UNIVERSITÉ SULTAN MOULAY SLIMANE

FACULTÉ POLYDISCIPLINAIRE
KHOURIBGA

Technique de PCR pour l’amplification du fragment

d’ADN d'intérêt

Réalisé par: Demandé par:

SABIR Hamza Pr. ALILOU Hakim
ELKHOMRI Abdelkarim

Année universitaire: 2021/2022 1

 Introduction

Définition et applications

Matériel nécessaire

PLAN Principe et étapes de la PCR

Exemple d’application

Conclusion

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

En 1983, Karry Mullis met au point une

technique d’amplification de l’ADN: la PCR
(Polymerase Chain Reaction). Aujourd’hui, c’est
une technique incontournable et couramment
utilisée dans les laboratoires.

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

Définition : Que signifie le terme PCR ?

PCR = Polymerase Chain Reaction (réaction de polymérisation en chaîne)

Polymérase Réaction en chaîne

Nombre de copies : 2n avec

(n) le n° de réactions

Exemple après 2 réactions:

22 = 4 copies

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

Applications de la PCR

La PCR permet d’amplifier spécifiquement et de manière

exponentielle une séquence d’ADN donnée.

En recherche En médecine

• Clonage moléculaire • Diagnostic des maladies génétiques

• Diagnostic des infections

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

De quoi a-t-on besoin pour réaliser un PCR ?

Thermocycleur
ou Machine à PCR

Composants de la réaction

1 Taq polymérase + Tampon (MgCl2)

2 Amorces (Oligonucléotides)

3 ADN double brin matrice

4 Nucléotides

Tubes à PCR
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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

 Taq polymérase
• Enzyme thermorésistante qui permet
l’élongation des brins d’ADN.

• Isolée d’une bactérie thermophile appelée

Thermus aquaticus.

• T. aquaticus a été pour la première fois

isolée d’une source chaude du Parc
National du Yellowstone.

Principaux avantages :
 Résistance à l’ébullition
 Activité optimale à 72 – 80 °C

Mais elle est dépourvue de l’activité de relecture

 Mésappariements
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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

 ADN double brin matrice

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

 Amorces (Oligonucléotides) ou primers (en anglais)

• Courtes séquences oligonucléotidiques
• Longueur : 18 – 24 bases
• Contenu G/C : 40 – 60%
• Température de fusion = Température de demi-dénaturation = Tm : 50 – 60°C
Tm = 2(A + T) + 4(C + G)

Comment choisir les amorces pour la PCR :

Deux brins complémentaires des régions

5’ à 3’ de part et d’autre du gène ou de
la partie du gène à amplifier

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

 Amorces (Oligonucléotides) ou Primers (en anglais)

 Un exemple concret

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

 Nucléotides
• Nécessaires à la réaction de polymérisation
• Désoxynucléotides triphosphates :
- dATP (désoxy adénine tri-phosphate)
- dCTP (désoxy cytosine tri-phosphate)
- dGTP (désoxy guanine tri-phosphate)
- dTTP (désoxy thymine tri-phosphate)

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

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 Principe et
Définition et Matériel Exemples
Introduction étapes de la Conclusion
applications nécessaire d’applications
PCR

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 Distribution
Structure et
Introduction Absorption Métabolisme Effets toxiques Conclusion
propriétés
Elimination

CONCLUSION

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MERCI DE VOTRE
ATTENTION

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Références