Utilisation du Xevo-TQS-Micro

1. Mise en fonction du spectromètre de masse :

 Dans la fenêtre « MS TUNE », ouvrir API Gas et COL Gas.

 Mettre le MS à « OPERATE » en bas à droite.

2. Mise en fonction du chromatographe liquide

2.1. Sous l’onglet instrument, ouvrir « MS CONSOLE »

 S’assurer que l’entête indique bien Acq. UPLC Console (local).
 Installer les lignes A1, A2, B1, B2, Weak Wah et strong wash
dans une solution de MeOH 50% prévue pour le rinçage des
lignes
 Dans la partie de gauche, choisir « ACQUITY SYSTEM » puis dans
le menu déroulant « CONTROL », cliquer sur « Start up system »
 Sélectionner « Solvent change over » puis cliquer sur
« Use custom condition »
 Sous l’onglet « Prime Solvents »
 sélectionner le sous-onglet « BSM », cocher
toutes les lignes désirées et inscrire 3 minutes
 sélectionner le sous-onglet « SM », s’assurer
que les items Strong wash, Weak wash,sample
syringue sont cochés et que le nombres de
cycles est au minimum à 2 ( entre 2 et 5 cycles
recommandés). Mettre 3 cycles.
 Sous l’onglet « Equilibrate method »,
 sélectionner le sous-onglet « BSM », mettre le
« Flow » à 0 mL/min

Appuyer sur START. Attendre que le start-up system soit complété.

3. Mise en fonction de la méthode d’analyse

Installer les lignes dans les phases mobiles appropriées selon la

méthode.
 Pour la C-617
 A1 : eau déminéralisée
 B1 : ACN
 A2 : d’acétate d’ammonium 5 mM et d’acide acétique
0,1 % (v/v)
 B2 + SW : Solution d’acétonitrile: méthanol 50:50 (v/v)
et d’acide acétique 0,1 %
 WW : ACN 10%

Dans la partie gauche choisir dans le menu déroulant « control » +

« Start-up system »

 Sous l’onglet « Prime solvents »

 Sélectionner le sous-onglet « BSM », cocher toutes les
lignes et inscrire 3 minutes
 Sélectionner le sous-onglet « SM » et s’assurer que le
Strong Wash, Weak Wash, Sample syring sont cochés +
2 cycles
 Sous l’onglet « equilibrate to method »
 Sélectionner le sous-onglet « BSM », choisir les lignes,
les proportions ainsi que le débit « Flow » selon la
méthode
 Sélectionner le sous-onglet « SM », inscrire la
température des échantillons selon la méthode
 Sélectionner le sous-onglet « CM », inscrire la position
et la température de la colonne selon la méthode

 Pour la C-617
  BSM : A2 et B2, 95% et 5%, 0.4 mL/min
 SM : 25 °C
 CM : 45 °C

Faire « START ». Attendre que le start-up soit complété.

 Dans la fenêtre « MS TUNE », Sous l’onglet « Fluidics » s’assurer

que le Flow/ Valve position est à LC.

4. Mise en fonction des paramètres de l’injecteur

4.1. Sous l’onglet « Instrument », ouvrir « Inlet Method »

Dans le menu déroulant « File », appuyer « Open » et choisir la

méthode « Inlet » désirée

 Dans le menu déroulant « Acquity Sampler », ouvrir « Bed

Layout » et choisir les plaques correspondantes dans l’onglet
« Current Layout Select » selon la méthode.
 Ici c’est 2 plaques de 48 vials
 Dans le menu déroulant « LC », sélectionner « Load Method »
(Application des paramètres de la méthode. Si le Start Up a bien
été effectué, pas de changement.)

5. Vérification

Dans MS Console

 Choisir « Binary Solvent Manager »,

 Vérifier qu’il n’y a pas de fuite à la colonne (bien
refermer la porte du chauffe-colonne)
 Vérifier que la pression du système est stable (Delta
inférieur à 30)

Dans notre cas, bien vérifier au niveau de la colonne isolatrice et de la

valve d’injection
6. Démarrage de la séquence d’injection

Dans la fenêtre principale de MassLynx

 Ouvrir la séquence à injecter en passant par le menu déroulant

« File » et choisir « Open »
 Sélectionner les lignes à injecter et appuyer sur « Start »
 Cliquer sur l’onglet en bas à droite de l’écran.
 Vérifier que ShutDown_INSPQ.acl est sélectionné
 Cocher « Enable shutdown after batch » ainsi que
« Shutdown if queue is in pause »
 Enregistrer et fermer la fenêtre.
 Préparation des phases mobiles C-617
Prendre 5 bouteilles. Les rincer avec le solvant concerné puis le jeter
dans le fond de la hotte
Les acides sont situés dans le placard de droite sous les centrifugeuses
Pipette d’acide acétique dans l’isoloir, en haut à gauche du frigo
Prélever les acides dans des tubes en verre puis les rincer avant de les
jeter

1. Phase mobile A Solution d’acétate d’ammonium 5mM et d’acide

acétique 0,1% (v/v)

 Dans une bouteille en verre de 1000 mL, ajouter :

 0,385 g d’acétate d’ammonium (salle des balances, boîte
rouge à l’abris de l’humindité),
 1000 mL d’eau déminéralisée à l’aide d’un cylindre
gradué en verre de 1000 mL
 1000 µL d’acide acétique glacial à l’aide d’une pipette
Microman M1000.
 Conserver 1 mois, à la température de la pièce. Après le délai de
conservation, la portion non utilisée doit être éliminée dans
l’évier.

2. Phase mobile B et Strong Wash : MeOH 50:50 (v/v) et acide

acétique 0,1%
 Dans une bouteille en verre de 1000 mL :
 ajouter 500 mL d’acétonitrile et 500 mL de méthanol à
l’aide d’un cylindre gradué en verre de 500 mL
  1000 µL d’acide acétique glacial à l’aide d’une pipette
Microman M1000.
 Conserver 3 mois, à la température de la pièce. Après le délai de
conservation, la portion non utilisée doit être éliminée dans le
rejet de solvant organique.

3. Weak Wash : ACN 10% (v/v) :

 Dans une bouteille en verre de 1000 mL, ajouter 100 mL
d’acétonitrile et 900 mL d’eau déminéralisée à l’aide de
cylindres gradués en verre de 100 mL et de 1000 mL.
 Conserver 3 mois, à la température de la pièce. Après le délai de
conservation, la portion non utilisée doit être éliminée dans le
rejet de solvant organique.
 Préparation de la vérif instrumentale

Placard 5 : prendre une fiole en polypropylène de 1,8 mL à bouchon

vissant,

Placard 35 : ajouter 880 µL de solution de reprise à l’aide d’une pipette

à volume variable de 1000 µL,

Frigo tiroir 39 : vortexer les étalons. Puis mettre100 µL de l’étalon

combiné à 100 ng/mL à l’aide d’une pipette Microman M100 et 20 µL de
l’étalon interne combiné à 15 ng/mL à l’aide d’une pipette Microman
M25.

Placard 11 : embouts pipettes

 Optimisation des composés par infusion
Dans les F10-16 faire la liste des emplacements des composés à ajouter
ainsi que leurs numéros de lot

1. Solutions à préparer
1.1. Préparation d’environ 40 mL solution de dilution : 50% MeOH
+ 0,1% AF
 À l’aide d’un cylindre gradué, ajouter 20 mL d’eau dans un
bécher en verre.
 Verser dans un tube à essai de l’acide formique, puis avec une
pipette XXX à volume variable et un embout avec filtre XXX,
ajouter 40 uL dans le bécher.
 Prélever du MeOH dans un bécher puis, à l’aide d’un cylindre
gradué dédié aux solvants, ajouter 20 mL dans au mélange
précédent.

1.2. Solution optimisation de chacun des 4 composés à 200 ng/mL

dans 50% MeOH + 0.1% acide formique

F:\Partage\Commun\LABO\CLINIQUE\Dév-Valid-Dépannage-Vcibles\C-594\F-10-16
Développement\161222_Ajout de composé à la méthode C594.docm
F:\Partage\Commun\LABO\CLINIQUE\Dév-Valid-Dépannage-Vcibles\C-594\F-10-16
Développement\20221013_Ajout de nouveaux composés à la méthode.docm

 Optimiser les composés les composés à l’aide d’Intellistart

(transitions MRM, énergie de cône, énergie de collision) à
l’aide de la solution d’infusion à 200 ng/mL
 Créer un MS méthode regroupant chacun des nouveaux
composés et injecter ceux-ci avec la Inlet Method
Dépistage C-594
 Déterminenr les temps de rétention des composés
 Ajouter chaque composé dans la fenêtre de la MS method
C-594 correspondant au bon temps de rétention
  Préparer une solution <a 10 ng/mL dans la solution de
reprise (ACN :H2O 10 :90) soit 40 uL de solution à 250
ng/mL + 960 uL de la solution de reprise

 Injecter la solution à 10 ng/mL avec la nouvelle MS method et

mettre à jour la méthode Target Lynx (Dépistage C-
594_complet_MSF0) avec les 3 nouveaux composés.
 Bonifier les solutions d’Étalon mixte à 10 µg/mL (préparé à
partir des solutions à 1 mg/mL et 100 µg/mL) avec les nouveaux
composés (excepté Naloxone-d5). Pour ce dernier la clinique
vont préparer les solutions nécessaires
 Bonifier la solution d’étalons mixte à 100 ng/mL
 Préparer une solution de vérif instrumentales à 10 ng/mL et
injecter la solution pour s’assurer la présence de chacun des
nouveaux composés ajoutés
 Compléter la documentation nécessaire
 Dans la méthode Dépistage C-594_complet_MSF0, remplacer
ephedrine-d3 par Naloxone-d5
 NB : Pas besoin de changer les RRT, car Naloxone-d5 et
ephedrine-d3 ont les mêmes Tr.
 Envoyer un courriel au responsable de la C-594 pour qu’il
modifie leurs méthodes d’interprétation selon les modifications
apportées à la méthode Dépistage C-594_complet_MSF0.

Vortexer les étalons.

Pour chacun des composés séparément, dans un contenant en
polypropylène de XX mL dédié aux infusions, ajouter

 À l’aide d’un cylindre gradué (ou d’une pipette répétitive s’il

y en a en clinique), ajouter 10 mL de solution 50% MeOH +
 0.1% AF
 À l’aide d’une pipette à volume variable XXX munie d’un
embout XXX, ajouter 2 mL de la solution mère à 1 mg/mL,
 À l’aide d’une pipette à volume variable XXX munie d’un
embout XXX, ajouter 80 uL de la solution mère à 25 mg (20
de celle à 100ug)

2. Procédure d’optimisation : étapes principales