Planches techniques

histologiques
-Vitesse de pénétration et effets tissulaires des agents fixateurs-
-Propriétés des agents fixateurs seuls-
 -1-

- Etapes d’inclusion-
-2- -3-

-4- -5-
 -1-

-2-

-3-

-4-
 Cortex cérébral Cortex cérébelleux Substance grise cervelet
(B. Toluidine) (B. Luxol-Hématoxyline) (B. Luxol)

Substance blanche Tronc Substance blanche Moelle E. Substance grise Moelle E.

(B. Luxol) (Hématoxyline-éosine) (Hématoxyline-éosine)
 NSO

NRC

Noyaux Hypothalamiques Noyaux Hypothalamiques

(V. Cresyl) (A. Heidenhain)

Soma Neuronal Neurone Tronc C. Purkinje

(B. Toluidine) (B. Luxol) (B. Luxol-hematoxyline)
 Etapes de la technique histologique
 Méthodes de l’immunohistochimie

 Immunohistochimie directe
C’est une méthode IHC en une seule étape. L’anticorps marqué réagit
directement avec l’antigène sur des coupes de tissus. Cette technique
utilise un seul anticorps et
DAB
la procédure est courte et rapide.
Peroxydase
Cependant, elle est moins sensible
en raison de la faible amplification Précipité
du signal et donc rarement utilisée.
  Immunohistochimie indirecte
Elle implique un Ac Iaire non marqué qui réagit avec l’antigène tissulaire et
un Ac IIaire marqué qui se lie à l’anticorps primaire (Ac secondaire doit être
dirigé contre les immunoglobulines de l’espèce animale dans laquelle l’Ac
Iaire a été produit).
 Cette méthode est plus sensible en
raison de l’amplification du signal due
aux multiples réactions de l’Ac IIaire
sur les différents sites antigéniques de
l’Ac Iaire.
 La biotine est couplée à l’Ac IIaire qui
est spécifique de l’Ac Iaire de l’espèce
productrice. La reconnaissance de la
biotine par l’Avidine Peroxydase
forme un complexe Biotine-Avidine-
Peroxydase. La présence de multiples
sites de fixation de l’Avidine sur la
biotine va permettre sa fixation sur
l’anticorps secondaire et par
conséquent l’amplification du signal
 Marquage des neurones Marquage au niveau du cerveau
dopaminergiques dans le cerveau

Marquage de la microglie au
niveau de la moelle épinière
 Exemples d’Ac utilisés pour les structures nerveuses

 Protéine d'acides fibrillaires gliales (GFAP):

Est une protéine à filament intermédiaire présente dans les

astrocytes et certaines cellules épendymaires du système nerveux
central.
 Anti AVP: Vasopressine, ou
hormone antidiurétique, est une
hormone peptidique synthétisée
par les noyaux supraoptiques et
paraventriculaires de
l'hypothalamus, et libérée par
l'hypophyse postérieure.

 Anti-Ocytocine: Ocytocine est

un neuropeptide sécrété par les
noyaux paraventriculaire et
supraoptique de l'hypothalamus
et excrétée par l'hypophyse
postérieure qui agit
principalement sur les muscles
lisses de l'utérus et des glandes
mammaires.
 Anti-Gènes Horloges (Per1, Per2, Cry2, Bmal1):
L'activité circadienne des neurones du noyau suprachiasmatique est
sous-tendue par le fonctionnement cyclique d'une dizaine de gènes
dits « de l'horloge », responsables des rythmes d'activité électrique
et biochimique des cellules avec une période proche de 24 heures.

Marquage de Bmal au niveau de Marquage de Per2 (Period Circadien

l’hippocampe Protein) au niveau du cerveau
 Neurofilaments (NF):
Appartiennent à la famille des protéines des filaments
intermédiaires. anticorps anti-neurofilaments colorent une variété
de tumeurs neurales, neuroendocrines et endocrines, telles que les
neuromes, les ganglioneuromes, les gangliogliomes, les
ganglioneuroblastomes et les neuroblastomes. Ces anticorps sont
donc utiles pour l'identification des tumeurs avec différenciation
neuronale.
 Protéine de base de la myéline (MBP): Est une protéine intracellulaire dotée
d'une structure très flexible, présente dans la myéline des systèmes nerveux
central et périphérique. MBP est exprimée dans les oligodendrocytes des
cellules du SNC et de Schwann du SNP.

 La GH: est une hormone peptidique

produite par l'hypophyse antérieure.
  Vimentine: filaments intermédiaires et l'un
des principaux composants de la structure du
cytosquelette. L’Ac anti-vimentine
marquent les cellules mésenchymateuses. En
combinaison avec un panel d'anticorps, ils
sont utilisés pour identifier une tumeur
d'origine mésenchymateuse et un mélanome
malin. De plus, la vimentine est un marqueur
de contrôle utile pour le traitement approprié
des tissus.

Mélanome

 Protéine S-100: utilisée pour

détecter les mélanomes, les tumeurs
malignes de la gaine nerveuse
périphérique et les sarcomes à
cellules claires.
 Immunofluorescence

Anticorps Anticorps IIaire

Fluorochrome Iaire

Anticorps
Iaire
Fluorochrome
-Cervelet-
 -Réseau de neurones-
-Neurone-
-Anti-Vimentin- -Anti-VGFAP-