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mtaux chez les plantes C- La phytoremdiation C1- la phytostabilisation exemple du projet europen Difpolmine dans lAude C2- la phytovolatilisation C3- la phytodgradation C4- la phytoextraction les plantes hyperaccumulatrices de mtaux les limites la recherche D- Deux exemples approfondis de physiologie des mtaux D1- la tolrance laluminium D2- la tolrance au cadmium
UV
Heavy metals
POLLUTION INORGANIQUE :
1940 1910
engrais (nitrate, phosphate) mtaux (Cd, As, Hg, Pb, Ni, Zn) et radiolments POLLUTION ORGANIQUE : hydrocarbures solvants chlors pesticides composs nitrs
Solvants Autres
http://www.senat.fr/rap/l00-261/l00-26182
et TOXIQUES
Fe, Zn, Mg, Mn, Cu sont ESSENTIELS mais peuvent devenir TOXIQUES lorsquils
Relativement faible DISPONIBILITE des mtaux du sol pour les plantes car les
ions (petites molcules charges) ne peuvent pas traverser les membranes biologiques par simple diffusion.
Laurence Marqus UM2
Exemple du fer
Carence Excs
symptomes de chlorose
Symptomes de bronzing
Lhomostasie des mtaux doit tre finement contrle pour viter les effets dltres.
Laurence Marqus UM2
NE MARCHE PAS .
DILUTION
ou
CONCENTRATION et CONFINEMENT
Laurence Marqus UM2
Problmes socioconomiques
Pression forte sur les vgtaux Problme de sant publique Rduction de biodiversit Slection de vgtaux tolrants et/ou hyperaccumulateurs
Redistribution/ Stockage
transporteurs transmembranaires: INFLUX chlateurs
Translocation
transporteurs transmembranaires: EFFLUX chlateurs
famille CDF
ATPases type-P
famille ZIP
(Clemens S. (2001) Planta, 212:475-486)
famille NRAMP
Influx : entre dans le cytoplasme Efflux : sortie du cytoplasme (vers lapoplasme ou les compartiments intracellulaires)
Laurence Marqus UM2
Les chlateurs connus pour jouer un rle dans la tolrance aux mtaux: dtoxification et stockage
Acides organiques: citrate, malate, oxalate (Al, sve brute) Acides amins: histidine (Ni) Nicotianamine (Ni) Phytochelatines (Cd, vacuole) Metallothionines (Zn, Cu, cytoplasme)
SHOOTS
=
PHYTOEXTRACTION
solar-driven pump
Zn
Zn
PHYTODEGRADATION PHYTOSTABILISATION
. .. . . . . . . .. . . . . . . . .. . .. .. . Zn .. . Pb Pb . .. uptake
TNT
leaching
SHOOTS
=
solar-driven pump
PHYTOSTABILISATION
. . . . . . . .. . ... . . Pb Pb . ..
TNT
. .. . .. ..
..
leaching
PHYTOSTABILISATION
OBJECTIF:
Utilisation des plantes pour viter la dispersion de la pollution
CARACTERISTIQUES:
Efficace pour prvenir le lessivage vers les zones non pollues Efficace contre lrosion olienne Les espces choisies doivent possder un systme racinaire tendu, tre tolrantes aux mtaux mais non accumulatrices pour viter lentre dans la chaine alimentaire
LIMITES:
La pollution est toujours prsente Survie des plantes
Ralisations
2006
Laurence Marqus UM2
Eau potable : 10
g / l
0,01 ppm
SHOOTS
=
solar-driven pump
PHYTODEGRADATION
. .. . . . . . . . . . . . . .. . . ..
TNT
. .. . .. ..
..
leaching
PHYTODEGRADATION
Phytodegradation
organic pollution
A cleaning up of the site is achieved Both plant cells and rhizospheric microbes
degradation
participate to the
LIMIT:
SHOOTS
=
solar-driven pump
. .. . . . . . . . . . . . . .. . . ..
. .. . .. ..
..
leaching
PHYTOVOLATILIZATION
Plants can naturally volatilize Se : DMSe is volatil Microbes can naturally volatilize Se and Hg: Hg0 is volatil Cleaning up of the site is achieved
LIMIT:
Exemple de la raffinerie de ptrole Chevron Richmond (Californie):: le marais phytovolatilise 89% du Se relargu par la raffinerie.
http://epics.ecn.purdue.edu
Phytovolatilisation du slnium
MODELE DE PRELEVEMENT ET METABOLISATION DU Se Le Se est mtabolis par les enzymes de la voie dassimilation du sulfate. Il se forme de la SeMet qui peut tre mthyle en DMSe VOLATIL. Les marais sont des biotopes dans lesquels le Se est naturellement fortement volatilis
SHOOTS
=
PHYTOEXTRACTION
solar-driven pump
Zn
Zn
. .. . . . . . . .. . ... .. .. . . .. . Zn .. . . .. uptake
leaching
PHYTOEXTRACTION
AIM: Extraction of the pollutant from the soil using the solar-driven force and concentration in aerial harvestable part of the plant CHARACTERISTICS:
It does not transform the pollutant Use in the case of terminal pollution as
metallic pollution
Accumulation dans les parties ariennes : jusqu plusieurs % / g MS sans effet nfaste Hyperaccumulation: teneur foliaire > teneur racinaire
Augmentation de la translocation
Thlaspi caerulescens
Homogeneous Zn pollution
No pollution
Zn pollution
Laurence Marqus UM2
Clonage dun transporteur de zinc impliqu dans le prlvement accru de ce mtal chez T. caerulescens
Pence et al., 2000, PNAS, 97, 4956
Complmentation fonctionnelle du transport de zinc dans le mutant de levure zrt1zrt2 (zhy3) par TcZNT1.
ROOT
ROOT
--> La localisation subcellulaire des mtaux est trs dlicate car les ions mtalliques sont trs mobiles dans les tissus.
Nombre de rcoltes requises pour diminuer de moiti la concentration en mtal dans 20 cm de sol
Zinc absorb (kg/ha) 30,1 10,3 3,9 Nombre de rcoltes 13 37 96
Hyperaccumulateurs Thlaspi caerulescens Arabidopsis halleri Alyssum lesbiacum Non-accumulateurs Brassica napus Raphanus sativus
0,5 0,2
832 2046
Nombre de rcoltes pour passer de 444 300 mg zinc/kg sol (norme NF U 44-041)
(Baker et al., 1995)
Laurence Marqus UM2
LE VERROU BIOLOGIQUE:
FORTE BIOMASSE FAIBLE TRANSLOCATION
Thlaspi caerulescens
832
15
- EXPLOITATION DE LA BIODIVERSITE
- GENETIQUE
EXPLOITATION DE LA BIODIVERSITE
GENETIQUE QUANTITATIVE
A. halleri
A. lyrata
0,0
Mt2b
13,1
At5g08160
35,8 37,7
AthCDPK9 H9
50,0 53,6
AthDET1 MTP1-B
62,6 70,2 LD
AGG/CT-80
ZnTol QTL3
81,0
At4-GA2
P. Saumitou-Laprade, Lille
Laurence Marqus UM2
Col
0 ppm
70 ppm
700 ppm
Transgenic Indian mustards overexpressing -ECS display increased metal tolerance and shoot accumulation for Cd, Cr, Cu, Pb and Zn
APS = adenosine triphosphate sulfurylase GS = glutathione synthase -ECS = -glutamylcysteine synthase Plants are grown on aged polluted soil containing mixture of metals
US PATENTS Chaney, 1998, Method for phytomining of nickel, cobalt and other metals from soil, US Patent 5711784
La toxicit aluminique
LAl est le troisime lment le plus abondant sur terre. En sols acides la forme Al3+ trs phytotoxique domine. Ces sols reprsentent 40% des terres arables (+ acidication suite lutilisation excessive dengrais). Au niveau cellulaire, des concentrations symplastiques de lordre du nmol sont toxiques car Al3+ une constante dafnit pour lATP 107 fois plus importante que Mg2+. La constante de stabilit des complexes Al3+ -acides organiques est encore plus forte que celle de lATP et permet donc de chlater efcacement lAl3+ . Pour la racine en croissance la toxicit est trs forte au niveau de lapex racinaire.
Rponse spcifique de Al. *Le sarrasin rsiste laluminium en protgeant lapex racinaire par scrtion dacide oxalique: ce mcanisme est commun toutes les plantes rsistantes lAl, seul le type dacide varie. * Le sarrasin accumule de lAl dans ses parties ariennes. La forme complexe avec lacide oxalique est une forme non toxique accumule dans les feuilles.
Prlvement, transport et stockage de lAl chez le sarrasin: diffrents ligands organiques interviennent
La rsistance laluminium est contrle par lexcrtion dacide organique par lapex racinaire
La surexpression de citrate synthase confre une rsistance aluminique au tabac et la papaye
CSb
contrle
75
Al3+
200
1000
La rsistance au cadmium
-Glutamylcystine synthase
mutation rcessive pas deffet maternel sgrgation 3:1 : locus mendlien unique le croisement entre les deux mutants montre que les deux mutations sont allliques.
-20000 M2 (mutagnse aux rayons X) cribles pour la sensibilit au Cd dans un test de brunissement racinaire - 1 mutant identi cad2
Glutathion -Cd +Cd Wild type cad2-1 cad1-1 231 41 225 154 30 567
GC
(nmol g-1 DW)
GSH
(mol g-1 DW)
GCS
(nmol min-1 mg-1 protein)
64 21 160 24
Cette enzyme avait t caractrise biochimiquement en 1989 mais pendant dix ans personne navait pu cloner le gne correspondant.
En 1999, trois quipes publient simultanment le clonage par des approches toutes diffrentes
1- Equipe de Cobbett
cartographie du locus CAD1 par RFLP un gne inconnu identifi le squencage dans les diffrents mutants cad1 donne des mutations ponctuelles complmentation du mutant cad1-3 par le locus CAD sauvage: a marche! expression dans E. coli donne une enzyme fonctionnelle capable de synthtiser des PCs. pas de rgulation transcriptionnelle par le Cd
2-Equipe de Schroeder
transformation de S. cerevisiae par une banque de cDNA de racines de bl et criblage pour la rsistance au cadmium accumulation de Cd2+ dans les levures transformes purification de la protine correspondante la protine correspondante une activit catalytique produisant des PC2 partir de milieu contenant du Cd et du GSH
transformation du mutant de levure yap1 par une banque cDNA dA. thaliana, criblage sur des milieux toxiques en Cd et retransformation dans le mutant ycf1 pour les plasmides confrant tjrs une rsistance au Cd clonage dun cDNA purification de la protine correspondante dmonstration de lactivit catalytique de lenzyme: production de PC partir de GSH en prsence de Cd