PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 10.0
COT dans l’eau pour usage pharmaceutique
Mode fragmentométrique (« single ion monitoring »,
SIM, ou « multiple ion monitoring », MIM). L’acquisition
du signal est restreinte à un (SIM) ou plusieurs (MIM) ions
caractéristiques de la ou des substances à analyser. Ce mode
permet de diminuer sensiblement le seuil de détection. Des
études quantitatives ou semi-quantitatives peuvent être
réalisées au moyen de standards internes ou externes (étalons
deutériés, etc.). De telles analyses ne peuvent être réalisées
avec des analyseurs à temps de vol.
Mode fragmentométrique en double spectrométrie de
masse (« multiple reaction monitoring », MRM). Il s’agit
dans ce cas de suivre spécifiquement la décomposition
unimoléculaire ou bimoléculaire d’un ion précurseur choisi,
caractéristique de la substance à analyser. La sélectivité et
le caractère hautement spécifique de ce mode d’acquisition
permettent d’atteindre d’excellents niveaux de sensibilité et en
font la technique la mieux adaptée aux études quantitatives
par l’intermédiaire de standards internes appropriés (étalons
deutériés, etc.). Ce type d’analyse n’est réalisable qu’à l’aide
d’appareils équipés de trois quadrupôles en série, d’analyseurs
à piège d’ions ou à résonance cyclotronique.
ÉTALONNAGE
L’étalonnage permet d’attribuer au signal détecté la valeur
du rapport m/z correspondante. En règle générale, il se fait
à l’aide d’un produit de référence. Cet étalonnage peut être
externe (fichier d’acquisition distinct de l’analyse) ou interne
(le ou les produits de référence sont mélangés au composé à
analyser et apparaissent sur le même fichier d’acquisition).
Le nombre d’ions ou de points nécessaires pour obtenir un
étalonnage fiable dépend du type d’analyseur et de la précision
de la mesure que l’on veut obtenir : par exemple, dans le cas
d’un analyseur magnétique, où le rapport m/z varie de façon
exponentielle avec la valeur du champ magnétique, il convient
d’avoir le plus de points possible.
DÉTECTION DU SIGNAL ET TRAITEMENT DES
DONNÉES
Les ions séparés par l’analyseur, sont convertis par un
système de détection tel qu’un photomultiplicateur ou
un multiplicateur d’électrons, en signaux électriques, qui
sont amplifiés avant d’être à nouveau convertis en signaux
numériques, permettant le traitement informatique des
données incluant des fonctions aussi diverses que l’étalonnage,
la reconstruction des spectres, la quantification automatique,
l’archivage, la création ou l’utilisation de banques de données
spectrales. Les différents paramètres physiques nécessaires
au fonctionnement de l’ensemble de l’appareil sont gérés par
ordinateur.
01/2008:20244
corrigé 10.0
2.2.44. CARBONE ORGANIQUE
TOTAL DANS L’EAU POUR USAGE
PHARMACEUTIQUE
Le dosage du carbone organique total (COT) est une méthode
de mesure indirecte des substances organiques présentes
dans l’eau pour usage pharmaceutique. Cette méthode peut
également servir à contrôler le déroulement de diverses
opérations intervenant dans la préparation des médicaments.
Il existe plusieurs méthodes acceptables pour la détermination
du COT. Plutôt que de prescrire une méthode particulière, le
présent chapitre général décrit les procédures à suivre pour
qualifier la méthode choisie et interpréter les résultats dans
le cadre d’un essai limite. Une solution étalon est analysée à
intervalles réguliers, déterminés en fonction de la fréquence
des mesures. Cette solution est préparée avec une substance
Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes
2.2.44.
présumée facilement oxydable (par exemple, le saccharose),
à concentration telle que la réponse instrumentale obtenue
corresponde à la limite de teneur en COT fixée. La conformité
du système est vérifiée au moyen d’une solution préparée avec
une substance présumée difficilement oxydable (par exemple
la 1,4-benzoquinone).
Tous les types d’appareils utilisés pour mesurer le COT
contenu dans l’eau pour usage pharmaceutique reposent sur le
même principe : oxydation complète en dioxyde de carbone
des molécules organiques contenues dans l’échantillon d’eau,
puis analyse quantitative du dioxyde de carbone produit et,
à partir de la valeur obtenue, détermination par le calcul de
la teneur en carbone de l’eau.
L’appareil utilisé doit permettre de différencier le carbone
organique du carbone inorganique, présent sous forme de
carbonate. Deux approches sont possibles : soit mesurer
le carbone inorganique et déduire le résultat de la teneur
en carbone total, soit éliminer de l’échantillon le carbone
inorganique présent avant de procéder à l’oxydation.
Certaines molécules organiques peuvent également être
entraînées au cours de cette opération, mais l’eau pour usage
pharmaceutique ne contient que des quantités négligeables de
carbone organique susceptible d’être ainsi co-éliminé.
Appareillage. Utilisez un appareil étalonné, installé en ligne
ou hors ligne. A intervalles de temps appropriés, vérifiez la
conformité du système comme décrit ci-après. La limite de
détection de l’appareil, spécifiée par le fabricant, doit être
inférieure ou égale à 0,05 mg de carbone par litre.
Eau COT. Utilisez de l’eau hautement purifiée satisfaisant aux
spécifications suivantes :
– conductivité : inférieure ou égale à 1,0 μS·cm− 1 à 25 °C,
– carbone organique total : teneur inférieure ou égale à
0,1 mg/L.
Selon le type d’appareil utilisé, les teneurs en métaux lourds et
en cuivre peuvent être des facteurs critiques. Il convient de se
conformer aux instructions du fabricant.
Préparation de la verrerie. Nettoyez soigneusement la
verrerie par une méthode permettant d’éliminer les matières
organiques. Utilisez de l’eau COT pour la phase finale de
rinçage.
Solution étalon. Dissolvez du saccharose R, préalablement
séché à 105 °C pendant 3 h, dans de l’eau COT de façon à
obtenir une solution à 1,19 mg de saccharose par litre (0,50 mg
de carbone par litre).
Solution à examiner. Recueillez l’eau à examiner dans un
récipient étanche, en prenant toutes les précautions requises
pour éviter une contamination et en laissant un espace de tête
aussi réduit que possible. Procédez à l’analyse dès que possible
afin de réduire les risques de contamination par le récipient
et le dispositif de fermeture.
Solution de conformité du système. Dissolvez de la
1,4-benzoquinone R dans de l’eau COT de façon à obtenir une
solution à 0,75 mg de 1,4-benzoquinone par litre (0,50 mg de
carbone par litre).
Témoin eau COT. Utilisez de l’eau COT préparée en même
temps que celle employée pour préparer la solution étalon et
la solution de conformité du système.
Solutions témoins. En plus du témoin eau COT, préparez
des solutions à blanc appropriées ou toutes autres solutions
requises pour établir la ligne de base ou procéder à l’étalonnage
suivant les instructions du fabricant. Utilisez les blancs
appropriés pour régler le zéro de l’appareil.
Conformité du système. Examinez les solutions suivantes et
notez les réponses respectivement obtenues : eau COT (rw),
solution étalon (rs), solution de conformité du système (rss).
Calculez l’efficacité du système en pourcentage, à l’aide de
l’expression :
rss - rw
´ 100
rs - rw
87
2.2.45. Chromatographie en phase supercritique PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 10.0

Le système n’est conforme que si la valeur obtenue n’est pas Phases mobiles
inférieure à 85 pour cent ni supérieure à 115 pour cent de la
valeur théorique. La phase mobile est généralement constituée de dioxyde de
carbone, éventuellement additionné d’un modifiant polaire
Mode opératoire. Mesurez la réponse (ru) du système pour la tel que le méthanol, le 2-propanol ou l’acétonitrile. La
solution à examiner. La solution à examiner satisfait à l’essai si composition, la pression (densité), la température et le débit
ru n’est pas supérieur à rs – rw. de la phase mobile indiquée peuvent être maintenus constants
La mesure peut également être réalisée avec un appareil pendant toute la durée de l’analyse chromatographique
installé en ligne, convenablement étalonné et satisfaisant à (élution isocratique, isobare, isotherme), ou varier selon
l’essai de conformité du système. L’emplacement de l’appareil un programme défini (gradient d’élution du modifiant, de
doit être choisi de telle sorte que les résultats obtenus soient pression (densité), de température ou de débit).
représentatifs de l’eau utilisée. Détecteurs
Les détecteurs les plus utilisés sont les spectrophotomètres
dans l’ultraviolet/visible (UV/Vis) et les détecteurs à ionisation
de flamme. La détection peut également reposer sur la
dispersion de la lumière, la spectrophotométrie d’absorption
01/2008:20245 infrarouge, la conductivité thermique ou d’autres méthodes
particulières.

MODE OPÉRATOIRE

2.2.45. CHROMATOGRAPHIE EN Préparez la (les) solution(s) à examiner et la (les) solution(s)

témoin(s) prescrites. Les solutions doivent être exemptes de
PHASE SUPERCRITIQUE particules solides.

La chromatographie en phase supercritique (CPS) est une
technique de séparation chromatographique où la phase
mobile est un fluide porté à l’état supercritique ou subcritique.
La phase stationnaire, contenue dans une colonne, peut être
constituée de particules solides de granulométrie fine (silice ou
graphite poreux par exemple), ou être chimiquement modifiée
comme les phases utilisées en chromatographie liquide, ou,
pour les colonnes capillaires, être constituée d’un film liquide
réticulé recouvrant uniformément les parois de la colonne.
La CPS est fondée sur des mécanismes d’adsorption ou de
distribution de masse.
Des critères de conformité du système sont décrits dans le
chapitre Techniques de séparation chromatographique (2.2.46).
Les limites dans lesquelles il est possible de faire varier
les différents paramètres, pour satisfaire aux critères de
conformité du système, sont également indiquées dans ce
chapitre.
07/2016:20246

APPAREILLAGE
L’appareillage se compose généralement d’un système
de pompage réfrigéré, d’un injecteur, d’une colonne
chromatographique placée dans un four, d’un détecteur,
d’un régulateur de pression et d’un système d’acquisition des
données (ou d’un intégrateur ou enregistreur).
Systèmes de pompage
Les systèmes de pompage doivent fournir la phase mobile à
un débit constant. Il convient de limiter autant que possible
les fluctuations de pression, par exemple en faisant passer le
solvant sous pression à travers un dispositif amortissant les
pulsations. Les tubes et raccords doivent pouvoir résister aux
pressions développées par la pompe.
Les systèmes pilotés par microprocesseur sont capables de
délivrer avec précision une phase mobile dans des conditions
constantes ou variables, selon un programme défini. Pour les
chromatographies à gradient d’élution, il existe des systèmes
de pompage qui délivrent le(s) solvant(s) à partir de plusieurs
réservoirs, le mélange pouvant être effectué soit en amont
(basse-pression) soit en aval (haute-pression) de la (des)
pompe(s).
Injecteurs
L’injection peut être effectuée directement en tête de colonne
au moyen d’une vanne.
Phases stationnaires
Les phases stationnaires sont contenues dans des colonnes
de même type que celles décrites dans les chapitres
Chromatographie liquide (2.2.29) (colonnes remplies)
et Chromatographie en phase gazeuse (2.2.28) (colonnes
capillaires). Une colonne capillaire a un diamètre intérieur (Ø)
maximal de 100 μm.
2.2.46. TECHNIQUES DE SÉPARATION
CHROMATOGRAPHIQUE
Les techniques de séparation chromatographique sont
des méthodes de séparation séquentielle reposant sur la
distribution des composants de l’échantillon entre 2 phases,
l’une stationnaire et l’autre mobile. La phase stationnaire peut
être un solide ou un liquide déposé sur un support solide ou un
gel. Elle peut être contenue dans une colonne, étalée en couche,
déposée sous forme de film, etc. La phase mobile peut être
gazeuse ou liquide ou en phase supercritique. La séparation
peut reposer sur des phénomènes tels que l’adsorption, la
distribution de masse (partage), l’échange d’ions, etc., ou sur
des différences de propriétés physicochimiques moléculaires
telles que la taille, la masse, le volume, etc.
Le présent chapitre contient des définitions et des méthodes
de calcul des paramètres communs à ces techniques, ainsi que
des exigences d’application générale pour la conformité des
systèmes chromatographiques. Les principes de séparation,
appareillages et modes opératoires sont décrits dans les
méthodes générales suivantes :
– chromatographie sur papier (2.2.26),
– chromatographie sur couche mince (2.2.27),
– chromatographie en phase gazeuse (2.2.28),
– chromatographie liquide (2.2.29),
– chromatographie d’exclusion (2.2.30),
– chromatographie en phase supercritique (2.2.45).

88 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)