Corrigé TD 4 / MSTEV

Exercice 01 : Electrophorèse
I. Les 5 protéines, dont les masses moléculaires et les points isoélectriques sont donnés ci-
dessous, sont séparées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS
(détergent anioniquefort (sodium dodecylsulfate (SDS). Donner l'ordre de leur
migration du sommet (le point de dépôt des échantillons) à la partie inférieure du gel.
a: alpha-Antitrypsine (PM: 45000),
b: Cytochrom c (PM: 13400),
c: Myoglobine (PM: 17000),
d: Albumine sérique (PM: 69000),
e: Transferrine (PM: 90000).

II. Deux électrodes de 5 cm2 de surface, distantes de 10cm, sont plongées dans une solution
aqueuse de NaCl (29,25 g/L, supposés complètement dissociés). La mobilité des ions Na+ est
de 5×10-8 SI (Système international), celle des ions Cl- est de 7×10-8 SI. On applique entre les
électrodes une tension continue de 5V.
a) Calculer l’intensité du champ électrique E
b) La force de frottement des ions Na+ et Cl-.
c) Et les vitesses de déplacement des ions Na+ et Cl-.
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Solution :
I. Sommet : e, d, a, c, b partie inférieure. La séparation est réalisée en fonction de la taille
des molécules (PM=Poids Moléculaire)
II.
a) Calcul de l’intensité de E (champ électrique)
E = V/d où :
V : tension électrique en Volt
d : distance en m
donc : E = 5 / 0.1 m = 50 V/m
b) La force de frottement des ions Na+ et Cl-.
f = q×E
Et sachant que q = z×e Où:
- +
 z est la charge de l'ion (par exemple; -1 pour Cl et +1 pour Na )
-19
 e est la charge élémentaire et vaut e = 1.6*10 C
donc ;
f Na+ = z×e×(E) = 1×1.6×10-19 × 50 = 8×10-18 V/m
f Cl- = z×e×(E) = -1×1.6×10-19 × 50 = -8×10-18 V/m
c) Les vitesses de déplacement des ions Na+ et Cl-.
𝒗 = µ .𝑬
Donc : v Na+ = 5×10-8 ×50 = 2.5×10-6 m/s
v Cl- = 7×10-8 ×50 = 3.5×10-6 m/s
Exercice 02 : Chromatographie
L’analyse HPLC (chromatographie liquide haute performance) a été effectuée pour un
mélange réactionnel. Les résultats du chromatogramme obtenu sont rassemblés dans le
tableau suivant :
tr (min) Largeur à mi-hauteur
(ω)
Toluène 1.83 0.08
Pic 1 2.62 0.20
Pic 2 3.03 0.25

a) Donner une formule permettant de calculer le facteur de résolution entre deux pics
chromatographiques et calculer le facteur R entre les pics 1 et 2.
b) A votre avis, les deux pics de ce chromatogramme sont-ils bien résolus ? Pourquoi ?
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Solution :
a) La formule ;

- Calcul du facteur de résolution R ;

b) Les deux pics de ce chromatogramme sont bien résolus car R >1,5 et donc plus la
résolution est grande, meilleure est la séparation.
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Exercice 03 : Chromatographie

On détermine les temps de rétention (tr) au cours d'une chromatographie sur Sephadex des
protéines suivantes dont on connaît la masse moléculaire (M) (Le débit de la colonne est de 5
ml / min) :

Proteines M tr (min)
Aldolase 145000 10.4
Lactate déshydrogénase 135000 11.4
Phosphatase alcaline 80000 18.4
Ovalbumine 45000 26.2
Lactoglobuline 37100 28.6
a) Calculer les volumes d'élution (Ve) correspondants. Tracer le graphique log de M en
fonction de Ve - Que remarquez-vous ?

b) Pour la glucokinase, tr = 21 min. Déterminer sa masse moléculaire à l'aide du graphique

précédent.
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Solution :
a) Cet exercice met en jeu une chromatographie d'exclusion (encore appelée : tamisage
moléculaire, gel filtration, perméation de gel). La connaissance du débit de la colonne
(5 ml / min) et des différents temps de rétention nous permet de calculer le volume
d'élution pour chaque composé (voir tableau), selon la relation :

Ve (volume d'élution) = d (débit) x tr (temps de rétention)

M log M tr (min) Ve (ml)
Aldolase 145000 5.16 10.4 52
Lactate déshydrogénase 135000 5.13 11.4 57
Phosphatase alcaline 80000 4.9 18.4 92
Ovalbumine 45000 4.65 26.2 131
Lactoglobuline 37100 4.57 28.6 143
La représentation graphique du log de la masse moléculaire (log M) qu'il faut calculer
préalablement (voir
tableau) en
fonction du volume
d'élution (Ve) nous
donne une droite :
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Que remarquons nous ????

Le fait de visualiser une droite signifie qu'aucune protéine n'est exclue du gel
b) La glucokinase, avec un temps de rétention de 21 min, est éluée à un volume d'élution de ;
5 x 21 = 105 ml. Il suffit de se reporter au graphe pour déterminer un log de M = 4,82
environ, soit une masse moléculaire de 66070 Da (ou 66070 g/mol ou 66,07 kDa), environ.
 Comment s’est faite la transformation :
log de M = 4,82 M= 104.82 M = 66070Da (Dalton)

Exercice 04 : Spectrophotométrie
Une solution aqueuse de permanganate de potassium (C = 1,28.10-4M) a une transmittance de
0,5 à 525 nm, si on utilise une cuve de 10 mm de parcours optique.
1) Calculer le coefficient d’absorption molaire du permanganate pour cette longueur d’onde.
2) Si on double la concentration, calculer l’absorbance et la transmittance de la nouvelle
solution. Quelle conclusion en tirez-vous ?
Solution :
1) Calcul du coefficient d’absorption
Il faut calculer d’abord l’absorbance ;

= log 1/0.5 = 0.3010

Puis le coefficient ;

Il faut transformer = 10mm en cm donc, = 1 cm

10-4) ε = 2351,56 mol-1.l.cm-1.

2) Calcul de l’absorbance et la transmittance

 L’absorbance ; A= 2351.56 * 1 *(2*1.28.10-4) A = 0,601
 La transmittance

A = log (1) – log (T)

A = -log (T) donc ; T =10-A et donc T = 0,25.
Conclusion :
Plus l'échantillon est concentré, plus il absorbe la lumière c.à.d ;
La première concentration C1 = 1,28.10-4M A = 0.30
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La deuxième concentration (C2 est le double de C1) A = 0.601