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1. OBJECTIFS ET PORTÉE
a. Objectif
Le dosage d’anticorps H-pylori permet de déterminer si une personne a été infectée par la bactérie et
de permettre au médecin ou à l’infirmier(e) de faire une prise en charge efficace de celle-ci.
b. Personnes concernées
Personnel de l’unité des ELISA
2. Domaine d’application
5. PRINCIPE
Le dosage d’ Helicobacter pylori repose sur la méthode ELISA indirecte. Les antigènes spécifiques à H-
pylori sont fixé au font des puits ; si les anticorps (IgM ou IgG) sont présent dans le sérum du patient, un
complexe antigène-anticorps se forme. Après une période d’incubation les éléments non fixés sont retirer par
lavage et l’ajout du conjugué est faite un second lavage est effectué puis ajout du substrat (TMB) avec
formation d’un précité bleu et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec apparition
d’une coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des anticorps
présent dans le sérum.
MODE OPERATOIRE
- Diluer l’échantillon, le CN, le CP et le calibreur au 1/40 (5ul de chaque spécimen et 200ul de
diluant)
- Ajouter 100ul des solutions diluées dans les puits sauf celui du blanc
- Incuber 30min à température ambiante
- Laver 03 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350de solution par puits)
- Ajouter 100ul du Conjugué dans les puits et incuber 30min à température ambiante
- Laver 03 fois avec de solution de lavage
- Ajouter 100ul du Substrat 15min à température ambiante à l’abri de la lumière
- Ajouter 100ul du Stop
- Lire à 450nm de densité optique pendant les 10min qui suivent l’ajout du stop
Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale
DO P
- Si CO
<1 → NEGATIVE
DO P
- Si CO
=0,9−1,1→ refaire le test en doublant les puits du patient et si même résultat est observé, -
considéré POSITVE
DO P
- Si CO
>1 → POSITIVE
PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
CERIMED ANALYSES DE H-PYLORIRO KIT BIOGENIX Applicable le :
BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :
7. MATERIELS UTILISES
Micropipette
Plaque pour les puits
Puits pour le test
Réactif
Gants
Embouts
Chronomètre
Fiche de paillasse
Combi Wash
Huma Reader
Eau distillée
-
PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
CERIMED ANALYSES DE H-PYLORI KIT BIOGENIX Applicable le :
BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1
ATTESTATION DE LECTURE
Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures