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Iran J Parasitol: Vol. 14, n° 3, juil.-sept. 2019, pp.362-367

Iran J Parasitol
Université de médecine de Téhéran Revue en libre accès sur
Société iranienne de parasitologie
Publications scientifiques http://ijpa.tums.ac.ir
http://isp.tums.ac.ir
http://tums.ac.ir

Article original

Inhibiteurs colloïdaux de nanoargentToxoplasma gondiiTachyzoïtes et

Bradyzoïtes in Vitro
* Saeedeh SHOJAEE1, Nima FIROUZEH1, Hussein KECHAVARZ1,2, Sanaz JAFAR-
POUR AZAMI1, Mahboobeh SALIMI1, Mehdi MOHEBALI1,2

1. Département de parasitologie médicale et de mycologie, École de santé publique, Université des sciences médicales de Téhéran,
Téhéran, Iran
2. Centre de recherche sur les parasites endémiques d'Iran (CREPI), Université des sciences médicales de Téhéran, Téhéran, Iran

Reçu 18 avril 2018 Abstrait

Accepté 14 juil. 2018 Arrière-plan:Toxoplasma gondii, le parasite protozoaire coccidien de distribution
mondiale, est l'agent de la toxoplasmose. La maladie est mortelle sous forme
congénitale et chez les patients immunodéprimés. La présente étude a été réalisée en
Mots clés: 2016 pour évaluer les effets in vitro du nanocolloïde d'argent sur les tachyzoïtes et les
nanoargent; bradyzoïtes deT. gondii, RH et souches de Téhéran.
Microscopie électronique;
Méthodes :Différentes concentrations (5, 10, 20 ppm) de nanocolloïde d'argent ont été
Tachyzoïte ; ajoutées à des tachyzoïtes deT. gondii,souche RH (type I) et bradyzoïtes et kystes tissulaires

bradyzoïte ; deT. gondii,souche Tehran (type II) et incubés pendant 30, 60, 90 et 120 minutes. Les taux de

Toxoplasma gondii mortalité des tachyzoïtes et des bradyzoïtes ont été évalués par le colorant bleu trypan et le
test MTT. Puis SEM effectué pour montrer les changements entre le contrôle et les parasites
exposés.
*Correspondance Résultats:Le taux de mortalité le plus élevé a été observé à une concentration de 20 ppm et après 120

E-mail: minutes d'exposition. En microscopie électronique, les changements structurels ont été observés dans les

Shojaee1980@yahoo.com tachyzoïtes de RH et le kyste tissulaire de la souche de Téhéran en comparaison avec les groupes
témoins.
Conclusion:Le colloïde de nanoargent était efficace à la fois sur les tachyzoïtes et les
bradyzoïtes deT. gondii,Souches RH et Téhéran.

Introduction

J l'oxoplasmose est une maladie infectieuse

causée par le parasite protozoaire intracellulaire,
Toxoplasma gondii.Si une femme
est infecté pendant la grossesse, il pourrait être mortel
pour le fœtus en développement (1). Bien que des
recherches récentes montrent une possible relation

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 Shojaee et al. : Le nanoargent colloïde inhibe les tachyzoïtes de Toxoplasma gondii…
entreT. gondiiinfection et certains troubles tels que
l'anxiété et les troubles cognitifs, la schizophrénie,
l'hyperalgésie et la maladie d'Alzheimer chez l'homme
et dans des modèles expérimentaux, l'infection
réactivée pourrait être mortelle chez les personnes
immunodéprimées telles que les patients atteints du
SIDA et les candidats à la greffe (2-5).
Il y a trois stades infectieux dans le cycle de vie de
T. gondii, le tachyzoïte à division rapide, le kyste
tissulaire contenant des bradyzoïtes à croissance
lente et l'oocyste contenant des sporozoïtes (1). Le
traitement de routine de la toxoplasmose est
l'association de sulfadizine et de pyriméthamine. En
plus d'avoir des effets secondaires graves surtout
pendant la grossesse, ces médicaments sont
efficaces juste sur les tachyzoïtes (6). L'argent, le
métal aux effets antimicrobiens, antifongiques,
antiprotozoaires et antiviraux connus, pourrait être
utilisé comme agent antiseptique dans une variété
de matériaux (7). Pour l'effet antimicrobien, l'un des
nanomatériaux les plus largement utilisés est le
nanoargent qui est préparé en ajoutant Ag-No3
dans des stabilisants tels que le citrate de sodium
suivi de l'ajout d'agents réducteurs tels que le
brohydrate (8). Les effets inhibiteurs des
nanoparticules d'argent surLeishmaniela
prolifération des promastigotes avait été rapportée
plus tôt (9). Des effets antiprotozoaires de cette
nanoparticule avaient été montrés sur divers
parasites tels que :Giardia lamblia,Entamoeba
histolytica,Cryptosporidium parvum,Acanthamoeba
etT. gondiiaussi (10-13).
La présente étude a été réalisée pour évaluer les
effets du colloïde de nanoargent surT. gondii
tachyzoïtes de souche RH et bradyzoïtes et kystes
tissulaires de souche Téhéran.
Matériels et méthodes
Parasite
Cette étude a été réalisée en 2016. Brièvement, les
tachyzoïtes deT. gondii, la souche RH (type I) ont été
inoculées dans la cavité péritonéale de souris BALB/c
comme décrit précédemment (14). Après 3 jours
d'infection, les tachyzoïtes ont été récoltés de la cavité
péritonéale et lavés avec du phosphate-
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solution saline tamponnée (PBS, pH 7,2). Bradyzoïtes de
T. gondii, souche Tehran (type II) ont été inoculés dans
la cavité péritonéale de souris BALB/c. Après 2 mois
d'infection, les souris ont été sacrifiées et leurs
cerveaux ont été examinés pour la présence de kystes
tissulaires par microscopie optique. En utilisant du
percoll 45% (Sigma, USA), des kystes tissulaires ont été
isolés des tissus cérébraux. Certains des kystes
tissulaires sont restés intacts et les autres ont été
rompus pour libérer les bradyzoïtes.
Le comité d'éthique de l'Université des sciences
médicales de Téhéran a approuvé l'étude.
Nanoargent
Un colloïde de nanoargent commercial
(Nanocid, Iran) d'une taille de 70 nm a été utilisé.
Les concentrations de 5, 10, 20 ppm de
nanoargent commercial ont été préparées (15).
Effets létaux du colloïde de nanoargent sur T.
gondii
Tachyzoïtes et bradyzoïtes deT. gondiiSouches RH et
Téhéran (1×104) ont été exposés à ces concentrations
pendant 30, 60, 90 et 120 minutes à température
ambiante, respectivement. En même temps, des
tachyzoïtes et des bradyzoïtes de ces souches ont été
exposés avec du PBS (pH 7,2) comme groupe témoin.
Un colorant bleu trypan (Sigma, USA) et une
observation au microscope optique ont été effectués
pour estimer le nombre de parasites morts, puis les
taux de mortalité ont été calculés. Les kystes
tissulaires intacts de la souche Téhéran ont été
incubés avec les concentrations de nanoargent
mentionnées, teints avec du bleu trypan et examinés
au microscope optique. Les expériences ont été
réalisées en double.
Dosage MTT [bromure de 3-(4, 5-
diméthylthiazol-2-yl)-2, 5-diphényltétrazolium]
Le MTT a été réalisé pour estimer le taux de viabilité
des tachyzoïtes et bradyzoïtes deT. gondiisouches
basées sur le test de cytotoxicité. Brièvement, après
incubation de parasites avec différentes
concentrations (5, 10, 20 ppm) de colloïde de
nanoargent, 10 µl de MTT( Zistiede, Iran) ont été
ajouté et incubé pendant 4 heures à 37 -C,
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 Iran J Parasitol: Vol. 14, n° 3, juil.-sept. 2019, pp.362-367

puis 50 ul de solution de DMSO (diméthylsulfoxyde, dratées, colorées à l'or et examinées au

Merck, Allemagne) ont été ajoutés. La densité
optique a été déterminée à 630 nm par un lecteur
ELISA automatisé (BIOTEC, LX800, USA). Le taux de
viabilité a été estimé pour chaque échantillon selon
la formule : OD test - OD blank/Contrôle OD - Blanc
OD ×100. Ensuite, le taux de mortalité a été calculé.
Les expériences ont été réalisées en double.
Microscopie électronique à balayage (MEB)
Pour la microscopie électronique à balayage (MEB), la
suspension de tachyzoïtes avec une concentration de 20
ppm de colloïde de nanoargent a été incubée pendant 2
heures. Cette procédure a également été effectuée pour
les kystes tissulaires. Les échantillons ont été fixés dans
du glutaraldéhyde pendant 1 heure, colorés avec du
tétroxyde d'osmium (OSO4), déshydratés
microscope électronique à balayage (Ziess,
FOS-UT, Allemagne).
Résultats
Le nanocolloïde d'argent a été efficace à des
concentrations de 5, 10 et 20 ppm après 30, 60, 90 et
120 min d'exposition à la fois pour les tachyzoïtes et
les bradyzoïtes deT. gondii, RH et souches de Téhéran.
Le taux de mortalité le plus élevé a été observé à 20
ppm et après 120 minutes d'exposition. Les résultats
des tachyzoïtes exposés au nanoargent qui sont
colorés par le bleu trypan et comptés par microscopie
optique et les résultats du test MTT sont présentés à la
Fig.1 (a, b).

Fig. 1:Le taux de mortalité des tachyzoïtes deT. gondii, souche RH après 30, 60, 90 et 120 minutes d'exposition à 5,
10 et 20 ppm de colloïde de nanoargent en comparaison avec le groupe témoin, A) coloré au bleu trypan et
compté par microscopie optique, B) par dosage MTT

Les résultats des bradyzoïtes deT. gondii, la souche
de Téhéran qui a été exposée aux concentrations de
nanocolloïde d'argent, colorée au bleu trypan et
comptée par microcroscopie optique et les résultats
du test MTT ont été présentés à la Fig. 2 (a, b). Les
résultats du SEM ont montré des résultats normaux
forme de croissant avec des micropores évidents dans
les tachyzoïtes du groupe témoin (Fig. 3), alors que les
tachyzoïtes exposés au colloïde de nanoargent
présentaient des changements structurels, la forme de
croissant était endommagée et des fossettes étaient
visibles à la surface du parasite (Fig. 4).

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 Shojaee et al. : Le nanoargent colloïde inhibe les tachyzoïtes de Toxoplasma gondii…

Fig. 2 :Le taux de mortalité des bradyzoïtes deT. gondii, souche de Téhéran après 30, 60, 90 et 120 minutes
d'exposition à 5, 10 et 20 ppm de colloïde de nanoargent par rapport au groupe témoin, A) coloré au bleu trypan
et compté par microscopie optique, B) par dosage MTT

Fig. 4 :MEB de tachyzoïtes deT. gondii, souche RH

Fig. 3 :MEB de tachyzoïtes deT. gondii, souche RH
après 2 heures d'incubation avec 20 ppm de na-
dans le groupe témoin
colloïde sans argent

Le SEM du kyste tissulaire intact du groupe

témoin est illustré à la Fig. 5 et le kyste exposé au
nanoargent est illustré à la Fig. 6. Selon le SEM, la
forme du kyste tissulaire dans le groupe témoin
était normale et les bradyzoïtes étaient bien
organisés. Contrairement au groupe témoin, le
kyste exposé au nanoargent était endommagé avec
une surface irrégulière et les bradyzoïtes étaient
désorganisés.

Fig. 5 :MEB de kyste tissulaire deT. gondii, Téhéran

souche dans le groupe témoin

Disponible à:http://ijpa.tums.ac.ir 365

 Iran J Parasitol: Vol. 14, n° 3, juil.-sept. 2019, pp.362-367
Fig. 6 :MEB deT. gondii, souche de Téhéran après 2
heures d'incubation avec le colloïde de nanoargent
Discussion
La thérapie standard deT. gondiil'infection est
généralement efficace sur la forme active des
tachyzoïtes alors que le traitement est inefficace pour
la forme chronique de l'infection avec présence de
bradyzoïtes (16). L'activité biocide et la stabilité à haute
température des polymères antimicrobiens contenant
de l'argent ont attiré l'attention ces dernières années
et les recherches en nanotechnologie se sont
concentrées sur le diagnostic et le traitement des
maladies par ces polymères au cours de la dernière
décennie (17-18). Cho et al. ont étudié différents
mécanismes de destruction des bactéries par le
nanoargent ; la capacité de liaison forte avec des
composés soufrés et phosphorés, endommageant la
membrane cellulaire bactérienne, la pénétration de
bactéries, d'enzymes et d'ADN contenant du soufre et
du phosphore, endommageant et accumulant dans les
mitochondries et altération de la fonction
mitochondriale (19).
Les effets des nanoparticules ont été étudiés dans des
organismes tels que les protozoaires et les larves d'insectes.
L'argent, le métal connu, est largement utilisé en raison de
ses propriétés antimicrobiennes dans les produits de
consommation (8). Willcox et al. ont montré l'activité de
l'argent incorporé dans les lentilles de contact contre
Acanthamoeba(13). Saïd et al. utilisé des nanoparticules
d'argent, de chitosane et de curcumine comme anti-Giardia
agents dans le modèle expérimental de rat
366
(dix). Ils ont étudié que l'effet le plus élevé et la
guérison complète étaient obtenus par la
combinaison de ces trois nano-formes dans
lesquelles le parasite était éradiqué des selles et de
l'intestin. Saad et al. ont rapporté l'activité
antiparasitaire des nanoparticules d'oxyde d'argent
et de cuivre contreE. histolyticaetC.parvum(11). Ils
ont découvert qu'en augmentant les concentrations
de nanoparticules, le taux de mortalité des
parasites augmentait.
Dans la présente étude, les tachyzoïtes deT. gondii,
la souche RH et les bradyzoïtes de la souche Téhéran
ont été exposés à des concentrations de 5, 10 et 20
ppm de colloïde de nanoargent pendant 30, 60, 90 et
120 minutes. Même à une concentration de 5 ppm et
en 30 minutes d'exposition, le nanocolloïde d'argent
était efficace à la fois sur les tachyzoïtes et les
bradyzoïtes deT. gondii. En augmentant les
concentrations de nanoargent et les temps
d'incubation, les taux de mortalité des tachyzoïtes et
des bradyzoïtes ont augmenté, alors que les meilleurs
résultats ont été obtenus à une concentration de 20
ppm et après 120 min d'exposition. Dans cette étude,
les kystes tissulaires intacts de la souche Téhéran (type
II) ont également été incubés avec du nanocolloïde
d'argent, puis teints avec du bleu trypan et examinés
au microscope optique. Les bradyzoïtes dans le kyste
tissulaire ont été teints progressivement et après 120
minutes, tous les organismes ont été teints en bleu, ce
qui indique la mort des bradyzoïtes.
Les résultats du SEM ont montré les changements
structurels évidents dans les tachyzoïtes des parasites
exposés au nanoargent par rapport au groupe témoin.
La forme en croissant des tachyzoïtes a changé en une
forme atypique avec de grandes fossettes et des
crêtes de surface. Le SEM du kyste tissulaire a montré
la forme ronde et bien organisée dans le groupe
témoin par rapport à une forme alvéolée et
endommagée dans le groupe exposé au nanoargent.
Conclusion
Le colloïde de nanoargent pourrait tuer les tachyzoïtes
et les bradyzoïtes deT. gondii. De plus, cette nanoparticule
a la capacité d'entrer et de tuer les organismes à
l'intérieur du kyste tissulaire. D'autres études
Disponible à:http://ijpa.tums.ac.ir
 Shojaee et al. : Le nanoargent colloïde inhibe les tachyzoïtes de Toxoplasma gondii…
pour les effets des nanoparticules d'argent surT. gondiien
culture cellulaire et des modèles expérimentaux sont
proposés.
Remerciements
Cette étude a été réalisée sous forme de thèse de maîtrise,
soutenue financièrement par l'Université des sciences médicales
de Téhéran.
Conflit d'intérêt
Il n'y a pas de conflit d'intérêts.
Les références
1. Dubey JP. Toxoplasmose animale et humaine. 2e
éd. Presse du CRC ; (2010).
2. Mahmoudvand H, Ziaali N, Aghaei I et al.
L'éventuelle association entreToxoplasma
gondiiinfection et risque d'anxiété et de
troubles cognitifs chez les souris BALB/c.
Pathog Glob Santé. 2015;109(8):369-76.
3. Selseleh M, Keshavarz H, Mohebali M et al. Production
et évaluation deToxoplasma gondiiGRA7
recombinant pour le sérodiagnostic des infections
humaines. Coréen J Parasitol. 2012;50(3):233-8.
4. Rostami A, Keshavarz H, Shojaee S et al. Fréquence de
Toxoplasma gondiichez des patients séropositifs
de l'ouest de l'Iran par ELISA et PCR.Iran J
Parasitol. 2014;9(4):474-81.
5. Mahmoudvand H, Ziaali N, Ghazvini H et al. Toxoplasma
gondiil'infection favorise la neuroinflammation à
travers les réseaux de cytokines et l'hyperalgésie
induite chez les souris BALB/c. Inflammation.
2016;39(1):405-412.
6. Mui EJ, Jacobus D, Milhous WK et al. La triazine
inhibeToxoplasma gondiitachyzoïtes in vitro et
in vivo. Agents antimicrobiens Chemother.
2005;49(8):3463-7.
7. Balazs DJ, Triandafillu K, Wood P et al. Inhibition de l'adhérence
bactérienne sur les tubes endotrachéaux en PVC par
décharge luminescente RF-oxygène, traitements à
l'hydroxyde de sodium et au nitrate d'argent.
Biomatériaux. 2004;25(11):2139-51.
8. Najafi-Taher R, Ghaemi B, Kharrazi S et al. Effets
antibactériens prometteurs de l'argent nano-
Disponible à:http://ijpa.tums.ac.ir
Nanoémulsion d'huile d'arbre à thé chargée de
particules : une combinaison synergique contre la
menace de résistance. AAPS PharmSciTech.
2018;19(3):1133-1140.
9. Allahverdiyev AM, Abamor ES, Bagirova M et al. Étude
des activités anti-leishmaniennes des
nanoparticules de Tio2@Ag sur les propriétés
biologiques deL. tropiqueetL. infanteparasites, in
vitro. Exp Parasitol. 2013;135(1):55-63.
10. Said DE, Elsamad LM, Gohar YM. Validité des
nanoparticules d'argent, de chitosane et de
curcumine comme agents anti-Giardia. Parasitol Res.
2012;111(2):545-54.
11. Saad HA, Soliman MI, Azzam AM, Mostafa B. Activité
antiparasitaire des nanoparticules d'oxyde d'argent et
de cuivre contreEntamoeba histolyticaet
Cryptosporidium parvumkystes. J Égypte Soc
Parasitol. 2015;45(3):593-602.
12. Willcox MDP, Hume EBH, Vijay AK, Petcavitch
R. Capacité des lentilles de contact imprégnées d'argent à
contrôler la croissance et la colonisation microbiennes. J
Optom. 2010 ; 3(3):143-148.
13. Gaafar MR, Mady RF, Diab RG, Shalaby TI.
Nanoparticules de chitosane et d'argent : Anti-
Toxoplasmeagents. Exp Parasitol. 2014;143:30-8.
14. Teimouri A, Azami SJ, Keshavarz H et al. Activité anti-
toxoplasmique de divers poids moléculaires et
concentrations de nanoparticules de chitosan sur
des tachyzoïtes de souche RH. Int J Nanomédecine.
2018;13:1341-1351.
15. Kheybari S, Samadi N, Hosseini SV, Fazeli A, Fazeli MR.
Synthèse et effets antimicrobiens de nanoparticules
d'argent produites par la méthode de réduction
chimique. Darou. 2010;18(3):168-72.
16. Azami SJ, Amani A, Keshavarz H et al. La nanoémulsion
d'atovaquone comme approche prometteuse pour
le traitement de la toxoplasmose aiguë et
chronique. Eur J Pharm Sci. 2018;117:138-146.
17. Kumar R, Münstedt H. Libération d'ions argent à partir de
composites antimicrobiens polyamide/argent.
Biomatériaux.Biomatériaux. 2005;26(14):2081-8.
18. Panyam J, Labhasetwar V. Nanoparticules biodégradables pour
l'administration de médicaments et de gènes aux cellules et
aux tissus. Adv Drug Deliv Rev. 2003;55(3):329-47.
19. Cho KH, Park JE, Osaka T, Park SG. L'étude de l'activité
antimicrobienne et des effets conservateurs de
l'ingrédient nanosilver.Electrochim Acta.2005 ;
51(50):956-960.
367