RECUEIL INTERNATIONAL DES METHODES D’ANALYSES – OIV

Acides organiques – Méthode générale par HPLC

Méthode OIV-MA-AS313-04 Méthode Type IV

Acides organiques

Les acides organiques du vin peuvent être séparés et éventuellement dosés

simultanément par chromatographie liquide haute performance (CLHP).

1. Principe de la méthode
Les acides organiques du vin peuvent être séparés sur deux types de phase
stationnaire : silice greffée octyl et résine échangeuse d’ions. Les acides sont
détectés par spectrophotométrie d’absorption dans l’ultraviolet.
Pour le dosage des acides tartrique et malique, il est préférable d’utiliser la
séparation sur silice greffée octyl et pour les acides citrique et lactique, la
séparation sur échangeur d’ions. Le dosage de ces acides est effectué par rapport à
un étalon externe analysé dans les mêmes conditions.
Cette méthode permet, en outre, une évaluation des teneurs en acides shikimique,
acétique, succinique et fumarique.
Remarque : D’autres types de colonnes peuvent également permettre une bonne
séparation. Les conditions opératoires et le mode opératoire décrits ci-dessous sont
donnés à titre d’exemple.
2. Appareillage
2.1. Dispositif de filtration sur membrane de cellulose
(diamètre des pores : 0,45 µm).
2.2. Cartouches garnies de silice greffée octadécyl (exemple : Sep Pak WATERS
ASS.).
2.3. Chromatographe en phase liquide haute performance équipé :
- d’un injecteur à boucle de 10 µl,
- d’un dispositif de thermostatisation,
- d’un détecteur, spectrophotomètre permettant les mesures d’absorbance à
210 nm,
- d’un enregistreur, éventuellement d’un intégrateur.
Conditions opératoires
2.3.1. Cas de la séparation des acides citrique, lactique et acétique :
- colonne garnie de résine échangeuse de cations forte (H+) (ex. : HPX-87 H
BIO-RAD, longueur 300 mm, diamètre interne 7,8 mm, particules de 9 µm),

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- phase mobile : solution d’acide sulfurique 0,0125 M,

- débit de la phase mobile : 0,6 ml/min.,
- température : 60-65 °C (selon le lot de résine).

2.3.2.Cas de la séparation des acides tartrique, malique, lactique, shikimique,

succinique et fumarique
- deux colonnes (250 mm de longueur et 4 mm de diamètre interne) placées en
série, garnies de silice greffée octyl, particules sphériques de 5 µm de
diamètre,
- phase mobile : solution titrant 70 g/l en dihydrogénophosphate de potassium,
14 g/l en sulfate d’ammonium et ajustée à pH 2,1 par addition d’acide
phosphorique,
- débit de la phase mobile : 0,8 ml/min.
- température : 20 °C.
3. Réactifs
3.1. Eau distillée ou de qualité CLHP
3.2. Méthanol distillé
3.3. Acide tartrique
3.4. Acide malique
3.5. Lactate de sodium
3.6. Acide shikimique
3.7. Acétate de sodium
3.8. Acide succinique
3.9. Acide citrique
3.10. Acide fumarique
3.11. Acide sulfurique (20 = 1.84 g/ml)
3.12. Solution d’acide sulfurique 0,0125 M
3.13. Dihydrogénophosphate de potassium, KH2 PO4
3.14. Sulfate d’ammonium (NH4) 2SO4
3.15. Acide orthophosphorique à 85% (20 = 1.71 g/ml)
3.16. Solution de référence composée de : acide tartrique (5 g/l), acide malique
(5 g/l), lactate de sodium (6,22 g/l), acide shikimique (0,05 g/l), acétate de
sodium (6,83 g/l), acide succinique (5 g/l), acide fumarique (0,01 g/l) et acide
citrique (5 g/l).

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4. Mode opératoire
4.1. Préparation de l’échantillon
Laver préalablement une cartouche par 10 ml de méthanol puis par 10 ml
d’eau.
Dégazer l’échantillon de vin ou de moût. Filtrer sur membrane (0,45 µm).
Prélever 8 ml d’échantillon filtré dans une seringue préalablement rincée avec
l’échantillon ; faire passer sur la cartouche. Éliminer les trois premiers ml et
recueillir les 5 ml suivants (éviter d’amener la cartouche à sec).
4.2. Chromatographie
Injecter dans le chromatographe successivement 10 µl de solution de référence
et 10 µl de l’échantillon préparé selon 4.1. Répéter trois fois ces injections dans
le même ordre.
Enregistrer le chromatogramme.
5. Calculs
5.1. Analyse qualitative
Déterminer les temps de rétention respectifs de chacun des composés élués.
Les acides organiques de la solution de référence sont séparés dans l’ordre
d’élution suivant :
- acides citrique, tartrique, malique, succinique + shikimique, lactique
fumarique, acétique dans la technique 2.3.2.
- acides tartrique, malique, shikimique, lactique, acétique, citrique, succinique
et fumarique dans la technique 2.3.2.
5.2. Analyse quantitative
Mesurer la surface de chacun des pics et déterminer la moyenne des trois
réponses pour la solution de référence et pour l’échantillon à analyser.
Déduire la concentration de l’échantillon en acides organiques.
6. Expression des résultats
Les concentrations sont exprimées :
- en grammes par litre avec une décimale pour les acides tartrique, malique,
lactique et succinique,
- en milligrammes par litre pour les acides citrique, acétique et fumarique.

BIBLIOGRAPHIE

TUSSEAU D. et BENOIT C., F.V. O.I.V., 1986, N°s 800 et 813 ; J. Chromatogr.,
1987, 395, 323-333.

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