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5 x 50 56353
1 x 50 56356
Test d'agglutination au latex pour l'identification de Staphylococcus aureus
881158 - 2018/10
SOMMAIRE
1. APPLICATION ............................................................................................................................................ 2
2. RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST ................................................................................................. 2
3. PRINCIPE DU TEST ................................................................................................................................. 2
4. RÉACTIFS................................................................................................................................................... 2
5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION ............................................................................................................ 3
6. ÉCHANTILLONS ........................................................................................................................................ 4
7. PROCÉDURE ............................................................................................................................................. 4
8. LIMITES DU TEST..................................................................................................................................... 5
9. PERFORMANCES DU TEST .................................................................................................................. 5
10. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES .................................................................................................. 7
1
1. APPLICATION
Pastorex™ Staph-Plus est un test d'agglutination rapide pour la détection simultanée du facteur d’affinité pour le
fibrinogène (« clumping factor »), de la protéine A et des polysaccharides capsulaires de Staphylococcus aureus.
3. PRINCIPE DU TEST
Le test Pastorex™ Staph-Plus permet la recherche simultanée des trois composants spécifiques de Staphylococcus
aureus suivants :
1) le facteur d'affinité pour le fibrinogène, également appelé coagulase liée ou « clumping factor » ;
2) la protéine A qui possède une affinité pour le « fragment cristallisable » (Fc) de l'immunoglobuline gamma (IgG) ;
3) les polysaccharides capsulaires du S. aureus.
Ce réactif est constitué de particules de latex sensibilisées d’une part avec du fibrinogène et des IgG, et d’autre part
avec des anticorps monoclonaux spécifiques des polysaccharides capsulaires de S. aureus (brevet Institut Pasteur) [12,
13, 14, 15].
Les isolats de culture de S. aureus sont mélangés avec le réactif au latex sur une carte d’agglutination. Après avoir bien
mélangé, la carte est examinée à l’œil nu : la formation d'agglutinats indique la présence de S. aureus.
4. RÉACTIFS
4.1. Description
A) Pastorex™ Staph-Plus, code 56356 (50 tests) :
2
B) Pastorex™ Staph-Plus code 56353 (5 x 50 tests) :
Identification Description Présentation
Latex rouge sensibilisé avec une solution d'albumine bovine, 5 x 1 ml
Pastorex™ Staph-Plus du fibrinogène, des IgG et des anticorps monoclonaux anti- 1 flacon compte-gouttes
Latex test polysaccharides capsulaires de S.aureus. à bouchon rouge,
Conservateur : <1,5 % ProClin™ 300 prêt à l'emploi
5 x 1 ml
Réactif de contrôle négatif de latex rouge sensibilisé par une
Pastorex™ Staph-Plus 1 flacon compte-gouttes
solution d'albumine bovine.
Negative control à bouchon blanc,
Conservateur : <1,5 % ProClin™ 300
prêt à l'emploi
5. PRÉCAUTIONS D'UTILISATION
Uniquement pour le diagnostic in vitro réalisé par des techniciens de laboratoire, dans un environnement de laboratoire :
3
6. ÉCHANTILLONS
Le test Pastorex™ Staph-Plus doit être effectué avec des colonies présomptives de staphylocoques fraîches et bien
isolées (Gram positif, catalase positive) sur les milieux d’isolement gélosés recommandés suivants :
Trypto-Casein-Soy agar (par ex. Bio-Rad, code 63884)
Columbia Blood agar (par ex. Bio-Rad, codes 63804, 63784)
Baird-Parker agar
Mannitol Salt agar (Chapman) (par ex. Bio-Rad, code 63844)
MRSASelect™II (Bio-Rad, codes 63757, 63758, 63759, 63763)
SASelect™ (Bio-Rad, code 63748)
7. PROCÉDURE
7.1. Matériel fourni
Tous les matériaux mentionnés dans la section « Réactifs » et leurs contrôles
Cartes d’agglutination jetables (Bio-Rad, code 61723)
Réaction négative
Une réaction négative se traduit par une suspension homogène avec un aspect laiteux, sans agglutination, après
30 secondes d’agitation. Ne pas conclure un résultat négatif avant 1 minute.
Interprétation du résultat
Interprétation Critère
Test au latex Contrôle négatif
Résultat positif Réaction positive Réaction négative
Résultat négatif Réaction négative Réaction négative
Résultat non interprétable Réaction positive ou négative Réaction positive
4
Résultat non interprétable
Une réaction est non interprétable si le réactif contrôle négatif (Negative control) présente une agglutination. Dans ce
cas, rechercher la présence de coagulase libre et de DNAse thermostable à l'aide d'une autre méthode.
8. LIMITES DU TEST
a) Des résultats faux-positifs ont été signalés avec certaines souches de staphylocoques.
- S. lugdunensis et S. schleiferi, qui possèdent un facteur d'affinité pour le fibrinogène [16, 17], peuvent réagir avec
le test Pastorex™ Staph-Plus, selon les souches et le milieu d'isolement [11, 18, 6, 19, 20, 21].
- Certaines souches de S. haemolyticus sont reconnues par les anticorps anti-polysaccharides capsulaires de
type 5 [22], ce qui donne un résultat faux-positif avec le test Pastorex™ Staph-Plus [11, 18].
- Certaines souches de S. epidermidis sont décrites comme possédant des polysaccharides capsulaires de type 8
[23] et peuvent ainsi donner des résultats faussement positifs avec le test Pastorex™ Staph-Plus [24, 18].
- D'autres staphylocoques tels que S. cohnii, S. capitis et S. hominis donnent très rarement des résultats faux-
positifs [6, 20, 25, 18, 19].
b) Certaines souches de staphylocoques (S. saprophyticus, S. epidermidis) et Micrococcus luteus peuvent donner une
agglutination non spécifique conduisant à des résultats non interprétables [6, 20, 26].
c) S. intermedius, retrouvé essentiellement en pathologie animale mais très rarement isolé chez l’homme, peut donner
une réaction positive avec les tests classiques de coagulase et donc également réagir avec les tests de détection du
facteur d'affinité pour le fibrinogène [21, 17].
d) Certains streptocoques possèdent une protéine ayant une affinité pour le fragment Fc des immunoglobulines et
peuvent donc réagir avec le latex [27].
e) Des réactions non spécifiques ont également été signalées pour Candida albicans [27, 28, 29]. Il est recommandé
d’effectuer une coloration de Gram et une recherche de catalase sur les colonies à tester avant le test au latex.
f) Des réactions faussement négatives peuvent s’observer si le S. aureus isolé ne produit pas de facteur d'affinité pour
le fibrinogène (« clumping factor »), de protéine A ou de polysaccharides capsulaires correspondant aux anticorps
monoclonaux spécifiques [30, 20].
g) Des résultats faussement négatifs peuvent se produire avec un inoculum insuffisant.
h) Le diagnostic final, comme tous les diagnostics de laboratoire, ne peut pas être basé sur les résultats d’un seul test,
mais sur l’ensemble des données cliniques et des résultats biochimiques, cytologiques et immunologiques.
9. PERFORMANCES DU TEST
9.1 Etude de la reproductibilité
Un panel de 3 échantillons a été utilisé pour déterminer la reproductibilité et la précision du test Pastorex™ Staph-Plus.
Le panel de reproductibilité à 3 échantillons incluait 1 échantillon négatif (colonies S. epidermidis) et 2 échantillons
positifs consistant en deux souches différentes de colonies de S. aureus (« souche 1 » pour la détection du facteur
d'affinité pour le fibrinogène et « souche 2 » pour la détection des polysaccharides capsulaires).
9.1.1 Répétabilité
Le panel de reproductibilité (N = 3) a été testé en 10 réplicats, le même jour, sur un même lot de Pastorex™ Staph-Plus
et lus par un même opérateur. Les échantillons négatifs et positifs ont donné les mêmes résultats attendus avec les
10 réplicats.
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Tableau II : Résultats de la précision série par série, jour par jour et inter-opérateur
Précision série par série, jour par jour et inter-opérateur
Contrôle négatif Test au latex
avec Pastorex™ Staph-Plus
Total Non Total Non
Échantillon (souche) Réactif Réactif
réplicats réactif réplicats réactif
Remarque : (*) La mesure de l'intensité d'agglutination a été affinée en ajoutant ,5 et le suffixe + ou - (par ex. 2,5- est compris entre 2 et
3, avec une intensité légèrement inférieure à 2,5)
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Tableau IV : Spécificité sur colonies bactériennes
Spécificité sur Nombre de souches Nombre de souches Spécificité
Nombre testé
colonies non réactif(s) réactive(s) (%)
Site 1 30 30 0 100%
Site 2 12 12 0 100%
Site 3 96 95 1 (*) 99,0%
Total 138 137 1 99,3%
Remarque : (*) Réactivité croisée avec les souches : un résultat faussement positif a été obtenu avec la souche de Staphylococcus
lugdunensis (sur 2 analysées).
9.2.2 Sensibilité
Sensibilité sur colonies bactérienne
La performance de sensibilité testée dans trois laboratoires [31, 9, 32] avec le Pastorex™ Staph-Plus sur 439 souches
de staphylocoques est de 100 % (439/439) avec un IC de 95 [96,2-100,0 %].
Les souches de Staphylococcus aureus ont aussi été testées pour leur sensibilité à la méticilline.
Site 1 : Souches sensibles à la méticilline Staphylococcus aureus (SASM, N=222) et souches résistantes à la méticilline
Staphylococcus aureus (SARM, N=78).
Site 2 : Souches SARM (N=40) cultivées sur gélose Columbia au sang, gélose Mannitol et Baird-Parker.
Site 3 : Souches SARM (N=99) après exclusion d'un résultat non interprétable. Les cent souches cultivées sur gélose
Columbia au sang venaient de Belgique (N=9), du Danemark (N=1), d'Allemagne (N=18), de France (N=12), des Pays-
Bas (N=9), d'Italie (N=6), d'Autriche (N=9), de pays d'Europe de l'Est (N=9), de Suisse (N=18) et d'Espagne (N=9).
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12. Boutonnier A., Nato F., Bouvet A., Lebrun L., Audurier A., Mazie J.C., and Fournier J.M. Direct testing of blood cultures for
detection of the serotype 5 and 8 capsular polysaccharides of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1989, 27:989-993.
13. Fournier J.M., Bouvet A., Boutonnier A., Audurier A., Goldstein F., Pierre J., Bure A., Lebrun L., and Hochkeppel H.K.
Predominance of capsular polysaccharide type 5 among oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1987,
25:1932-1934.
14. Hochkeppel H.K., Braun D.G., Vischer W., Imm A., Sutter S., Staeubli U., Guggenheim R., Kaplan E.L., Boutonnier A., and
Fournier J.M. Serotyping and electron microscopy studies of Staphylococcus aureus clinical isolates with monoclonal
antibodies to capsular polysaccharide types 5 and 8. J. Clin. Microbiol., 1987, 25:526-530.
15. Karakawa W.W., Fournier J.M., Vann W.F., Arbeit R., Schneerson, R.S. and Robbins. J.B. Method for the serological typing
of the capsular polysaccharides of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1985, 22:445-447.
16. Hébert G.A. Hemolysins and Other Characteristics That Help Differentiate and Biotype Staphylococcus lugdunensis and
Staphylococcus schleiferi. J. Clin. Microbiol., 1990, 28:2425-2431.
17. Wilkerson M., McAllister S., Miller M., Heiter B.J., Bourbeau P.P. Comparison of Five Agglutination Tests for Identification of
Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1997, 35:148-151.
18. Van Griethuysen A., Bes M., Etienne J., Zbinden R., Kluytmans J. International Multicenter Evaluation of Latex Agglutination
tests for Identification of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 2001, 39:86-89.
19. Andriesse G.I., Elberts S., Vrolijk A., Verhulst C., Kluytmans J.A.J.W. Evaluation of a fourth-generation latex agglutination
test for the identification of Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 2011, 30:259–264.
20. Idelevitch E.A., Walther T., Molinaro S., Li X., Xia G., Wieser A., Peters G., Peschel A., Becker K. Bacteriophage-Based
Latex Agglutination Test for Rapid Identification of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 2014, 52:3394-3398.
21. Carricajo A., Treny A., Fonsale N., Bes M., Reverdy M.E., Gille Y., Aubert G., Freydiere A.M. Performance of the
Chromogenic Medium CHROMagar Staph Aureus and the Staphychrom Coagulase Test in the Detection and Identification
of Staphylococcus aureus in Clinical Specimens. J. Clin. Microbiol., 2001, 39:2581–2583
22. Poutrel B., Mendolia C., Sutra I., Fournier J.M. Reactivity of Coagulase-Negative Staphylococci Isolated from Cow and Goat
Milk with Monoclonal Antibodies to Staphylococcus aureus Capsular Polysaccharide Types 5 and 8. J. Clin. Microbiol.,
1990, 28:358-360.
23. Blake J.E., Metcalfe MA. A Shared Noncapsular Antigen Is Responsible for False-Positive Reactions by Staphylococcus
epidermidis in Commercial Agglutination Tests for Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 2001, 39:544-550.
24. Hollyday M.G., Ford M., Perry J.D., Gould F.K. Rapid Identification of Staphylococcus aureus by Using Fluorescent
Staphylocoagulase Assays. J. Clin. Microbiol., 1999, 37:1190-1192.
25. Tveten Y. Evaluation of New Agglutination Test for Identification of Oxacillin-Susceptible and Oxacillin-Resistant
Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1995, 33:1333-1334.
26. Gregson D.B., Low D.E., Skulnick M., Simor A.E. Problems with Rapid Agglutination Methods for Identification of
Staphylococcus aureus When Staphylococcus saprophyticus Is Being Tested. J. Clin. Microbiol., 1988, 26:1398-1399.
27. Kronvall G. A Surface Component in Group A, C, and G Streptococci with Non-Immune Reactivity for Immunoglobulin G. J.
Immunology., 1973, 11:1401-1406.
28. Becker K., Almasri A.S., von Eiff C., Peters G., Heilmann C. Fegeler W. Systematic Survey of Nonspecific Agglutination by
Candida spp. in Latex Assays. J. Clin. Microbiol., 2007, 45:1315-1318.
29. Goncalves Rodrigues A., Pina-Vas C., Costa-de-Oliveira S., Tavares C. Expression of Plasma Coagulase among
Pathogenic Candida Species. J. Clin. Microbiol., 2003, 41:5792-5793.
30. Compernolle V., Verschaegen G., Claeys G. Combined Use of Pastorex Staph-Plus and Either of Two New Chromogenic
Agars, MRSA ID and CHROMagar MRSA, for Detection of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol.,
2007, 45:154-158.
31. Davies S. Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus: the evaluation of rapid agglutination methods, Br.
J. Biomed. Sci., 1997, 54:13-15.
32. Neher C., Allerberger F., Prodinger W. Dierich M.P., Evaluation of commercially available agglutination tests for methicillin-
resistant. 8th ECCMID Congress, Lausanne, 1997.
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