Université d’Abomey Calavi

Département de biochimie Biologie Moléculaire

Licence de Biochimie Biologie Moléculaire et Applications

Thème :

LES CENTRIFUGEUSES
Réalise par:
BOKPE M Fresnel :18299318 Enseignant:
HOUIGNALO Israël : Dr AMOUSSA Madjid
TANDJIEKPON Olivier : 19927619
TEVOEDJRE Bernard :18002918
VODONOU Stella: 10446919
Année scolaire:2020-2021
 PLAN

I. Introduction
II. Généralité
III. Eléments de centrifugeuse
IV. Les différentes types de centrifugeuses
V. Principe de fonctionnement
VI. Entretien et mode d’utilisation
VII. Conclusion

2
 INTRODUCTION

Le progrès de la science a permis de mettre au point plusieurs

appareils importants dans différents domaines .

Le monde de la biologie ne fut pas épargnés et beaucoup

d’appareils sont inventés pour faciliter les recherches et aider le
biologiste . C’est le cas de la Centrifugeuse .

Cet appareil présente des caractéristique bien spécifique et l’actuel

présentation nous permettra de plus le découvrir.

3
 Généralité

Une centrifugeuse est un appareil qui permet d'impulser un

mouvement de rotation à forte vitesse pour, mélanger un contenant
et ainsi séparer des molécules . Cette technique de séparation est
appelés centrifugation et est basée sur le principe de la différence
de densité des phases en leurs soumettant à une force centrifuge.

4
 Généralité

Les centrifugeuses ont de multiples applications dans de nombreux

domaines. Elles permettent :

- en biochimie: la séparation du plasma ou du sérum sur lesquels

seront pratiqués différents dosages, la clarification des urines pour
dosages spécifiques, etc.

- en hématologie: la détermination de l’hématocrite, les dosages

des facteurs plasmatiques de la coagulation.

5
 Généralité

- en immunohématologie: détermination des anticorps irréguliers, des

groupes sanguins, lavage des hématies pour les débarrasser du
plasma, etc.

- en bactériologie: pour la cytologie de liquides de différentes origines

, etc.

- en parasitologie: pour des épreuves de concentration des parasites,

etc.

- en toxicologie, pharmacologie pour effectuer une séparation solide

liquide sur le matériel végétale
6
 Généralité

• En biologie moléculaire : on pourra considérer l’achat de

centrifugeuses adaptées à l’extraction d’ADN par exemple. Dans
ce cas, selon le type d’échantillons, il peut être nécessaire de
disposer d’une centrifugeuse réfrigérée. Les centrifugeuses
réfrigérées sont utilisées pour traiter des échantillons qui
nécessitent d’être maintenus à une température constante.

7
 Eléments d’une centrifugeuse

Les centrifugeuses sont des appareils technologiques et dont la

structure interne peut impliqués plusieurs réseaux électriques.
Néanmoins on y retrouve certains constituants qu’un biologiste doit
maitriser car il est invité à le manipuler à tous moments.

8
 Eléments d’une centrifugeuse

Comme différents parties importants on a:

• Rotors: Ce sont les compléments indispensables des

centrifugeuses . On distingue des rotors angulaires et des rotors
libres. Ces deux types de rotors présentent chacun des avantages
spécifiques, notamment en terme de vitesse de rotation et de
positionnement du sédiment au fond du tube.

9
Eléments d’une centrifugeuse
• Nacelles:

Les nacelles sont des compléments indispensable des rotors libres

accompagnant les centrifugeuses. Très important dans le choix
global de votre matériel de centrifugation , ils déterminent
notamment le nombre de tubes pouvant être centrifugés. Elles sont
généralement complétées par des portoirs ou adaptateurs
permettant le maintien des tubes. Certains modèles acceptent un
couvercle, nécessaire pour la manipulation de certaines substances.

10
Eléments d’une centrifugeuse

• Les tubes à centrifuger:

Ce sont des éléments essentiels pour l’isolation, la stratification ou la

séparation en gradients de densité d’échantillons lors de l’utilisation de
centrifugeuses. Ils possèdent de multiples applications dans le
domaine de la biologie (en particulier la culture cellulaire et la
microbiologie), la chimie, les soins de santé cliniques et
l’environnement industriel en général. Les tubes à centrifuger sont
spécialement conçus pour résister à une force centrifuge relative
(FCR) très élevée : jusqu’à 20 000 x FCR pour certains types de tubes.

11
Eléments d’une centrifugeuse

Les tubes en plastique sont également disponibles en versions

teintées pour protéger les échantillons sensibles à la lumière . Les
tubes à centrifuger sont également fabriqués en verre, en particulier
en verre borosilicaté. Les tubes à centrifuger en verre ont divers
avantages : ils sont réutilisables et durables, tout en possédant une
bonne résistance thermique et aux produits chimiques avec de
faibles taux de matières extractibles.

12
Eléments d’une centrifugeuse

Rotor Nacelles

13
Eléments d’une centrifugeuse

Tubes à centrifuger ensemble nacelles-rotor-tubes

14
Eléments d’une centrifugeuse

• Les charbons: ce sont des éléments présents au niveau du

moteur de la centrifugeuse qui permet à la machine de bien
centrifuger . Elle est changeable tous les 6 mois ou 1 ans selon la
qualité.

15
 Les différentes types de
centrifugeuses

Ils existent plusieurs sortes de centrifugeuses.

On distingue :

• Petite centrifugeuse : généralement à rotor fixe, d’inclinaison de 15

à 45 degrés, légère, compacte, facilement transportable, de faible

consommation d’énergie. Inconvénient : accepte un nombre limité de

tubes et de faible volume.

16
Les différentes types de
centrifugeuses

Petite centrifugeuses

17
 Les différentes types de
centrifugeuses
• Centrifugeuses dites “standard” : elles sont souvent
polyvalentes et peuvent être utilisées pour l’analyse d’urine, de
selles, etc. Elles disposent d’une vitesse de rotation comprise
entre 5 000 et 15 000 tours/min.

18
 Les différentes types de
centrifugeuses

Micro-centrifugeuses : servent en général pour de petits

volumes d’échantillons , comme des tubes capillaires par exemple.
Elles sont principalement utilisées pour l’analyse du sang , dans la
préparation d’échantillons dans la recherche : par exemple pour les
protocoles d’extraction de l’ADN. Leur vitesse de rotation est
supérieure à 10 000 tours/min. Ces centrifugeuses ont une
conception compacte. Inconvénient : faible volume traité.

19
Les différentes types de
centrifugeuses

Micro-centrifugeuses

20
 Les différentes types de
centrifugeuses
• Centrifugeuse de paillasse : robuste, endurante, d’assez
grande capacité (jusqu’à 4x100ml), pouvant tourner à 5000-6000
tours/mn. C’est la centrifugeuse de base de tout laboratoire de
biologie clinique. Certains modèles peuvent être réfrigérés
permettant ainsi de centrifuger des substances fragiles comme

certains facteurs de coagulation.

21
Les différentes types de
centrifugeuses

Centrifugeuse de paillasse

22
 Les différentes types de
centrifugeuses

Ultracentrifugeuses : ce sont des centrifugeuses à très grande

vitesse. Elles sont généralement dédiées à des analyses pointues
dans des laboratoires spécialisés ou dans le cadre de la recherche.
Leur vitesse de rotation est comprise entre 50 000 et 100 000
tours/min. Les Ultracentrifugeuses sont complexes et couteuses

23
Les différentes types de
centrifugeuses

Ultracentrifugeuse
24
 Les différentes types de
centrifugeuses
• Centrifugeuse sur pieds: permet de traiter de gros volumes ou
un nombre très important de tubes. Sa vitesse de rotation élevée
est de 30 000 t/min. elles sont souvent réfrigérées. Inconvénient :
poids important

• Centrifugeuse manuelle : fonctionne grâce à une manivelle

actionnée par l’homme. Leur vitesse de rotation est de 3 000
tours/min maximum. Elle a l’avantage de fonctionner sans
électricité.

25
Les différentes types de
centrifugeuses

Centrifugeuse sur pieds Centrifugeuse manuelle

26
 Principe de fonctionnement

Une centrifugeuse est un appareil destiné à imprimer une force

centrifuge, grâce à un mouvement de rotation, à un mélange
généralement liquide/solide. La force centrifuge est une accélération
qui s’exerce vers l’extérieur de l’axe de rotation et permet la
sédimentation au fond du tube des particules les plus lourdes, le
liquide plus léger est le surnageant.

27
 Principe de fonctionnement

• La rotation est créée par un moteur électrique entrainant un rotor,

le tout dans une enceinte solide.

• Le rotor est en général composé de quatre branches sur

lesquelles sont articulées des nacelles. Chaque nacelle reçoit un
plot de centrifugation dans lequel sont placés des tubes à
centrifuger dont le nombre et le volume dépendent du domaine
d’application.

28
 Principe de fonctionnement

• La séparation des composés d'un mélange est réalisable par

décantation, sous l'action de la seule gravitation mais elle nécessite
parfois une longue durée pour acquérir de bons résultats et est donc
souvent inefficace. Il est donc plus efficace d'utiliser la centrifugation.

• Une particule soumise à un champ gravitationnel tend à se déplacer

dans ce champ jusqu'à ce qu'elle rencontre une résistance capable
de l'arrêter complètement. Ce principe fondamental de physique est
très utilisé en biochimie pour séparer des précipités, des cellules, des
organites et même des macromolécules.

29
 Principe de fonctionnement

En mettant une préparation biochimique dans le rotor d'une centrifugeuse et

en faisant tourner celui-ci, on génère une accélération qui va pousser les
particules qui la composent vers l'extérieur du rotor, c'est-à-dire le fond du
tube à centrifuger. La vitesse avec laquelle se déplaceront ces particules est
proportionnelle à

• la force gravitationnelle à laquelle la particule est soumise

• la masse de la particule

• la différence entre la densité de la particule et celle du solvant, et

inversement proportionnelle à la friction avec le milieu, en fonction de la
taille et à la géométrie des particules.
30
Principe de fonctionnement

Au cours de cette opération de séparation, les composés dans le

fluide situés à une distance r de l'axe de rotation sont soumis à
différentes forces :

• La force de pesanteur descendante Fp

• La poussée d'Archimède ascendante Fa

• Une force de friction Fv

• La force centripète F'c

• La force centrifuge Fc
31
Principe de fonctionnement

La séparation s'opère par l'action de la force centrifuge Fc sur les

composés. Cette force centrifuge, exprimée en newtons, est donnée
par la relation Fc = mrω² dont :

• La masse m du composé à séparer

• La distance r du tube à l'axe de rotation de la centrifugeuse

• La vitesse angulaire ω exprimée en radians par seconde ou en

tour par minute.

32
Principe de fonctionnement

La centrifugation fait appel à la force centrifuge exercée sur les

particules incluses dans la solution, afin de ségréguer certaines
composantes. Cette séparation s’effectue selon la densité des
particules. La force exercée par l’accélération à haute vitesse de la
solution à séparer est régie par la loi de Stokes :

33
Principe de fonctionnement

Cette loi permet de calculer la vitesse de sédimentation des

particules. Dans cette équation, la composante vs est la vitesse de
sédimentation. Le r est le rayon de la particule en solution. Le Δρ
est la différence de densité entre la particule et le milieu où la
particule est contenue. Le ‘’g’’ est l’accélération due à la force
centrifuge dans la centrifugeuse. Le η est la viscosité de la solution.

34
 Entretien et Mode
d’utilisation
L’installation d’une centrifugeuse se fait généralement en présence
d'un technicien de la société :

• L'emplacement doit être stable, capable de supporter les

vibrations

• L'environnement ne doit être ni poussiéreux, ni corrosif

• L'alimentation électrique doit être compatible avec les

caractéristiques techniques du matériel

35
 Entretien et Mode
d’utilisation
• Une centrifugeuse doit être tenue propre et régulièrement
désinfectée. En cas de casse accidentelle d’un tube dans la cuve,
nettoyer à l’eau abondamment, après avoir enlevé soigneusement
les débris de tube, puis désinfecter par une solution de javel,
rincer et sécher.

• Graisser régulièrement les supports des nacelles pour une bonne

mobilité de celles-ci pendant la centrifugation

36
 Entretien et Mode
d’utilisation
Le personnel utilisateur (technicien de laboratoire, aide de laboratoire,

biologiste) doit avoir suivi une formation à l’utilisation et à la maintenance de

l’appareil dispensée par le constructeur, son représentant local agréé ou par

une personne habilitée.

Précautions d’utilisation

• Le personnel doit appliquer les consignes d’utilisation préconisées par le

constructeur.

• Port de gants obligatoire pour la protection du personnel

37
 Entretien et Mode
d’utilisation
• Une condition impérative : équilibrer le chargement du rotor, c’est-
à-dire que chaque plot doit avoir le même poids . Un déséquilibre
peut avoir pour conséquence la rupture de l’axe et l’expulsion du
rotor à grande vitesse.

• Pour les modèles non équipés de sécurité de blocage de

couvercle, il est impératif de ne pas ouvrir le couvercle lorsque la
centrifugeuse est en rotation.

38
 Entretien et Mode
d’utilisation
Mode opératoire

• Soulever le capot de la centrifugeuse

• Veiller à l'équilibrage statique et dynamique

• Abaisser et verrouiller le couvercle : un dispositif de sécurité

empêche le démarrage si le verrouillage est incorrect

• Choisir la durée de centrifugation, en règle générale, 10 mn

• Sélectionner la vitesse de centrifugation en tr/mn, en principe

5 à 10 000trs/mn
39
 Entretien et Mode
d’utilisation
• Presser le bouton de commande de démarrage

• L'arrêt est automatique quand le temps de centrifugation est

écoulé

• Placer le sélecteur de freinage en position HIGH

• Déverrouiller après arrêt complet : un dispositif de sécurité

empêche l'ouverture du couvercle en cours de centrifugation

• Soulever le capot, sortir les plots contenant les tubes

40
 Entretien et Mode
d’utilisation
Précautions d'usage

• Ne jamais oublier de vérifier le chargement et le bon

positionnement des plots pour assurer l'équilibrage ; en cas de

vibrations ou de bruit anormal, stopper d'urgence en ramenant le

• sélecteur de vitesse à zéro. Attendre l'arrêt complet pour soulever

le capot

• N'utiliser que des plots fournis par le fabricant et adaptés aux

tubes à centrifuger
41
 Entretien et Mode
d’utilisation
• Ne jamais tenter de faire démarrer la centrifugeuse avec la main

• Ne jamais tenter d'ouvrir le couvercle en cours de centrifugation

• Ne jamais tenter de ralentir la centrifugeuse autrement qu'en

utilisant le système de freinage prévu

NB: Les petites centrifugeuses, les micro-centrifugeuses et les

centrifugeuses de paillasse doivent être posées sur une table
résistante et stable, afin d’éviter tout déplacement intempestif de
l’appareil.

42
 Entretien et Mode
d’utilisation
Une attention particulière doit être portée à l'équilibrage :

• L'équilibrage statique consiste à équilibrer 2 à 2 des portoirs

diamétralement opposés, de telle sorte que la différence de poids
soit minimale

• L'équilibrage dynamique consiste à déposer la charge des portoirs

diamétralement opposés de façon symétrique par rapport à l'axe
d'entraînement et l'axe de pivotement des nacelles

43
 CONCLUSION

En résumé la centrifugeuse constitue un excellent appareil de séparation

des constituants des mélanges quelques soient les types ( liquide/liquide ou
liquide/solide) et ceci grâce aux rôles que joue chacun de leur composant
dans l'accomplissement du processus de centrifugation. En revanche, le
mode d'utilisation et les démarches d'installation des centrifugeuses
dépendent de chaque domaine d'intervention . Leur service et leur aptitude
à vite rendre les résultats leur confère une valeur quelque soit le domaine
d'intervention.

44
Merci pour votre attention!!!

45
 Référence

• Google scholar
• https://www.emse.fr/~brodhag/TRAITEME/fich4_5.htm
• http://coproweb.free.fr/gbearemi/pf4pm1.htm
• https://www.techniques-ingenieur.fr/base-documentaire/procedes-chimie-bio-agro-th2/
operations-unitaires-du-genie-industriel-alimentaire-42430210/centrifugation-et-
decantation-f2730/principes-de-la-centrifugation-f2730niv10001.html
• https://www.lelaborantin.com/produits/equipement-de-laboratoire/
centrifugeuses.html#:~:text=Une%20centrifugeuse%20permet%20d'impulser,et%20ainsi
%20s%C3%A9parer%20des%20mol%C3%A9cules.&text=Dans%20ce%20cas%20les
%20centrifugeuses,types%20rotor%2C%20nacelles%20et%20portoirs .

46