La chromatographie 

:
• Définition: La chromatographie
sous toutes ses formes, est une méthode de séparation
des constituants d’un mélange gazeux, liquide ou solide.
La chromatographie est une technique
de séparation des constituants d'un mélange basée sur les
interactions entre trois produits lors d'un processus
dynamique : le composant (produit contenu dans le
mélange), la phase mobile (le solvant) et la phase
stationnaire (cellulose, silice, alumine, etc...)
 • La chromatographie
d’exclusion :
• La chromatographie d'exclusion permet la séparation des
molécules à travers un gel poreux en fonction du poids
moléculaire de la protéine.
•En fonction de : - la
taille -la forme
-poids moléculaire
 le principe :
• la phase stationnaire (résine) consiste en un réseau de
polymères réticulé possédant des pores, fabriqué sous
forme de billes
• les pores dans les billes du gel sont suffisamment grands
afin de permettre la pénétration complète des petites
molécules, mais ils ne laissent pas pénétrer toutes les
protéines à partir d’une certaine taille
• les protéines qui ne pénètrent pas dans les pores
traversent la colonne plus rapidement que les protéines
retenues dans les pores des billes
 • La chromatographie
d’adsorption :

La chromatographie d’adsorption est basée sur le partage

des solutés entre l’adsorbant solide fixe et la phase mobile.
Chacun des solutés est soumis à une force de rétention par
adsorption et une force d’entraînement par la phase mobile.
L’équilibre qui en résulte aboutit à une migration
différentielle des solutés de l’échantillon à analyser, ce qui
permet leur séparation.
• L’adsorption est un phénomène de surface par lequel des molécules se
fixent sur la surface d’un adsorbant, selon divers processus plus ou moins
intenses. Le phénomène inverse, par lequel les molécules adsorbées sur
une surface s’en détachent se nomme la désorption.
• Les adsorbants (les phases stationnaires):
Ce sont des solides très divisés, ainsi, On
peut distinguer :
- Les adsorbants à faible capacité d’adsorption, comme le talc ou le
carbonate de sodium.
- Les adsorbants forts, comme le gel de silice, l’alumine
ou le charbon actif. Certains adsorbants présentent une forte polarité
électrique, comme le gel de silice ou l’alumine, alors que d’autres, comme
le charbon actif ou les phases inverses (dont nous parlerons plus en détail
ultérieurement) ont une faible polarité.
• Les solvants :
Pour un système chromatographique donné
(caractérisé par une phase stationnaire, une température, une
pression et un soluté), le pouvoir éluant dépend de la polarité du
solvant. Prenons, par exemple, une phase stationnaire constituée
d’un adsorbant polaire (le gel de silice), d’un soluté polaire adsorbé
et d’un solvant polaire (la propanone). Le solvant polaire possède un
pouvoir éluant élevé, fortement adsorbé, il déplace le soluté. En
revanche, un solvant apolaire comme l’éther de pétrole possèdera un
mauvais pouvoir éluant, mais entraînera un soluté apolaire.