Filière SV – GEBC- S6 Module : Diagnostic Ecologique et Techniques d’Analyses

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Université Cadi Ayyad
Faculté des Sciences Semlalia
Département de biologie-Marrakech

Module
« Diagnostic Ecologique et Techniques d’Analyses »

Travaux pratiques
Analyses physico-chimiques d’une eau :
dosage des nitrites et du titre alcalimétrique.

Objectifs du TP :
Le TP vise à :
 faire acquérir à l’étudiant les bases de quelques méthodes d’analyses utilisées dans l’étude
de la qualité de l’eau ;
 permettre à l’étudiant de se familiariser avec le vocabulaire utilisé en chimie de l’eau;
 apprendre à l’étudiant les bases de calcul utilisées dans la préparation des différentes
solutions (réactifs, gamme étalon, dilution…...).

Le TP comporte deux types de dosages, les plus utilisés en physico-chimie de l’eau en

particuliers et dans d’autres disciplines de la biologie et de la chimie en général, il s’agit d’un
dosage colorimétrique (ou spectrophotométrique ) et d’un dosage volumétrique (acide-base).

Méthode colorimétrique :

Dosage des nitrites (NO2- )

L’azote se trouve dans l’eau sous forme organique ou minérale (NH4+, NO3-, et NO2-).
Les nitrites (NO2-) sont une forme azotée intermédiaire produite par le phénomène de
nitrification de l’ammonium, réalisé essentiellement par les micro-organismes (Nitrosomonas et
Nitrobacter…) selon les réactions suivantes :

Nitrosomonas Nitrobacter
NH4+ --------------------> NO2- ------------------> NO3-

Méthode de dosage utilisée :

Le dosage des nitrites sera réalisé par la méthode au réactif de diazotation.

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Principe
La diazotation des sulfanilamides par les nitrites et sa copulation avec le dichlorure de N1-
Naphtyl-éthyléne diamine donne un complexe coloré rose susceptible d'un dosage
spectrophotométrique.

Réactifs :
- Solution mère à 100mg/l de N-NO2 (préparée à partir de NaNO2)
- Réactif de diazotation :
A 100 ml d'acide orthophosphorique concentré (d=1,70), ajoutez 40 g sulfanilamide,
laissez dissoudre, puis ajoutez 2 g de dichlorure N-1Naphtyléthyléne diamine, agitez jusqu'à
dissolution complète et ajustez à 1000 ml avec de l'eau distillée. Cette solution conservée dans
un flacon brun au réfrigérateur est stable plusieurs mois.

Matériel et verrerie :
- Pipettes de 1ml, Pipette de 5ml.
- Fioles de 50 ml
- Tubes en verre.
- Spectrophotomètre UV-Visible

Préparation de la gamme d’étalonnage :

 La solution mère est à une concentration massique de 100 mg N-NO2/ l.
 La solution fille : à partir de la solution mère, préparez une solution fille à une
concentration massique de 1 mg/l de N-NO2.

Courbe d’étalonnage
- Dans une série de fioles jaugées de 50 ml, numérotées 1, 2, 3, 4, préparez une série de
dilutions comme indiqué au tableau :

N° fioles 1 2 3 4
Solution Fille (en ml) 0 1 2 5
Eau distillée (ml) Q.S.P 50 ml.
Concentration finale
(mg N-NO2 /l)
Facteur de dilution
/solution fille

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Questions :
a) Calculez le facteur de dilution pour chaque concentration.
b) Calculez la concentration finale en nitrites (exprimée en mg N-NO2/l) dans chaque fiole
de la gamme d’étalonnage ;
c) Remplissez le tableau ci-dessus.

Dosage :
- Dans une série de tubes à essai numérotés 1, 2, 3, 4, pipetez 20 ml de chaque fiole (1,2,3 et 4)
et procédez comme dans le tableau suivant :

N° tube à essai 1 2 3 4
Solution d’étalonnage (en ml) 20
Réactif (en ml) 0,5
Agiter et attendre 30 mn.
Lire la densité optique (DO) dans un spectrophotomètre à la longueur d’onde 537 nm.

- Préparation de l’échantillon à analyser :

De la même façon, pipetez 20 ml d’eau à analyser (échantillon), transvasez-les dans des tubes à
essai numérotés 5 et 6 et puis procédez de la même manière que pour la courbe d’étalonnage.

Remarque :
La lecture de la DO au spectrophotomètre nécessite, avant toute utilisation, un étalonnage des
zéro de transmission et d’absorbance à la longueur d’onde de la mesure.
Le zéro de l’absorbance est réglé par rapport au témoin.

Résultats :
a- Représentez la fonction qui relie la concentration des nitrites et la DO. sur du papier
millimétré ou utiliser un tableur Microsoft Excel.
b- Dégagez l’équation matérialisant cette relation, en utilisant vos connaissances en
statistiques ou en utilisant le tableur Excel (équation et coefficient de corrélation).
c- Déterminez la teneur des nitrites dans les échantillons, en mg de N-NO2/l, mg NO2 et
en mole/l en se basant sur la courbe du papier millimétré ou en utilisant l’équation
dégagée ci-dessus.

Méthode volumétrique :

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Détermination de l’alcalinité d’une eau.

Définition :
L’alcalinité d’une eau se mesure par l’intermédiaire du :
- Titre alcalimétrique, TA qui dose la teneur de l'eau en alcalis libre (OH-) et en carbonates
alcalins caustiques (CO3--).
- Titre alcalimétrique complet, TAC qui correspond à la teneur de l'eau en alcalis libre (OH-),
carbonates –CO3--) et hydrogénocarbonates ou bicarbonates (HCO3-).

Principe
La détermination du titre alcalimétrique est basée sur la neutralisation d’un certain volume
d’eau par un acide minéral dilué, en présence d’un indicateur coloré. C’est un dosage
acide/base.

Réactifs

Solution de titrage :
Acide chlorhydrique (HCl) ou sulfurique (H2SO4) N/50

Solution des indicateurs colorés

- Solution de phénolphtaléine dans l'alcool (0,1% dans éthanol) : 0,1 g dans 50ml d’alcool qsp
100 ml d’eau distillée.
- Solution de bromocrésol à 0,1% dans l’éthanol : 0,1 g dans 50 ml d’alcool qsp 100 ml d’eau
distillée.

Dosage
Remplir la burette, jusqu’au trait de jaugeage 0, avec la solution acide N/50.

Détermination du TA
La prise d'essai de l’échantillon :
 Pipeter 25 ml d’eau à analyser et transvaser dans un bêcher de 250 ml ;
 Ajouter 1 à 2 gouttes de phénolphtaléine ;
 Agiter pour homogénéiser ;

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Si la coloration est rose, il y a présence des carbonates CO 3- -, (cas contraire le TA = 0 cas des
eaux dont le pH est inférieur à 8,3) :
 Verser ensuite doucement l’acide titrant, en agitant constamment, jusqu'à décoloration
complète de la solution (pH 8,3) ; Soit V1 le volume d'HCl ajouté,

Détermination du TAC
- Remplir de nouveau la burette jusqu’au trait 0 avec la solution acide N/50.
- Pipeter de nouveau une prise d’essai de 25 ml d’eau à analyser et transvaser dans un bêcher
de 250 ml ;
- Ajouter 2 gouttes du bromocrésol et titrer de nouveau avec l’acide jusqu’au virage du bleu au
jaune pur (pH 4,3) ; Soit V2 le volume total versé.

Résultats
a- exprimer les résultats en équivalent (éq) /l et puis en milliéquivalent (méq)/l.
b- exprimer les résultats ensuite en mg CaCO3/l et en degré français (°F), sachant que :
La masse molaire (MM) de CaCO3 = 100 ; 1 méq = 5°F ; 1éq (CaCO3) = 50g.

Le plan du compte rendu : à rendre dans 8 jours après la séance du TP

 Introduction
 But du TP
 Méthodes utilisées
o Principe des méthodes
 Résultats des analyses : se référer au polycopié
o NO2- :
 complétez les tableaux du poly ;
 représentez la relation DO= f(c) et déterminez l'équation et le coefficient
de corrélation décrivant cette fonction ;
 déterminez les teneurs en nitrites (selon les différentes manières
d'expressions).
o TA et TAC :
 déterminez la valeur du TA et TAC selon les expressions possibles objets
de la page 5 du poly.

Rq : Donnez des exemples de calculs pour les 2 paramètres, NO2- et alcalinité.