PROCÉDURE DE REALISATION Pages :

CERIMED ANALYSES DE L’Ag HIV Applicable le :

BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

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Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine

Date
Signatures

1. OBJECTIFS ET PORTÉE
a. Objectif

La réalisation du test de l’anticorps HIV permet de déterminer si le système immunitaire d’un patient
développe les anticorps spécifiques aux antigènes du virus de l’hépatite
b. Personnes concernées
Personnel de l’unité des ELISA
2. Domaine d’application

Unité des ELISA

3. RÉFÉRENCES

Fiche d’utilisation du réactif antigène HIV (HUMAN)

4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS

Tâches Personnes autorisées Responsables

Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL

Validation du test Personnels de l’unité des ELISA MBEP Christian

et le responsable technique
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5. PRINCIPE
Le principe du dosage de l’antigène HIV repose sur l’ELISA sandwich double détection d’antigène et
d’anticorps. Des antigènes recombinants spécifiques au VIH 1.2 ainsi que les anticorps monoclonaux dirigé
contre l’Ag p24 du VIH sont fixés dans les puits de microtitration ; au cours de l’incubation les anticorps
spécifiques et antigènes présent dans l’échantillon se fixent aux antigènes immobilisés ainsi qu’au conjugué
1 formant des complexes doubles antigène-anticorps ; ces complexes sont marqués en ajoutant le conjugué 2
après le cycle de lavage pour l’élimination des composants non fixés, le TMB est ajouté une coloration bleu
se forme et vire au jaune à l’ajout du stop . L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration
d’Ac-VIH/Ag-VIH dans l’échantillon.
6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST

 PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE

Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+24
NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30 min avant utilisation

 MODE OPERATOIRE

- Ajouter 30ul du WCON-1 dilué au 10+100 dans les puits du control négatif, positif et
échantillon
- Ajouter 70ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits ; recouvrir d’un film protecteur
adhésif et incuber 60 min à 37 ͦ c
- Diluer WCON-2 au 10+100 et ajouter 50ul de la solution diluée dans les puits recouvrir d’un
film protecteur adhésif et incuber 30 min à 37 ͦ c
- Laver 04 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 400ul de solution par
puits)
- Diluer le SUBSTRAT au 10+100 et ajouter 100ul de la solution diluée dans les puits recouvrir
d’un film protecteur adhésif et incuber 20 min à 18-24 ͦ c à l’abri de la lumière
- Ajouter 150ul du Stop
- Lire à 450nm de densité optique dans les 3-4 min qui suivent l’ajout du stop.
Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale.
Le test est valide si : NC ≤ 0.200, CP1 et CP2 ≥ 0.800

Interprétation des résultats qualitatifs

Valeur seuil (VS) = moyenne CN + 0 ,400

- Si DO patient < VS → NEGATIVE

- Si DO patient > VS → POSITIVE

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7. MATERIELS UTILISES

 Micropipettes
 Plaque pour les puits
 Puits pour le test
 Réactif
 Gants
 Embouts
 Chronomètre
 Fiche de paillasse
 Combi Wash
 Huma Reader

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ATTESTATION DE LECTURE
Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures

Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11