Master 2 IDS - Tournié Christophe

Délivré par l´Université de Montpellier
Préparée au sein de Binding Site
Spécialité : Ingénierie des Dispositifs pour la Santé
Présentée par Tournie Christophe
Apprentissage du métier « Ingénieur de

Service » dans le domaine du diagnostic in
vitro
Duration du stage : 01/01/2018 et 30/04/2018
Encadrant de stage : Philipe Loison

Responsable Pédagogique : Fernando Gonzales
Posada
Rapport de stage Confidentiel
J’ai eu un parcours étudiant dans des domaines professionnels divers tels que : le BAC Professionnel, le BTS,
une Licence L3 Professionnelle. Ainsi, l’ingénierie technique et applicative a toujours su m’intéresser.
Avec mon inscription dans le MASTER IDS, j’avais la détermination de concrétiser cet objectif. En début
d’année 2017, pendant ma première année de MASTER IDS, après avoir postulé pour un stage en tant
qu’ingénieur technique chez The Binding Site, j’ai signé avec eux une convention de stage à effectuer pour mon
projet personnel et mon stage de fin d’année de Master 2.
Le Master IDS me permet de lier les notions scientifiques en physique et en biologie. Le poste d’ingénieur de
service est idéal pour mettre en œuvre ces nouvelles compétences.
 La science physique pour comprendre le dispositif de santé sur son aspect technique
 La science biologique pour comprendre les tests et ses résultats ainsi que la science des protéines
spécifiques
L’objectif du stage est de m’apprendre le métier d’ingénieur de service avec une partie sur l’ingénierie
d’application.
Je dois être capable de réaliser des interventions préventives et correctives, et aussi de comprendre la science
de l’immunologie pour enfin savoir travailler/communiquer en équipe avec les autres ingénieurs (commerciaux,
applications, support technique) et faire du « reporting » à mon manager.
Après un certain temps l’autonomie, le savoir-faire et le savoir-être doivent être acquis pour que je puisse me
focaliser sur l’interprétation des résultats « Contrôles Qualités » ainsi que sur les changements produits par la
certification COFRAC.
Je décris dans les chapitres qui suivent la société « The Binding Site », spécialisée en immunologie (science
de l'étude du système immunitaire).
Je consacre de même un chapitre aux réactifs vendus par cette société et permettant le diagnostic de certaines
pathologies par des protéines spécifiques.
La société TBS ne vend pas uniquement des dispositifs de santé. Il y a un immense travail dans la recherche,
la production et la distribution des protéines spécifiques pour développer de nouvelles protéines.
Nous parlerons ensuite de « Optilite » qui est leur dispositif de santé spécialisé dans les protéines spécifiques
pour le diagnostic d’immunodéficience, ainsi qu’une explication sur la notion de « Contrôles Qualités » et sur
ses résultats quantifiés.
A la fin de ce stage, j’espère avoir acquis :

 Un Savoir-faire technique supérieur à celui que j’avais en début de stage, ainsi qu’une réflexion et une
méthodologie de résolution de problème plus juste et plus rapide.
 Un Savoir-faire de la maintenance corrective et préventive
 Un Savoir communiquer plus aisé avec le Biologiste responsable du laboratoire et comprendre son
vocabulaire afin d’adapter le mien.
 Un savoir-être professionnel plus grand afin de collaborer avec des professionnels très spécialisés et
ce sans écart de compréhension
 Une autonomie dans la gestion des interventions et une analyse de l’automate et des automatismes de
dépannage.
Je vous souhaite une excellente lecture.
1 Rapport de stage confidentiel

Remerciements
Mes vifs remerciements à Philipe Loison , Directeur du service technique ainsi qu’à mon maitre de
stage Laurent Leroy, Ingénieur responsable de la partie technique, pour m’avoir fait découvrir de
nombreuses facettes de ce poste avec une attention et une pédagogie exemplaire. Merci également
pour le travail de relecture de ce rapport.
De même pour les ingénieurs qui composent le service technique pour leurs aides et leurs patiences
dans cette prise de poste en home office, qui est une première pour moi.
Je tiens à remercier mon tuteur, Laurent Leroy, Responsable des Ingénieurs de Service, qui, par son
expérience, a guidé mon activité tout en préservant mon esprit d’initiative, durant toute la période de
construction de mes projets.
Ce stage m’a donné la possibilité de me confirmer et de découvrir les multiples perspectives

professionnelles que ma formation me permettrait de mettre au service du handicap. J’adresse
également mes remerciements à l’ensemble des professeurs du Master II Technologies et Handicap
pour l’enseignement et notamment, au directeur, Emmanuel Leclezio, pour son accompagnement
pédagogique.
Je remercie l’ensemble du personnel de la Direction des Ressources Humaines pour son accueil et
son soutien,
Enfin, je tiens à remercier ma famille qui m’a toujours soutenu, et, en particulier mes parents et mon
frère pour leur générosité, leur discernement et leur soutien inconditionnel, ainsi que ma compagne
sa patience, sa compréhension et ses conseils durant ces six dernières années. Je leur dédie mes
réussites passées et à venir.

Abréviations
UM2 : Université de Montpellier II

FAS : Fied Applicatif Spécialist
FSE : Fied Service Engeneer
UFR : Unité de Formation et de Recherche
M2 : Master 2
DIV : Diagnostic In Vitro
TBS : The Binding Site
LBM : Laboratoire de Biologie Médicale
SAV : Service Après-vente
LCR : Liquide Céphalo Rachidien
SEP : Sclérose En Plaques
Cofrac : Comité Français d’Accréditation
IgG : Immunoglobulines G
IMWG : International Myeloma Working Group
Ac : Antigène
Ag : Anticorps

Table des matières

Table des matières ........................................................................................................................... 4
Introduction à la société The Binding site .......................................................................................... 7
L ‘industrie du Diagnostic in vitro ...................................................................................................... 7
The Binding Site ............................................................................................................................... 7
Histoire de la société ..................................................................................................................... 7
Organisation de la société ............................................................................................................. 8
Gammes de produits et services proposés .................................................................................. 11
Chapitre 1 : La science à la base des produits Binding Site ............................................................ 13
1.2.2 Définition d’un anticorps : .............................................................................................. 13
1.3.1 Aperçu des gammapathies monoclonales ..................................................................... 15
1.3.2 Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (GMSI) ................................ 16
1.3.3 Myélome multiple indolent (MMI) ................................................................................... 16
1.3.4 Myélome multiple (MM) ................................................................................................. 17
1.4 Les troubles rénaux et plasmocytaires ................................................................................. 17
1.4.1 Aperçu des troubles rénaux et plasmocytaires .............................................................. 17
1.4.2 Amylose AL ................................................................................................................... 18
1.5 Immunodéficience ................................................................................................................ 18
1.5.1 Immunoglobulines et sous-classe d'immunoglobulines : ............................................... 18
1.5.2 Protéines du Complément ............................................................................................. 18
1.5.3 Réponse vaccinale ........................................................................................................ 18
1.5.4 Dépistage du plasma .................................................................................................... 18
Chapitre 2 Les réactifs à succès chez Binding Site ......................................................................... 20
2.1 Le réactif Hevylite ................................................................................................................. 20
2.1.1 Qu’est-ce que Hevylite .................................................................................................. 20
2.1.3 Compréhension des tests Heavylite .............................................................................. 21

2.1.4 Utilisation Hevylite ......................................................................................................... 21
2.2 Le reactif Freelite® ............................................................................................................... 22
2.2.1 Qu’est-ce que Freelite ................................................................................................... 22
2.2.2 Compréhension des tests :............................................................................................ 23
2.2.3 Utilisation de Freelite ..................................................................................................... 23
Chapitre 3 : L’analyseur de protéine spécifique « Optilite »............................................................. 25
3.1 Introduction de l’Optilite ........................................................................................................ 25
3.2 L’Optilite, un turbidimètre ..................................................................................................... 25
3.3 Principaux composant de l’analyseur ................................................................................... 26
3.3.1 Distributeur d’échantillons ............................................................................................. 26
3.3.2 Distributeur de réactifs .................................................................................................. 26
3.3.3 Incubateur ..................................................................................................................... 26
3.3.4 Portoirs d’échantillons et de calCQ ............................................................................... 26
3.3.5 Mélangeur ..................................................................................................................... 26
3.3.6 Chargeur de cuvettes .................................................................................................... 26
3.3.7 Disque de réactifs ......................................................................................................... 27
3.4 Principe de la mesure photométrique ................................................................................... 27
3.4.1 Principe de fonctionnement technique pour des analyses. ........................................ 27
3.4.2 Le photomètre ........................................................................................................... 27
3.4.3 La mesure de l’intensité absorbé ............................................................................... 28
3.4 Principe de mesure : Réaction antigène-anticorps ............................................................ 29
3.5.1 La liaison Ag Ac ......................................................................................................... 29
3.5.2 Reaction Ag Ac .......................................................................................................... 29
4 Chapitre 4 Problématique : Les contrôles qualités hors gamme............................................... 30
4.1 Qu’est-ce que le contrôle de qualité ? ............................................................................... 30
4.2 Contrôle de qualité (flacon de contrôle) ............................................................................ 31

4.3 Comparaison des résultats de contrôle et des limites statistiques spécifiques .................. 31
4.4 Calculs et utilisation des statistiques de contrôle de qualité .............................................. 33
4.5 Calculer un écart-type....................................................................................................... 33
4.5 Tableau de Levey-Jennings & Règles de Westgard ......................................................... 35
4.6 Utiliser un tableau de Levey-Jennings pour évaluer quotidiennement la qualité de

l’automate ................................................................................................................................... 37
4.6.1 Distinguer une erreur aléatoire d’une erreur systématique. ........................................ 37
4.7 Certifier le bon fonctionnement du dispositif. .................................................................... 39
4.7.1 Comment certifier le bon fonctionnement le bon fonctionnement du dispositif. .......... 39
Chapitre Final Synthèse et Conclusion ........................................................................................... 42
Annexe : ......................................................................................................................................... 43
Fiche de poste Ingénieur de Service ........................................................................................... 43
Formation faite en Angleterre ...................................................................................................... 44
Secteur sous ma responsabilité .................................................................................................. 44
Rapport d’intervention après maintenance préventive ............................................................... 45
Bibliographie module HMSN404 en fin de document.

Introduction à la société The Binding site

L ‘industrie du Diagnostic in vitro
L'industrie du DIV englobe toutes les sociétés qui développent, produisent et/ou commercialisent des
réactifs et dispositifs médicaux destinés aux analyses de biologie médicale. L’appellation Diagnostic
In Vitro, signifie que l’examen est réalisé uniquement sur un prélèvement issu du patient et non sur
le patient lui-même. Elle regroupe donc l’ensemble des techniques analytiques utilisées après le
prélèvement qui permettent aux médecins, dans plus de 70% des cas, d’orienter leurs décisions en
fonction des résultats obtenus. Ces analyses médicales sont primordiales car elles donnent la
possibilité de diagnostiquer les maladies mais également de les dépister à un stade précoce, avant
l’apparition de signes cliniques. Elles sont aussi d’une grande importance lors du choix des
traitements à administrer, ou pour évaluer l’efficacité de ces traitements.
Le marché mondial annuel de ce secteur est estimé à plus de 35 milliards d’euros (1). Ce marché
possède une capacité d’innovation importante grâce au développement de secteurs tels que la
médecine personnalisée, l’automatisation, la miniaturisation ou les nouveaux tests de diagnostic
rapide.
The Binding Site
Dans le secteur du DIV, The Binding Site Group Ltd (TBS) se positionne comme une société intégrant
la recherche, le développement, la fabrication ainsi que la distribution de ses tests de diagnostic
immunologiques. TBS commercialise aussi des automates pour le marché des Laboratoires de
Biologie Médicale (LBM) hospitaliers, spécialisés ou privés.
Fort de son expertise scientifique, elle s’érige dans ce domaine comme la société « Spécialiste des
Protéines ». Binding Site propose aux biologistes et cliniciens des solutions permettant de
perfectionner le diagnostic et le suivi de patients atteints de disfonctionnements du système
immunitaire ou de dyscrasies plasmocytaires.
TBS a obtenu à de nombreuses occasions de prestigieuses récompenses afin de souligner le succès

de l’entreprise dans différents domaines tels que l’innovation ou l’export. Ces récompenses découlent
du sérieux et de la qualité dont TBS fait preuve depuis trois décennies.
Histoire de la société
The Binding Site a été créée suite au travail de chercheurs issus du département d’Immunologie de
l’Université de Birmingham. Vers le début des années 70, une équipe de scientifiques recherche une
solution innovante pour la production d’anticorps. En 1983, M. Bradwell, fort de ses années de
recherche sur le sujet, dépose avec son équipe un brevet pour une technique d’immunisation de
moutons qui favorise la récupération d’un volume conséquent d’anticorps polyclonaux spécifiques.

C’est à partir de ce moment que la société The Binding Site Group Limited est créée. En 2011, Nordic
Capital un fond d’investissement privé rachète le groupe.
Organisation de la société
Depuis les années 80, TBS s’est bien développée jusqu’à devenir une multinationale représentée
dans plus de 100 pays. La société possède son siège social à Birmingham en Angleterre et dispose
de 7 filiales en Europe et 1 filiale aux Etats-Unis ainsi qu’un large réseau de distributeurs implantés
mondialement (points bleus Figure 2). Pour la production de ses réactifs, TBS possède une ferme
dans le Vermont, aux Etats-Unis. Là-bas, des protéines humaines sont injectées aux moutons qui
produisent les anticorps spécifiques correspondants. Ainsi, une partie du sang de près de 2000
moutons est purifiée afin de récupérer les précieux anticorps. Ces derniers sont envoyés à
Birmingham pour passer à travers différents process tels que la recherche et le développement mais
aussi la fabrication des différents kits d’immunodiagnostic.
Figure 1: La présence de Binding Site au niveau internationalCarte issue d’un document interne,
photos issues de Google Maps
Au siège de Birmingham, les employés sont aussi responsables de la distribution des kits à travers
le monde mais également du marketing stratégique, de l’aspect règlementaire et du traitement des
plaintes de la part des clients qui n’auraient pas été résolues au niveau des filiales. TBS Group
emploie actuellement plus de 700 personnes au niveau mondial
Au niveau national, Binding Site France a vu le jour à Grenoble en 1995. Actuellement implantée à
Saint-Égrève, TBS France est dirigée depuis le début par Annie Pietrantuono.
Forte d’une croissance élevée et continue depuis plus de 25 ans, TBS France a su se transformer
pour passer d’un effectif très réduit (3 personnes) à plus de 40 personnes en 2018. Avec cette forte

croissance et un marché qui évolue rapidement, l’organisation de la société a connu des

changements fréquents. TBS France possède différents services tels que le Service Technique,
l’Administration des Ventes, le service Administratif et Communication, le service Finances ou encore
le Service Marketing.

La stratégie technique est définie comme suit : Philipe Loison est le directeur technique, son rôle est
de diriger les responsables de services, il s’occupe des nouveaux contrats clients.
FAS : Fied Application Spécialist // Ingénieur d’application

Yoann Hustache est le manager des FAS. Leurs rôles sont d’assurer la formation des utilisateurs et
l’ajout de nouveau tests de diagnostic sur nos dispositifs, à cela s’ajoute les problèmes de réactifs.
FSE Field Service Engineer // Ingénieur de Service

Laurent Leroy en est le manager. Les FSE sont responsables de la maintenance préventive et
corrective, lorsqu’une panne apparente est présente, leur rôle est de restaurer le dispositif dans un
état de fonctionnement optimal.
Ils travaillent étroitement avec le FAS et l’Ingénieur technico-commercial associé au secteur et ceci
afin de permettre un échange d’information continu et fiable pour intervenir dans les meilleures
conditions.
Lorsqu’il y a des pannes aléatoires et non récurrentes, la logique et le savoir-faire du FSE est mis à
rude épreuve. Pour résoudre ce type de pannes il doit prendre en compte : les erreurs des utilisateurs,
l’état du réactifs, la mécanique, l’hydraulique, les paramètres de réglages et l’antériorité des pannes
de la machine
L’intervention finit par une explication de la panne, de l’implication de celle-ci, et s’il y a eu des tests
pour des patients, rassurer le biologiste sur la validité des résultats. Ceci fait partie de notre savoir-
faire.

TSS : Technical Support Service // Technicien spécialisé dans le support

Christophe Cuilla en est le manager. Les TSS sont les premiers contacts en cas de problème
utilisateur, de problème machine ou lorsqu’il y a une panne.
Les problèmes sont gérés sous forme de « case », et si le problème dépasse leurs capacité
d’intervention, ce sont les FAS et FSE qui reprennent le dossier.
Gammes de produits et services proposés

Depuis sa création TBS est une société qui instaure un dialogue
essentiel entre biologistes et cliniciens à travers des ateliers lors de
congrès, ou lors de symposiums, ou bien lors de visites dans les
hôpitaux. Les cliniciens, préalablement formés par nos responsables
d’affaires scientifiques et disposant d’outils mis à leur disposition (2,3),
créent de la demande en prescrivant nos tests. Les biologistes,
décisionnaires quant à l’achat des réactifs, peuvent par conséquent,
2: Vue d'un du
Figure 3:Evolution coffret pour
nombre
si la demande est forte, acheter nos produits. The Binding Site attache d'études
l'Optilite®Photo issue d’une présentation
bibliographiques concernant
beaucoup d’importance à la recherche et après des années d’efforts Freelite® marketingou Hevylite®graphique issu
et de collaborations étroites avec les praticiens hospitaliers et les leaders d’opinion, la société propose
actuellement 3 gammes de produits différentes : Une gamme concernant le Statut Immunitaire,
englobant les réactifs destinés à détecter des déficits immunitaires héréditaires. On retrouve dans
cette gamme les premiers tests proposés par Binding Site : les kits pour le dosage des sous-classes
des immunoglobulines G (IgG). Par la suite, la société a complété la gamme avec des kits pour
évaluer le bon fonctionnement du système du complément et des coffrets ELISA pour le dosage des
anticorps dirigés contre différents vaccins pour la recherche de plasma hyperimmuns. Au fil des
années de nombreux paramètres ont été ajoutés à la gamme.
Avec cette gamme complète et des clients satisfaits, The Binding Site s’est forgée une image de
qualité en devenant le leader, à l’échelle mondiale, du dosage des sous-classes d’immunoglobulines.
Une deuxième gamme nommée Dyscrasie Plasmocytaires, concerne les réactifs affectés au
diagnostic de ces dernières. Un des produits de cette gamme est le réactif Freelite® commercialisé
en 2001. Ce réactif permet le dosage sérique des chaines légères libres d’immunoglobulines, kappa
ou lambda, et permet la détection et le suivi de maladies incluant le myélome multiple.
The Binding Site étant à l’époque l’unique société à pouvoir proposer un dosage automatisé, facile à
employer pour un usage de routine, elle a pu bénéficier d’un monopole sur le marché du dosage
automatisé des chaines légères libres pendant près de 10 ans. Au fil des années le nombre d’études
bibliographiques sur les applications cliniques de Freelite® n’a cessé d’augmenter (figure 5). En 2009
le test Freelite® est cité dans les recommandations de l’International Myeloma Working Group (4).
Freelite® est le réactif phare de la société, il représente la majorité des ventes. En 2009 d’autres tests
innovants ont été introduits : Hevylite® basés sur la même technologie que les tests Freelite®, ils
permettent de différencier et de quantifier les isotypes des immunoglobulines sériques de type A, G
et M.

Enfin, une troisième gamme appelée Instrumentation

regroupe les instruments de mesures de la société. On y
retrouve des MININEPHPLUS ®, turbidimètre de paillasse,
mais aussi des instruments plus imposants tel que
l’automate SPAPLUS®. Il s’agit d’un automate dédié au
dosage des protéines spécifiques par néphélémétrie. Lancé
en 2007, il a marqué la transition entre la société
commercialisant des réactifs et la société qui propose un
service global que l’on connait actuellement. En 2015, un
Figure 4: Dernier automate nouvel automate innovant répondant aux attentes des
commercialisé : l'Optilite®Photo issue
utilisateurs et avec des performances optimisées a été
d’une présentation marketing
commercialisé : l’Optilite®.
TBS offre aussi une multitude de services tels qu’un support technique assuré par une équipe de
techniciens et d’ingénieurs d’applications et d’ingénieurs de service pour assurer l’installation des
équipements, les formations des utilisateurs, les maintenances préventives et curatives. Ces équipes
peuvent travailler en relation étroite avec les utilisateurs et en cas de problème, TBS dispose
également d’une hotline pour répondre aux différents problèmes rencontrés.
The Binding Site permet la gestion des résultats de dosages de protéines spécifiques à ses
utilisateurs grâce à la station de travail appelée DataSite®, dédiée aux instruments Binding Site.
DataSite® permet de créer des règles de calculs, et de faciliter la démarche qualité de l’utilisateur en
établissant une représentation graphique de Levey-Jennings avec les règles de Westgard mais
aussi de générer une traçabilité des résultats, outil important lors d’un audit par exemple.
The Binding Site accompagne aussi ses utilisateurs avec une aide à l’accréditation. En effet TBS
propose des programmes d’évaluation externe de la qualité (IMMPROVE®) et fournit également des
dossiers d’aide à la vérification bibliographique des méthodes.
Du fait que Binding Site soit une société spécialisée dans un domaine en particulier et également que
la formation interne intègre des connaissances scientifiques approfondies, les clients ne sont pas
redirigés entre différents services, ils peuvent parler directement à une personne compétente. Ils
obtiennent ainsi une réponse rapide et efficace pour leurs besoins ou problèmes. Ceci est un véritable
avantage face à notre concurrent principal Siemens qui opère également sur les marchés des sous-
classes d’Ig, des instruments de mesure et plus récemment sur le marché des chaines légères libres.

Chapitre 1 : La science à la base des produits Binding Site
1.1 Introduction :
Pendant la lecture de ce chapitre, j’espère vous faire toucher du doigt les sciences qui ont permis à
The Binding Site de voir le jour pour ensuite se développer.
Vous allez avoir des introductions et des généralités dans le domaine de l’immunologie (Antigène,
Anticorps, réactions Ac-Ag etc), une explication sur les différents Myélomes pouvant être
diagnostiqué.
1.2 Généralités :
On regroupe sous le terme de méthode immunochimique toutes les méthodes se basant sur la mise
en évidence du complexe qui se forme lors de la réaction Antigène (Ag) –
Anticorps (Ac). Il s’agit le plus souvent d’utiliser des Anticorps spécifiques pour
identifier et éventuellement quantifier les Antigène.
1.2.1 Définition d’un antigène « Ag » :

Substance susceptible d'induire la formation d'anticorps lorsqu'elle est
introduite dans un organisme. Il porte plusieurs déterminants antigéniques ou
épitopes. Figure 1 Antigéne
Les épitopes d'un même antigène peuvent être tous identiques ou différents.
Haptène : sont des antigènes incomplets. Ils sont capables de se combiner spécifiquement à un
anticorps. Ils ne peuvent en déclencher l’élaboration. Ils induisent la synthèse des anticorps
seulement lorsqu’ils sont couplés à une protéine.
La valence d’un Antigène : représente le nombre de sites de fixation d’un anticorps (épitope).
Antigène univalent et uni-déterminé : possède un seul épitope à la surface qui est

capable de se lier à un anticorps. Les haptènes sont univalents et uni-déterminés.
Antigène multivalent et uni-déterminé : possède au moins deux épitopes du même type

sur une molécule d’antigène.
Antigène multi-déterminé et univalent : présente plusieurs épitopes de différents types,

mais seulement un de chaque type sur une molécule d’antigène.
Antigène multi-déterminé et multivalent : présente plusieurs épitopes de différents types

et plus d’un épitope de chaque type par molécule d’antigène
1.2.2 Définition d’un anticorps :

Les anticorps sont des immunoglobulines secrétées en réaction à la présence d’antigènes. Ce sont
des glycoprotéines qui ont une structure de base en forme de Y. Les paratopes spécifiques d'un
antigène, sont variables d'un anticorps à l'autre.

Structure de l’anti corps : : La structure de l’anti corps contient deux chaines lourdes qui définissent
les cinq classes : IgG,IgM,IgA,Ig, IgE ainsi que deux chaines légères : Kappa et Lambda.
Chaque chaîne légère est constituée d'un domaine constant et d'un domaine variable ; les chaînes
lourdes sont composées d'un fragment variable et de trois ou quatre fragments constants selon
l'isotype. Pour un anticorps donné, les deux chaînes lourdes sont identiques, de même pour les deux
chaînes légères.
Domaines constants : Les domaines constants sont caractérisés par une séquence en acides
aminés très proche d'un anticorps à l'autre, caractéristiques de l'espèce et de l'isotype.
Chaque chaîne légère en possède un exemplaire noté CL. Les chaînes lourdes comportent, selon
l'isotype, trois ou quatre domaines constants CH1, CH2, CH3, (CH4).
Les domaines constants ne sont pas impliqués dans la reconnaissance de l'antigène, mais
interviennent dans l'activation du système du complément, ainsi que dans l'élimination des complexes
immuns (anticorps lié à son antigène) par les cellules immunitaires possédant les récepteurs aux
fragments constants (RFc).
Domaines variables : Un anticorps possède quatre domaines variables situés aux extrémités des
deux « bras ». L'association entre un domaine variable porté par une chaîne lourde (VH) et le domaine
variable adjacent porté par une chaîne légère (VL) constitue le site de reconnaissance (ou paratope)
de l'antigène. Ainsi, une molécule d'immunoglobuline possède deux sites de liaison à l'antigène, un
au bout de chaque bras. Ces deux sites sont identiques (mais destiné à différents épitopes). D'où la
possibilité de lier deux molécules d'antigène par anticorps.
Figure 2 Structure Anti Corps

1.3 Gammaphathies monoclonales

Les gammapathies monoclonales constituent un groupe de troubles associés à la production de
protéines monoclonales.
1.3.1 Aperçu des gammapathies monoclonales

Troubles plasmocytaires associés aux cancers de la moelle osseus
Les protéines monoclonales sont produites à la suite de la prolifération clonale de cellules

plasmatiques que l'on trouvent dans la moelle osseuse, produisant elle-même des anticorps.
Les protéines monoclonales peuvent faire référence à : Immunoglobulines entières (Igs) et/ou
chaînes légères libres (CLL).
Figure 3 Immunoglobulin entiére Figure 4 Chaine légére libre
Elles sont sécrétées dans le sérum et sont des marqueurs de substitution de la masse tumorale.
Parmi les gammapathies monoclonales bénignes et asymptomatiques figurent la gammapathie

monoclonale de signification indéterminée (GMSI) et le myélome multiple indolent (MMI).
La gammapathie monoclonale maligne la plus commune est le myélome multiple (MM).
Figure 5 Myelome Multiple

Les tests en laboratoire jouent un rôle majeur dans la gestion des gammapathies monoclonales :
 Diagnostic - pour soutenir un diagnostic de gammapathie monoclonale

 Pronostic - pour prédire des résultats de patients
 Suivi - pour mesurer la réponse au traitement
Des directives internationales ont été instaurées pour soutenir les meilleures pratiques.
Freelite et Hevylite sont des tests en laboratoire permettant de détecter des chaînes légères libres
monoclonales et des immunoglobulines entières. Utilisés conjointement, ils permettent une détection
optimale des Gammapathie monoclonales.
1.3.2 Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (GMSI)

Une affection bénigne qui peut devenir un cancer comme le myélome multiple.
La GMSI est définie par les 3 critères suivants :
 Une protéine monoclonale sérique < 30 g/l

 Plasmocytes clonaux de la moelle osseuse < 10 %
Absence d'atteinte aux organes cibles, qui peut être attribuée au trouble prolifératif plasmocytaire
Chaque année, près de 1 % des personnes atteintes de GMSI développeront un myélome multiple
(MM) ou une malignité connexe.
Les directives internationales recommandent la stratification de risque des patients GMSI lors du
diagnostic afin d'optimiser l'orientation et le suivi.
En combinaison avec d'autres tests de laboratoire, le test des chaînes légères libres (CLL) sériques
Freelite identifie les patients présentant un faible risque de progression (~ 40 %). Les tests de
laboratoire Hevylite améliorent la stratification du risque et peut aider à pronostiquer la progression
du GMSI en MM.
1.3.3 Myélome multiple indolent (MMI)

Une forme de myélome multiple précoce à progression lente.
La définition du myélome multiple indolent (MMI) a été adaptée en 2014 et requiert deux conditions
auxquelles il convient de satisfaire :
 La présence d'une protéine monoclonale sérique (IgG ou IgA) à une concentration ≥ 30 g/l ou
d'une protéine monoclonale urinaire ≥ 500 mg/24 heures et/ou 10 à 60 % de plasmocytes
clonaux de la moelle osseuse (BMPCs).
 L'absence d'événements caractéristiques du myélome (y compris un rapport de chaînes
légères libres (CLL) sériques Freelite impliquées/non impliquées ≥ 100 ou d'amylose.
Les directives recommandent une mesure des CLL sériques lors du bilan initial de référence pour
tous les patients MMI afin de permettre la stratification du risque.
Un rapport CLL sériques très anormal lors du bilan initial de référence est associé à un risque
important de progression vers un myélome actif (MM).

Les patients asymptomatiques présentant un rapport CLL sériques impliquées/non impliquées ≥ 100*
en association avec ≥ 10% de plasmocytes clonaux de moelle osseuse ou un plasmocytome confirmé
par biopsie sont maintenant classés comme présentant un MM nécessitant un traitement.
*la concentration Freelite impliquée doit être ≥ 100 mg/l.
1.3.4 Myélome multiple (MM)

Un cancer des cellules plasmatiques de la moelle osseuse.
Les patients MM peuvent être classés en fonction de leur type de protéine monoclonale, à savoir MM
à immunoglobuline entière (MMIE), MM à chaînes légères (MMCL) et MM non sécrétant (MMNS).
Les directives de l'International Myeloma Working Group recommandent des résultats de base de
laboratoire avec le test des chaînes légères libres (CLL) sériques Freelite pour tous les patients
souffrant de MM afin de fournir des données pronostiques. Ils sont également recommandés pour le
suivi des patients atteints d'un MM oligosecrétant ou d'un MMIE (pour détecter une rechute avec des
chaînes légères libres uniquement).
Le suivi avec des tests de laboratoire Hevylite permet une meilleure gestion des patients atteints de
MM à immunoglobuline entière.
Les patients MM sont réputés présenter plusieurs clones tumoraux distincts pouvant exprimer
l'immunoglobuline entière, les CLL, les deux ou, rarement, aucun. Différents clones peuvent être
présents au moment du diagnostic et/ou évoluer au cours de la maladie. Le suivi de patients avec
une combinaison de Freelite et de Hevylite confère des informations sur ces clones en évolution.
1.4 Les troubles rénaux et plasmocytaires

Les patients atteints de troubles plasmocytaires présentent un risque d'atteinte rénale.
1.4.1 Aperçu des troubles rénaux et plasmocytaires

Les chaînes légères libres (CLL) monoclonales sont souvent toxiques pour le rein et peuvent induire
diverses maladies, notamment la néphropathie à cylindres myélomateux,
l'amylose AL et la maladie des dépôts de chaînes légères (MDCL).
90 % des cas d'insuffisance rénale associée au myélome multiple (MM) sont

dus à une néphropathie à cylindres myélomateux et sont considérés comme
des urgences médicales. Le traitement précoce augmente les chances de
guérison rénale.
Figure 6 Coupe d'un

rein
En cas de MM, jusqu'à 40 % des patients nouvellement diagnostiqués
présentent une insuffisance rénale, 3,5 % une insuffisance rénale aiguë (IRA)
nécessitant une dialyse, souvent due à une néphropathie à cylindres myélomateux.
En cas de MDCL, des CLL monoclonaux sont précipitées sur les membranes basales des reins,
induisant une insuffisance rénale.

Les patients présentant une IRA sévère de cause inconnue ou une maladie rénale chronique avec
protéinurie et/ou une diminution de la fonction rénale doivent subir un dépistage de gammapathie
monoclonale à l'aide de Freelite, en combinaison avec d'autres tests de laboratoire.
1.4.2 Amylose AL
L'amylose AL se caractérise par le dépôt d'un excès de chaînes légères libres (CLL)
sous la forme de fibrilles amyloïdes. Elles perturbent la structure et la fonction des
organes, dont les reins et le cœur.
Les tests de laboratoire des CLL sériques Freelite, combinés à l'immunofixation de

sérum et d'urine, confèrent un diagnostic efficace de l'amylose AL.
Au diagnostic, la majorité des patients présentent un rapport CLL Freelite anormal. Des CLL sériques
hautement anormales sont associées à de moins bons résultats de patients.
1.5 Immunodéficience
Le système immunitaire est constitué de plusieurs types de cellules et de protéines différents, dont
chacun accomplit une fonction spécialisée, ayant pour objectif de reconnaître ou de réagir avec les
corps étrangers, comme les bactéries, les virus, le pollen et les organes transplantés.
Quand une partie du système immunitaire fait défaut ou est altérée, un déficit immunitaire peut
survenir. Les déficits immunitaires sont catégorisés comme primaires ou secondaires. Un déficit
immunitaire primaire survient lorsqu'une partie du système immunitaire fait défaut ou ne fonctionne
pas correctement et est généralement associé à un désordre génétique. En revanche, un déficit
immunitaire secondaire survient lorsque le système immunitaire a été compromis en raison d'un
facteur externe, comme un virus (par ex. le VIH) ou à la suite d'un traitement médicamenteux (par ex.
chimiothérapie ou immunosuppression délibérée à la suite d'une transplantation d'organe).
Binding Site a développé une vaste gamme de tests pour la détection et le suivi des troubles du
système immunitaire. Elle comprend des tests pour :
1.5.1 Immunoglobulines et sous-classe d'immunoglobulines :

La mesure de l'immunoglobuline et des sous-classes d'immunoglobulines sont des outils clés
pour le diagnostic des troubles du système immunitaire.
1.5.2 Protéines du Complément

Le système du complément permet d'initier une réaction inflammatoire et de détruire certaines
bactéries et certains virus.
1.5.3 Réponse vaccinale

Un outil clé dans la compréhension de la capacité d'un patient à développer une réponse
immune humorale fonctionnelle.
1.5.4 Dépistage du plasma

Tests spécialisés pour la fabrication de produits à base d'immunoglobulines thérapeutiques


Chapitre 2 Les réactifs à succès chez Binding Site

Ce chapitre permet de visualiser et de comprendre qu’est-ce que sont les tests développer par The
Binding Site. D’en apprendre un peu plus sur leurs fonctionnements et le rendu des résultats.
2.1 Le réactif Hevylite

Hevylite® est un test unique pour l'analyse d'isotypes de chaîne lourde et de chaîne légère.
2.1.1 Qu’est-ce que Hevylite

Hevylite permet le suivi amélioré de patients atteints de myélome multiple par des mesures plus
précises des protéines monoclonales des immunoglobulines entières. Il s'agit d'un ensemble de tests
sériques uniques de laboratoire qui surpassent certains problèmes des méthodes électrophorétiques,
en particulier lors du suivi du myélome multiple à IgA.
Les tests d'isotypes de chaîne lourde et légère Hevylite permettent l'identification individuelle et la
quantification des différents types de chaînes légères de chaque classe d'immunoglobuline, à savoir
IgGκ, IgGλ, IgAκ, IgAλ, IgMκ et IgMλ.
Figure 7 Les classes d'immunoglobuline
Ces tests mesurent les immunoglobulines impliquées (clonales) et les immunoglobulines non
impliquées (non clonales). Ils confèrent des informations uniques de pronostic et utiles sur
l'immunodépression de l'isotype non impliqué, par exemple l'IgAλ chez un patient IgAκ.
Les tests donnent des résultats numériques pour :
IgGκ, IgGλ et rapport IgGκ/IgGλ
IgAκ, IgAλ et rapport IgAκ/IgAλ
IgMκ, IgMλ et rapport IgMκ/IgMλ

2.1.3 Compréhension des tests Heavylite

Les tests Hevylite mesurent séparément l'IgGκ, l'IgGλ, l'IgAκ, l'IgAλ, l'IgMκ et l'IgMλ en g/l.
Ces valeurs peuvent être utilisées de différentes façons pour évaluer un patient atteint de
gammapathie monoclonale :
Les gammes normales de valeurs Hevylite dans le sérum sont :
2.1.4 Utilisation Hevylite

Hevylite est un test sérique simple d'anticorps polyclonaux pour gammapathies monoclonales à
immunoglobulines entières, notamment le myélome multiple. Il peut :

Quantifier précisément les protéines monoclonales lorsque les bandes d'EPS et d'IF sont difficiles à
interpréter.
 Quantifier précisément les protéines monoclonales de faibles concentrations (< 10 g/l)

 Identifier la maladie résiduelle dans le cas d'un myélome multiple
 Détecter une récidive du myélome multiple de façon précoce
 Assurer un suivi optimal avec Freelite
Le test fournit rapidement des résultats précis, jouant un rôle important au niveau du :
 Diagnostic : Fournit une valeur de base

 Pronostic : Pour prédire l'évolution des patients
 Suivi : Pour mesurer la réponse au traitement
2.2 Le reactif Freelite®

Freelite contribue à la détection et au suivi du myélome multiple et des maladies apparentées.
Le test Freelite se compose de deux tests d'immunodiagnostic sensibles et spécifiques pour la

mesure de chaînes légères libres kappa (κ) et lambda (λ).
Il s'agit du seul test des chaînes légères libres recommandé par les directives nationales et
internationales
2.2.1 Qu’est-ce que Freelite

Freelite est un ensemble de tests sensibles et spécifiques pour la mesure de chaînes légères libres
(CLL) kappa (κ) et lambda (λ). Les tests se basent sur des anticorps polyclonaux purifiés par affinité
qui sont adsorbés sur des particules de latex. Ils sont utilisés pour produire des coffrets
néphélométriques et turbidimétriques, spécifiques des CLL κ et CLL λ.
Molécule d'anticorps présentant la structure de chaînes lourdes et de chaînes légères, avec des CLL
κ et λ.
Freelite réagit uniquement à des épitopes exposés de chaînes légères libres, qui sont masqués si la
chaîne légère est associée à la chaîne lourde.

Freelite est recommandé chez des patients présentant des gammapathies monoclonales, y compris
:
 Myélome multiple à chaînes légères (MMCL)

 Myélome multiple à immunoglobuline entière (MMIE)
 Myélome multiple indolent (MMI)
 Myélome multiple non sécrétant (MMNS)
 Amylose AL
 Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (GMSI)
2.2.2 Compréhension des tests :

Le test Freelite mesure les chaînes légères libres (CLL) kappa et lambda des immunoglobulines en
mg/l.
Ces valeurs peuvent être exprimées de différentes manières pour évaluer un patient présentant une
gammapathie monoclonale :
2.2.3 Utilisation de Freelite

Freelite est un test sérique à anticorps polyclonaux simple pour les gammapathies monoclonales,
notamment le myélome multiple.
Le test fournit rapidement des résultats de haute sensibilité, jouant un rôle important à différents
niveaux :
 Diagnostic - pour soutenir un diagnostic de gammapathie monoclonale

 Pronostic - pour prédire l'évolution des patients
 Suivi - pour mesurer la réponse au traitement

 Fonction rénale - pour faciliter le diagnostic d'insuffisance rénale due au myélome

Chapitre 3 : L’analyseur de protéine spécifique « Optilite »
3.1 Introduction de l’Optilite

L’Optilite c’est la dernière innovation dans les tests de protéines spécifiques, Avec une gamme
étendue de réactifs il permet de réaliser une vaste liste de tests.
Il est construit par Thermo Fisher Scientific car Binding Site n’est pas fabriquant de dispositif
électronique.
En intégrant une puissante technologie basée sur plusieurs sciences et un logiciel intelligent, Optilite
est entièrement optimisé pour les processus analytiques complexes.
Les principales caractéristiques incluent :
 Redilution automatique aux résultats finaux.

 Chargement et déchargement continus des échantillons, réactifs et cuvettes.
 Trois méthodes de protection contre l'excès d'antigène.
 Protocoles de test optimisés, avec de larges plages de mesure et de vastes étapes de dilution.
3.2 L’Optilite, un turbidimètre

La turbidimétrie est le processus consistant à mesurer la perte d'intensité de la lumière transmise
due à l'effet de dispersion des particules qui y sont en suspension.
La détermination de la concentration d’un antigène soluble en turbidimétrie implique une réaction

avec l’antisérum spécifique pour former des complexes insolubles. Lorsque la lumière traverse la
suspension formée, une portion de lumière est transmise et focalisée sur une photodiode par un
système de lentilles optiques. La quantité de lumière transmise est indirectement proportionnelle à la
concentration en protéine spécifique de l’échantillon. Les concentrations sont automatiquement
calculées à partir d’une courbe de calibration enregistrée dans l’automate

3.3 Principaux composant de l’analyseur
1 Distributeur d’échantillons
2 Incubateur
3 Portoirs d’échantillons et de
calCQ
4 Distributeur de réactifs
5 Mélangeur
6 Chargeur de cuvettes
7 Disque de réactifs
3.3.1 Distributeur d’échantillons

Cette aiguille de distribution permet distribuer le sérum patient dans les cuvettes qui se trouve dans
l’incubateur.
3.3.2 Distributeur de réactifs

Cette aiguille de distribution permet distribuer du réactif dans les cuvettes qui se trouve dans
l’incubateur.
3.3.3 Incubateur
Incubateur est une zone très importante, elle est la fonction principale car cette zone adjacente aux
autres fonctions, elle est la dernière étape avant la mesure optique.
L’incubateur est un disque tournant dans les deux sens grâce à un moteur. Ce disque contient des
racks de cuvettes, celle-ci vont être remplies par du sérum et du réactif pour ensuite être associée
avec le mélangeur.
3.3.4 Portoirs d’échantillons et de calCQ
C’est la zone d’insertion des échantillons avec une capacité de 54 échantillons, reconnaissables par
un lecteur de codes barre qui se trouve dans cette même partie et qui permet l’identification des
échantillons.
3.3.5 Mélangeur
Le mélangeur est un robot mixeur qui va permettre, un mélange « Réactif et échantillons » homogène.
C’est très important pour la mesure, car si le précipité est mal réalisé, alors la mesure n’est pas
correcte.
3.3.6 Chargeur de cuvettes

Les cuvettes sont chargées au centre, dans la zone de l'incubateur vers l'arrière à l’aide d’une
guillotine qui insère les racks de cuvettes dans l’incubateur.

3.3.7 Disque de réactifs

C’est la zone d’insertion des réactifs avec une capacité de 36 réactifs, cette zone est réfrigérée par
effet Peltier. Les réactifs sont reconnaissables par un lecteur code barre qui se trouve aussi dans
cette partie et qui permet l’identification des réactifs.
3.4 Principe de la mesure photométrique

3.4.1 Principe de fonctionnement technique pour des analyses.
La cuvette est déplacée du chargeur de cuvettes à une fente dans l'incubateur. Il y a des positions
désignées autour de l'incubateur pour distribuer les réactifs et les échantillons dans les cuvettes. De
même pour le mélangeur et la mesure de l'absorbance.
L'incubateur tourne pour déplacer les cellules de la cuvette à différentes positions autour de
l'incubateur en fonction des étapes des tests effectués. Quand toutes les cellules d’un kit de cuvette
sont utilisées et mesurées, une nouvelle cuvette est chargée et la cuvette précédemment mesurée
est jetée dans la poubelle de la machine.
1 Point d’entrée pour les cuvettes

2 Chargement de cuvette
3 Incubateur
4 Rack pour les tubes patients et contrôles
5 Disque échantillons
6 Réactifs
7 Disque pour réactifs
8 Lecteur code barre
9 Aiguilles distribuant le réactif
10 Aiguilles distribuant les échantillons
11 Mélangeur (Réactif/échantillons)
12 Unité photométrique
3.4.2 Le photomètre
La lumière de la lampe au xénon passe à travers des filtres, qui sont montés sur un disque en rotation
constante. L'instrument dispose de 12 positions, soit 12 filtres différents
L’onde lumineuse est émise lorsque le filtre est en positions et pas avant. En ce qui concerne les
dispositifs bi-chromatiques, les mesures sont séparées par un intervalle de 60 milliseconde.
L’onde lumineuse est dirigée par une fibre optique vers une lame semi-réfléchissante. Celle-ci ne
laisse passer que la moitié de la puissance lumineuse qui traverse ensuite la cuvette et finit son trajet
sur la photodiode. Elle en réfléchi l’autre moitié sur une photodiode de référence qui surveille la
fluctuation de lumière. En cas de fluctuation le test est annulé.
Le détecteur de signal (11) mesure la quantité de lumière absorbé

1 Lampe Xenon
2 Faisceau xénon
3 Disque des filtres
4 Faisceau filtré
5 Fibre Optique
6 Faisceau divisé
7 Faisceau de
référence
8 Détecteur de
référence
9 Cuvette
10 Faisceau lumineux
ayant traversé une
cuvette
11 Détecteur pour
analyser le
faisceau ayant
traversé la cuvette
3.4.3 La mesure de l’intensité absorbé

Le programme de l’Optilite à besoin de deux étape pour déterminer l’absorbances final. C’est celle-
ci qui sera utilisée dans l’équation de tendance de la calibration afin de définir le résultat du test du
patient.
Mesure de l’absorbance brute : Après avoir capturé l’intensité lumineuse à l’aide d’un
photorécepteur, l'analyseur envoie des résultats pour le calcul. L'absorbance brute est calculée en
utilisant l'équation suivante :
AR – Absorbance brute
IR - Intensité de la lumière mesurée par le détecteur de référence (8)
IS - Intensité de la lumière à travers une cuvette, mesurée par le détecteur de signal (11)
0.675 – coefficient de correction pour la longueur du trajet de la lumière dans la cuvette.
Mesure du blanc d’eau : C’est la valeurs zéro.
Nous allons mesurer l’absorbance de l’eau. Le blanc d'eau est mesuré pendant la procédure de
démarrage. Dans la mesure du blanc d’eau, la cuvette est remplie d'eau et les cellules sont mesurées
par toutes les longueurs d'onde. L'écart-type en absorbance pour la cuvette est calculée. Si l'écart
type est supérieur à 2 mA (configurable), un message d'erreur est affiché pendant la procédure de
démarrage.
Mesure de l’absorbance final (Absorbance réelle de l’échantillon corrigé par son WBL :
Après avoir calculé l'absorbance brute, l'absorbance A est calculée en utilisant l’équation suivante :

A - Absorbance
AR – Absorbance brute
AWBL – Absorbance du blanc d’eau, qui a été mesurée avec de l'eau du système à l'avance
3.4 Principe de mesure : Réaction antigène-anticorps
La réaction Ag-Ac est un processus bi- ou multimoléculaire à modalités variées se traduisant, en

fonction des caractéristiques structurales des molécules en contacts et du milieu réactionnel, par des
phénomènes physico-chimiques et biologiques macroscopiques d'une grande diversité.
3.5.1 La liaison Ag Ac
Pour qu’il y ait une liaison il faut une « complémentarité stérique » entre le paratope de l’Ac et l’épitope
de l’Ag.
Complémentarité stérique : complémentarité conformationnelle, représentation dans l’espace.
Figure 8 Complexe immunologique Ac Ag
Si la forme solide du paratope n’est pas identique à celle de l’épitope alors le complexe
immunologique n’est pas possible.
3.5.2 Reaction Ag Ac

Mélange et incubation de l’anticorps réactionnel et de l’échantillon

Les particules renforcées au latex et revêtues d’anticorps anti-lgG humaine présentes dans le réactif
s’agglutinent avec l’lgG humaine de l’échantillon de LCR. Lors de la phase d’incubation, un complexe
antigène-anticorps se forme.
Mesure du complexe antigène-anticorps

Le degré de turbidité engendré par les agrégats peut être déterminé par turbidimétrie à 700/340 nm
et s’avère proportionnel à la quantité d’immunoglobuline G présente dans l’échantillon : plus la
concentration d’immunoglobuline G est élevée, plus la turbidité est élevée.
La turbidimétrie
La turbidimétrie est la technologie utilisée par The Binding Site à des fins de dosage immunologique
homogène. Le développement permanent de la technologie turbidimétrique au cours des dernières
années – en termes de méthodes de détection comme de conception d’essais a imposé la
turbidimétrie au rang de méthode de détection extrêmement précise et sensible. L’utilisation de
longueurs d’onde bichromatiques en spectrophotométrie conjointement à la mesure d’un échantillon
à blanc minimise les effets d’interférences
4 Chapitre 4 Problématique : Les contrôles qualités hors gamme.

Nous recevons quelque fois des appels téléphonique demandant une intervention corrective sur la
machine, Pourquoi ? Car les résultats des contrôles qualités en début // fin de routine serait en
dehors des écarts types ± 2.
J’ai travaillé sur cette thématique là pour permettre une prise en charge méthodique et plus précise,
dans un but de rassurer le client après une intervention ou s’il y a eu une erreur de manipulation.
4.1 Qu’est-ce que le contrôle de qualité ?

Le contrôle de qualité dans un laboratoire d’analyses médicales est le processus statistique utilisé
pour contrôler et évaluer le processus analytique qui produit les résultats de patients. Lorsqu’un test
de diagnostic est exécuté dans un laboratoire, la finalité du test est d’aboutir à un résultat. Ce résultat
peut être celui d’un patient ou d’un contrôle de qualité (CQ). Il peut être quantitatif (un nombre) ou
qualitatif (positif ou négatif) ou semi-quantitatif (limité à quelques valeurs).
Les résultats de CQ sont utilisés pour valider les résultats de patients. Une fois validés, les résultats
de patients peuvent alors être employés pour effectuer un diagnostic, un pronostic ou la mise en
place d’une thérapie. Par exemple, lors du dosage du potassium dans le sérum d’un patient, le
résultat du test indique quelle quantité de potassium (quelle concentration) est présente dans le sang.
Le résultat est alors utilisé par le clinicien pour déterminer si le patient a un taux de potassium bas,
normal ou élevé.
Supposons que la valeur de potassium mesurée dans le sérum d’un patient soit de 2,8 mmol/l (unité
de mesure : millimoles par litre).
Ce résultat est bas et indique une perte anormale de potassium. Mais comment la personne réalisant
le test sait-elle si ce résultat est vraiment fiable ? Dans l’hypothèse où l’automate aurait été mal
calibré, alors le véritable taux de potassium du patient aurait pu être de 4,2 mmol/l—un résultat
normal.

La question de la fiabilité de la plupart des tests peut être résolue par une utilisation régulière de
contrôles de qualité ainsi que par un processus de traitement statistique.
4.2 Contrôle de qualité (flacon de contrôle)

Un contrôle est un matériau semblable à celui d’un patient, idéalement fabriqué à partir de sérum
humain, d’urine ou de liquide céphalo-rachidien (LCR) Un contrôle peut être liquide ou lyophilisé. Il
se compose d’un ou de plusieurs constituants (analytes) de concentration connue. Les contrôles
doivent être dosés de la même manière que les échantillons de patients.
Un contrôle normal contient des niveaux normaux. Un contrôle anormal contient une concentration
au-dessus ou au-dessous de l’intervalle normal de cet analyte.
Par exemple, l’intervalle normal du potassium est compris entre 3,5 et 5,0 mmol/l. Un contrôle normal
contiendrait un potassium à un taux inclus dans cette plage. Un contrôle anormal contiendrait du
potassium à un taux inférieur à 3,5 mmol/l ou supérieur à 5,0 mmol/l.
Les bonnes pratiques de laboratoire exigent des contrôles normaux (résultats non pathologique) et
anormaux (résultats pathologique) pour chaque test au moins quotidiennement afin de surveiller le
processus analytique. Si le test est stable moins de 24 heures ou suite à une modification capable
d’affecter potentiellement la stabilité du test, des contrôles doivent être passés plus fréquemment. Un
dosage régulier des contrôles permet l’élaboration d’une base de données de CQ que le laboratoire
utilise afin de valider les résultats de patients. Valider consiste à comparer les résultats de CQ
quotidiens aux limites d’acceptabilité des valeurs de CQ définies par le laboratoire. Cet intervalle est
calculé à partir des données de CQ recueillies pour les contrôles normaux ou anormaux.
4.3 Comparaison des résultats de contrôle et des limites statistiques spécifiques

Deux limites acceptables sont présentées dans le Tableau 9.
 Au Niveau I (Contrôle Normal), le domaine d’acceptabilité est de 3,7 à 4,3 mmol/l.

 Pour le Niveau II (Contrôle Anormal) il est de 6,7 à 7,3 mmol/l.
Lorsque le résultat de CQ quotidien obtenu avec le contrôle normal est comparé aux limites
attendues, il apparaît que chaque résultat se situe dans ces limites. Ceci indique que le processus
analytique est “sous contrôle” pour le niveau normal le jour du dosage. Quand le résultat de CQ
quotidien obtenu avec le contrôle anormal (potassium élevé) est comparé aux limites calculées pour
un contrôle anormal, le processus analytique montre qu’il est “sous contrôle” chaque jour sauf le
dernier jour (7/11). Du 1er au 6 novembre, les deux niveaux étaient “sous contrôle” et les valeurs de
patients pouvaient être considérées comme fiables. Cependant, le 7 novembre, le laboratoire était
“hors contrôle” pour les taux de potassium anormalement élevés : la valeur obtenue pour le matériau
de CQ (8,0 mmol/l) était en dehors des limites acceptables (6,7 à 7,3 mmol/l). Cela signifie qu’une
erreur s’est produite qui pourrait avoir rendu les résultats de patients anormalement élevés non
fiables. Le laboratoire ne doit rendre aucun résultat de patients avec un potassium anormalement
élevé avant la résolution de l’erreur et un nouveau test de ces échantillons.
Ce qui précède montre combien il est fondamental dans un système de contrôle de qualité d’établir
des limites d’acceptabilité pour chaque niveau de contrôle. La section suivante décrit comment
calculer les statistiques de base nécessaires à la détermination des limites d’acceptabilité d’un
contrôle de qualité d’un laboratoire d’analyses médicales.

Figure 9 Exemple de tableau de CQ avec des résultats de patients

4.4 Calculs et utilisation des statistiques de contrôle de qualité
Calculer une moyenne [x]
La moyenne correspond à la meilleure

estimation par le laboratoire de la valeur vraie
d’un analyte pour un niveau de contrôle
spécifique. Pour calculer la moyenne d’un
niveau de contrôle spécifique, faire la somme
de toutes les valeurs recueillies pour ce
contrôle. Ensuite, diviser la somme de ces
valeurs par le nombre total des valeurs. Par
exemple, pour calculer la moyenne du contrôle
normal (Niveau I) du Tableau 9, trouver la
somme des données {4,0 ; 4,1 ; 4,0 ; 4,2 ; 4,1 ;
4,1 ; 4,2}. La somme [∑] est de 28,7 mmol/l.
Le nombre des valeurs est 7 (n = 7). Par

conséquent, la moyenne d’un contrôle normal
de potassium (Tableau 8) du 1/11 au 7/11 est
de 4,1 mmol/l (soit 28,7 mmol/l divisé par 7).
4.5 Calculer un écart-type

L’écart-type [ET] est un paramètre qui quantifie la dispersion des valeurs entre elles (c’est-à-dire les
valeurs de CQ).
Le terme précision est souvent utilisé. Un autre terme, l’imprécision, est aussi utilisé pour exprimer la
dispersion des valeurs numériques. L’écart-type est calculé pour les contrôles à partir des mêmes
données utilisées pour calculer la moyenne. Le laboratoire peut avoir une estimation des
performances du test à des niveaux de concentration spécifiques. La répétabilité d’un test peut être
bonne (écart-type faible, imprécision faible) ou mauvaise (écart-type élevé, imprécision élevée).
La répétabilité médiocre peut être due au réactif concerné ou à un fonctionnement défectueux.

Dans ce cas, le laboratoire doit résoudre le problème. Dans un laps de temps court, les valeurs des
mesures répétées doivent être aussi proches que possible.
Il est nécessaire d’être particulièrement précis pour les tests qui sont répétés régulièrement pour le
suivi des patients afin de surveiller le traitement ou l’évolution de la maladie. Par exemple, un patient
diabétique dans un état critique peut avoir des dosages de glycémie toutes les deux ou quatre heures.
Dans ce cas, il est important que le dosage du glucose soit précis car un manque de précision peut
causer une perte de fiabilité du test. Si les résultats du test sont trop variables (imprécision élevée,
écart-type élevé), les différents résultats de dosage du glucose peuvent être faux.

Figure 10 Exemple de bonne et de mauvaise précision
L’écart-type peut être aussi utilisé pour vérifier les performances jour après jour.
Par exemple, si durant la dernière semaine de dosage, l’écart-type calculé, dans l’exemple, pour le
contrôle normal de potassium augmente de 0,08 à 0,16 mmol/l, cela indique une sérieuse perte de
précision.
Cette dégradation peut être due à un mauvais fonctionnement du processus analytique. Un examen
du système analytique peut être nécessaire et il faut se poser les questions suivantes :
• Le réactif ou le lot de réactif ont-t-ils été • Les pipettes de prélèvement des échantillons
récemment changés ? et des réactifs fonctionnent-elles correctement
?
• La maintenance a-t-elle été effectuée comme
d’habitude et dans les délais ? • Le technicien a-t-il changé récemment ?
• La lampe nécessite-t-elle d’être nettoyée ou

remplacée ?
Il est très intéressant de voir que certaines pannes peuvent être idenfiées juste en regardant le
résultat des contrôles qualités dans le temps.
Le rôle des Technical Service Support sera d’éliminer tout problème utilisateur et réactifs avant de
faire intervenir un Field Service Engineer

Figure 11 Calcul d’un écart-type pour une série de données.
Pour une série de contrôle tel que {4,0 ; 4,1 ; 4,0 ; 4,2 ; 4,1 ; 4,1 ; 4,2}
ET = 0,082 ou 0,10 (arrondi)
L’écart-type d’une semaine de passage du contrôle normal de potassium est de 0,082 mmol/l. Cette
précision étant maintenant connue, quelques hypothèses peuvent être faites quant à la bonne
performance de ce test
4.5 Tableau de Levey-Jennings & Règles de Westgard

L’écart-type est communément utilisé pour préparer des tableaux de Levey-Jennings (L-J ou LJ).
Le tableau de Levey-Jennings présente les valeurs de contrôle de qualité (série par série ou jour
après jour) chronologiquement sous forme de graphique. Chaque test et chaque niveau de contrôle
possèdent son tableau. La première étape est de calculer les limites de décision. Ces limites sont de
plus ou moins 1, 2 ou 3ET par rapport à la moyenne (les ET sont donnés par le constructeur et
garantie les résultats des test patient si la série patient a été encadré par des CQ, mais les ET peuvent
être modifiés par le Biologiste, pour réduire l’intervalle, on parle alors de resserrement de l’ET).
La moyenne pour le Niveau I du contrôle de potassium dans le Tableau 9 est de 4,1 mmol/l et l’écart-
type est de 0,1 mmol/l.
Les exemples de la formule 11 calculent les limites de CQ à ±1ET, ±2ET et ±3ET.
Calcul des limites du Contrôle de Qualité

Ces intervalles, ainsi que la moyenne, sont utilisés pour construire le tableau de Levey-Jennings
comme le montre la Figure
L’intervalle ± 1ET est de 4,0 à 4,2 mmol/l : L’intervalle ± 3ET est de 3,8 à 4,4 mmol/l :
4,1 – 0,10 (1) = 4,0 4,1 – (0,10) (3) = 3,8
4,1 + 0,10 (1) = 4,2 4,1 + (0,10) (3) = 4,4
L’intervalle ± 2ET est de 3,9 à 4,3 mmol/l :

4,1 – (0,10) (2) = 3,9
4,1 + (0,10) (2) = 4,3
Le Tableau de Levey-Jennings peut être représenté par un graphique représentant une gaussienne
afin d’illustrer la distribution générale des valeurs de contrôle.
Figure 12 Tableau de Levey-Jennings
Figure 13 Distribution relative des valeurs de CQ
Quand un processus analytique est sous contrôle, environ 68% des valeurs de CQ sont comprises
entre ± 1ET (écart-type). De la même manière, 95,5% des valeurs de CQ sont comprises entre ± 2ET
par rapport à la moyenne. Environ 4,5% de toutes les données seront en dehors des limites de ± 2ET
quand le processus analytique est sous contrôle. Environ 99,7% de toutes les valeurs de CQ sont
comprises entre ± 3ET par rapport à la moyenne. Comme seulement 0,3% ou 3 valeurs sur 1000
seront situées en dehors des limites ± 3ET, toute valeur en dehors des ± 3ET sera associée à un état
d’erreur significatif et les résultats de patients ne devront pas être validés.

Explication pour un biologiste :

Certains laboratoires considèrent que toute valeur de contrôle en dehors des limites ± 2ET est hors
contrôle. Ils décident incorrectement que les échantillons de patients et les valeurs de CQ ne sont
pas valides. Une série analytique ne devrait pas être rejetée si une seule valeur de contrôle est en
dehors des limites ± 2ET de CQ et à l’intérieur des limites ± 3ET de CQ. Environ 4,5% de toutes les
valeurs de CQ valides seront comprises dans les limites de ± 2ET et ± 3ET Les laboratoires qui
utilisent les limites ± 2ET rejettent trop fréquemment de bonnes séries. Cela signifie que les
échantillons de patients sont retestés inutilement, que du travail et des matériaux sont gaspillés et
que les résultats de patients prennent du retard inutilement.
4.6 Utiliser un tableau de Levey-Jennings pour évaluer quotidiennement la qualité

de l’automate
Le laboratoire a besoin de prouver que des contrôles sont passés et que les résultats des contrôles
ont été validés assurant la qualité des séries analytiques. Cette documentation est réalisée avec le
maintien des tableaux de bord de CQ et l’utilisation du Tableau de Levey-Jennings sur une base
régulière. Le technicien qui passe le test doit faire attention aux erreurs systématiques et aux erreurs
aléatoires.
4.6.1 Distinguer une erreur aléatoire d’une erreur systématique.

Une erreur systématique est détectée dès qu’il y a changement de moyenne des valeurs de
contrôle. Ce changement dans la moyenne peut être progressif et apparaître comme une dérive ou
il peut être soudain et apparaître comme un décalage.
Dérive Décalage
Une dérive indique une perte progressive de Un décalage survient lorsqu’il y a un

fiabilité dans le système analytique. changement brusque de la moyenne des
Les dérives sont habituellement subtiles. contrôles.
Les décalages dans les données de CQ
représentent un changement soudain et
important, positif ou négatif dans les
performances du système analytique.
Les causes peuvent être multiples :
Les causes peuvent être multiples :
 Détérioration de la lampe de l’automate
 Accumulation progressive de débris  Défaillance ou variation soudaine de la
dans lampe
les tubulures échantillons/réactifs  Changement de formulation du réactif
 Accumulation progressive de débris sur  Changement de lot de réactifs
les électrodes  Maintenance importante de l’automate
 Vieillissement des réactifs  Changement soudain de température
 Détérioration progressive des matériaux d’incubation
de contrôle  Changement de température ou
 Variation progressive de la température d’hygrométrie dans la pièce
de la chambre d’incubation
 Détérioration progressive de l’intégrité  Défaillance dans le système de

du filtre optique prélèvement d’échantillons
 Défaillance dans le système de
distribution des réactifs
 Mauvaise calibration/recalibration
imprécise
Les tableaux suivant schématisent l’allure d’une dérive croissante et d’un décalage croissant.
Figure 14 Décalage croissant et dérive croissante
C’est par l’étude de ce type schéma que nous, Ingénieurs de Services, Ingénieur d’application,
Technicien de Support Technique, pouvons identifier certain type de pannes (Utilisateur ou Machine).
Avec cette méthodologie, nous pouvons désormais visualiser le type d’erreur (Dérive ou Décalage),
après l’action des TSS, je peux me concentrer sur un problème technique et résoudre rapidement et
efficacement le problème qui engendre la panne, même si parfois cela reste un problème d’utilisateur.
Dans ce cas-là, je montre la méthodologie à appliquer pour éviter des contaminations avec les réactifs
etc.
Le rôle d’un FSE est versatile, il est courant de résoudre des problèmes applicatifs sans réel incident
sur la partie technique du dispositif.
4.7 Certifier le bon fonctionnement du dispositif.
Après toute intervention nous devons rendre compte au Biologiste ou Technicien référant, souvent
en nous appuyant sur des faits et des résultats pour certifier que le dispositif fonctionne
4.7.1 Comment certifier le bon fonctionnement le bon fonctionnement du dispositif.

Après une maintenance corrective et préventive, je lance un IQ TEST. Cette IQ test est une solution
étalon, dont nous allons mesurer 30 fois sa valeur au final.
1er étape : la calibration.

La calibration comprend six points sur la courbe, chaque point est mesuré trois fois pour avoir au
total 18 valeurs regroupées en 6 groupes de 3 valeurs.
Figure 15 Calibration IQ Test
Plusieurs informations sont dans ce tableau :
 Coefficient de corrélation : plus ce chiffre est proche du chiffre 1 plus les points
expérimentaux sont proche des points théoriques, ça donne une idée de la qualité de la
calibration.
 Réponse : c’est la valeur de l’intensité absorbé par l’échantillon, en Ampère, récupéré par la
photodiode
 Concentration de calcul : c’est la concentration expérimentale en mg/l calculé grâce à la
réponse d’intensité

 Concentration donnée : c’est la concentration théorique que nous devons obtenir dans un
cas idéal.
 Erreurs : dans ce tableur, il est marqué si la valeur obtenu est hors gamme ou si aucune
information est signalée, ce qui veux dire que notre calibration est juste.
Nous pouvons passer à la mesure des 30 échantillons
Exemple de mauvaise calibration :
Figure 16 Mauvaise calibration IQ Test
2eme étape : les contrôles
Figure 17 Résultats du IQ Test
Ce tableau présente plusieurs informations :

N = la population du test
Moy : La moyenne des 24 échantillons

ET : l’écart type sur les 24 échantillons
CV : Coefficient de variance, il doit être inférieur à 3% pour garantir le bon état de la machine
Pour finaliser, lorsque ce test est correct, nous, FSE, pouvons certifier le bon fonctionnement de la
machine. Malgré cette intervention si le problème est toujours présent, ça veut dire que les réactifs
sont contaminés.
Une intervention type Applicative commence, avec de nouveau réactifs, de nouvelles calibrations, de
nouveaux contrôles qualités.
Voici la difficulté du métier d’Ingénieur de Service, être à la fois compétent en technique qu’en
applicatif. Savoir reconnaitre le type de pannes (Automates ou réactifs/utilisateur) puis pourvoir
l’expliquer (et former l’utilisateur si besoin) afin qu’il se ne reproduise pas.
J’espère qu’après ce rapport assez dense, vous avez pu toucher du doigt mon métier actuel.

Chapitre Final Synthèse et Conclusion
Pendant ce stage d'une durée de 4 mois au sein de The Binding Site France, J'ai pu apprendre une
multitude de points essentiels sur la vie en entreprise et aussi confirmer mon avenir dans le domaine
technique et applicatif sur les dispositifs de santé.
Le poste d'ingénieur en home office fait mûrir, car nous sommes vraiment en autonomie, et grâce à
ça j'ai pu apprendre de nouvelles méthodes de travail, être toujours plus rigoureux. Pour cela il faut
avoir une organisation sans défaut. Je m'efforce de tenir cette cadence qui me plaît.
Les compétences du Master ont été un véritable atout pour moi car nous avons un cursus scientifique
très développé et nous pouvons comprendre et analyser des équations, une calibration, des résultats,
comprendre le fonctionnement d'un dispositif complexe. Mais aussi nous pouvons discuter aisément
avec un biologiste et un physicien. Nous pouvons aisément adapter notre langage.
Les objectifs que je m'étais fixé en début de stage je pense les avoir atteints. Effectivement je pense
avoir un savoir-faire technique largement supérieur à celui que j'avais en début de stage. Je
comprends plus facilement les pannes ou les problèmes utilisateur. Je communique plus facilement
avec le biologiste ou la Technicienne référente. J'ai acquis un langage scientifique (Biologie) me
permettant de discuter avec eux et sans écart de compréhension.
Mon autonomie s’est améliorée et la gestion de mes interventions est beaucoup plus rigoureuses car
j'ai enrichi mon savoir-être et savoir-faire. Pour terminer sur cette thématique j'analyse plus facilement
l’automate et les automatismes de dépannage.
La plus belle finalité pour moi et que j'ai été recruté en CDI début juin en tant qu'ingénieur de service.
Je compte mettre toute ma volonté et toute ma rigueur dans ce travail. Les perspectives d'avenir sont
:
 Formation avancée en Angleterre.

 Commencer à me préparer pour un nouveau dispositif qui sortira d'ici 2021 (Spectrométrie de
Masse)

Annexe :
Fiche de poste Ingénieur de Service

Formation faite en Angleterre
Pour être Ingénieur chez The Binding Site, nous devons être formés afin de valider un examen,
chaque formation dure 5 jours. Elle est suivie à la maison-mère en Angleterre.
 Deux formations techniques : Optilite et SPAplus

 Une formation Applicative : Optilte
Secteur sous ma responsabilité
Secteur en vert : 28 Automates

Rapport d’intervention après maintenance préventive







RESUME
En 2018, plusieurs dispositifs médicaux
provenant de constructeurs peuvent réaliser
du diagnostic de pathologie à l’aide de
protéines spécifique. Ce document a pour but
d’expliquer aux clients avec des arguments
concret la différence entre les deux méthodes
de mesure et le rassurer sur son choix lors de
l’achat.
Module HMSN 404

Etudiant en Master Ingénierie des Dispositifs de
Santé.
Ingénieur de Service chez The Binding site
TURDIMETRE ET
NEPHELEMETRE
Distinguer pour mieux choisir

Introduction
« Le marché mondial des technologies de diagnostic in vitro devrait atteindre 102,4 milliards de
dollars d’ici 2022, passant de 74,1 milliards de dollars en 2017 à un taux de croissance annuel
composé (TCAC) de 6,7%, de 2017 à 2022, celui du diagnostic via des protéines spécifiques
représente plus de 15 Milliard » [1].
En 2018, plusieurs dispositifs médicaux provenant de constructeurs peuvent réaliser du diagnostic

de pathologie à l’aide de protéines spécifique. Ce document a pour but d’expliquer aux clients, par
des arguments concret et scientifique la différence entre les deux méthodes de mesure et les rassurer
sur leurs choix lors de l’achat et de l’installation.
Plusieurs études seront présentées dans cette bibliographie, avec des constructeurs reconnus
comme Roche, Randox et The Binding Site.
The Binding Site est une société spécialisée dans la vente de réactif pour suivre et/ou diagnostiquer
des Myélomes Multiples, les reactifs sont prévu pour fonctionner en harmonie avec le l’automate de
laboratoire Optilite et SPAplus
Les dispositifs de santé citées sont vendus pour des hôpitaux et des laboratoires de biologie, cet
appareil augmente les capacités de l’établissement dans le diagnostic in vitro.
« Diagnostic in vitro : « Instrument destiné par son fabricant à être utilisé in vitro dans l’examen
d’échantillons provenant du corps humain, dans le but de fournir une information, notamment, sur
l’état physiologique ou pathologique d’une personne ou sur une anomalie congénitale
Les produits dénommés "réactifs" appartiennent notamment à cette catégorie » [1].
De quoi s’agit-il ?
La maladie de Kahler, aussi connue sous le nom de myélome multiple, est une affection de la moelle
osseuse provoquée par une prolifération incontrôlée d'un type précis de cellules sanguines de la
famille des globules blancs : les plasmocytes. En temps normal, ces cellules sont spécialisées dans
la fabrication d'anticorps.
Cette maladie doit son nom au médecin autrichien Otto Kahler qui l’a décrite pour la première fois il
y a une centaine d’années.
La maladie débute par une seule cellule anormale, qui se divise et prolifère de manière incontrôlée.
Les cellules ainsi produites portent la même anomalie et se divisent à leur tour de manière
incontrôlée.
Comme elles sont toutes apparentées, elles ne synthétisent plus qu’un seul type d’anticorps
spécifique (ou une fraction de celui-ci). Comme les anticorps sont des protéines, celui qui est produit
porte le nom de "protéine M" (pour Myéline protéine) ou paraprotéine. Si un fragment bien défini
(aussi appelé 'chaîne légère') de cette protéine est trouvé dans l'urine (ou le sérum sanguin), on parle
de protéine de Bence-Jones.
Il est également possible qu'un plasmocyte se mette à proliférer à cause du cancer, mais sans
produire de protéine M ou de protéine de Bence-Jones. Dans ce cas, on parle d'un 'myélome multiple
non sécrétant'.

Effet sur les os

La maladie de Kahler a un effet sur les os. En effet, les plasmocytes malins produisent également
une substance favorisant la destruction du tissu osseux. Il en résulte une décalcification en certains
endroits du squelette, ce qui donne naissance à des points de moindre résistance au niveau de l’os.
De (petites) fractures peuvent aisément se produire à ces endroits.
Effet sur les autres cellules sanguines
En raison de leur nombre important, les plasmocytes malins prennent peu à peu la place des autres
cellules sanguines (plasma, globules rouges, etc.) normalement présentes dans la moelle osseuse.
De ce fait, la production d'autres anticorps nécessaires pour assurer la défense de

l’organisme diminue.
De plus, le manque de globules rouges, de globules blancs et de plaquettes peut entraîner les
affections suivantes :
 Anémie
 Sensibilité accrue aux infections
 Risque accru d’ecchymoses (bleus)
 Temps de saignement prolongé des petites plaies
 La maladie de Kahler en chiffres
La maladie de Kahler est un cancer relativement rare. En Belgique, environ 750 nouveaux cas sont
enregistrés par an. Il touche proportionnellement davantage les hommes que les femmes, mais cette
différence tend à se réduire depuis quelques années. Cette maladie atteint principalement
les personnes âgées de plus de 60 ans et survient rarement avant 40 ans.
Epidémiologie
En France, environ 4000 nouveaux cas de myélome multiple sont diagnostiqués chaque année.
L’âge médian au moment du diagnostic est de 70 ans, cependant environ 40 % des patients ont
moins de 65 ans (chiffres réseau des registres de cancer français, Institut de veille sanitaire, Institut
national du cancer). Il n’existe pas à l’heure actuelle de cause connue. Cette maladie n’est ni
contagieuse ni héréditaire.

Turbidimétrie face à la Néphélémétrie

Information issu d’une étude faite par Randox [Immunoturbidimetry Versus Nephelometry]
« Les méthodes d'immunoturbidimétrie sont devenues la principale technique pour effectuer des tests
de protéines. La transition de la néphélométrie a été prudente, mais elle augmente à mesure que les
laboratoires bénéficient de la comparabilité et de la souplesse de l’immunoturbidimétrie
L'immunoturbidimétrie et la néphélométrie mesurent toutes deux la turbidité d'un échantillon pour

déterminer le niveau d'un analyte. Lors de l'addition du réactif de dosage, les anticorps et l'antigène
se regroupent pour former un complexe immun qui précipite, augmentant la turbidité de l'échantillon.
Lorsque la lumière est passée à travers la solution réactionnelle, une partie de la lumière est diffusée
par l'échantillon, une partie de la lumière est absorbée par l'échantillon et le reste traverse
l'échantillon.
L'immunoturbidimétrie mesure l'absorbance de la lumière par l'échantillon, la néphélométrie mesure

la lumière diffusée à un angle fixe. Le niveau d'analyse est déterminé par comparaison avec un
calibrateur de concentration connue.
Les néphélémètres sont des analyseurs dédiés uniquement capables d'effectuer ce type d'analyse.
En outre, ils sont lents, ont des coûts de consommation élevés et nécessitent un personnel hautement
qualifié. Des tests immunoturbidimétriques sont effectués sur des analyseurs cliniques de routine
polyvalents, rapides, rentables et offrant une plus grande stabilité des réactifs. Le principal avantage
de la néphélométrie est sa sensibilité, mais l'immunoturbidimétrie par latex a permis de combler cette
lacune. Les tests immunoturbidimétriques constituent une alternative de plus en plus acceptée à la
néphélométrie pour des dosages protéiques spécifiques. Les graphiques ci-dessous montrent la
corrélation étroite entre les tests immunoturbidimétriques Randox et la néphélométrie.
Réactifs : tous les tests patients ont été réalisés avec les réactifs Randox et les Turbidimètres
Randox » [2]
Turbidimètre Randox :

Graphique : Corrélation entre l’immunoturbidimétrie et la néphélémétrie [2]
Axe des y : Randox est un Turbidimètre de chez Randox

Axe des x : Néphélémètres concurrent (trois différents Néphélémètres ont participaient à l’étude)
Interaction entre un faisceau lumineux et une particule
Dans tous les cas, nous avons une excellente corrélation avec une valeur de R² de ≥ 0,935.

Etude faite par le Groupe Roche, document interne, Correlation study turbidimetry versus
nephelometry
« L’étude de corrélation entre turbidimétrique et les technologies néphélémétriques ont été

complétées le Module Roche cobas c 501, le Siemens BN II et le systèmes Abbott Architect pour 22
applications
Ce sont 3 Sites européens qui ont réalisé les tests :
Protocole de test :
L'objectif de l'étude est de confirmer la parité de performance entre turbidimétrie et néphélométrie

sous routine conditions de laboratoire. Exemple ci-dessous systèmes d'analyse pour turbidimétrie et
néphélométrie ont été sélectionnés : la plateforme Cobas C de Roche et le Système Siemens BN II.
22 tests ont été évalués
Les résultats de routine obtenus de l’architecte Abbott ont également été utilisés pour recevoir
d'autres corrélations des mesures.
Les expériences de corrélation ont été effectuées en analysant en moyenne 90 échantillons par
routine par paramètre à pour des niveaux correspondant à faible, normal et élevé physiologique
concentrations. Les paramètres évalués étaient :
Les résultats du test ont été comparés aux résultats immunonéphélémétriques méthodes sur le
Siemens BN II.
La comparaison des méthodes a été effectuée par calcul de l'analyse de régression Passing /
Bablok » [3].

« Passing et Bablok (1983) ont mis au point une méthode de régression qui permet de comparer deux
méthodes de mesure (par exemple deux techniques de mesure de concentration d'un analyte) qui
s'affranchit des hypothèses lourdes et ici inappropriées de la régression linéaire simple classique »
[4]
Résultats détaillés
« Au total, 6 000 résultats provenant de 2 000 échantillons et 2 méthodes différentes (turbidimétrie,

néphélométrie) ont été générés.
Pour presque tous les tests sélectionnés, les comparaisons de méthodes effectuées avec Siemens
BN II et Abbott Architect ont démontré une excellente corrélation (> 0.975) et n'a pas montré d'effet
"méthode utilisateur".
Le résultat de la comparaison des méthodes turbidimétriques et néphélémétriques prouve que la

différence dans la performance analytique est invisible. Les méthodes étaient précises et bien
corrélées entre les sites impliqués et les différents systèmes utilisés. » [3]

Conclusion et observation
Dr. J. Lotz, UNIVERSITÄTSMEDIZIN Mainz,

D-Mainz
« Le but de l’étude était de comparer la détermination de plusieurs protéines spécifiques analysées
par un néphélométrie (BN II) et deux turbidimètre (cobas c 501 modules / Architect c8000).
En général, la comparaison des essais turbidimétriques, ainsi que des analyses turbidimétriques et
néphélémétriques sont excellentes (r> 0,98), sauf pour RF, ASL et antitrypsine (r> 0,93). Cela indique
une forte cohérence entre les résultats du test. Cependant, certains de ces tests montrent différences
dans la pente de la régression linéaire.
Pour le dosage turbidimétrique de la ferritine (module cobas c) > 1,10 a été calculé pour la
néphélométrie, ainsi que pour le second dosage turbidimétrique (Architect). Mais un écart de 10%
n'est pas pertinent à des fins médicales.
Le titre ASL et concentrations en haptoglobine (Architect) sont significativement inférieurs aux

résultats obtenus par néphélométrie ou le test turbidimétrique comparé (module cobas c). Les deux
tests turbidimétriques aboutissent à concentrations plus faibles d'IgG (pente : 1,17, 1,25 resp.), mais
une corrélation excellente (r = 0,99 pour les deux).
En résumé, toutes les méthodes et tous les tests semblent détecter les mêmes analytes et montrent
une très bonne corrélation pour la majorité. Bien que différents principes de dosage, les
normalisations et les anticorps variables sont utilisés, tous les tests sont fiables pour l'utilisation
clinique » [3].

Dr. M. Trummler, Bio-Analytica AG, CH-Luzern
« La quantification de différentes protéines spécifiques est une partie principale de la charge de travail
quotidienne du laboratoire. Donc, nous avons été très heureux de voir que pour presque tous les
paramètres mesurés par un turbidimètre ont fourni des résultats très fiables par rapport aux autres
analyseurs. Il y en avait quelques résultats divergents lors de la comparaison d'analytes "difficiles"
comme le facteur rhumatoïde, mais néanmoins ils sont satisfaisants à des fins cliniques. » [3]
Dr. L. Esmilaire, Hôpital Henri Mondor, F-Créteil,pour AAGP
« La corrélation a été réalisée en 2 séries de 2 séries, l'un sur la série des analyseurs cobas® 6000
et l'autre sur l'analyseur BN II. Les échantillons ont été décongelés et centrifugé. Les étalonnages et
les contrôles ont été effectués avant les dosages.
La corrélation est très correcte. R² = 0,9974

Pente de la droite de régression = 1.000 » [3]

Etude faite par le Groupe Binding Site UK, document interne, MKG762.E
Turbidimètres - Systèmes d'immunoanalyse fiables et polyvalents afin de remplacer les

néphélémètres dans les laboratoires cliniques.
« Les SPAPLUS® et Optilite® sont des systèmes de dosage immunologique turbidimétrique dédiés
pouvant fournir plates-formes uniques pour la consolidation de charges de travail protéiques
spécifiques. Cela permet aux utilisateurs d'améliorer le fiabilité et qualité des résultats, en plus
d'améliorer l'efficacité du laboratoire. Ces analyseurs sont remplacés les analyseurs
néphélémétriques existants, principalement en raison de leur fiabilité et de la large gamme de des
tests pouvant être appliqués aux systèmes.
Bien que les principes fondamentaux des essais turbidimétriques et néphélémétriques soient
équivalents, de nombreux les clients nous interrogent sur les différences entre ces systèmes. Ce
guide donne un aperçu des similitudes et les différences entre ces méthodologies et compare certains
des résultats de Binding Site Réactif avec des dosages néphélémétriques équivalents. » [5]
Turbidimétrie - flexibilité dans la conception des essais
« Traditionnellement, le principal avantage de la néphélométrie sur la turbidimétrie était sa sensibilité

et sa capacité à mesurer de faibles concentrations d'analyte avec de petites tailles de particules.
Cette différence de sensibilité a maintenant contourné par l’application de la technologie du latex et
pour la majorité des applications cliniques les deux méthodes sont comparables en termes de
sensibilité.
Par conséquent, les avantages perçus de la néphélométrie n’existent plus.
La turbidimétrie présente un avantage certain par rapport à la néphélométrie, car la configuration de

l'instrument permet l'application de tests colorimétriques. Cela permet aux développeurs de tests
d’apporter de nouvelles des tests sur des systèmes automatisés qui ne seraient pas possibles avec
un système néphélémétriques. Binding Site a utilisé cette flexibilité pour ajouter des tests
colorimétriques CH50 à deux plates-formes automatisées (SPAplus et Optilite).
Cette combinaison de sensibilité et de polyvalence est le facteur déterminant de la montée en

puissance des systèmes de turbidimétrie. » [5]
Automates spécialisés en Turbidimétrie :
SPAplus (The Binding Site) Optilite (The Binding Site)

Automates spécialisés en Néphélémétrie
l’Immage™ (Beckman- BN Prospec™ (Dade-Behring) BN II (Siemens)

Coulter)
Graphique : Tableaux comparatifs pour un petit nombre de ces tests sont montrés ci-dessous
démontrant la performance équivalente du SPAPLUS avec des automates néphélométriques
Excellente corrélation
Dans tous les cas, nous avons une excellente corrélation avec une valeur de R² de ≥ 0,97.

Bibliographie
[1] https://ansm.sante.fr/Produits-de-sante/Dispositifs-medicaux-de-diagnostic-in-vitro
[2] Randox 2016. Immunoturbidimetry Versus Nephelometry For the detection of proteins, 3 pages
[3] Roche 2011.Correlation study turbidimetry versus nephelometry Turbidimetry setting new
standards: Consolidation without compromise, 16 pages
[4] [https://www.xlstat.com/fr/solutions/fonctionnalites/regression-passing-bablok]
[5] The Binding Sites, Oct 2014, Turbidimetry Vs. Nephelometry, 2 pages

Master 2 IDS - Tournié Christophe

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Master 2 IDS - Tournié Christophe

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Délivré par l´Université de Montpellier

Préparée au sein de Binding Site

Spécialité : Ingénierie des Dispositifs pour la Santé

Présentée par Tournie Christophe

Apprentissage du métier « Ingénieur de

Duration du stage : 01/01/2018 et 30/04/2018

Encadrant de stage : Philipe Loison

A la fin de ce stage, j’espère avoir acquis :

Je vous souhaite une excellente lecture.

1 Rapport de stage confidentiel

Ce stage m’a donné la possibilité de me confirmer et de découvrir les multiples perspectives

2 Rapport de stage confidentiel

UM2 : Université de Montpellier II

3 Rapport de stage confidentiel

Table des matières

Introduction à la société The Binding site .......................................................................................... 7

L ‘industrie du Diagnostic in vitro ...................................................................................................... 7

The Binding Site ............................................................................................................................... 7

Histoire de la société ..................................................................................................................... 7

Organisation de la société ............................................................................................................. 8

Gammes de produits et services proposés .................................................................................. 11

Chapitre 1 : La science à la base des produits Binding Site ............................................................ 13

1.2.2 Définition d’un anticorps : .............................................................................................. 13

1.3.1 Aperçu des gammapathies monoclonales ..................................................................... 15

1.3.2 Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (GMSI) ................................ 16

1.3.3 Myélome multiple indolent (MMI) ................................................................................... 16

1.3.4 Myélome multiple (MM) ................................................................................................. 17

1.4 Les troubles rénaux et plasmocytaires ................................................................................. 17

1.4.1 Aperçu des troubles rénaux et plasmocytaires .............................................................. 17

1.4.2 Amylose AL ................................................................................................................... 18

1.5 Immunodéficience ................................................................................................................ 18

1.5.1 Immunoglobulines et sous-classe d'immunoglobulines : ............................................... 18

1.5.2 Protéines du Complément ............................................................................................. 18

1.5.3 Réponse vaccinale ........................................................................................................ 18

1.5.4 Dépistage du plasma .................................................................................................... 18

Chapitre 2 Les réactifs à succès chez Binding Site ......................................................................... 20

2.1 Le réactif Hevylite ................................................................................................................. 20

2.1.1 Qu’est-ce que Hevylite .................................................................................................. 20

2.1.3 Compréhension des tests Heavylite .............................................................................. 21

4 Rapport de stage confidentiel

2.1.4 Utilisation Hevylite ......................................................................................................... 21

2.2 Le reactif Freelite® ............................................................................................................... 22

2.2.1 Qu’est-ce que Freelite ................................................................................................... 22

2.2.2 Compréhension des tests :............................................................................................ 23

2.2.3 Utilisation de Freelite ..................................................................................................... 23

Chapitre 3 : L’analyseur de protéine spécifique « Optilite »............................................................. 25

3.1 Introduction de l’Optilite ........................................................................................................ 25

3.2 L’Optilite, un turbidimètre ..................................................................................................... 25

3.3 Principaux composant de l’analyseur ................................................................................... 26

3.3.1 Distributeur d’échantillons ............................................................................................. 26

3.3.2 Distributeur de réactifs .................................................................................................. 26

3.3.3 Incubateur ..................................................................................................................... 26

3.3.4 Portoirs d’échantillons et de calCQ ............................................................................... 26

3.3.5 Mélangeur ..................................................................................................................... 26

3.3.6 Chargeur de cuvettes .................................................................................................... 26

3.3.7 Disque de réactifs ......................................................................................................... 27

3.4 Principe de la mesure photométrique ................................................................................... 27

3.4.1 Principe de fonctionnement technique pour des analyses. ........................................ 27

3.4.2 Le photomètre ........................................................................................................... 27

3.4.3 La mesure de l’intensité absorbé ............................................................................... 28

3.4 Principe de mesure : Réaction antigène-anticorps ............................................................ 29

3.5.1 La liaison Ag Ac ......................................................................................................... 29

3.5.2 Reaction Ag Ac .......................................................................................................... 29

4 Chapitre 4 Problématique : Les contrôles qualités hors gamme............................................... 30