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MATERIEL GENETIQUE

EXERCICE 1
L'analyse en bases azotes de l'ADN provenant de divers organismes a donn les pourcentages
regroups dans le tableau ci-aprs :

Organismes Bases azotes


Adnine Thymine Guanine Cytosine
Homme 31.0 31,5 19,1 18,4
Saumon 29,7 29,1 20,8 20,4
Criquet 29,3 29,3 20,5 20,7
Bactriophage T2 32,8 32,8 18,2 16,6
Bacille de la 16,1 14,8 34,9 35,4
tuberculose

1) Interprtez ces rsultats. Quelle relation simple existe-t-il entre les diffrentes bases de chaque organisme ?
2) Quelle hypothse concernant la structure de l'ADN pouvez-vous dduire de cette relation ?

EXERCICE 2

Les rapports des quantits de bases de l'ADN des mmes espces tudies dans l'exercice N1 sont donns dans
le tableau ci-aprs :

Rapports A+G (1) A+T (2)


Espces C+T G+C
Homme 1,004 1,67
Saumon 1,02 1,43
Criquet 0,996 1,42
Bactriophage T2 1,03 1,896
Bacille de la tuberculose 1,0159 0,440
1) Quels renseignements tirez-vous du rapport (1) ?
2) Mme question pour le rapport (2) ?
3) Quelles conclusions tirez-vous de ces renseignements ?
4) Que pouvez-vous dduire, si le rapport (2) pour un ADN donn est gal 1 ?
5) Expliquez dans quel cas les 2 rapports peuvent tre gaux entre eux pour un ADN bicatnaire donn ?

EXERCICE 3

Le rapport A+T dans un brin simple d'une molcule de l'ADN est de 0,2.
G+C
A) Quel est le rapport A+T du brin complmentaire ?
G+C
B) Si le rapport A+G est de 0,2 ; quelle sera la valeur de ce rapport dans la chane complmentaire ?
T+C
C) Quel est le rapport A+G dans la double chane de l'ADN de A et B ?
T+C
EXERCICE 4
On connat le virus X174. On extrait de l'ADN de ce virus et on le compare celui des Mammifres.
On se demande, en effet, si on n'est pas en prsence d'un ADN un seul brin (ADN monocatnaire).
A l'analyse, l'ADN viral prsente une composition en bases comprenant :
32% de cytosine, 29% d'adnine, 22% de thymine et 17% de guanine.
1) En quoi cette composition est-elle inhabituelle quand on la compare celle de l'ADN d'un
Mammifre ?
2) Cet ADN P1 est utilis comme matrice pour la synthse d'ADN in vitro. Le produit synthtis P2 a
la composition suivante : 17% de cytosine, 22% d'adnine, 29% de thymine et 32% de guanine.
Quelle relation existe-t-il entre la composition de P1 et celle de P2 ?
3) On fait la mme exprience avec un ADN de Mammifre P'1 que l'on fait rpliquer comme dans
l'exprience prcdente. Que peut-on dire des compositions de P'1 et P'2 nouvel ADN form ?
4) L'ADN du virus est-il form d'un brin ou de deux ? Exposez vos arguments.
5) Dans une mme molcule d'ADN bicatnaire, chacun des deux brins complmentaires
vhiculeraient-ils la mme information biologique ?

EXERCICE 5

On a isol de l'ADN "A" partir de virions d'un type viral dtermin. Sa composition en bases a t
mesure 1% prs. On a mesur de la mme manire la composition en bases d'un ADN "B" d'origine inconnue.

A G C T
ADN "A" 21 29 28 22
ADN "B" 25 24 18 33

1) Que vous suggre la composition en bases de l'ADN A ? Pourquoi ?


2) Mme question pour l'ADN B.
Des solutions d'ADN "A" et "B" sont soumises un chauffage progressif. On mesure pendant ce
chauffage l'absorption 260 nm de ces solutions. Les rsultats sont indiqus dans la figure1. On soumet ensuite
ces mmes solutions un refroidissement progressif (Figure2).
Les courbes A et B s'appliquent respectivement l'ADN "A" et "B".

Absorption (260nm) absorption (260nm)

A
B B
A

40 60 80 100 en C 100 80 60 40 en C
Figure 1 Figure 2.

1) Interprtez la courbe A dans la figure 1 puis la figure 2.


2) Le profil de la courbe B peut-il vous aider interprtez les rsultats relatifs au % de bases de l'ADN B ?
Commentez.

EXERCICE 6

La quantit d'ADN contenue dans les cellules de la carpe a t dtermine selon les techniques
suivantes :
1 Technique :
L'ADN a t chimiquement extrait d'une masse M de matriel en utilisant une mthode quantitative. D'une part,
le nombre de cellules constituant la masse M a t dtermin soit par mesure de sections cellulaires sur des
coupes de tissu observes au microscope optique (dans le cas du foie) soit directement l'hmatimtre sur une
fraction aliquote (dans le cas des rythrocytes et des spermatozodes). Les rsultats sont les suivants :
Foie : Exprience 1 : 4,2 x 10 8 cellules 1,38 mg ADN
Exprience 2 : 8,6 x 108 cellules 2,80 mg ADN
Exprience 3 : 6,9 x 108 cellules 2,28 mg ADN.
Erythrocytes : Exprience 1 : 5,5 x 108 cellules 1,87 mg ADN
Exprience 2 : 7,6 x 108 cellules 2,58 mg ADN
Spermatozodes : Exprience 1 : 7,1 x 108 cellules 1,16 mg ADN
Exprience 2 : 12,6 x 108 cellules 2,05 mg ADN.

2 Technique :
Les tissus ou cellules ont t fixs et colors au Feulgen. La coloration des noyaux a t quantifie par
microphotomtrie et les quantits d'ADN calcules au moyen d'une table de correspondance
Coloration = f (quantit d'ADN). Les valeurs ci-dessous sont une moyenne tablie sur 100 noyaux.
Foie : Exprience 1 : ADN = 3,2 x 10 -12 g/noyau
Exprience 2 : ADN = 3,3 x 10-12 g/noyau .

Erythrocytes : Exprience 1 : ADN = 3,45 x 10 -12 g/noyau


Exprience 2 : ADN = 3,35 x 10-12 g/noyau.
3 Technique :
Les cellules du foie ont t spars les unes des autres par dilacration. Des prparations par crasement ont t
ralises partir de ces cellules et partir d'rythrocytes. L'ADN nuclaire a t estim par microphotomtrie
d'absorption ultraviolette ( =2600). Les rsultats sont les suivants :
Foie : Exprience 1 : ADN = 3,3 x 10 -12 g/noyau
Exprience 2 : ADN = 3,3 x 10-12 g/noyau.
Erythrocytes : Exprience 1 : ADN = 3,4 x 10 -12 g/noyau.
Exprience 2 : ADN = 3,5 x 10-12 g/noyau.

1) Que peut-on dire de la fiabilit des techniques utilises ?


2) Ces rsultats sont-ils compatibles avec le fait que l'ADN constitue le matriel gntique ?
3) Quelle prcision apportent-ils quant la localisation cellulaire?
4) Dans un tissu embryonnaire de carpe, des dosages de l'ADN cellulaire ont conduit des quantits
lgrement suprieures celles trouves ici. Pensez-vous que ce rsultat soit en contradiction avec la
constance de la quantit d'ADN/cellule ? Pourquoi ?

EXERCICE 7

Meselson et Stahl ont mis au point une technique d'obtention du gradient de densit par centrifugation
grande vitesse (ultracentrifugation diffrentielle). Cette technique permet de sparer des ADN de densit trs
lgrement diffrente: par exemple, des ADN contenant des atomes d'azote lourd 15 N peuvent tre spars des
ADN analogues contenant des atomes d'azote normal (lger) 14N.

1) Des bactries sont cultives dans un milieu de culture dont la source d'azote contient uniquement de
l'azote lourd 15 N. L'ADN est extrait de ces bactries places dans un tube centrifugation et centrifuges
pendant 24 heures avec une acclration de 100000 g.
L'aspect du tube en fin de centrifugation est celui de la figure 1. La bande sombre correspond dans le gradient de
densit qui s'est tabli (de 1,69 1,74) un ADN de densit 1,724.
2) Des bactries de la mme espce cultives dans un milieu dont la source d'azote contient
uniquement de l'azote normal 14N et dont l'ADN est centrifug donnent le rsultat reprsent par la figure 2.
3) L'ADN est extrait de bactries cultives dans un milieu contenant 15N, puis places au dbut de
l'exprience dans un milieu contenant 14N. Ces bactries sont cultives dans des conditions provoquant la
synchronisation des divisions.
L'aspect des tubes centrifugation est donn par la figure 3.
a. indique le dbut de l'exprience.
b. indique la fin de la 1 division.
c. indique la fin de la 2 division.
Interprtez les rsultats des 3 types d'observations, sachant que, pour chaque centrifugation, on a plac dans le
tube la mme quantit d'ADN; imaginez les schmas de la molcule d'ADN traduisant cette interprtation.
Extrmit centripte
1,69
Augmentation de
la densit de la 1,71 1,71
solution de CsCl
1,717 1,717
1,724 1,724

1,74

Extrmit centrifuge (a) (b) (c)


Fig. 1 Fig. 2
Fig. 3

EXERCICE 8

On ralise au laboratoire les deux expriences suivantes :


Exprience I :
Avec un ADN portant des amorces 3'OH. On peut synthtiser des quantits d'ADN 50 fois suprieures la
quantit de matrice introduite.

Exprience II :
Si on rplique un ADN lourd (marqu par l'azote 15) en milieu lger ( 14N), on ne retrouve pas d'ADN lger
mme aprs deux ddoublements, par contre, en gradient alcalin (c'est dire dans un milieu o les conditions de
dnaturation sont maintenues en permanence), on obtient aprs reprsentation des rsultats sous forme
graphique, un pic d'ADN et un autre pic correspondant de l'ADN lourd.
1) Que tirez-vous de l'exprience I ?
2) Que tirez-vous de l'exprience II ?
3) Proposez un modle de fonctionnement de l'ADN polymrase III in vitro permettant d'expliquer
ces deux expriences. On ne vous demande pas de dire tout ce que vous savez sur la polymrase III,
mais seulement ce que vous pouvez dduire de son fonctionnement partir de ces deux expriences.

EXERCICE 9

I- Dans un tube essai, on mlange en quantit convenable :


- 4 dsoxyribonuclotides triphosphates dont la dTTP tritie (radioactive).
- L'ADN polymrase I purifie partir d'E.coli.
- Une amorce d'ADN purifi partir d'E.coli.
- des ions Mg++.
On place le tube essai au bain marie 37C. Aprs un temps suffisant une quantit importante de radioactivit
a t incorpore sous forme de polynuclotides.
On compare alors l'ADN amorc et l'ADN synthtis in vitro et on obtient les rsultats suivants :

A T C G A+G A+T
T+C G+C
Amorce 1,00 0,97 0,98 1,05 0,98 0,97
Produit 1,04 1,00 0,97 0,98 1,01 1,02

1) Expliquez pourquoi les 4 lments sont ncessaires la synthse de l'ADN in vitro (synthtisez un peu
plus) le rle de l'ADN polymrase III.
2) Cette exprience est-elle suffisante pour affirmer qu'amorce et produit sont identiques ? Pourquoi ?
3) A quelles autres conclusions, concernant la structure de l'ADN amorce et l'ADN synthtise, vous amne
cette exprience ?
4) A la lumire de vos connaissances actuelles sur l'ADN pourriez-vous expliquer pourquoi la rplique de
l'ADN est une rplication de haute fidlit et qu'est ce qui assure cette fidlit ?
II- Une deuxime exprience diffrente de la premire est ralise cette fois pour dterminer la composition en
bases du matriel gntique de deux organismes "B" et "C". Les rsultats obtenus sont les suivants :

A T C G U A+G
T+C
Organisme"B" 0,50 0,66 0,84 0,60 - 0,73
Organisme"C" 0,52 - 0,88 0,62 0,68 -

1) Quelles conclusions pouvez-vous tirez ? A quelles types d'organismes peuvent appartenir la matriel
gntique "B" et "C" ?
2) Que savez-vous des organismes " C" et de leurs particularits ? Citez un exemple.

EXERCICE 10

On cultive des E.coli dficientes en ADN polymrase I pendant deux gnrations en prsence de 14C thymidine,
puis on prpare par lyse mnage des complexes "ADN-membranes" dbarrasss du cytoplasme. Ces complexes
sont incubs dans les conditions optimales de temprature et pH en prsence de dATP et dGTP. Le dTTP est
remplac par du 3H-dBUTP, un analogue qui augmente la densit de flottaison de l'ADN dans lequel il est
incorpor.

Aprs incubation pendant un cycle de rplication, le mlange est dbarrass des membranes et centrifug en
gradient de CsCl l'quilibre. On obtient la figure 1.
Le pic observ est repris, trait pH 12,5 pour rompre les liaisons H, puis centrifug nouveau sur gradient, on
obtient la figure 2.

ADN ADN
14 14
C C
3
H
3
H

Fond Sommet Fond Sommet

Figure 1 Figure 2
1) Comment expliquez-vous que l'on puisse cultiver des bactries dficientes en ADN polymrase I pendant
plusieurs gnrations ?
2) Dcrire la figure 1. Comment pouvez-vous l'interprtez ?
3) Dcrire la figure 2. La comparer avec la figure 1. Quels renseignements complmentaires vous apporte-t-elle
?

EXERCICE 11

Soient les squences nuclotidiques suivantes utilises comme matrices dans la synthse d'ADN in vitro :
(a) 5'- ATCCTTGCGTTAC- 3'
(b) 3'-TCTTGTTGCTCCAG-5'
1) Donnez la squence complmentaire pour chacun des brins proposs en calculant le nombre de liaisons
"hydrogne" et "phosphodiester".
2) Reprsentez la structure des 3 premiers nuclotides forms dans le brin nosynthtis.

5' brin (a)

3'
5'
3' brin (b)
3) Prcisez le type de rplication pour les deux brins.
4) A l'aide de schmas, dtaillez la rplication discontinue (du dbut jusqu' la formation des deux premiers
fragments d'Okazaki).