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J Med Biochem 2015 ; 34 (3) DOI : 10.2478/jomb-2014-0054

UDK 577. 1 : 61 ISSN 1452-8258

J Med Biochem 34 : 344 -350, 2015 Article original

Originalni naučni rad

COMPARAISON MULTICENTRIQUE DE SEPT IMMUNODOSAGES

AUTOMATISÉS DE LA VITAMINE D 25OH
MULTICENTRI^NO PORE\ENJE SEDAM AUTOMATIZOVANIH IMUNOESEJA
ZA 25OH VITAMIN D

Giuseppe Lippi1, Gian Luca Salvagno2, Antonio Fortunato3, Mariella Dipalo1, Rosalia
Aloe1, Giorgio Da Rin4, Davide Giavarina3

1Laboratoire de chimie clinique et d'hématologie, hôpital académique de Parme, Parme, Italie

2Laboratoire de chimie clinique et d'hématologie, hôpital académique de Vérone, Vérone, Italie
3Laboratoire de chimie clinique et d'hématologie, hôpital San Bortolo, Vicence, Italie
4Service de médecine de laboratoire, Hôpital de Bassano del Grappa, Bassano del Grappa (VI), Italie

Résumé Kratak sadr`aj

Contexte : La mesure de la 25OH vitamine D continue à se
développer dans les laboratoires cliniques. L'objectif de
cette étude multicentrique était de comparer les résultats
de sept immunodosages commerciaux automatisés avec
une technique HPLC de référence.
Méthodes : Cent vingt échantillons consécutifs de sérum
de patients ambulatoires ont été centrifugés, divisés en
aliquotes, congelés et expédiés aux laboratoires
participants. Le 25OH Vita- min D a été mesuré avec un
système HPLC de référence et avec sept immunodosages
commerciaux automatisés (Roche Cobas E601, Beckman
Coulter Unicel DXI 800, Ortho Vitros ES, DiaSorin Liaison,
Siemens Advia Centaur, Abbott Architect i System et IDS
iSYS).
Résultats : Par rapport à la méthode de référence, les
coefficients de régression étaient compris entre 0,923 et
0,961 (tous p<0,001). La pente de l'ajustement de Deming
était comprise entre 0,95 et 1,06, tandis que l'ordonnée à
l'origine était comprise entre -15,2 et 9,2 nmol/L. Le biais
de la technique HPLC de référence variait de -14,5 à 8,7
nmol/L. L'objectif de performance minimum pour le biais
a été légèrement dépassé par un seul immunoas- say. La
concordance entre la CLHP et les différents
immunodosages à 50 nmol/L de 25OH vitamine D variait
entre 0,61 et 0,85 (tous p<0,001). Le pourcentage
d'échantillons en dessous de ce seuil était
significativement différent avec un seul test
immunologique.
Uvod : Merenje 25OH vitamina D sve se če{će obavlja u
kliničkim laboratorijama. Cilj ove multicentrične studije bio je
da se rezultati sedam automatizovanih komercijalnih
imunoeseja uporede sa referentnom tehnikom HPLC.
Metode : Sto dvadeset uzoraka seruma od uzastopnih paci-
jenata koji su posetili kliniku centrifugirano je, podeljeno u
alikvote, smrznuto i poslato laboratorijama koje su učestvo-
vale u istra`ivanju. Nivo 25OH vitamina D meren je po- moću
referentnog sistema HPLC i pomoću sedam auto-
matizovanih komercijalnih imunoeseja (Roche Cobas E601,
Beckman Coulter Unicel DXI 800, Ortho Vitros ES, DiaSorin
Liaison, Siemens Advia Centaur, Abbott Architect i System i
IDS iSYS).
Résultats : U pore|enju sa referentnim metodom, koefici-
jenti regresije kretali su se izme|u 0,923 i 0,961 (svuda
p<0,001). Nagib za Demingovu regresiju kretao se od 0,95
do 1,06, dok je kriva obuhvatila područje izme|u -15,2 i
9,2 nmol/L. Odstupanje od referentne tehnike HPLC
kretalo se od -14,5 do 8,7 nmol/L. Minimalni do- met za
odstupanje blago je pre{ao samo jedan imunoesej.
Slaganje izme|u HPLC i različitih imunoeseja pri koncen-
traciji od 50 nmol/L 25OH vitamina D variralo je izme|u
0,61 i 0,85 (svuda p<0,001). Procenat uzoraka ispod ove
cut-off vrednosti značajno se razlikovao samo za jedan
imu- noesej.

Adresse de correspondance :
Prof. Giuseppe Lippi
U.O. Diagnostica Ematochimica,
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Azienda Ospedaliero-Universitaria di Parma,
Via Gramsci, 14, 43126 - Parma, Italie
Tél. 0039-0521-703050
Tél. 0039-0521-703791
e-mail : glippi@ao.pr.it, ulippi@tin.it

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J Med Biochem 2015 ; 34 (3) 345

Conclusions : L'excellente corrélation avec la technique HPLC Zaključak : Odlična korelacija sa referentnom tehnikom HPLC
de référence atteste que les sept immunodosages potvr|uje da se svih sedam automatizovanih imuno- eseja
automatisés peuvent être utilisés de manière fiable pour mogu sa sigurno{ću koristiti za rutinsko odre|ivanje nivoa
l'évaluation de routine du 25OH-D dans les laboratoires 25OH-D u kliničkim laboratorijama. Značajno odstu- panje
cliniques. Le biais significatif entre les différentes méthodes izme|u različitih metoda po svoj prilici se mo`e uglavnom
semble principalement attribuable au manque de pripisati nedostatku standardizacije i zahteva dodatne napore
standardisation et appelle à des efforts supplémentaires pour kako bi se popravila harmonizacija imuno- eseja za 25OH-D.
améliorer l'harmonisation des immunodosages du 25OH-D.
Kljuǐne reǐi : vitamine D, 25OH-D, imunoeseji,
Mots clés : vitamine D, 25OH-D, immunodosages, standar- dizacija, pore|enje metoda
standardisation, comparaison des méthodes
isotopique soit considérée comme la méthode de
référence candidate pour la quantification précise du
Introduction 25OH-D, les techniques à haute pression (HPLC) avec
détection UV fournissent des résultats comparables,
La vitamine D est un composé liposoluble qui permettent la mesure simultanée du 25OH-D2 ou du
exerce un kaléidoscope de fonctions biologiques 25OH-D3 et sont également plus faciles à mettre en
chez l'homme (1). Fondamentalement, la vitamine œuvre.
D2 (ergocalciférol) dérive de l'ergostérol, un stérol abordable pour les laboratoires cliniques de routine (9).
membranaire produit par le phytoplancton, les
invertébrés et les champignons en réponse à
l'irradiation ultraviolette (UV), mais elle n'est pas
synthétisée de manière constitutive dans les plantes
ou les vertébrés. La vitamine D3 (cholécalciférol) est
produite dans la peau ou peut être apportée par
l'alimentation à partir de sources animales,
principalement le poisson, le jaune d'œuf ou le foie.
La synthèse de la 25-hydro- xyvitamine D (25OH-D)
se produit par hydroxylation de la vitamine D3 (ou
D2) dans le foie, suivie d'une autre hydroxylation
dans le rein, pour générer du 1-a,25-
dihydroxycholécalciférol (c'est-à-dire du calcitriol ou
1,25OH-2D). En raison de cette voie métabolique
complexe, la concentration de 25OH-D est
actuellement considérée comme l'indicateur le plus
approprié des réserves corporelles de vitamine D (1).
La carence en 25OH-D, qui est actuellement
définie comme une valeur inférieure à 50 nmol/L (c'est-
à-dire 20 ng/mL) par l'Institut américain de médecine
(IOM) (2) et la directive de pratique clinique de
l'Endocrine Society (3), est récemment apparue comme
un problème de santé publique. Outre sa fonction bien
connue dans le métabolisme osseux, la carence en
25OH-D est de plus en plus souvent associée à un
certain nombre de troubles humains, notamment les
maladies cardio-vasculaires (4), le cancer (5), les
maladies infectieuses (6) et la fragilité (7). La mesure du
25OH-D dans le sérum ou le plasma est donc devenue
une pierre angulaire de la santé et du bien-être en
général, et les volumes de tests de vitamine D
continuent d'augmenter dans les laboratoires cliniques
(8).
Les techniques actuelles de mesure du 25OH-D
comprennent des méthodes de chromatographie
liquide (LC) couplées à une détection automatisée par
UV ou par spectrométrie de masse (MS), et des
techniques d'immunochimie, qui sont basées sur des
anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre le
25OH-D et ont été développées pour être utilisées sur
une variété de plates-formes automatisées de chimie
clinique (2, 9). Bien que la LC-MS/MS avec dilution
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 Les techniques LC-MS/MS et HLPC présentent
toutes deux plusieurs inconvénients par rapport aux
tests immunologiques automatisés, notamment une
plus grande complexité, un délai d'exécution plus
long et la nécessité d'un personnel qualifié, ce qui
les rend pratiquement inaccessibles à certains
laboratoires, en particulier les plus petits ou ceux
pour lesquels l'équipement LC est inabordable. Par
conséquent, les essais automatisés sont
généralement considérés comme le meilleur choix
pour un certain nombre de services de laboratoire,
à condition que ces méthodes présentent des
performances analytiques satisfaisantes et une
concordance optimale avec les techniques LC de
référence. Quelques articles ont déjà été publiés sur
la comparaison analytique des immunodosages
automatisés avec les méthodes LC (10 -14),
montrant des résultats plutôt hétérogènes.
L'objectif de cette étude multicentrique était donc
de comparer les résultats du 25OH-D obtenus avec
une technique HPLC de référence avec les résultats
de sept immunodosages automatisés commerciaux
différents.

Matériels et méthodes
Le prélèvement de sang (tube à sérum en
plastique BD Vacutainer® Plus de 13 × 100 mm x 6,0
ml ; Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA) a été
centralisé à l'hôpital académique de Parme, en
Italie. En bref, 120 échantillons consécutifs de
patients ambulatoires (58 hommes et 72 femmes ;
âge moyen 54±18 ans) adressés au service local de
médecine de laboratoire avec une demande
spécifique de dosage du 25OH-D ont été
centrifugés, séparés et divisés en 5 aliquotes de 0,6
ml chacune. La première aliquote a été utilisée pour
la mesure de routine du 25OH-D conformément à la
prescription du médecin, tandis que les 4 autres
aliquotes ont été conservées à -70 °C en vue d'un
test différé. Après une semaine de stockage, toutes
les aliquotes ont été transportées vers les centres
participants à l'aide de boîtes de transport
certifiées, dans des conditions contrôlées de
température et d'humidité. La durée moyenne du
transport était de 91±18 minutes. Dès leur arrivée
dans les différents laboratoires, les échantillons ont
été conservés à -70 °C jusqu'à ce que tous les
centres aient reçu l'envoi, ce qui a permis de
commencer les mesures simultanément. Avant
l'analyse, tous les aliquots ont été décongelés à
température ambiante, puis centrifugés. Les
caractéristiques analytiques des immunodosages du
25OH-D sont synthétisées dans le tableau I. La
méthode CLHP de référence utilisée dans cette
étude (Chromsystems Instruments & Chemicals
GmbH, Gräfelfing, Allemagne) permet de simuler la
concentration de 25OH-D dans l'urine.

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346 Lippi et al : Comparaison des immunodosages du 25OH-D

Tableau I Caractéristiques techniques et analytiques des méthodes d'analyse du 25OH-D utilisées dans cette étude, telles
qu'indiquées par les fabricants.

LOD Linéarité
Laboratoire Entreprise Plate-forme et méthode Normalisation Imprécision
(nmol/L) (nmol/L)

Hôpital Chromsystems Système HPLC UV (vérifié par 2.7 3.5-925 0.8-4.6%

universitaire Instruments & isocratique LC-MS/MS)
de Vérone, Chemicals GmbH, avec détection
Vérone, Italie Gräfelfing, Allemagne UV
NIST SRM 7.5 7.5-175 2.2-6.8%
Roche Diagnostics, Cobas E601, 2972
Bâle, Suisse chimiluminescence
de liaison
compétitive en 1
étape contre la
protéine de liaison
de la vitamine D
Beckman Coulter, Unicel DXI 800, NIST SRM 5.0 5.0-525 5.6-9.3%
Brea, CA, USA chimiluminescence de 2972
liaison compétitive en 2
étapes contre 25OH-D

Hôpital Ortho-Clinical Vitros ES, UV (vérifié par 20 20 -315 5.3-10.1%

universitaire Diagnostics, chimiluminescence de LC-MS/MS)
de Parme, Rochester, NY, liaison compétitive en 1
Parme, Italie États-Unis étape contre 25OH-D
DiaSorin, Saluggia Liaison, UV (vérifié par 5.0 10 -375 2.9-5.5%
(VC), Italie chimiluminescence de LC-MS/MS)
liaison compétitive en 1
étape contre 25OH-D

Hôpital Advia Centaur,

Siemens Healthcare
général de immunodosage UV (vérifié par
Diagnostics, 8.0 10.5-375 4.8-11.1%
Vicenza, fluorescent à liaison LC-MS/MS)*
Tarrytown, NY, USA
Vicenza, compétitive en 1 étape
Italie contre le 25OH-D
Système Architect i,
Hôpital général Abbott Diagnostics, chimiluminescence de UV (vérifié par 7.7 20-400 2.8-4.6%
de Bassano del Lake Forest, IL, États- liaison compétitive en 1 LC-MS/MS)
Grappa, Bassano Unis étape contre 25OH-D
del Grappa (VI), Immunodiagnostic iSYS, chimilumines- UV (vérifié par 9.0 15-315 8.9-16.9%
Italie Systems Limited, cence de liaison LC-MS/MS)
Boldon, Royaume- compétitive en 1 étape
Uni contre 25OH-D
CLHP, chromatographie liquide à haute pression ; CL, chromatographie liquide ; LOD, limite de détection ; MS, spectrométrie
de masse ; NIST, National Institute of Standards and Technology.
* Cette méthode a été rendue traçable au NIST SRM 2972 après la publication de cette étude.

sont ensuite quantifiés à l'aide d'un système de test

La méthode a consisté à déterminer par HPLC, en incluant un étalon interne stable.
chromatographie la 25- OH-D3 et la 25-OH-D2 sur un
simple système HPLC isocratique avec détection UV Les résultats de toutes les mesures ont été
(Gilson Aspec XL, Mid- dleton, WI, USA). La méthode analysés à l'aide de l'ajustement de Deming, de la
a été calibrée à l'aide d'un étalon commercial corrélation de Spearman, de la statistique de kappa.
propriétaire (Chromsystems Instruments &
Chemicals GmbH). Les caractéristiques de base de
cette méthode ont été décrites précédemment (15).
En bref, les compo- sants interférents sont éliminés
des échantillons par pré- cipitation des protéines et
extraction sélective en phase solide. Les analytes
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tique, test du carré c2 avec correction de Yates et
diagrammes de Bland & Altman, en utilisant
Analyse-it (Analyse-it Software Ltd, Leeds, UK).
L'étude était basée sur des échantillons
préexistants, de sorte que l'autorisation éthique et
le consentement éclairé n'étaient pas nécessaires,
conformément à notre comité éthique local. L'étude
a toutefois été réalisée conformément à la
Déclaration d'Helsinki et aux dispositions de toutes
les législations locales pertinentes.

Résultats
Les valeurs de 25OH-D mesurées dans les 120
échantillons de sérum de patients externes à l'aide de
la CLHP de référence étaient uniformément réparties
dans l'ensemble des paramètres biologiques
pertinents.

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J Med Biochem 2015 ; 34 (3) 347
La concordance (statistiques kappa) entre la
Tableau II Ajustement de Deming et corrélation de CLHP et les différents immunodosages au seuil de 50
Spearman des différents immunodosages automatisés par nmol/L de 25OH-D est également indiquée dans le
rapport à la méthode HPLC de référence. tableau III et varie entre 0,61 et 0,85 (tous p<0,001).
Le pourcentage d'échantillons en dessous de ce seuil
Méthodes HPLC
était de 22% (26/120).
y = 1,06x - 11,7
Roche Cobas
r = 0,923 (p<0,001)

y = 0,95x + 8,5
Siemens Centaur
r = 0,955 (p<0,001)

y = 1,02x - 7,8
Liaison DiaSorin
r = 0,961 (p<0,001)

y = 1,04x - 8,6
Ortho Vitros
r = 0,928 (p<0,001)

y = 0,97x - 11,2
Beckman DxI
r = 0,945 (p<0,001)

y = 0,99x + 9,2
IDS iSYS
r = 0,958 (p<0,001)

y = 1,26x - 15,2
Abbott Architecte
r = 0,959 (p<0,001)

Les résultats de l'ajustement de Deming et de la

corrélation de Spearman obtenus par comparaison
avec la méthode de référence HPLC sont présentés
dans le tableau II. Les résultats de l'ajustement de
Deming et de la corrélation de Spearman obtenus par
comparaison avec la méthode de référence HPLC sont
présentés dans le tableau II. En bref, les coefficients de
régression étaient toujours optimaux, allant de 0,923
à 0,961 (tous p<0,001). La pente de l'ajustement de
Deming était comprise entre 0,95 et 1,06, tandis que
l'ordonnée à l'origine était comprise entre -15,2 et
9,2 nmol/L. Le biais de la technique HPLC de
référence, calculé à partir des diagrammes de Bland
& Altman, est présenté dans le tableau III et la figure
1. En général, le biais moyen variait entre -14,5 et
8,7 nmol/L. En conséquence, l'objectif de
performance minimum pour le biais suggéré par
l'Endocrine Society (c'est-à-dire 15,8 %) a été
légèrement dépassé par un seul immunodosage
(c'est-à-dire Unicel DxI -17,1 %, IC 95 % -21,7 à -12,4
%), mais pas par les autres méthodes (c'est-à-dire
Cobas E601 -11,9 %, IC 95 % -17,2 à -6,5 % ; Advia
Centaur
11,1 %, IC 95 % 6,6 à 15,6 % ; Vitros ES -6,7 % ; IC 95
%.
-11,9 à -1,5 % ; Liaison -5,4 %, IC 95 % -8,8 à -2,0 % ;
iSYS 10,7 %, IC 95 % 7,5 à 14,0 % ; Architect 7,9 %,
95 % CI 4,0 à 11,8 %) (3).
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 pas à des critères analytiques rigoureux (10, 14), tandis
Tableau III Biais absolu (IC à 95 %) et concordance (sta- que d'autres ont fait état de résultats plus favorables.
tistique kappa et IC à 95 %) au seuil de diagnostic de la
carence en vitamine D (c.-à-d. 50 nmol/L) des différents
immunodosages automatisés par rapport à la méthode
HPLC de référence.

Méthodes HPLC

Biais -6,5 (IC 95% -12,0 à -1,2)

Roche Cobas
Kappa 0,79 (0,66 à 0,92 ; p<0,001)

Biais 4,2 (IC 95 % 1,0 à 7,5)

Siemens Centaur
Kappa 0,61 (0,43 à 0,79 ; p<0,001)

Biais -3,7 (IC 95% -7,0 à -0,7)

Liaison DiaSorin
Kappa 0,81 (0,68 à 0,94 ; p<0,001)

Biais -5,5 (IC 95% -9,7 à -1,2)

Ortho Vitros ES
Kappa 0,66 (0,51 à 0,82 ; p<0,001)

Beckman Unicel Biais -14,5 (IC 95% -19,0 à -9,7)

DxI Kappa 0,72 (0,57 à 0,86 ; p<0,001)

Biais 7,7 (IC 95 % 4,5 à 11,0)

IDS iSYS
Kappa 0,69 (0,52 à 0,86 ; p<0,001)

Biais 8,7 (IC 95 % 3,5 à 14,0)

Abbott Architecte
Kappa 0,85 (0,73 à 0,97 ; p<0,001)

avec HPLC, 24% (29/120 ; p=0,76 versus HPLC)

avec Cobas E601, 11% (13/120 ; p=0,036) avec
Advia Centaur, 29% (35/120 ; p=0,24) avec Unicel
DxI, 28% (33/120 ; p=0.37) avec Vitros ES, 23%
(28/120 ; p=0,88) avec Liaison, 14% (17/120 ;
p=0,18) avec iSYS, et 20% (24/120 ; p=0,87) avec
Architect.

Discussion
Selon des données récentes, la fréquence des
carences en 25OH-D varie de 22 à 26% selon l'âge et le
sexe (16). Ces chiffres sont reflétés par une
augmentation constante de la demande de mesure de
la vitamine D dans les laboratoires cliniques (8). Bien
qu'il soit compréhensible que le 25OH-D soit évalué de
préférence avec des techniques LC, soit HPLC ou LC-
MS (2, 3), cette approche est pratiquement inadaptée
dans les laboratoires où ces techniques sont
inabordables pour des raisons économiques ou
organisationnelles. L'introduction progressive sur le
marché du diagnostic d'une variété d'immunodosages
automatisés doit donc être considérée comme une
alternative viable pour l'évaluation de routine du
25OH-D, à condition que les résultats soient précis et
finalement corrélés avec une méthode de référence.
Diverses études antérieures ont montré que
certaines méthodes com- merciales ne répondaient
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348 Lippi et al : Comparaison des immunodosages du 25OH-D

Figure 1 Diagrammes de Bland & Altman des données sur la vitamine D 25OH (n=120) obtenues avec sept immunodosages
automatisés, comparées à une technique de référence de chromatographie liquide à haute pression (HPLC).

150 60
Différence (Roche Cobas - HPLC)

Différence (Siemens Centaur - HPLC)

100 40

50 20

0
0
-20
-50
-40
-100
-60
-150 -800 50 100 150 200 250 300
0 50 100 150 200 250 300
Moyenne de tous
Moyenne de tous (nmol/L)
(nmol/L)

80 100
Différence (Liaison Diasorin - HPLC)

80
Différence (Ortho Vitros - HPLC)
60
60
40
40
20 20
0 0
-20 -20
-40
-40
-60
-60 -80
-80 -100
0 50 100 150 200 250 300 0 50 100 150 200 250 300

Moyenne de tous (nmol/L) Moyenne de tous

(nmol/L)

150 100
Différence (Beckman DxI - HPLC)

80
Différence (IDS iSyS - HPLC)

100
60
50 40
20
0
0
-50 -20
-40
-100
-60
-150 -80
0 50 100 150 200 250 300 0 50 100 150 200 250 300
Moyenne de tous (nmol/L) Moyenne de tous (nmol/L)

200
Différence (Architecte Abbott - HPLC)

150

100

50

-50

-100
0 50 100 150 200 250 300
Moyenne de tous (nmol/L)
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J Med Biochem 2015 ; 34 (3) 349
autres immunodosages sont basés sur une liaison
pour certains dosages (11-13). Outre une simple compétitive directe (c'est-à-dire en une étape)
comparaison des données dans l'ensemble de la contre le 25OH-D ou la protéine de liaison de la
gamme biologique du 25OH-D, la question la plus vitamine D (VDBP) (tableau I). Il est intéressant de
critique est en fait l'accord sur le seuil actuellement noter que le pourcentage de biais calculé sur les
utilisé pour définir la carence en vitamine D, qui est de échantillons avec 25OH-D <75 nmol/L était
50 nmol/L (2, 3). beaucoup plus faible (n=56 ; -12,8% ; 95% CI -21,1
à -4,5%). Non
Les résultats de cette étude montrent clairement Des études antérieures ont examiné les performances
qu'un seul test (Advia Centaur) a montré un des
désaccord significatif au seuil de diagnostic de la Ce test n'a pas été réalisé à notre connaissance et la
carence en 25OH-D parmi les sept que nous avons comparaison avec les résultats d'autres études
testés, où le taux de carence en vitamine D dé- analytiques est donc impossible. Avec le Cobas E601, ce
terminés avec cette méthode est apparu près de la
moitié de celui mesuré en utilisant la HPLC (11%
contre 24% ; p=0,036). Il est intéressant de noter que
nous avons constaté un biais positif global pour
Advia Centaur par rapport à la HPLC (+11%), qui était
plus évident dans les échantillons avec de faibles
valeurs de 25OH-D (c.-à-d. <50 nmol/L) (Figure 1). Un
résultat identique a été récemment rapporté par
Janssen et al. (17), dans lequel les échantillons à très
faible teneur en 25OH-D présentaient un biais positif
d'environ 50 % par rapport à une technique LC-
MS/MS de référence. Cependant, la corrélation
globale de ce dosage était excellente tant dans notre
étude (r=0,955) que dans l'évaluation analytique de
Janssen et al. (17) (r=0,92).
Une tendance inverse a été observée avec le
Cobas E601. En accord avec deux études
précédentes (12, 18), les résultats ont été biaisés
négativement (-12%). Ceci est probablement dû au fait
que, contrairement au test HPLC de référence utilisé
dans cette étude, le test immunologique de Roche
est traçable au matériau de référence standard (SRM)
972 basé sur le sérum du National Institute of
Standards and Technology (NIST) (19). Il convient
également de noter que la concordance globale de ce
test était la troisième plus élevée parmi tous les
immunodosages et que la corrélation était
excellente (r=0,923 ; p<0,001), très similaire à celle
rapportée précédemment par Chen et al. (12)
(r=0,945). En ce qui concerne les autres
immunodosages, malgré une bonne concordance au
seuil diagnostique et une excellente corrélation
(r=0,945 ; p<0,001) avec l'HPLC, la méthode
récemment mise à disposition sur l'Unicel DxI
présentait le biais (négatif) le plus élevé (à savoir -
14,5 nmol/L) et une différence en pourcentage qui
dépassait légèrement l'objectif de performance
minimal pour le biais (à savoir 17,1 % contre 15,8
%). Plus précisément, ce biais était principalement
imputable aux échantillons dont le taux de 25OH-D
était supérieur à 75 nmol/L (figure 1), et donc
dont les concentrations d'analyte étaient
supérieures au seuil conventionnel de déficience
modérée en 25OH-D. Ce résultat peut être imputable à
la spécificité de l'analyse de l'échantillon et au fait qu'il
n'y a pas de différence entre les deux échantillons. Cela
peut s'expliquer par l'immuno-activité spécifique des
anticorps contre les échantillons testés, mais aussi par
le fait qu'il s'agit d'une méthode de
chimiluminescence en deux étapes, alors que les
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 NIST-SRM 2972) pour différentes méthodes et
est également étalonnée par rapport au NIST-SRM plates-formes devrait être efficace pour réduire de
972, de sorte que ces résultats ne sont pas manière cohérente le biais et améliorer la
inattendus. Il a été récemment démontré que les comparabilité entre les différents immunodosages
valeurs de 25OH-D sont typiquement faiblement automatisés du 25OH-D disponibles sur le marché.
biaisées dans les méthodes traçables au NIST-SRM D'autres études devraient donc être planifiées pour
972, en particulier lors de la mesure d'échantillons vérifier l'efficacité de cette stratégie.
contenant déjà beaucoup de 25OH-D3 (20), comme
ceux obtenus à partir de notre population d'étude
Déclaration de conflit d'intérêts
de patients ambulatoires non sélectionnés (la
supplémentation en 25OH-D2 n'est pas prescrite Les auteurs ont déclaré n'avoir aucun conflit
dans notre région). Les résultats des autres dosages d'intérêt concernant la publication de cet article.
étaient globalement satisfaisants, avec d'excellentes
corrélations et une concordance significative au
seuil de déficit en 25OH-D (tableaux II et III). Un
biais négatif a également été observé pour l'Abbott
Architect, en accord avec celui précédemment
rapporté par Jovičić et al. (18), qui ont également
utilisé une technique HPLC comme gold standard.
En conclusion, les excellentes corrélations avec la
technique HPLC de référence trouvées dans cette
étude attestent que les sept immunodosages
automatisés peuvent être utilisés de manière fiable
pour l'évaluation de routine du 25OH-D dans les
laboratoires cliniques. Les différences observées dans
cette étude sont au moins en partie attribuables à la
conception différente du test. Plus précisément, l'essai
immuno-électrochimiluminescent Roche Cobas E601
est une méthode de liaison protéique compétitive qui
utilise une protéine spécifique qui se lie à la VDBP,
alors que les autres méthodes sont basées sur la
liaison compétitive d'anticorps à la 25OH-D (tableau I).
Il convient également de noter que les méthodes
directes, dans lesquelles le 25OH-D et le VDBP ne sont
pas complètement séparés, peuvent également
présenter une immunoréactivité hétérogène par
rapport aux immunodosages en deux étapes
(10). Indépendamment de ces différences, seule
une méthode a légèrement dépassé l'objectif de
performance minimum pour le biais par rapport à la
CLHP, et une autre a montré un désaccord
significatif au niveau du seuil de carence en 25OH-
D. Dans les deux cas, cependant, la corrélation avec
la méthode de référence était excellente, soulignant
ainsi le problème actuel de mauvaise normalisation
des tests de vitamine D (tableau I). Dans les deux
cas, cependant, la corrélation avec la méthode de
référence était excellente, soulignant ainsi le
problème actuel de la mauvaise normalisation des
tests de vitamine D (tableau I). Cette hypothèse est
également étayée par la valeur plutôt hétérogène
du biais (de -14,5 à 8,5 nmol/L) observée dans les
différentes comparaisons de méthodes. Bien que
cela doive être considéré comme un facteur de
confusion potentiel lors de l'évaluation du 25OH-D
selon les recommandations conventionnelles de
maintenir la concentration de cette vitamine au-
dessus d'un certain seuil (2, 3), l'objectif
d'harmonisation peut toutefois être atteint avec des
efforts relativement modestes. En raison de la
grande fiabilité des résultats individuels par rapport
à la technique de référence (tableaux II et III), il est
raisonnable de supposer que l'extension de la
traçabilité à des normes communes (par exemple
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350 Lippi et al : Comparaison des dosages immunologiques de 25OH-D
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Reçu : 23 mars 2014
Accepté : 22 avril 2014
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