LA RPLICATION DE LADN

I. GNRALITES. Lors de la division cellulaire, quand une cellule-mre donne deux cellules-filles, il est essentiel que lADN prsent dans les cellules-filles soit la copie identique de lADN prsent dans la cellule-mre. Cette copie de lADN est indispensable raliser avant la mitose !ou division cellulaire" on parle de rplication de lADN. #ralablement toute division cellulaire, la quantit dADN est multiplie par deux. Les mcanismes de rplication conditionnent donc le droulement de la division cellulaire. II. LA RPLICATION DE LADN CHEZ LES PROCARYOTES. $$.%. Les caractristiques &nrales. La rplication est tout dabord dite semi-conservatrice !'eselson et (ta)l, %*+,". Ceci si&nifie que sur les deux brins dADN, on a tou-ours un brin dADN qui provient dun des deux brins de lADN parental et un brin nouvellement form. A c)aque rplication, les deux brins dADN parental se sparent, c)acun de ces deux brins sert de matrice pour la s.nt)se dun brin complmentaire. $$./. Les lments ncessaires la rplication de lADN. La rplication de lADN ncessite0 - 1out dabord, une matrice dADN constitue par un brin parental. - La prsence de nuclotides propres lADN, cest- -dire contenant du /-dsox.ribose, des bases A, 1, 2 et C et sous forme de nuclosides trip)osp)ates0 dA1#, d11#, dC1# et d21# !on crit souvent pour les dnommer dN1#". - La prsence de nombreux en3.mes que nous verrons plus loin. - La prsence de certains ions !cations bivalents0 '& /4, ce cation est indispensable pour la rplication de lADN". $$.5. Les mcanismes de linitiation de la rplication. $$.5.%. Notion de rplicon. Lunit dADN o6 se produit la rplication est appele le rplicon. Ce rplicon a une ori&ine o6 est initie la rplication et une terminaison o6 est arr7te la rplication. LADN bactrien constitue lui seul un rplicon. A partir dun point dinitiation, la rplication peut pro&resser soit de manire unidirectionnelle, soit de manire bidirectionnelle. C)e3 les procar.otes, partir dune ori&ine de la rplication !ou oeil de rplication", la rplication pro&resse dans les deux sens. 8n compare souvent cette pro&ression de la rplication dans le sens bidirectionnel un oeil qui sa&randit -usqu que la rplication sac)ve. $$.5./. $nitiation de la rplication. C)e3 9. coli, il existe au niveau de lADN bicatnaire une ori&ine unique de la rplication appele 8riC. Le locus 8riC est constitu dune squence de /:+ paires de bases. Cette squence contient en tandem - trois squences nuclotidiques presque identiques constitues de 13 nuclotides c)acunes !squences de t.pe 2A1C1N11N1111". - quatre sites de liaison comportant un motif de 9 paires de bases pour une protine appele dnaA ou protine dinitiation de la rplication , code par le &ne dnaA. Des copies multiples de la protine dnaA vont sassocier avec lADN lori&ine de la rplication. Ces liaisons ncessitent de lA1#. Cette tape est indispensable la transformation localise de lADN double brin en ADN simple brin . Ces complexes vont ensuite fixer lADN hlicase !ou protine dna;", code par le &ne dna;. LADN )licase va catal.ser le droulement de la double )lice dADN en prsence dA1#, ce qui dfinira la future fourc)e de rplication. <ne protine appele dnaC est indispensable cette tape. 9lle sera ensuite rel=c)e aprs fixation de la protine dna; la fourc)e de rplication. Deux )licases se lient la r&ion 8riC, une )licase pour c)acun des brins dADN. Les brins spars de lADN sont stabiliss sous forme simple brin &r=ce la fixation de protines appeles ! "pour # sin$le strand bindin$ %&' Ces protines ((; emp7c)ent les deux brins dADN de se rapparier. #uis, il se formera rapidement un complexe appel primosome entre l)licase et une en3.me appele primase !ou protine dna2" qui s.nt)tise une amorce dA>N. Aprs s.nt)se de lamorce dA>N !*%/ nuclotides", lADN pol.mrase $$$ sinsre au niveau de la fourc)e de rplication, elle utilise

lamorce dA>N pour commencer la s.nt)se de lADN. LADN pol.mrase $$$ possde deux sites actifs qui seront capables de s.nt)tiser les nouveaux brins dADN au niveau de la fourc)e de rplication. Le complexe de protines qui se dplace le lon& de l?ADN pour catal.ser la rplication est appell rplisome' $$.:. La discontinuit de la rplication entre les deux brins dADN. La rplication nest pas identique entre les deux brins dADN. 9n effet, sur lun des brins la rplication seffectue de manire continue, on parle de brin avanc, alors que sur lautre brin elle seffectue de manire discontinue, on parle de brin retard. (ur le brin avanc, la pro&ression de la rplication se fait dans le sens + 5 en utilisant comme modle le brin dADN orient dans le sens + 5. (ur le brin retard, des petits fra&ments dADN sont s.nt)tiss, encore appels fra&ments d8@AAA@$. C)aque fra&ment est s.nt)tis dans le sens +5, le brin modle correspondant de lADN est orient de manire anti-parallle 5 +. 8n voit donc que lallon&ement discontinu de ce brin retard se fait dans le sens de la propa&ation de la rplication. $l est important de comprendre que le brin qui sert de matrice de lecture pour la constitution du brin retard doit former une boucle autour dun des deux sites actifs de lADN pol.mrase $$$. Dans ces conditions, lintervention de la primase et de lADN pol.mrase $$$ permet la s.nt)se dun brin nouveau dADN dans le sens + 5 par copie au niveau de cette boucle. Aprs la s.nt)se dADN sur le brin retard, la boucle est dfaite et une nouvelle est reforme au niveau de louverture de la fourc)e de rplication. Binalement, des fra&ments dADN sont ainsi s.nt)tiss sur le brin retardC de manire discontinue. #our donner une ide plus concrte sur la rplication, les fra&ments d?8Da3aDi ont c)e3 (' coli une lon&ueur mo.enne de une deux Db. La fourc)e de rplication se dplace une vitesse estime environ %EEE nuclotides par seconde 5F de&rs. $$.+. Lintervention de lADN-pol.mrase $$$. LADN pol.mrase $$$ s.nt)tise un brin complmentaire partir de lextrmit 5-8G libre de lamorce dA>N en utilisant lADN comme matrice !sens + 5". L?)oloen3.me d?ADN pol.mrase $$$ comporte %E pol.peptides !/H+ sous units protiques". La m7me en3.me s.nt)tise le brin avanc et les fra&ments discontinus sur le brin retard. $$.I. Ncessit damorces dA>N. La copie du brin dADN parental ncessite lintervention dune amorce dA>N s.nt)tise &r=ce une A)N pol*mrase ou primase. Cette en3.me s.nt)tise une amorce de * %/ nuclotides. #uis, lADN pol.mrase $$$ allon&e cette amorce dA>N mais pour s.nt)tiser le brin complmentaire dADN. Cette complication apparente est lie au fait que les ADN pol.mrases sont incapables de commencer la s.nt)se dune c)aJne dADN sans amorce par contre, elles sont tout fait capables allon&er une c)aJne de nuclotides. $$.F. G.drol.se et remplacement des amorces dA>N, intervention de lADN pol.mrase $. Les amorces dA>N seront ensuite dtruites et ).drol.ses par lintervention dune en3.me, la >NAse G. 9lles seront remplaces par des fra&ments dADN. Les lacunes en&endres par len3.me >NAse G sont combles par une ADN pol.mrase $. Binalement, les fra&ments dADN deviennent conti&us et sont souds les uns aux autres par lintervention dune en3.me qui est une DNA-li$ase. $l faut remarquer que lADN pol.mrase $ peut ).drol.ser les amorces dA>N la place de len3.me >NAse G. $$.,. >emarques &nrales sur les fonctions des ADN pol.mrases $ et $$$. Les ADN pol.mrases $ et $$$ impliques dans la rplication de lADN prsentent plusieurs fonctions en+*matiques0 - 1out dabord une fonction pol*mrasique qui permet la constitution de la c)aJne pol.nuclotidique, len3.me a-oute un nuclotide lextrmit 5 8G dun acide nuclique. - ,ne fonction e-onuclasique .3 !activit de rparation de lADN".

- ,ne fonction e-onuclasique 3.. Cette dernire fonction est trs intressante. 9n effet, len3.me est capable de vrifier le dernier nuclotide mis en place. 9n prsence dun dfaut dappariement, elle enlve ce dernier nuclotide !proprit exonuclasique 5 +" et insre le nuclotide correct !proprits pol.mrasiques". Ce mcanisme capital est appel fonction ddition des ADN pol*mrases et permet donc la correction derreurs au cours de la rplication. $$.*. 1erminaison de la rplication. $l existe plusieurs sites de terminaison dans le &nome bactrien !au moins I sites de terminaison ou sites ter". <ne protine spcifique appele 1us peut se lier aux sites de terminaison. Cette liaison arr7te la protine dna; !)licase". Les sites de terminaison ne travaillent que dans une seule direction, un seul site de terminaison est utilis au cours dun tour de rplication. III. LA RPLICATION DE LADN CHEZ LES EUCARYOTES. $$$.%. Les caractristiques &nrales. La rplication de lADN c)e3 les eucar.otes est tout fait comparable la rplication de lADN c)e3 les procar.otes. 9lle est &nralement bidirectionnelle, elle est discontinue entre les deux brins dADN. Des amorces dA>N sont ncessaires. Cette rplication est &alement complmentaire, antiparallle et dans le sens +5. $$$./. Caractristiques particulires. La replication se fait en de nombreux points dinitiation. 9lle fait intervenir un nombre dADN pol.mrases plus important que c)e3 les procar.otes. De nombreuses protines interviennent comme facteurs de rplication. 8n connait mal les c)an&ements subis par les nuclosomes au cours de la rplication de lADN eucar.ote. 9nfin, la rplication de lADN des extrmits c)romosomiques !ou tlomres" commence 7tre connue de manire plus approfondie. $$$.5. Kuelques caractristiques des ADN pol.mrases des eucar.otes. 8n connait au moins + ADN pol.mrases c)e3 les eucar.otes. - La pol.mrase alp)aLprimase. Cette pol.mrase est impliqu dans l?initiation de la rplication !Mprimin&M". - La pol.mrase bta. - La pol.mrase &amma. Cette pol.mrase est localisation mitoc)ondriale, bien que code par un &ne du no.au cellulaire. - La pol.mrase delta. - La pol.mrase epsilon. La pol.mrase alp)aLprimase s.nt)tise les amorces d?A>N. <ne protine appele #CNA !Mproliferatin& cell nuclear anti&enM" intervient. L?ADN simple brin au cours de la rplication est stabilis par des protines correspondant aux protines ((; du colibacille. Les amorces d?A>N sont dtruites par la >Nase G. Les lacunes formes sont combles par les pol.mrases bta ou alp)a. IV. LES TLOMRES. $N.%. Dfinition. Les tlomres constituent les extrmits des c)romosomes eucar.otes. $ls sont forms par des squences rptitives dADN. A lextrmit 5 des c)romosomes, on retrouve des copies rptes de squences de t.pe 112222 !retrouves c)e3 un proto3oaire cili0 /trah*mena" ou 11A222 !retrouves c)e3 lGomme". A lextrmit +, on a les squences complmentaires ric)es en c.tosine. 0e probl1me ma2eur lors de la rplication de lADN est llimination potentielle de lamorce dA)N la plus e-terne ce qui pourrait entra3ner un raccourcissement de lADN chaque c*cle de rplication . La protection des extrmits des c)romosomes des eucar.otes est assure par une en3.me spcifique0 la tlomrase. $N./. Lintervention dune en3.me spcifique0 la tlomrase. La rplication de lADN lextrmit des c)romosomes eucar.otes fait donc intervenir une en3.me particulire appele tlomrase. Cette en3.me a-oute des squences spcifiques en 5 dun brin dADN.

La tlomrase va se positionner +

lextrmit 5 du brin dADN selon le sc)ma suivant0

5 !brin parental +5" 112222112222112222112 AACCC 5 + brin tardif incomplet !nouvellement s.nt)tis 5+" La tlomrase possde une matrice qui lui est propre et qui est une matrice dA)N, elle va se fixer lextrmit 50 5 brin parental 4 tlomrase AACCCCAAC !+" 112222112222112222112 !5" AACCC + brin tardif incomplet !nouvellement s.nt)tis" $l . a s.nt)se dADN face la matrice dA>N0 5 brin parental 4 tlomrase AACCCCAAC !+" 112222112222112222112GGGTTG !5" AACCC + brin tardif incomplet !nouvellement s.nt)tis" #uis, une translocation conduit un mouvement de la tlomrase0 5 brin parental 4 tlomrase AACCCCAAC !+" 112222112222112222112GGGTTGGGGTTG !5" AACCC + brin tardif incomplet !nouvellement s.nt)tis" La tlomrase peut poursuivre ce mouvement de translocation0 5 brin parental 4 tlomrase AACCCCAAC !+" 112222112222112222112GGGTTGGGGTTGGGGTTG !5" AACCC + brin tardif incomplet !nouvellement s.nt)tis" <ne rptition de motifs0 112222 est s.nt)tise. 9lle constitue le tlom1re. #our s.nt)tiser le brin tlomre complmentaire ric)e en C, une primase interviendrait avec s.nt)se dune amorce dA>N par copie de lextrmit 5. #uis lADN pol.mrase allon&erait la c)aJne partir de lamorce dA>N. Binalement, une li&ase assurerait la soudure finale. + 5 squences tlomres ric)es en 2

squences tlomres ric)es en C 4 amorce dA>N 5 +

Aprs ).drol.se de lamorce dA>N ! que les tlomres ric)es en 20 + en 2

", les tlomres ric)es en C sont l&rement plus courts 5 squences tlomres ric)es

squences tlomres ric)es en C aprs ).drol.se de lamorce dA>N 5 + Lactivit des tlomrases est trs rduite ou nulle dans les cellules normales en culture. Aprs plusieurs rplications, les c)romosomes perdent leurs tlomres et deviennent instables. #ar contre dans les cellules cancreuses, lactivit est au&mente.