations génétiques, telles que les SNP

(Single Nucléotide Polymorphismes), deviennent évidentes lors de la comparaison
des séquences.
➢ Étapes du Séquençage pour la Détection des Polymorphismes:
Préparation de l’Échantillon:

Isolation et préparation de l'ADN à séquencer, souvent par amplification PCR.

Séquençage:
13
 - Sanger Sequencing: Identifie des polymorphismes en révélant des positions où
différentes bases sont incorporées.

- Séquençage de Nouvelle Génération (NGS) : Permet une analyse à grande échelle,

détectant divers polymorphismes simultanément.

Analyse Comparative: Comparaison des séquences pour repérer les variations,

comme les substitutions de nucléotides.

Interprétation des Résultats: Utilisation d'outils bio-informatiques pour déterminer

l'impact des polymorphismes sur la structure génétique.

Figure 4:Séquençage de L’ADN

Principes du séquençage selon la méthode de Sanger. Après dénaturation du produit

amplifié par séquençage, l’un des deux brins (ici, le brin sens) s’hybride à une amorce
spécifique. Pour la simplicité du schéma, nous avons pris une amorce de 5 pb, la taille
habituelle des amorces étant de 20 pb environ. Le mélange réactionnel contient, outre
les tampons et l’ADN polymérase, des déoxynucléotides triphosphates
(dNTP, dA-, dC-, dG-, dT-TP) mais aussi des didéoxynucléotides triphosphates
(ddNTP, ddA-, ddC-, ddG-, ddT-TP). L’incorporation aléatoire d’un ddNTP à la
place d’un dNTP ne permet plus la polymérisation par l’ADN polymérase.
L’extension s’arrête. À la fin de la réaction de séquence effectuée selon des cycles
thermiques identiques à ceux de la PCR (on parle de PCR asymétrique, une seule
amorce étant utilisée au lieu de deux), nous avons des fragments de taille différente.
Ces fragments sont soumis à migration dans un champs électrique. Il s’agit le plus

14
souvent d’une électrophorèse capillaire. Chaque ddNTP étant marqué par un
fluorophore différent, un signal lumineux sera généré, spécifique de la
base didéoxy incorporée. Les fragments étant de taille différente et la résolution allant
jusqu’à une base de différence, il sera simple de recueillir ce signal et en déduire la
séquence. Les signaux lumineux sont analysés par un logiciel spécifique, et le résultat
de l’analyse peut être lu, par exemple, sous forme d’un électrophorégramme de
lecture facile. Des logiciels d’interprétation des séquences sont également disponibles.
Pour confirmer un résultat, toute réaction de séquence d’un fragment d’ADN est
systématiquement faite sur le brin sens et le brin antisens.

➢ Applications du Séquençage pour la Détection des Polymorphismes:

- Études d'Associations Génétiques: Identification de liens entre variations génétiques

et traits phénotypiques.

- Diagnostics Génétiques: Détection de mutations associées à des maladies génétiques

- Pharmacogénomique: Compréhension des variations génétiques influençant les

réponses aux médicaments.

➢ Avantages:

- Haute Résolution: Détecte des variations à l'échelle de la base, offrant une

résolution fine.

- Polyvalence: Applicable à différents types de polymorphismes, des SNP aux

insertions/délétions.

➢ Inconvénient:

- Coût et Complexité: Certains types de séquençage peuvent être coûteux et

nécessitent des compétences avancées en bio-informatique.

PCR Allele-Specific (AS-PCR): Une Approche Ciblée pour la Détection Précise des
Polymorphismes d'ADN

15
La PCR Allele-Specific (AS-PCR)

La AS- PCR représente une méthode ciblée et efficace pour la détection des
polymorphismes d'ADN, mettant l'accent sur la spécificité de l'amplification pour
discriminer entre les différentes variantes génétiques.

➢ Principes Fondamentaux:

- Amplification Spécifique: Utilise des amorces spécifiques conçues pour cibler

sélectivement une séquence associée à une variante allélique.

- Discrimination par Séquence: La spécificité est obtenue grâce à des amorces

complémentaires aux séquences spécifiques des allèles, permettant une amplification
sélective.

➢ Etapes de la PCR Allele-Specific:

• Conception des Amorces: Des amorces spécifiques à chaque allèle sont

conçues, différenciées par la base en position critique.

• Amplification PCR: L'ADN est amplifié en utilisant ces amorces spécifiques,

permettant la sélectivité entre les allèles.

• Analyse des Produits Amplifiés: Les produits de PCR sont analysés par
électrophorèse ou d'autres méthodes pour identifier la présence de l'allèle
spécifique.

16
Figure 5: La PCR Allele-Specific (AS-PCR)

➢ Applications de l'AS-PCR:

- Détection de SNP (Single Nucléotide Polymorphismes): Ciblage de variations d'une

seule base pour déterminer les génotypes.

- Typage Allélique: Identification des variantes spécifiques d'un gène ou d'une région
génomique.
➢ Avantages de l'AS-PCR:

- Sensibilité: Peut détecter des variations alléliques même avec de faibles

concentrations d'ADN.

- Simplicité: Processus relativement simple et rapide par rapport à d'autres methods

➢ Limitations:

- Multiplexage Limité: Il peut être difficile de concevoir des amorces spécifiques

pour plusieurs allèles simultanément.

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- Dépendance de la Conception des Amorces: La réussite de la méthode repose sur
une conception précise des amorces.

5. SNP Arrays (Single Nucleotide Polymorphism Arrays)

Les SNP Arrays (Single Nucleotide Polymorphism Arrays) sont une technologie
avancée de génomique qui permet la détection simultanée de milliers à des millions
de SNP, offrant une vue exhaustive des variations génétiques au niveau des
nucléotides individuels.

➢ Principes Fondamentaux:

- SNP (Single Nucleotide Polymorphism): Une variation génétique où un seul

nucléotide diffère entre les individus.

- Puces à ADN: Les SNP Arrays utilisent des puces à ADN qui contiennent des
sondes spécifiques pour différentes variantes de SNP.

➢ Etapes des SNP Arrays:

• Préparation de l’Échantillon: Extraction de l'ADN à partir de l'échantillon

biologique à étudier.

• Hybridation: L'ADN de l'échantillon est marqué et hybridé avec la puce à

ADN contenant des sondes complémentaires aux SNP.

• Détection: Mesure de l'intensité des signaux sur la puce, permettant de

déterminer les allèles présents.

• Analyse Informatique: Les données sont analysées informatiquement pour

identifier les SNP et générer des profils génétiques.

18
Figure 6: Les SNP Arrays (Single Nucleotide Polymorphism Arrays)

➢ Applications des SNP Arrays:

- Études d'Association Génétique: Recherche de liens entre des variations génétiques

spécifiques et des traits phénotypiques.

- Cartographie Génétique: Localisation de gènes associés à des maladies ou

caractéristiques particulières.

- Études de Population: Analyse de la diversité génétique dans différentes

populations.

➢ Avantages des SNP Arrays:

- Haut Débit: Permet l'analyse simultanée de milliers à des millions de SNP.

- Précision: Offre une résolution fine au niveau nucléotidique.

➢ Limitations
- Coût: Peut être relativement coûteux, en particulier pour des études à grande
échelle.
- Dépendance de la Puce: La qualité des résultats dépend de la conception précise de
la puce à ADN.

19
 6. MALDI-TOF
(Matrix-AssistedLaser Désorption/Ionisation Time-of-Flight)

La technologie MALDI-TOF, abréviation de Matrix-Assisted

Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight, représente une méthode avancée de
détection des polymorphismes d'ADN, exploitant la spectrométrie de masse pour
fournir des informations précises sur les variations génétiques.

Principes Fondamentaux:

- Ionisation au Laser: L'ADN est combiné à une matrice absorbante de photons et

exposé à un laser, provoquant l'ionisation des molécules d'ADN.

- Accélération et Séparation des Ions: Les ions ainsi formés sont accélérés dans un
champ électrique et se déplacent jusqu'à un détecteur TOF (Time-of-Flight) où ils
sont séparés en fonction de leur temps de vol.

- Analyse par Spectrométrie de Masse: La masse des ions est mesurée avec une
grande précision, permettant l'identification des différentes variations génétiques.

➢ Etapes de la Technique MALDI-TOF pour la

Détection des Polymorphismes

• Préparation de l’Échantillon: L'ADN est préparé, souvent par PCR, et

combiné à une matrice pour faciliter l'ionisation.

• Ionisation au Laser: Un laser génère des ions à partir de l'ADN dans la

matrice.

• Accélération et Séparation des Ions: Les ions sont accélérés et séparés

en fonction de leur masse.

• Détection et Analyse: Le temps de vol des ions est mesuré avec

précision, fournissant des informations sur la masse et permettant
l'identification des polymorphismes.

20
Figure 7: MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser Désorption/Ionisation Time-of-Flight

➢ Applications de MALDI-TOF:

- Typage Génétique: Utilisé pour le génotypage de SNP (Single Nucleotide

Polymorphisms) et la détection de variations génétiques.

- Séquençage de Petits Fragments: Analyse rapide de fragments courts d'ADN.

21
III. Utilisation du polymorphisme de l’ADN en recherche génétique et
médicale

Le polymorphisme de l'ADN offre de nombreuses utilisations dans différents

domaines tels que la génétique, la médecine, l'anthropologie et la recherche judiciaire.
Voici quelques-unes des utilisations les plus courantes du polymorphisme de l'ADN :

− Identification génétique: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé pour l'identification et

la distinction entre les individus. Les empreintes génétiques basées sur le polymorphisme
de l'ADN sont utilisées dans les enquêtes criminelles pour établir des correspondances ou
des exclusions entre les échantillons d'ADN prélevés sur une scène de crime et ceux des
suspects.
− Diagnostic de maladies génétiques: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé pour
détecter les variations génétiques associées à certaines maladies génétiques et pour
diagnostiquer ces maladies. Par exemple, les variations génétiques liées au risque de
développement de certains cancers peuvent être identifiées grâce au polymorphisme de
l'ADN.
− Études de parenté et généalogie: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé pour
déterminer les relations de parenté entre les individus et reconstituer des arbres
généalogiques. Les tests de paternité et les recherches généalogiques utilisent souvent des
marqueurs polymorphes de l'ADN pour établir des liens familiaux.
− Études évolutives et de migration humaine: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé
pour étudier les mouvements migratoires et les relations génétiques entre les populations
humaines. Les variations génétiques dans les populations peuvent fournir des
informations précieuses sur l'histoire évolutive et migratoire de l'humanité.
− Identification des espèces: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé pour identifier et
distinguer les espèces animales et végétales. Les séquences d'ADN polymorphes
spécifiques à chaque espèce permettent de développer des tests moléculaires pour
identifier les organismes et éviter les erreurs d'identification.
− Études de diversité génétique: Le polymorphisme de l'ADN est utilisé pour évaluer la
diversité génétique au sein des populations. Ces études sont importantes pour
comprendre les mécanismes de l'évolution, pour la conservation des espèces menacées et
pour l'amélioration des cultures agricoles en identifiant des caractères intéressants dans
les populations.

Ces utilisations du polymorphisme de l'ADN démontrent l'importance de cette technique dans

divers domaines scientifiques et pratiques. Elle offre des informations précieuses sur la variation
génétique, l'identité individuelle et les liens de parenté, contribuant ainsi à de nombreuses
avancées scientifiques et applications pratiques.

22
IV- limitations et controverses liées au polymorphisme de l'ADN

1. Fiabilité des techniques de détection

RFLP
Cette technique de marquage moléculaire a été très utilisée, car elle fournit des profils
peu complexes permettant de caractériser l’empreinte génétique d’une plante ou de
construire une carte génétique. Elle est fiable, les résultats observés peuvent être
répétés; elle est toutefois progressivement abandonnée au profit de techniques plus
rapides à mettre en œuvre, et souvent basée sur la PCR.
STR
Il faut connaître, synthétiser et tester les amorces bordant le microsatellite. Cette
technique est simple d’utilisation car repose simplement sur une PCR. Elle permet de
développer de nombreux marqueurs, notamment pour le maïs ou le colza. Toutefois,
elle n’est pas applicable à toutes les espèces, la tomate par exemple ne possède pas de
polymorphisme pour les microsatellites.
SNP
Le nombre différent de comparaisons est dû aux différents ensembles de SNP
rapportés par les deux méthodes. Ces résultats démontrent que l'approche basée sur la
population présente un taux de discordance significativement plus faible pour les
attributions de génotypes entre des échantillons en double et une précision absolue de
98,8%
2. problèmes éthique et de confidentialité des données génétiques

les problèmes éthiques rencontrés aujourd’hui en génétique médicale dans les pays
développés et dans les pays en développement. Ces problèmes sont les suivants :
égalité d’accès aux services, conseil volontaire ou obligatoire, tests et dépistage,
sauvegarde de l’individu et choix des parents, communication intégrale de
l’information, confidentialité ou devoir d’information des membres de la famille
présentant un risque génétique, protection de l’information génétique contre une
tierce partie institutionnelle, conseil directif ou non directif, utilisation non médicale
du diagnostic prénatal (notamment choix du sexe) et différents aspects de la
recherche et de la thérapie génique.

➢ Principes éthiques applicables en médecine

• Respect de l’autonomie des personnes: respecter l’autodétermination des individus
et protéger les personnes dont l’autonomie est réduite.
• Bienfaisance: accorder le rang de priorité le plus élevé au bien-être des personnes et
maximiser les effets bénéfiques pour leur santé.
23
• Non-malfaisance: éviter et prévenir ou du moins réduire au minimum tout effet
nocif pour les personnes.
• Justice: traiter les personnes de manière impartiale et équitable et répartir les
avantages et les inconvénients des soins de santé de manière aussi équitable que
possible dans la société.
➢ Principes éthiques appliqués aux services de génétique
• Allocation équitable des ressoures publiques à ceux qui en ont le plus besoin
(justice).
• Liberté de choix pour toutes les questions ayant trait à la génétique. La
femme doit être celle qui prend endernier ressort la décision en matière de
choix génésique (autonomie).
• Nécessité d’une démarche volontaire dans ce type de services, notamment en
matière de test et de traitement. Eviter toute contrainte par les pouvoirs
publics, la société ou les professionnels de la santé (autonomie).
• Respect de la diversité humaine et de ceux dont l’opinion est minoritaire
(autonomie, non-malfaisance).
• Respect de l’intelligence fondamentale des gens, quel que soit leur degré de
connaissance (autonomie).
• Enseignement de la génétique à destination du grand public, des
professionnels de la médecine et autres professionnels de la santé, des
enseignants, du clergé et autres personnes servant de source d’information
religieuse (bienfaisance).
• Coopération étroite avec les associations de patients et de parents, si elles
existent (autonomie).
• Prévention de toute discrimination ou de tout favoritisme abusifs en matière
d’emploi, d’assurance ou de scolarisation fondés sur des données génétiques
(non-malfaisance).
• Travail en équipe avec d’autres professionnels grâce à un réseau
d’orientation-recours. Lorsque c’est possible, aider les personnes et les
familles à devenir des membres informés de l’équipe (bienfaisance,
autonomie).
• Emploi d’un langage non discriminatoire qui respecte les gens en tant que
personnes (autonomie).
• Fourniture en temps utile des services ou du traitement de suivi indiqués
(non-malfaisance).
• Abstention de la fourniture de tests ou de méthodes qui ne sont pas
médicalement indiqués (nonmalfaisance).

24
 • Contrôle continu de la qualité des services, notamment des méthodes de
laboratoire (non-malfaisance).

3. Confidentialité Des Banques De Données

La pratique de la santé publique nécessite d’importants moyens et implique

l’intervention des nombreux acteurs pour recueillir, transcrire, entreposer et analyser
les données collectées. Toutes ces étapes ainsi que les diverses personnes impliquées
font craindre à beaucoup une fuite accidentelle ou délibérée d’informations médicales.
Cette crainte est encore amplifiée lorsqu’il s’agit de données génétiques
« La gestion des données médicales par des infomédiaires pose de graves problèmes
de sécurité et de confidentialité [...] Ni l’informaticien ni le technocrate ne sont
dangereux, en revanche l’homme d’affaire qui gère l’infomédiaire peut l’être. » Cette
déclaration de l’Ordre des médecins français résume le risque perçu par
l’accumulation des informations médicales dans des systèmes informatiques
La confidentialité dans les banques de données informatiques partagées peutelle
exister? Les expériences rapportées de fusion de renseignements de banques
différentes indiquent que cette confidentialité peut être brisée.
Quelles mesures doivent être mises en place pour l’assurer et rassurer les individus
qui subiront des tests génétiques dont les résultats devront être partagés? Plusieurs
interrogations
éthiques en matière de santé publique sont encore posées lorsque des données
génétiques sont en cause:
– L’anonymisation ou la dénomalisation des données génomiques sont-elles
sécuritaires?
– La fragmentation des banques de données génomiques est-elle préférable à la
centralisation?
– La protection légale des données médicales personnelles génomiques par rapport au
secteur privé s’étend-t-elle à l’État?
– Où se situe la responsabilité de l’administration de la Santé publique dans le bris de
confidentialité des données génomiques en cas de risque grave pour la santéou la vie?

25
 CONCLUSION
Au terme de notre travail nous pouvons dire que l'étude du polymorphisme de
l'ADN joue un rôle crucial dans de nombreux domaines tels que la génétique,
l'évolution, la médecine et même les enquêtes criminelles. Grâce à cette approche,
nous pouvons mieux comprendre la diversité génétique au sein des populations,
identifier les facteurs de risque pour certaines maladies, et établir des liens de parenté.
Les avancées technologiques, telles que le séquençage à haut débit, ont
considérablement amélioré nos capacités d'analyse et ouvert de nouvelles
perspectives de recherche. Cependant, les recherches futures devraient également se
concentrer sur l'éthique et la protection de la vie privée des individus, ainsi que sur
l'utilisation responsable des informations génétiques. En somme, l'étude du
polymorphisme de l'ADN est une discipline passionnante qui continue de faire
progresser nos connaissances sur la complexité de la vie et de l'humanité.

26
REFERENCES

- P Hamet, F Gossard. Banque de données génomiques,

confidentialité et santé publique.
- D.Wertz et al, Les problèmes éthiques rencontrés en génétique
médicale, WHO/HGN/ETH/00.4.
- https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&opi=89978
449&url=https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2847757
/%23:~:text%3DThe%2520different%2520number%2520of%252
0comparisons,an%2520absolute%2520accuracy%2520of%252098
.8%2525.&ved=2ahUKEwjqp53VoYSDAxUhh_0HHb7OABMQF
noECCkQBQ&usg=AOvVaw3VGah_riAFLArhPRigCSuR
- https://www.semae-pedagogie.org/sujet/marqueurs-moleculaires/

27
PARTIE
II

29
QUESTIONNAIRES GENIE GENETIQUE TPE 2
1-Définition, rôle et importance du génie génétique.

Le génie génétique est l’ensemble des outils permettant de modifier la constitution

génétique d’un organisme en supprimant, en introduisant ou en remplaçant une
séquence d’ADN.

Le génie génétique permet:

• d’identifier et d’isoler,

• de modifier et de transférer,

• de cloner et d’amplifier,

• de contrôler l’expression d’un gène ou d’un transgène dans le matériel biologique.

2- Définitions de gène et transgène.

Gène: portion de l’ADN qui code pour une protéine précise

Transgène: séquence isolée d’un gène étranger transféré à un organisme qui n’est pas
son organisme originel.

3- Définition de mutagène.

Mutagène: gène qui a été modifié pour produire une protéine recombinante

4- Définition de séquençage.

Séquençage: technique qui permet la détermination de l’ordre d’agencement

nucléotidique de l’ADN isolé pour définir les introns, les exons et les zones de
régulation de l’ADN inséré dans le vecteur.

5- Les techniques du génie génétique.

- Techniques d’extraction et de précipitation

- Technique de Contrôle de pureté
- Technique de quantification des acides nucléiques

30
6- Comment à partir d’absorbance pouvez-vous contrôle la pureté d’un ADN
extrait?

Le maximum d'absorption des acides nucléiques se situe à 260 nm. Les protéines
absorbent aussi à 260 nm mais avec un maximum d'absorption qui se situe vers 280
nm. Le rapport R constitue alors un bon moyen pour apprécier une éventuelle
contamination de la préparation d'ADN par les protéines ou par les RNA.

R = A260nm/A280nm

* ADN pur: 1,8 ≤ R ≤ 2

* ADN contaminé par les protéines: R < 1,8

* ADN contaminé par les ARN: R > 2

7- Quel est intérêt de connaitre les sites uniques de restriction dans un vecteur de
clonage?

Il permet de que connaitre le lieu où l’enzyme de restriction va cliver la portion

d’ADN précisément.

8-Quelles sont les raisons pour qu’un vecteur lambda soit un vecteur de clonage?

- Les extrémités cohésives permettent au phage de se concaténer et de se

circulariser.
- La circularisation est observée dans la bactérie immédiatement après
l’infection.
- La tête du phage  peut encapsider spécifiquement un ADN chromosomique
d’environ 5kb.

9-Importance du polylinker et lac Z.

Le polylinker possède plusieurs sites de restriction qui peuvent être utilisés pour
insérer une séquence d’intérêt

Le gène lac Z’ permet la sélection aisée des recombinants.

31
10- Après avoir définir enzyme de restriction, précisez les nomenclatures et citer
leur différentes types en précisant celui qui est valorisée en génie génétique.

Les enzymes de restriction sont des endonucléases qui coupent d’une manière
définie et reproductible l’ADN double-brin quelle que soit son origine.

Nomenclature des enzymes de restriction:

Chaque endonucléase a un nom de code déterminé selon les principes suivants:

- La première lettre en majuscule est l'initiale du genre de la bactérie.

- Les deux lettres suivantes, en minuscule désignent l'espèces de la bactérie.
- La 4ème lettre en majuscule, (pas toujours présente) désigne la souche
bactérienne.
- Un chiffre romain distingue les enzymes d'une même souche dans l'ordre de
leur découverte.

Les types d’enzyme de restriction:

Enzyme de type I

Enzyme de type II

Enzyme de type III

Seules les enzymes de type II qui coupent au niveau du site de reconnaissance sont
utilisés en génie génétique parce qu’on peut contrôler parfaitement le site de coupure
et donc les extrémités engendrées.

11- Quelles sont les caractéristiques et différentes parties ou composantes d’un

plasmide.

- Une origine de réplication de type relâché : la séquence ori

- Un gène de résistance à un antibiotique auquel la souche hôte est sensible

32
 - Un second gène marqueur phénotypique (soit un deuxième gène de résistance
à un second antibiotique ou le gène Lac Z' )
- Un ou plusieurs sites de restriction (polylinker)

12-Quelles différentes faites-vous entre plasmide de première génération et

seconde génération.

Les plasmides de première génération n'ont pas les propriétés requises pour les
manipulations génétiques. Alors que les plasmides de seconde génération possèdent
deux gènes de résistance
aux antibiotiques : l’un pour la tétracycline TcR et l’autre pour l’ampicilline AmpR et
20 sites uniques pour les enzymes de restriction

13-Criteres de classification des vecteurs de clonage

- Leur origine
- La taille de l’insert

14- Quelle différence faites-vous entre une banque génomique et une banque
ADN complémentaire.

Une banque génomique est constitué d’ADN génomique issu de la fragmentation de

l’ADN tout entier d’une cellule et son introduction dans des vecteurs alors que la
banque d’ADNc est constituée de tous les ADN complémentaires de tous les
ARN messagers présents dans la cellule.

15- A quoi consiste une construction dans une banque génomique.

Construire une banque génomique consiste à fragmenter l’ADN tout entier d’une
cellule et à introduire chaque fragment dans un vecteur, puis dans un hôte approprié
soit par transformation soit par injection pour la multiplication

16- Avantages des banques génomique.

Les banques génomiques permettent de connaître :

- Les régions non transcrites des exons

33
- Les séquences de régulation

- Les gènes silencieux

- Les introns

17-Différence entre transformation et infection.

Transformation: introduction d’un plasmide recombinant dans une cellule

bactérienne

Infection: introduction d’un phage recombinant dans une cellule bactérienne

18. Différence entre ARNm dans le noyau et ARNm dans le cytoplasme.

L’ARNm dans le cytoplasme contient une queue poly-A à son extrémité 3’ car ayant
déjà subit les modifications post-transcriptionnelles alors l’ARNm situé dans le
noyau ne possède pas une queue poly-A

19-Eléments nécessaires pour la réalisation de la PCR.

Les éléments de la PCR: les réactifs et le matériel:

• l’ADN à amplifier

• 2 amorces: sens et anti sens

• tampon de réaction (Buffer)

• MgCl2

• dNTP

• Taq polymérase

• L’appareil thermocycleur pour PCR

• H2O bi distillée et stérile

20-Citer 8 techniques d’analyses de ADN cloné et pour chaque technique donner

son intérêt.

34
 Le criblage par des oligonucléotides de synthèse :
- Le criblage par des anticorps
- L’électrophorèse
- Le séquençage
- Analyse du génome et de ses modifications : Le Southern blot
- La PCR
- Étude des polymorphismes : RFLP, VNTR, SSTR, SSCP
- Puces à ADN (microarray) ou ADN chips

21- Citer les applications du génie génétique dans 4 domaines de votre choix.

- En biotechnologie : production par des organismes recombinant des protéines

eucaryotes des vaccins et des hormones
- En médecine : prédiction, diagnostic des maladies héréditaires et traitement à
traves la thérapie génique
- En agriculture : La création de plantes résistantes aux insectes, au stress
hydrique et
pour la production de protéines utiles comme les anticorps
- En médecine « légale » à travers la technique de l'ADN « finger printing »
peut individualiser une personne humaine sans équivoque car cette technique
ne requiert que quelques cellules de la personne concernée

22- Donner les types de banques en génie génétique et donnez-leur rôle.

Banque génomique joue un rôle important dans le séquençage du génome entier

d’un organisme

Banque ADN complémentaire joue un rôle important dans le séquençage des ADNc
de tous les ARNm d’une cellule

23-Citer quelques exemples de techniques de l’étude du polymorphisme de ADN.

- Les RFLP (restriction fragment length polymorphism)

- VNTR (Variable Number of Tandem Repeats)

35
 - SSCP (single Strand Conformation Polymorphism)
- SSTR (Short Séquences of Tandem Repeats)

24-Differentes éléments effectuer lors d’une étude de ADN clone.

- Le criblage par des oligonucléotides de synthèse :

- Le criblage par des anticorps
- L’électrophorèse
- Le séquençage
- Analyse du génome et de ses modifications : Le Southern blot
- La PCR
- Étude des polymorphismes : RFLP, VNTR, SSTR, SSCP
- Puces à ADN (microarray) ou ADN chips

25-Citer 10 outils du génie génétique.

- La PCR
- Le clonage
- Southern blot
- Northern blot
- Western blot
- Dot blot
- Electrophorèse
- Séquencage
- Enzymes de restriction
- Vecteurs de clonage

26- Citer les différentes étapes de Southern blot.

Le processus est le suivant :

• L’ADN génomique est d’abord fragmenté par une enzyme de restriction appropriée

36
• Les fragments sont ensuite séparés par électrophorèse sur gel d’agarose,

• L’ADN est dénaturé in situ par une solution de soude,

• L’ADN dénaturé (simple brin) est transféré par capillarité sur un support solide
(filtre de nitrocellulose ou nylon)

• Le support solide est hybridé avec une sonde monobrin marquée à faible astringence
puis lavé
• Le ou les fragments reconnus par la sonde sont révélés par la technique de
l’autoradiographie.

27- Avantages et importance du southern Blot.

Cette technique permet:

- L’établissement des cartes de restriction

- La mise en évidence de pseudogènes et de gènes apparentés
- Les mutations par délétions
- La détection de mutation ponctuelle
- La détection des recombinaisons

28- Etapes, intérêt et application de la PCR.

Etapes:

- La dénaturation de l’ADN à amplifier à 94°C,

- L’hybridation avec une amorce, appariement primer, annealing à 64°C
- L’élongation : extension de l’amorce à 70 - 72°C par la Taq polymérase.

Intérêt:

Amplifier une séquence d’intérêt

Application:

- Diagnostic des infections

37
 - Diagnostic des anomalies génétiques
- Diagnostic et pronostic des cancers
- Mutagenèse dirigée
- Archéologie
- Médecine personnalisée
- Détection des OGM

29-Intéret de la transgénèse.

- Au plan zootechnique: l’un des intérêts majeurs de la transgénèse est l’amélioration

des caractères phénotypiques des animaux de rente: amélioration de la croissance des
animaux, comme le porc, le saumon, l’acquisition de résistances aux maladies causes
de mortalité dans les élevages de lapins, de truites, de carpes….

- Au niveau des plantes: La création de plantes résistantes aux insectes, au stress

hydrique et pour la production de protéines utiles comme les anticorps: (maïs
résistant aux insectes, tomates transgéniques à mûrissement lent, bananes
vaccinantes…)

- Sur le plan médical: Production de protéines d’intérêt pharmaceutique: Certaines

protéines trop complexes (glycosylées, carboxyméthylées…) ne peuvent être
synthétisées complètement par les bactéries in vitro. Il faut donc chercher à en obtenir
par un animal transgénique (dans le lait, le sang, les urine...).

30-Quelles sont les risques qui peuvent être lié à la transgénèse.

Risques liés à la transgénèse sont:

1. L’utilisation de l’hormone de croissance humaine chez les animaux perturbe leur

croissance et leur reproduction.

2. Les risques liés à la consommation des produits OGM comme les protéines de la
vache folle qui provoque des troubles chez l’homme.

38
3. Les risques liés à l’environnement: Ces risques sont liés à la dissémination des
organismes transgéniques

31- Donnez une espèce procaryote et une espèce eucaryote.

Procaryote: (Escherichia coli)

Eucaryote (saccharomyces cerevisiae)

32-Comment le génie génétique peut impacte sur le réchauffement climatique.

- Réduction de l’empreinte carbone de l’agriculture

- Plantes à haute efficacité photosynthétique
- Culture résistante aux conditions climatique
- Biocarburant de deuxième génération

39