T.A.S.S.

2BIOPHY 13/11/2014

Corrigé du DST 1
Techniques Spectrales et Séparatives
(1h00)

Documents non autorisés - Calculatrice autorisée

Justifier les calculs
Séparer calcul littéral et numérique

Questions de cours : (6 points)

1/ Rappeler les définitions de la transmittance T et de l'absorbance A en fonction des

puissances lumineuses incidentes P0 et transmise P. (1 point)
! !
T=! et A = - logT = log !!
!

2/ Pour effectuer des mesures dans l'UV-Visible, quel type de cuve doit-on utiliser ?
(0,5 point)

On doit utiliser des cuves quartz, car ce matériau n'absorbe pas dans l'UV-Visible.

3/ Pour compenser les pertes par diffusion dûes au solvant, que devez-vous effectuer en
pratique ? Même question pour compenser les pertes par absorption et par reflexion dûes au
matériau de la cuve utilisée. (2 points)

Pour compenser les pertes par diffusion, il faut effectuer un "blanc", c'est-à-dire mesurer
l'absorbance d'une cuve remplie du solvant seul, puis soustraire l'absorbance obtenue à celle
de la cuve remplie de l'échantillon dont on veut mesurer l'absorbance.
Pour compenser les pertes par absorption et par reflexion dûes au matériau de la cuve, il faut
faire ce que l'on appelle un "décalage des cuves", c'est-à-dire remplir de solvant, la cuve
utilisée pour effectuer le "blanc", puis faire de même avec la cuve utilisée pour faire la mesure
de l'absorbance de l'échantillon. La différence d'absorbance entre les 2 cuves devra être
soustraite de l'absorbance mesurée pour l'échantillon.

4/ Rappeler l'expression de la pression osmotique géométrique, c'est-à-dire l'expression de la

pression osmotique Π en fonction de g, le champ de pesanteur, h la hauteur de liquide, d la
densité de la solution et ρeau la masse volumique de l'eau. (1 point)

Π = h.d.g.ρeau

5/ Donner l'expression théorique de la pression osmotique en fonction de l'osmolalité d'une

solution. Simplifier cette expression dans le cas où le solvant utilisé est l'eau. (1,5 points)

Π = R.T.d.ξb = R.T.ξb car d = 1,00 dans le cas de l'eau.

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Exercice 1 : (3,5 points)

Voici 3 spectres (A, B et C) d'absorption UV-Visible de la 1,2,4,5-tétrazine dans trois milieux

différents.

Identifiez quel spectre est acquis, dans quel milieu et expliquez pourquoi : (1,5 + 2 points)

- Le spectre B correspond au spectre de la tétrazine dans l'eau ;

- Le spectre C correspond au spectre de la tétrazine dans l'hexane ;
- Le spectre A correspond au spectre de la tétrazine à l'état vapeur.

L'état dans lequel se trouve l'analyte lors de l'analyse UV-Visible affecte son spectre
d'absorption.
À l'état vapeur, les molécules sont très espacées et interagissent peu entre elles et avec le
milieu. Elles possèdent un grand nombre de degré de liberté menant à des transitions
spécifiques permettant de reconnaître la structure fine complexe des niveaux associés aux
divers états électroniques excités.
À l'état condensé, la liberté rotationnelle est atténuée. De plus, la solvatation et le type de
solvant peut restreindre le nombre de degré de liberté d'une molécule et élargies les énergies
des différents états vibrationnels.
Contrairement à l'hexane, l'eau est une molécule polaire induisant des liaisons H avec la
tétrazine, ce qui diminue le nombre de degrès de liberté de l'analyte ; Il en résute un
élargissement de la raie d'absorption.

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Exercice 2 : (5,5 points)

Structure du médicament anti-inflammatoire benzydamine et spectre UV-Vis dans un tampon

phosphate pH = 7,5 ; [Bz] = 1,00.10-4 mol.L-1 ; chemin optique b = 11 mm.

1/ Quelle est la longueur d’onde optimale λmax pour une analyse quantitative ? (0,5 point)

λmax = 306 nm.

2/ Calculez le coefficient d’absorption molaire ε de la benzydamine à λmax. (1 point)

D'après la loi de Beer-Lambert, A = ε(λ).b.[Bz]

! !,!"
⇒ ε(λ) = !. !"   =   !,!  !  !,!!.!"!!   = 5182 mol-1.L.cm-1

3/ Sachant que l’erreur sur la transmittance T est minimale entre 20% et 70%, calculez les
concentrations limites utiles pour une analyse quantitative à λmax. (2 points)

A = - logT
Donc pour Tmin = 0,20 ; Amax = 0,70 et pour Tmax = 0,70 ; Amin = 0,15.
En utilisant la loi de Beer-lambert : [Bz]max = 1,23.10-4 mol.L-1 et [Bz]min = 2,63.10-5 mol.L-1.

4/ Indépendamment de la question précédente, tracez de manière qualitative sur un même

graphique les courbes d’étalonnage A = f([Bz]) d’une analyse à λmax, à λ = 235 nm, à λ = 295
nm, à λ = 275 nm et à λ = 190 nm. Expliquer les différences de pente obtenue, par les
limitations à la linéarité de la loi de Beer-Lambert : (2 points)

Il existe plusieurs facteurs pouvant affecter la linéarité de la loi de Beer-Lambert :

a) Les déviations dans les coefficients d’absorption molaire aux concentrations molaires
élevées ( > 0,01 mol.L-1), en raison des interactions électrostatiques entre les molécules ;
b) Dispersion lumineuse par des particules ;

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c) Fluorescence / phosphorescence de l’échantillon ;

d) Participation à des équilibres chimiques qui sont fonction de la concentration ;
e) Rayonnement polychromatique ; les déviations peuvent être minimisées en utilisant une
partie relativement plate de la gamme d'absorption telle que le maximum de la bande
d'absorption.
Les facteurs qui jouent ici sont (a) et (e). Plus l’absorbance est grande, plus la sensibilité de
l’étalonnage est grande (grande pente). Cependant, si λ n’est pas un maximum ou un
minimum, la gamme linéaire est réduite dû surtout à (e) et aux limitations instrumentales.

Exercice 3 : (5 points)

On ajoute 13,5 grammes de NaCl, dans 1,5 litres d’eau.

Données : R = 82,1 atm.cm3.mol-1.K-1 ; M(NaCl) = 58,5 g.mol-1 ; ρeau = 1,00 kg.L-1.
1 atm = 1,013.105 Pa ; g = 9,81 m.s-2. d = 1,00.

1/ Calculer la concentration molaire C, ainsi que la molalité b de la solution préparée.

(2 points)
! !",!
On détermine la quantité de matière en NaCl : n = !!"#$   =   !",! = 0,23 mol.
!"#$
! !,!"
On détermine la concentration molaire C = !   =   !,!
= 0,15 mol.L-1 ;

! !,!"
On déterminer la molalité b = !   =   !"##  !  !",! = 0,155 mol.kg-1.
!"#$%&'

2/ Calculer l'osmolarité théorique ξc, ainsi que l'osmolalité théorique ξb de la solution

préparée. (1 point)

NaCl (s) → Na+(aq) + Cl-(aq)

D'où l'osmolarité ξc = N.C = 2 x 0,15 = 0,30 osmol.L-1 ;

D'où l'osmolalité ξb = N.b = 2 x 0,155 = 0,31 osmol.kg-1 ;

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3/ Quelle est la pression osmotique Π de cette solution à 0°C ? Exprimer le résultat en

atmosphères. En déduire la hauteur h de liquide. (2 points)

Π = R.T.ξc = 82,1 atm.cm3.mol-1.K-1 x 273 K x 0,30 mosmol.mL-1

= 82,1 x 273 x 0,30.10-3 atm

finalement, Π = 6,72 atm.

! !,!"  !  !,!"#.!"!
Π = h.d.g.ρeau ⇒ h = !.!.!   =   !  !  !,!"  !  !"""
= 69,4 m
!"#

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