SPECTROFOTOMETRIE

CONSIDÉRATIONS THÉORIQUES :

La spectrophotométrie UV-Vis permet l'étude de solutions par l’interaction de la

lumière avec la matière. La lumière utilisée se trouve dans les domaines spectraux ultraviolets
et visibles. Dans le spectre électromagnétique les 2 domaines se trouve dans l’intervalle de
longueur d’onde (λ) entre 200-400 nm pour UV et entre 400-750 nm pour le Vis (Figure 1). En
Vis seulement les substances colorées absorbent de la lumière (les couleurs sont la conséquence
de l’interaction de la lumière Vis avec la matière).

Le diagramme au-dessous montre un faisceau de lumière monochromatique d'intensité

I0 dirigé vers une solution. Quand la radiation traverse la solution, l’absorption surviennent et
la radiation quittant l'échantillon aura l'intensité I (I<I0).

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 La quantité de lumière pénétrant une solution peut être exprimée par 2 grandeurs
adimensionnelles: l’absorbance A et la transmittance T:
𝐼0 1 𝐼
𝐴 = log10 ;𝑇 = ; 𝑇(%) = ∗ 100
𝐼 𝐴 𝐼0
La loi de Beer-Lambert déclare que l'absorbance A d’une substance en solution est une
fonction linéaire de sa concentration.
𝐴 = 𝜀∗𝑐∗ 𝑙
où ε est le coefficient molaire d’absorption (exprimé en L/(mol cm)), l représente la longueur
du chemin optique de l'échantillon (exprimé en centimètre) et c est la concentration molaire de
la solution exprimée en mol/L.

Les couleurs:
La couleur des solutions est déterminée par l'absorbance et la transmittance de la
lumière visible. Par exemple, une solution bleue apparaît bleue parce qu'elle absorbe toutes les
couleurs sauf le bleu ou toutes les couleurs de lumière sauf le jaune sont transmises (bleu et
jaune sont des couleurs complémentaires). Deux couleurs sont complémentaires lorsqu'elles
donnent du blanc par addition. Ainsi, l'absorption d'une radiation traversant une solution
donnée dépend de sa longueur d'onde et aura la plus haute valeur pour la longueur d'onde
conforme à la couleur complémentaire de solution. Les couleurs complémentaires peuvent être
trouvées en utilisant la roue en couleur présentée dans la figure 3. Sur ce projet n'importe
quelles deux couleurs opposées sur la roue en couleur sont des couleurs complémentaires.

Figure 3.

Un spectrophotomètre est composé :

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  d’une source de lumière (S) avec un spectre d'émission continu
 d’un monochromateur : décompose la lumière blanche en fonction des longueurs des
ondes dans les radiations composantes et aide à sélectionner une seule longueur d’onde
 Cuve de mesure
 Détecteur : transforme l’intensité lumineuse en intensité électrique
 Enregistreur avec un affichage électronique, ordinateur
Source → Monochromateur → Cuve → Détecteur → Enregistreur

Un spectrophotomètre mesure la quantité de lumière qui absorbe une substance. Le

faisceau de lumière, constituée de paquets de photons dont la gamme de longueur d'onde varie
entre 185 à 800 nm (UV-Vis) est projetée sur la cuve contenant des molécules d'analyte
(molécules étudiées). Pour chaque longueur d'onde, le nombre de photons passant par la
substance à analyser est séparément enregistré. Le photon entre en collision avec les molécules
d'analyte, ainsi il y aura une bonne probabilité que le photon soit absorbé par la molécule
d’analyte. En conséquence les molécules d’analyte passent de l'état fondamental sans un état
excité (Figure 4). Le photon sera absorbe par la molécule d’analyte seulement si l’énergie du
photon incidente sera égal avec l’écart énergétique entre l’état fondamental et l’état excite: hν
= ΔE. Dans le spectre d'absorption (la quantité de photons absorbés en fonction de la longueur
d'onde des photons) apparaît ainsi une résonance située à la longueur d'onde du photon absorbé.
Les spectres d'absorption enregistrés dans l'ultraviolet et visible sont dus à des transitions entre
les niveaux des états électroniques de molécules d’analyte, appelé le spectre électronique. Les
spectres d'absorption enregistré dans l'infrarouge (>800 nm) sont dus à des transitions entre des
niveaux de vibration, de rotation ou de rotation - vibration des molécules.

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Figure 4: Gauche - le passage de la molécule d'analyte de l'état fondamental (n=0) à l'état excité (n=1) due a
l’absorption d’un photon d'énergie hν. Chaque niveau électronique a plusieurs niveaux de vibration et chaque
niveau de vibration a plusieurs niveaux de rotation. Droite – le spectre d’absorption qui montre la résonance
localisée à la longueur d'onde du photon absorbé.

OBJECTIF :

La détermination expérimentale de la concentration d'alcool d'une solution alcoolique en

utilisant la méthode spectrophotométrique.

MODE DE TRAVAIL :

Souvent, la police routière arrête les conducteurs soupçonnés de conduite sous

l’influence d’alcool. Bien que le sens olfactif puisse vérifier qu'ils ont consommé de l'alcool, il
ne peut pas déterminer avec précision l’alcoolémie. Pour démontre que les conducteur a
consomme d’alcool la police routière utilise un dispositif compris dans un flacon relié à un
petit spectrophotomètre, qui sépare la lumière en fonction de ses couleurs. Ainsi, en utilisant
ce dispositif on peut mesurer le niveau d'alcool dans l'air qu’on expire qui peut ensuite être
corrélée à la concentration d'alcool dans le sang. Cependant, comment un tel dispositif sensible
aux couleurs peut détecter l'alcool qui, comme nous le savons, est incolore ? Le flacon contient
une substance chimique ayant la couleur jaune appelé dichromate de potassium appelé
(K2Cr2O7). Lorsque cette substance réagit avec l'alcool dans l’air qu’on expire, un composé
appelé sulfate de chrome ayant la couleur bleu-vert (Cr2 (SO4)3) est formé lors de la réaction
ci-dessous:

2K2Cr2O7 + 8H2SO4 + 3CH3CH2OH = 2Cr2(SO4)3 + 2K2SO4 + 3CH3COOH + 11H2O

De cette façon, le flacon devient vert et la police peut prouver que le conducteur a
consomme d’alcool. En outre, cette couleur est analysée par spectrophotomètre relié au
dispositif, pour indiquer le niveau d'alcool dans l'air qu’on expire.
Évidemment pour déterminer aussi précisément le niveau d'alcoolémie est nécessaire
que le spectrophotomètre soit bien calibré. Dans la première phase nous allons déterminer la
longueur d’onde correspondant au maximum d’absorption. Une fois déterminée, nous allons
mesurer, à cette longueur d’onde, l’absorbance de plusieurs solutions ayant diffèrent
concentrations d’alcool. A la fin, nous allons tracer l'absorbance en fonction de la concentration

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d'alcool dans les solutions respectives. A partir du graphe d'étalonnage nous allons extraire la
concentration d’alcool inconnue d’une solution (soit plusieurs solutions).

Le protocole expérimental:
1. Remplissez une cuve avec l’eau distillé est mettez la dans l’appareil sur la position 1.
2. Remplissez une autre cuve avec solution alcoolique de c = 1,5 % est mettez la dans
l’appareil sur la position 2.
3. Fixez la longueur d’onde ( λ ) a 540 nm : appuyiez sur GOTO λ et avec les flashes ↑ et
↓ fixez la valeur, et puis appuyiez sur OK (symbole ⸺).
4. Attendez que l’absorbance este zero, si no appuyiez sur ZERO.
5. Poussez la cuve avec la solution alcoolique en face du faisceau lumineuse à l’aide de la
tige métallique.
6. Lissez la valeur de l'absorbance et introduisez-la dans le tableau ci-dessous.
7. Remettez la cuve avec l'eau distillée en face du faisceau lumineuse en tirent sur la tige
métallique.
8. Changez la valeur de la longueur d’onde a 550 nm – voir le pas 3.
9. Effectuez les pas 4, 5, 6 et 7.
10. Continuez avec les autres valeurs de la longueur d’onde.

Nr. Longueur L’absorbance (u.a.)

d’onde (λ)
1 540
2 550
3 560
4 570
5 580
6 590
7 600
8 610
9 620

11. Tracez le graphe absorbance en fonction de la longueur d’onde

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12. Identifiez la longueur d’onde qui correspond à l’absorbance maximale et fixer sa valeur
dans l’appareil – pas 3
13. Remplissez la cuve avec solution alcoolique de c = 0.5 % et mesurer l’absorbance en
respectant le pas 4, 5, 6 et 7.
14. Continuez avec les autres solutions
Nr. La L’absorbance (u.a.)
concentration
d’alcool (%)
1 0.50
2 0.75
3 1.00
4 1.25
5 1.50
6 1.75

6
 7 X1
8 X2

15. Tracez le graphe absorbance en fonction de la concentration (en Excel). Faites une
régression linéaire et affichez l’équation de la droite. Déterminez la concentration
inconnue des solutions.