PROCÉDURE DE REALISATION Pages :

CERIMED ANALYSES DE L’Ag HBe Applicable le :

BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

Rédigé par : Vérifié par : Validé par :

Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine

Date
Signatures

1. OBJECTIFS ET PORTÉE
a. Objectif

La réalisation du test de l’antigène HBe permet de déterminer si le virus de l’hépatite B présent chez
un patient est en phase de multiplication
b. Personnes concernées
Personnel de l’unité des ELISA
2. Domaine d’application

Unité des ELISA

3. RÉFÉRENCES

Fiche d’utilisation du réactif antigène HBe (KITE MELSIN)

4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS

Tâches Personnes autorisées Responsables

Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL

Validation du test Personnels de l’unité des ELISA MBEP Christian

et le responsable technique
 PROCÉDURE DE REALISATION DE Pages :
CERIMED ANALYSES L’Ag HBe Applicable le :
BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

5. PRINCIPE
Le principe du dosage de l’antigène HBe repose sur la méthode ELISA sandwich. Les anticorps spécifique
sont fixé au font des puits l’ajout du sérum ou du plasma et l’ajout du conjugué permet la formation d’un
complexe immun après une période d’incubation les éléments non fixés sont retirer par lavage puis l’ajout
du substrat (TMB) et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec formation d’une
coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des anticorps présent dans
le sérum.
6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST

 PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE

Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée : 1/20
Multiplier la concentration du Wash buffer avec le volume total du flacon pour avoir le volume total d’eau
distillée à utiliser.
NB : laisser les réactifs à température ambiante pendant 30min au minimum avant l’utilisation
 MODE OPERATOIRE

- Ajouter 50ul (03 CN, CP, et Echantillon) sauf le blanc

- Ajouter 50ul du HRP conjugué dans les puits sauf le blanc, mixé en tapotant la plaque
doucement
- Incuber 30min à 37 ͦ c
- Laver 05 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350- 400ul de solution par
puits)
- Ajouter 50ul de Chromogène A et 50ul de chromogène B, incubé 15min à 37°c à l’abri de la
lumière
- Ajouter 50ul du Stop et mixer gentiment
- Lire à 450nm de densité optique pendant les 10min qui suivent l’ajout du stop
Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale

Interprétation des résultats : méthode qualitatifs

MCN
Cutt-off (CO) ¿ X 2,1
3
DO P
- Si CO
<1 → NEGATIVE

DO P
- Si CO
=0,9−1,1→ refaire le test en doublant les puits du patient et si même résultat est observé, -
considéré POSITVE
DO P
- Si CO
<1 → NEGATIVE
 PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
CERIMED ANALYSES DE L’Ac HBe Applicable le :
BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

7. MATERIELS UTILISES

 Micropipette
 Plaque pour les puits
 Puits pour le test
 Réactif
 Gants
 Embouts
 Chronomètre
 Fiche de paillasse
 Combi Wash
 Huma Reader

-
 PROCÉDURE DE REALISATION DE Pages :
CERIMED ANALYSES L’Ag HBe Applicable le :
BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1

ATTESTATION DE LECTURE
Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures

Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11