LABORATOIRE D'ANALYSES DE BIOLOGIE MEDICALE

Professeur A.TARZAALI

Alger, le 10 mars 2022

INFORMATION AUX LABORATOIRES

Anticorps anti-nucléaires (ANA) revue de notre démarche

décisionnelle, introduction du BioPlex 2200 et changement de prix

Chères Consœurs, chers confrères,

Nous vous informons du changement de notre démarche décisionnelle concernant la recherche des
anticorps anti-nucléaires (ANA) et de l’introduction du dépistage et du TITRAGE du ds-DNA et des
anticorps anti-antigènes nucléaires solubles (ENA) par immunofluorimétrie en flux (technologie
Luminex ®) sur BioPlex 2200 de la société Bio-Rad.
L’exploration immunologique d’une affection systémique évoquant une maladie auto-immune non
spécifique d’organe débute par une recherche des anticorps anti-nucléaires (ANA). Le lupus
érythémateux systémique, la polyarthrite rhumatoïde, les sclérodermies, le syndrome de Sjögren, la
dermatomyosite, les polymyosites, la connectivite mixte de Sharp sont des exemples de maladies
auto-immunes non spécifiques d’organes dites également maladies systémiques ou connectivites.
Toute recherche d’ANA commence par un dépistage en immunofluorescence indirecte (IFI) sur
cellules Hep-2. Parce que plus sensible que n’importe quelle autre technique, l’IFI demeure le gold
standard pour le dépistage des anticorps anti-nucléaires. Seule l’IFI permet de rendre un résultat
positif d’ANA avec un titre et un aspect de fluorescence du noyau. Quand la recherche des ANA est
positive, il faut identifier les cibles antigéniques en dosant à minima les anticorps anti-ADN natif et
les anticorps anti-antigènes nucléaires solubles (ENA).
Dans le cadre d’une prescription globale, le dépistage d’autres cibles antigéniques des ANA peut être
réalisé à la demande du prescripteur.
L’ensemble des résultats issus de cette cascade diagnostique, la positivité des ANA, le titre obtenu, la
cohérence entre l’aspect de fluorescence et les anticorps mis en évidence s’interprète en fonction du
contexte clinique du patient et souligne l’importance du dialogue clinico-biologique et donc de la
FICHE DE RENSEIGNEMENTS.

Pour une meilleure compréhension, nous vous avons détaillé ci-après les grandes lignes de notre
démarche diagnostique.

 1ere étape : le dépistage des ANA par IFI sur cellules HEp-2 (Gold standard)

Pour cette première partie, la lecture des lames se fait sur un microscope à fluorescence (IFA)
entièrement automatisé, le NOVA View® de la société Inova Diagnostics (Werfen). Le NOVA View®
est un système d’automatisation de l’interprétation de l’immunofluorescence indirecte, il permet la
reconnaissance des différents aspects avec une mesure de l’intensité en unités de fluorescence dans
le but d’augmenter la reproductibilité de ces tests. Ce système permet l’enregistrement des images
de l’IFI, leur mémorisation et leur archivage pour d’éventuelles comparaisons.

Une relecture peut donc être effectuée à tout moment afin de confirmer ou modifier l’aspect de la
fluorescence de certains échantillons.

Les aspects de la fluorescence :

* Fluorescence nucléaire : homogène, membranaire, mouchetée (gros grains, grains fins),

centromères, nucléolaire, dots nucléaires (dots multiples, 4-6 dots), fuseau mitotique, mixte.

* Fluorescence cytoplasmique : grains fins des anti-synthétases, mitochondries ribosomes,

golgi …

 2ème étape : l’identification des antigènes cibles

Pour cette seconde partie, l’identification se fait sur le système BioPlex 2200 de la société Bio-Rad
qui est une plateforme de tests multiplex entièrement automatisés.
La technologie multiplex permet de détecter simultanément un panel de 15 cibles antigéniques :
ds DNA*, chromatine ou nucléosome, protéines ribosomale P, SSA, SSA Ro60, SSA Ro 52, SSB, Sm,
Sm/RNP,U1-RNP, RNP A, RNP 68, Scl 70, Jo1,Centromére B.
*Anticorps anti-ds DNA : marqueurs du lupus érythémateux disséminé (LED) de très bonne
spécificité lorsque les taux sont élevés. La technique immunofluorimétrique en flux multiplex utilisée
par le BioPlex 2200 quantifie cet auto-anticorps et permet d'apprécier et de suivre l'évolution de la
maladie.
Pour les autres cibles antigéniques, anticorps anti-antigènes nucléaires solubles ( ENA ), les résultats
sont semi-quantitatif.
Ces dosages sont couplés au MDSS (Medical Decision Support Software) qui est un logiciel d’aide à
l’interprétation basé sur plus de 15'000 résultats venant de différents groupes de plus de 1'400 cas
cliniques.

*Contrôle qualité : Chaque panel réalisé sur le système BioPlex 2200 contient en plus des billes de la
réaction, trois billes de contrôle interne (SVB / ISB /RBB) sécurisant le résultat obtenu.
  Cas particuliers (cas rares, environ 10% des IFI positifs ) :

 Présence d’aspect cytoplasmique : type mitochondrie, grains cytoplasmique anti-

synthétase…
 Si le contexte clinique*** est évocateur d'un syndrome des anti-synthétases ou syndrome de
chevauchement (hépatopathies auto-immunes et connectivites par exemple).

/!\ *** importance +++ de la fiche de renseignements /!\

D’autres panels (par immuno-dot) seront utilisés pour l’identification des anticorps anti-
mitochondries, anti-Sp100, anti-EJ, anti-PL7, anti-PL12 :

• BlueDriver Quantrix ANA 24 Screen IgG (D-TEK) : ADNnatif, Nucléosome, Histone, Sm,
Sm/RNP, U1RNP, SSA Ro60, SSA Ro52, SSB, Jo1 , PL7, PL12, SRP, Protéines ribosomale P,
PCNA, Mi2 , Ku, Scl 70, Pm/Scl 100, Centromère B /A, Sp100, gp 210, anti-mitochondrie type
2 native et recombinante.

• Myositis (EUROIMMUN) : Mi2, Ku, Pm/Scl 100, Pm/Scl 75 , Jo1, SRP, PL12, PL7, EJ,OJ, Ro 25.

• Auto-immune Inflammatory Myopathies (EUROIMMUN) : Mi2 alpha et béta, TIF1g, MDA5,

NXP 2, SAE, Ku, Pm/Scl 100, Pm/Scl 75 , Jo1, SRP, PL12, PL7, EJ,OJ, Ro 25.
 Une positivité suggère l’existence d’un terrain auto-immun : connectivite ou
autre MAI spécifique d’organes (cirrhose biliaire primitive (CBP), HAI).
Mais ils peuvent être retrouvés au cours d’une pathologie inflammatoire,
infectieuse (virale), tumorale (leucémie lymphoïde chronique, lymphome).
Ou être induits par des médicaments (bêta-bloquants, anti-TNF alpha…).
Dans certains cas, ils peuvent être détectés chez le sujet sain (10 à 15%) et
chez les femmes après 60 ans.

☞ Merci de prendre en considération les conditions pré-analytiques suivantes :

 Echantillon : 1 mL de SERUM recueilli sur tube de prélèvement standard ou

contenant un gel séparateur.

 Conservation et Transport : la conservation et le transport de vos échantillons

s’effectuent en milieu réfrigéré (+2°C à +8°C)

 Stabilité de l’échantillon : 7 jours entre 2°C et 8°C, au-delà le prélèvement doit

être congelé à -20°C (± 5 °C).

 Technique : Immunofluorimétrie en flux multiplex

 Unité : dsDNA : UI/ml standardisé OMS ; ENA : Index

 Valeurs attendues :
IFI :
Technique : WERFEN INOVA - immunofluorescence indirecte (IFI) sur cellules Hep2
Les résultats sont rendus en "inverse de dilution"
Titre Interprétation
< 80 Négatif
80 Seuil de positivité, titre non significatif
160 - 320 Titre peu élevé
> 320 Titre élevé
DsDNA :
Titre Interprétation
< 5 UI/mL (OMS) Négatif
5 - 9 UI/mL (OMS) Equivoque
> 9 UI/mL (OMS) Positif
ENA :
Index Interprétation
< 0,9 Négatif
0,9 - 1,2 Equivoque
> 1,2 Positif

 Jours de traitement : du dimanche au jeudi

 Délai de résultats : 4 jours ouvrés (sont exclus week-end et jours fériés)

 Prix :
 1ere étape IFI, pas de fluorescence (négatif à l’IFI) : 1’400,00 DA
 2ème étape, après une fluorescence à l’IFI, l’identification des cibles antigéniques sur
BioPlex 2200 se lance automatiquement : rajouter 2'500,00 DA soit un total de
3'900,00 DA pour les deux étapes.

Votre laboratoire sera contacté par notre secrétariat afin d’obtenir votre accord
pour le lancement des cas particuliers (cas rares, environ 10% des IFI positifs)
suivants :
 2ème étape bis, après une fluorescence positive à l’IFI, l’identification des cibles
antigéniques se fera par BlueDriver Quantrix ANA 24 Screen IgG (D-TEK) : rajouter
4'200,00 DA soit un total de 5'600,00 DA pour les deux étapes.
 2ème étape ter, après une fluorescence positive à l’IFI, l’identification des cibles
antigéniques se fera par Myositis (EUROIMMUN) ou Auto-immune Inflammatory
Myopathies (EUROIMMUN) : rajouter 4'700,00 DA soit un total de 6'100,00 DA pour
les deux étapes.

Dr.Y.BEROUAL