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RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Acide organique

Mthode OIV-MA-AS313-16

Mthode Type IV

Dosage des acides organiques et anions mineraux dans


les vins par chromatographie ionique
(Rsolution Oeno 23/2004)
Prambule
Le dveloppement de la chromatographie ionique haute performance dans les
laboratoires a permis dtudier le dosage par cette technique des acides
organiques et anions minraux dans les boissons alcoolises ou non.
Sagissant particulirement de lanalyse des vins, les rsultats des essais
dintercomparaison et les mesures des taux de recouvrement ont permis de
valider une mthodologie analytique.
Lintrt majeur de cette mthode tient au fait que les colonnes changeuses
dions permettent une sparation de la plupart des acides organiques et anions et
la dtection par conductimtrie affranchit lanalyste des interfrences dues la
prsence de composs phnoliques. Or, ce type dinterfrences est trs notable
dans les mthodes chromatographiques qui comportent une dtection dans
lultra-violet 210 nm.
1 - OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION
La mthode de dosage des anions minraux et acides organiques par
chromatographie ionique est applicable aux boissons alcoolises (vins, eaux-devie et liqueurs). Elle permet de doser les acides organiques dans les domaines de
concentration, rapports dans le tableau 1; ces concentrations sont obtenues par
dilution des chantillons.
Tableau 1 : Domaine de concentration des anions pour leur analyse
par chromatographie ionique
Sulfate
Ortho-phosphate
Acide malique
Acide tartrique
Acide citrique
Acide isocitrique

0,1 10
0,2 10
1 20
1 20
1 20
0,5 5

mg/l
mg/l
mg/l
mg/l
mg/l
mg/l

Les gammes de travail mentionnes ci-dessus sont donnes titre indicatif.


Elles englobent les modes d'talonnage couramment pratiqus et sont donc
modulables en fonction du type d'appareillage utilis (nature de la colonne,
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sensibilit du dtecteur, ...) et du mode opratoire (volume d'chantillon inject,


dilution, ...).
2- PRINCIPE
Sparation des anions minraux et acides organiques sur une rsine changeuse
d'ions.
Dtection par conductimtrie.
Identification d'aprs le temps de rtention et quantification au moyen d'une
courbe d'talonnage.
3 - REACTIFS
Tous les ractifs utiliss lors de l'analyse doivent tre de qualit analytique.
L'eau servant la prparation des solutions doit tre de l'eau distille ou
dsionise d'une conductivit infrieure 0,06 S, exempte des anions doss
des seuils compatibles avec les limites de dtection que permet d'atteindre
l'appareillage utilis.
3.1 Eluant
La composition de l'luant dpend de la nature de la colonne de sparation et de
la nature de l'chantillon analyser. Elle est cependant toujours prpare partir
de solutions aqueuses dhydroxyde de sodium.
Les performances de l'analyse chromatographique sont altres par
carbonatation de la solution dhydroxyde de sodium; en consquence, les
flacons de phase mobile sont balays l'hlium avant adjonction dhydroxyde
de sodium et il faut prendre toutes les prcautions afin d'viter de les contaminer
par l'air ambiant.
Enfin, ce sont des solutions dhydroxyde de sodium concentres commerciales
qui seront utilises.
Remarque
Le tableau du chapitre 7 rappelle les principaux interfrents susceptibles d'tre
prsents dans les chantillons.
Il est donc ncessaire de savoir au pralable s'ils coluent avec les ions doser
et s'ils sont prsents une concentration telle que l'analyse est perturbe.
Les boissons fermentes contiennent de l'acide succinique qui peut interfrer
avec l'acide malique. A cet effet, il est ncessaire d'ajouter du mthanol dans
l'luant pour amliorer la rsolution de la colonne au niveau de ces deux
substances (20 % de mthanol).

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3.2 Solutions mres talons


Prparer des solutions mres talons de concentrations prcises voisines de
celles indiques sur le tableau suivant. Dissoudre dans l'eau, dans des fioles
jauges de 1000 ml, des quantits de sels ou d'acides correspondants. (Tableau
2)
Tableau 2 : Concentration des anions doss dans les solutions mres talons
Anions et
acides
Sulfate
Orthophosphate
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. citrique
Ac. isocitrique

Composs
pess
Na2SO4
KH2PO4
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. Citrique.H2O
Isocitrate 3Na.2H2O

Concentration
finale (mg/l)
500
700
1000
1000
1000
400

Quantit
pese (mg)
739,5
1003,1
1000,0
1000,0
1093,8
612,4

Remarque
Le laboratoire doit prendre les prcautions ncessaires au regard du caractre
hygroscopique de certains sels.
3.3 Solutions d'talonnage
Les solutions d'talonnage sont obtenues par dilution dans l'eau des solutions
mres de chaque ion ou acide.
Ces solutions doivent contenir l'ensemble des ions ou acides doss dans une
gamme de concentrations recouvrant ncessairement celle correspondant aux
chantillons analyser. Elles doivent tre prpares le jour de leur emploi.
Au moins deux solutions d'talonnage et un blanc doivent tre analyss de faon
tablir, par substance, des courbes d'talonnage l'aide de trois points (0,
demi-concentration maximale, concentration maximale).
Remarque
Le tableau 1 donne des indications sur les concentrations maximales en anions
et acides dans les solutions d'talonnage mais les performances des colonnes
chromatographiques sont meilleures avec des solutions trs dilues.
Il faut donc rechercher au mieux l'adquation entre les performances de la
colonne et le niveau de dilution des chantillons.

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En gnral, on est amen diluer l'chantillon entre 50 et 200 fois au maximum,


sauf cas particulier.
Pour amliorer la dure de vie des solutions filles, il est souhaitable de les
prparer en solution dans un mlange eau/ mthanol (80/20).
4 - APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et,
4.1 Ensemble instrumental pour la chromatographie ionique
comprenant:
4.1.1 Rservoir(s) d'luant(s)
4.1.2 Pompe dbit constant, sans effet de pulsation
4.1.3 Dispositif d'injection, soit manuel, soit automatique, constitu
d'une vanne boucle d'chantillonnage (par exemple 25 ou 50 l).
4.1.4 Colonnes de sparation
Ensemble constitu d'une colonne changeuse d'anions, de performance
contrle, ventuellement d'une prcolonne de mme nature que la colonne
principale. A titre dexemple, il est possible dutiliser les colonnes AS11 et
prcolonne AG11 de DIONEX.
4.1.5 Systme de dtection
Cellule de conductivit circulation, de trs faible volume, relie un
conductimtre comportant plusieurs gammes de sensibilit.
Afin d'abaisser la conductivit de l'luant, un dispositif de suppression
chimique, changeur de cations est install en amont de la cellule de
conductivit.
4.1.6 Enregistreur, intgrateur ou autre dispositif de traitement des
signaux.
4.2 Balance sensible au 1 mg
4.3 Fioles jauges de 10 1000 ml
4.4 Pipettes calibres de 1 50 ml
4.5 Membranes filtrantes de diamtre moyen de pore de 0,45 m.
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5 - ECHANTILLONNAGE
Les chantillons sont dilus en tenant compte des anions minraux et des acides
organiques que l'on souhaite doser.
Si leur concentration est trs variable dans l'chantillon, deux niveaux de
dilution seront ncessaires afin de respecter les domaines de concentration
couverts par les solutions d'talonnage.
6 - MODE OPERATOIRE
Mettre en marche l'appareillage en suivant les instructions du constructeur.
Rgler les conditions de pompage (flux d'luant) et de dtection de manire
obtenir une sparations slective des pics dans la gamme de concentrations des
ions analyser.
Laisser le systme s'quilibrer jusqu' obtention d'une ligne de base stable.
6.1 Etalonnage
Prparer les solutions d'talonnage comme indiqu en 3.3.
Injecter les solutions d'talonnage de faon ce que le volume inject soit au
moins de 5 fois celui de la boucle d'chantillonnage pour permettre le rinage
du systme.
Tracer les courbes d'talonnage pour chaque ion. Celles-ci doivent tre
normalement des droites.
6.2 Essai blanc
Injecter l'eau utilise dans la prparation des solutions d'talonnage et des
chantillons.
Contrler l'absence de pics parasites et quantifier les anions minraux prsents
(chlorure, sulfate..).
6.3 Analyse
Diluer l'chantillon ventuellement deux niveaux diffrents comme indiqu en
5, de sorte que les anions et acides doser soient prsents dans la gamme des
concentrations des solutions d'talonnage.
Filtrer l'chantillon dilu sur une membrane filtrante (4.5) avant injection.
Procder ensuite comme pour l'talonnage (6.1).
7 - REPETABILITE, REPRODUCTIBILITE
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Cette mthode a t teste par un circuit interlaboratoire mais il ne s'agit pas


d'une validation formelle selon le protocole OIV (Oeno 6/99).
La limite de rptabilit et la limite de reproductibilit du dosage de chaque ion
dans les
vins ont t calcules selon la norme ISO 5725.
Chaque analyse a t rpte 3 fois.
Nombre de laboratoires participants: 11; Les rsultats sont les suivants:

Vin blanc

Acide malique
Acide citrique
Acide tartrique
Sulfate
O.phosphate

Nb labos
retenus

Moyenne
(mg/l)

11/11
9/11
10/11
10/11
9/11

2745
124
2001
253
57

Nb labos
retenus

Moyenne
(mg/l)

Rptabilit
(mg/l)

Reproductibilit
(mg/l)

110
13
96
15
5

559
37
527
43
18

Vin rouge

Acide malique
Acide citrique
Acide tartrique
Sulfate
O.phosphate

8/11
8/10
9/11
10/11
10/11

128
117
2154
324
269

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Rptabilit
(mg/l)
16
8
48
17
38

Reproductibilit
(mg/l)
99
44
393
85
46

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8 - CALCUL DES TAUX DE RECOUVREMENT


Lchantillon supplment est un vin blanc
Dtermination Nb labos Concentration
retenus initiale
(mg/l)

Ajout
rel
(mg/l)

Ajout
mesur
(mg/l)

Ac. citrique
Ac. malique
Ac. tartrique

25,8
600
401

24,2
577
366

11/11
11/11
11/11

122
2746
2018

Taux de
rcupration
(%)

93,8
96,2
91,3

9 - RISQUES DINTERFERENCES
Toute substance dont le temps de rtention concide avec celui de l'un des ions
analyss peut constituer une interfrence.
Les interfrences les plus courantes sont les suivantes:
Anions ou
acides
Nitrate
Sulfate
Orthophosphate
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. citrique
Ac. isocitrique

Interfrents
bromure
oxalate, malate
phtalate
Ac. succinique, Ac. citramalique
Ac. malonique
-

Remarque
Lajout de mthanol dans la phase mobile peut rsoudre certains problmes
analytiques.
Par exemple:
- La prsence de mthanol dans la phase mobile n'est pas toujours requise;
cependant elle est indispensable pour obtenir une rsolution convenable entre
acide succinique et acide malique lors de l'analyse des vins.

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- Les ions oxalates et sulfates coluent avec la plupart des conditions


chromatographiques; il faut 13% de mthanol dans la phase mobile pour les
sparer.
- La rsolution des pics correspondant aux acides actique et lactique est
satisfaisante si l'on ralise un gradient d'lution en hydroxyde de sodium, sans
mthanol.
10 - EXEMPLES DE CHROMATOGRAMMES
Annexe (a)

Chromatogramme d'une solution d'talonnage d'acides organiques et d'anions


minraux: Chlorure (1,96 mg/l), Nitrate (2,21 mg/l), Acide malique (5,35 mg/l), Acide
tartrique (5,08 mg/l), Sulfate (2,8 mg/l), O.phosphate (3,9 mg/l), Acide citrique (3,24
mg/l), Acide isocitrique (1,6 mg/l).

Appareillage utilis de marque DIONEX: Pompe, Dtecteur PED, suppresseur


AMMSII avec AUTOREGEN, colonne AS11 et prcolonne AG11.
Dbit 2ml/mn Phase mobile 1: Eau-NaOH 0,5mM/l, mthanol (80/20)
Phase mobile 2: Eau-NaOH 100mM/l, mthanol (80/20)
Gradient d'lution: 100% Phase mobile 1 65% phase mobile 1 en 25 mn.
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Annexe (b)

Chromatogramme d'un vin ros dilu 200 fois:


Appareillage utilis de marque DIONEX: Pompe, Dtecteur PED, suppresseur
AMMSII avec AUTOREGEN, colonne AS11 et prcolonne AG11.
Dbit 2ml/mn Phase mobile 1: Eau-NaOH 0,5mM/l, mthanol (80/20)
Phase mobile 2: Eau-NaOH 100mM/l, mthanol (80/20)
Gradient d'lution: 100% Phase mobile 1 65% phase mobile 1 en 25 mn.

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