souches Critères de choix d’une souche industrielle
• 1. Croissance rapide sur un milieu peu coûteux (R.A.I. mélasse
de canne à sucre ou de betterave, lactosérum, amidon, cellulose,…) Eviter le sucres simples: glucose, sacharose, … • 2. La souche ne doit pas muter (la souche doit etre stable sur le plan génétique) • 3. Etapes d’extraction et de purification les plus simples et les moins coûteuses possibles. • Question: Si le prix d’un métabolite microbien coute plus cher que le meme métabolite synthétisé chimiquement. Qu’elle est la voie que l’on va choisir? Butanol (C. (Butyricum) avant 1960 • Butanol extraction pétrole depuis 1960) Criblage et amélioration des souches • Criblage: ou "screening" est une technique de sélection ou de tri pour l'obtention de souches microbiennes performantes (c'est à dire bonne productrice de substance utile) Long et difficile mais toujours utilisée avec des résultats très faibles • Amélioration des souches ou de leur production: -mutagénèse exemple lysine par un mutants Homosérine déshydrogénase - • -Recombinaison génétique fusion des protoplastes Amélioration de la production de pénicilline après traitements mutagènes (22 fois= 40 g/l) Recombinaison génétique (fusion des protoplastes fig 6.26) Souche sélectionnée (Criblage, mutagénèse, …) • Bien conserver et surtout ne pas la perdre ou perdre ses propriétés répiquages,… donc à Lyophiliser • Voir tableau n° 6.7. (avantages et inconvéniants de chaque méthode de conservation) Souche sélectionnée 1. Chercher un bon milieu pour qu’elle pousse bien et qu’elle produise beaucoup de métabolite (I ou II). Mise au point ou Formulation d’un milieu de culture 2. On doit trouver une bonne source de C, N, Oligo éléments, .. qui conviennent le mieux 3. Meilleures conditions de cultures: T°C, pH, Aération (02), Antimousse,… Formulation d’un milieu optimisé (à faire de préférence après amélioration)
• La teneur moyenne des éléments constitutifs des cellules
microbiennes est (en % du poids sec) : Carbone (50%), azote (7%) , phosphore, magnésium, soufre : environ 1% pour chacun, oligo-éléments (Mn, Ca, Fer : 0,1-0,5% ; Co, Cu, Zn, Mo :0,01-0,03%). • 1. Méthode classique: longue, incertaine et difficile • 2. Méthode moderne; plans d’expérience ou plans expérimentaux Principaux constituants des milieux de culture employés en Mic. Ind (tableau 6.8) Méthode classique • Nombreuses Expériences: en faisant varier les constituants du milieu un par un. • Exemple: • 1. Milieu de départ simple: Glucose 5g(SC), Na NO3 3g (SN), + Oligoéléments (P, Mg, Fe, SO4,….) • 2. On change (remplace) le Glucose par d’autres S. C. complexes (Mélasse, amidon, cellulose,….) en gardant les autres constituants invariables. On compare la croissance de la souche. On choisit la meilleure source de carbone. • 3. On change le NaNO3 la source d’azote par d’autres complexes (ammoniac, glutamine, farine de soja, …. En gardant les autres constituants inchangés. On choisi la meilleure source d’azote. • 4. On change les oligoéléments un par un par d’autres et ainsi de suite . On les choisi un par un. • Ensuite on fait varier les concentration de chaque constituants,… Les conditions de cultures • Une fois que les constituants du milieu ont été choisi on passe au conditions du milieu; T°C, pH, Aération, antimousse, volume de l’inoculum • Milieu optimum incubé à Différentes températures; 20, 30, 40, 50°C en gardant le pH neutre et aération 50% On sélectionne la T° optimale • On change le pH: 5,6, 7,8,9 ,……. • On procède de la meme manière avec l’aération et l’antimousse. Schéma général représentatif d’un procédé typique de fermentation industrielle Chapitre III. Les produits de fermentation
• 1. Les Cellules microbiennes (P.O.U. de
bactéries, champignons, levures et algues) • 2. Les Métabolites Primaires (acides organiques, solvants industriels, acides aminés, enzymes • 3. Les métabolites secondaires : pénicillines, streptomycine Les P.O.U. • Problématique: • insuffisance en protéines dans le monde Pays S/D. malnutrition. Déficit s’aggrave de plus en plus • Solutions: OGM, insectes (sauterelles, blattes, viandes synthétiques? P.O.U. Avantages des P.O.U/ autres Protéines • 1. Les microorganismes ont un taux de croissance élevé. • 2. le temps de génération des bactéries est de 20 mn, celui des levures est de 2 h. les algues et les mycètes doublent leur masse cellulaire en 2 à 6 h pour les premières, 4 à 12 heures dans le cas des seconds. • 3. Ils ont également l’avantage d’utiliser des sources carbonées et azotées bon marché : sous-produits agricoles ou industriels : mélasses, lactosérum, méthane, résidues de bois et de cellulose, hydrocarbures. • Le tableau 6.11, compare la composition chimique des principaux microorganismes (P.O.U.) avec des protéines végétales et animales. Suite • A titre de comparaison, en moyenne et à poids égal, on estime qu’une vache bien nourrie, fournit quotidiennement 100 g de protéines, le blé en produit 1 g/j, les levures 500 g/j alors que le rendement des bactéries est de 800 g/j. Par rapport aux protéines végétales et animales, les protéines microbiennes ont une composition bien équilibrée, sauf en ce qui concerne les acides aminés souffrés. La teneur en méthionine est beaucoup plus élevée que celle des levures, alors que c’est plutôt l’inverse pour la lysine. De plus, elles contiennent, en plus, des vitamines et des lipides. Composition chimique comparée des principaux P.O.U. avec des protéines végétales et animales. Les teneurs indiquées ne tiennent pas compte de l’eau (Poids sec) Les P.O.U. • 1. Exemples de P.O.U. • Bactéries (spiruline, Pruteen) • Champignons F. graminearum Korn, Terfezia • Levures C. utilis, K. fragilis, C. lypolytica, S? cervesiae • Algues Chlorella pyrenoidosa 2. Toxicité, inconvéniants, traitements des P.O.U P.O.U Bactériens • Methylophilus methylotrophus. CH4 ou méthanol comme source de Carbone. • I.C.I. 1985 culture de la bactérie sur CH4 • CH4 CH30H HCO HCOOH C02 • -26,12 -44,21 -57,15 -58,25 Kcal
• 100000 T/an d’une protéine « Pruteen »
enfants. Spiruline • Spirulina platensis (lac Tchad et Mexico) • Organisme Vivant le plus Riche en Protéines • Acides aminés bien représentés • Glucides, lipides, fibres, 11 vitamines, • Production facile et pas couteuse (cultivé partout dans le monde) • Croissance rapide (double chaque jour) Spiruline Exemples P.O.U de levures • Riche en lysine et vitamine B • Plusieurs procédés: • -Wheast process Klyuveromyces fragilis sur lactosérum • -Symba, Candida utilis sur amidon • -Bell S. cerevisiae et C. utilis sur Betteraves ou topinambour • -Phillipe petroleum: C. lipolytica sur hydrocarbures • Production mondiale de levures dans le monde est de 3,5 millions de tonnes/an (panification, alimentation humaine et animale P.O.U. de Champignons • F. graminearum cultivé mucoprotéine KORN • Terfezia clavery (Terfes) truffe ascomycete) • Agaricus bisporus (champignon de Paris) Champignons alimentaires