République Algérienne

Démocratique et Populaire
Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche
Scientifique
Université DJILALI BOUNAAMA KHEMIS MILIANA
Faculté des Sciences de la Nature et de la vie et Sciences de la
Terre Département du Tronc Commun des Sciences Naturelles et de
la Vie

L3 BIOTECHNOLOGIE MICROBIENNE

Polymerase Chain Reaction

Réalisée par
o Chahma Abouelkheyr G03
o Ribouh fatma G01
o Hadjelaoui wildane G01
 Plan de travail
Historique
Définition
Principe de travail de la PCR
Les étapes de la PCR
 Les applications de la PCR
Utilisation de PCR
Les avantages et les inconvénients
 conclusion
 HISTORIQUE
1983 : Dr. KaryMullis a developer la PCR
1985 : premiere publication de la technologie PCR par la Cetus Corporation.
1993 : Dr. KaryMullis, Prix Nobel de avoir conçu la technologie PCR.
 Definition
 C’est une technique ingénieuse permet de copier
en grand nombre (avec un facteur de
multiplication de l'ordre du milliard) une
séquence d‘ADN ou d‘ARN connue à partir
d'une faible quantité (de l'ordre de quelques
picogrammes) d’acide nucléique.
 Donc c’est une technique de purification ou de
clonage.
 Principe de la PCR:

1.Le principe de la PCR s'agit de réaliser

une succession de réactions de
réplication d'une matrice double brin
d'ADN qui se répètent en boucle,
comportant chacun trois paliers de
température.
 Le thermocycleur
 Cet appareil permet d’exposer les tubes à des températures choisies et pour
des durées déterminées par l’expérimentateur. La réaction PCR est
extrêmement rapide et ne dure que quelques heures (2 à 3 heures pour une
PCR de 30 cycles).
 Les étapes de la PCR
1-Dénaturation thermique a 95 °C : (95°C > TM de l’ADN) :
rupture des liaisons hydrogènes et séparation des deux brins
d’ADN pour donner deux ADN simple brins matrices.

2- l’hybridation des amorces : annealing : la température du

milieu est amené a une T° de (50 -65°) < Tm des amorces

3- Elongation : extension des amorces par la TAqpolymerase à

72°, T° optimal pour l’extension
 Type de PCR
PCR en temps réel
PCR classique
RT-PCR (Reverse Transcriptase)PCR)
 Utilisation de PCR

1. Biologie moléculaire
2. Médecine
3. En médecine légale
4. En histoire
5. En agroalimentaire
 Les avantages et les deavantage
1. Les avantages:
2. Pouvoir travailler sur une toute petite quantité de matériel biologique
(sensibilité)
3. Pouvoir travailler sur de l’ADN dégradé
4. Pouvoir discriminer entre différentes cibles (spécificité)
5. La rapidité
6. La capacité d’analyse

7. Les inconvénients
8. Problèmes de contamination
9. Problème de la présence d’inhibiteurs
 CONCLUSION
• PCR « maison » toujours présentes dans de nombreux laboratoires
mais avec une tendance rapide vers l’apparition de kits commerciaux et
l’automatisation en améliorant la standardisation et la reproductibilité
des résultats
. Nouvelle génération de termocycleurs et robots permettant
l’application en routine.
MERCI POUR VOTRE ATTENTION