TP n°4 IUT Hygiène-Sécurité-Environnement Vire

TP n°4 : Contrôle de surfaces et des atmosphères

Introduction :
Ce Tp de microbiologie n°4 contrairement au Tp précédent n’as pas pour but de découvrir le
contenu d’un échantillon précis. Ici on cherche à étudier l’environnement ou ces recherches ont été
réalisées, en effet malgré le fait qu’une salle de microbiologie se doit d’être la plus aseptisé possible
il est impossible d’éliminer totalement toutes traces ainsi par ce Tp nous ferons l’étude de
l’aseptisation de notre milieu de recherche. Pour cela nous allons devoirs à l’aide de diverses
méthodes étudier l’hygiène des surfaces utilisées ainsi que l’atmosphère (air ambiant)

Matériel et méthode :
Le Tp se divise en 2 parties :
Dans un premier temps il nous faut étudier nos surfaces, pour cela deux types de méthodes
existent :
-par frottement d’un écouvillon
-par adhérence sur un milieu gélose
Ce deuxième type se réalise avec 3 méthodes différentes, il y a la technique d’impression sur gélose
(la plus utiliser pour sa praticité et sa rapidité) pour la réaliser il suffit de placer une boite de contact
sur la surface à étudier. Il y a aussi la technique des lames gélosées ici encore par même principe
on fait entrer en contact notre lames avec notre surface et on laisse incuber pour futures observation,
pour finir on a la technique du Petrifilm qui comme les deux précédentes consiste à faire entre en
contact un milieu avec notre surface.
Dans un deuxième temps il nous faut étudier l’air de notre milieu, pour cela deux méthodes
existent :
-la méthodes des boites d’ambiances déjà vu et utilisée dans les TP précédent
-la méthodes par aspiration ou à l’aide d’un aspirateur à filtre on pourra connaître la quantité de
micro-organismes par unités de volumes d’air (c’est donc contrairement à la méthode des boites
d’ambiances, une étude quantitative.

Liste de matériel :
• Ecouvillon x2
• Boîtes de Pétri x15
• Boites de « contact » x2
• Pétrifilm x2
• Lames gélosées x2

Résultats Brut :

Avant Après
Boite de contact (ufc) 13 41
Lame (ufc) 13 43
Petrifilm (ufc) / /
Tableau 1 : résultats des tests

Gamme de dilution Boîte n°1 Boîte n°2 Boîte n°3

Solution mère (ufc) +300 +300 +300
Avant
10-1 (ufc) +300 +300 +300
désinfection
10-2 (ufc) 177 169 182
Après Solution mère (ufc) -30 -30 -30
désinfection 10-1 (ufc) -30 -30 -30
Tableau 2 : résultat de la gamme de dilution avant et après désinfection

Hugo HEUVELINE, Mewenn Allaert TP 111 1

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Interprétation / Discussion :
Les Petrifilm n’ont pas de résultats car nous avons manqué de temps pour les réaliser.

Pour essayer de comprendre pourquoi nous retrouvons plus de UFC sur la boîte de contact et
sur la lame gélosée après le nettoyage nous avons plusieurs hypothèses. Avant il faut savoir que
les tests réalisés avant le nettoyage ont été réalisé avec des échantillons de la dilution à 10-2 puisque
la solution mère aurait été saturé de micro-organisme. Les tests réalisés après le nettoyage ont été
fait avec la solution mère :
• Il est probable que le produit utilisé, le Mr Propre soit contaminé se qui signifie que lors du
nettoyage des organismes ont été déposés.
• Il est probable que nous ayons inversés les boîtes ainsi que leurs échantillons.
• Lors du salissage, la zone n’a peut-être pas été souillé de façon homogène c’est-à-dire par
exemple que dans notre cas la partie droite possédait une plus grande quantité de bactérie
que la partie gauche et même avec le nettoyage la quantité est resté supérieur à la partie
gauche.
• La désinfection a été appliqué directement, aucun rinçage ni nettoyage n’a été effectué avant.

Cependant la gamme de dilution que nous avons réalisé pour l’avant et après désinfection nous
montre que la désinfection aurait fonctionné puisque la solution mère avant ainsi que la dilution à
10-1 avant présentent plus de 300Ufc. La concentration est donc élevé. En comparaison nous avons
la solution mère après et la dilution à 10-1 après désinfection qui nous montrent une présence de
moins de 30Ufc. La dilution à 10-2 avant désinfection sont les seuls résultats exploitables puisque
sur les 3 boîtes les Ufc présentent sont bien comprises entre 30 et 300. De plus les résultats ont le
même ordre de grandeur.

Nous avons des résultats contradictoires, en effet si on regarde les premiers tests nous pouvons
à priori dire que le produit n’est pas efficace cependant la gamme de dilution vient prouver le
contraire puisque les résultats sont cohérant avec la théorie qui est que si on désinfecte un endroit
il est normalement plus ou beaucoup moins peuplé de bactérie.

Conclusion :
Ce TP nous permet de nous rendre compte encore une fois de la rigueur et la concentration
qu’il faut apporter lors de nos manipulations car ce manque de cohérence dans les résultats vient
très probablement d’une erreur de manipulation. Dans le cadre de ce TP aucun enjeu était présent
à la fin à part la compréhension de ce que nous faisions. Cependant dans le cadre professionnel si
nous sommes un jour amenés à effectuer ou diriger ce type d’expérience pour contrôler la qualité
d’un endroit, ou produit il y aura de réel enjeu. Les principaux seront la qualité sanitaire, la valeur
commerciale ou encore la durée de la conservation des produits concernés.

Hugo HEUVELINE, Mewenn Allaert TP 111 2