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CAHIER DE
CAHIER DE
Formation
Biologie mdicale
Cahiers de formation dj parus
N 1 : Hmatologie
N 2 : Immunoanalyse
N 3 : Parasitologie
N 4 : Bactriologie
N 5 : Hormonologie - Gazomtrie
N 6 : G.B.E.A
N 7 : Immuno-allergie (1)
N 8 : Hmoglobines glyques - Lipides
N 9 : Dosage des mdicaments Tome I
N 10 : Hmatologie Cas illustrs
N 11 : Amibes et flagells intestinaux
N 12 : Les maladies Prions
N 13 : Autoimmunit et autoanticorps
N 14 : Lexploration de la thyrode
N 15 : Dpistage de la trisomie 21
N 16 : Immuno-allergie (2)
N 17 : Virus des hpatites A (VHA) et E (VHE)
N44
Biologie mdicale
2010
N 28 : Immunoglobulines monoclonales
N 30 : Exploration de la fonction
de reproduction - versant fminin
N 31 : Les dermatophytes
N 32 : Les marqueurs tumoraux sriques
des tumeurs solides
N 33 : Sport et Biologie
N 34 : Borrliose de Lyme
N 35 : L'Inflammation
N 36 : Le virus Epstein-Barr
et les marqueurs de l'infection
N 37 : Maladies auto-immunes du foie
N 38 : Les vitamines
BIOFORMA est la structure nationale qui gre et organise la formation continue conventionnelle des directeurs et
directeurs adjoints de L.a.b.m privs.
Cette formation continue est finance par les trois Caisses Nationales de lAssurance Maladie (C.N.A.M.T.S.,
C.C.M.S.A. et R.S.I.) dans le cadre de la convention passe entre elles et les trois syndicats de biologistes (S.d.B.,
S.N.M.B. et S.L.B.C.).
A ce titre, BIOFORMA dite des cahiers de formation comme celui-ci.
Ces ouvrages sont distribus chaque laboratoire danalyse de biologie mdicale, priv ou hospitalier, aux inspecteurs des DRASS, aux pharmaciens et mdecins conseils des CRAM, aux responsables de la DGS et du Ministre
de la Sant. Les prcdents numros sont disponibles la consultation sur le site Internet www.bioforma.net.
Ces livres ne sont pas en vente dans le commerce et le tirage est de 6500 exemplaires.
ISSN : 1293-2892
ISBN : 2-913633-56-0
Dpt lgal : JUIN 2010
N 29 : Mycobactries - Mycobactrioses
Les levures
et levuroses
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Fax : 01.56.54.39.30
Nous vous souhaitons une bonne lecture de ce Cahier de Formation n44 et vous
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Adrien BEDOSSA
Prsident
Les levures
et levuroses
Jean-Philippe Bouchara
Matre de Confrences des Universits - Praticien Hospitalier
Responsable de lUnit Fonctionnelle de Parasitologie-Mycologie
Marc Pihet
Praticien Hospitalo-Universitaire
Ludovic de Gentile
Praticien Hospitalier
Bernard Cimon
Praticien-Attach (Matre de Confrences des Universits, IUT dAngers)
Dominique Chabasse
Professeur des Universits - Praticien Hospitalier
Coordinateur du Ple de Biologie du CHU dAngers
Remerciements
Les auteurs tiennent remercier Mmes les Docteurs Elodie Cesbron-Mitiviers (Angers),
Nelly Contet-Audonneau (Nancy), Dea Garcia Hermoso (Paris) et Franoise Symoens
(Bruxelles, Belgique), Mme le Professeur Isabelle Cochereau (Angers), Mrs les Docteurs
Jacques Laporte (Angers), Christian Le Clec'h (Angers), Jacques Marchetta (Saumur),
Patrick Moureaux (Vannes), Bruno Person (Angers) et Boualem Sendid (Lille),
Mrs les Professeurs Thierry Bergs (Poitiers), Alain Fourni (Angers), Jean-Charles Gantier
(Paris) et Raymond Robert (Angers), ainsi que les socits SR2B (Avrill) et AdvanDx
(distribue par la socit i2a, Dominique Boissinot, Prols).
INTRODUCTION
Les levures d'intrt mdical reprsentent une flore importante et varie issue essentiellement du
milieu extrieur (sol, eau, fruits, crales, ...). Chez l'homme et de nombreux animaux, certaines
espces vivent en commensales, colonisant le revtement cutan, mais aussi les voies digestives ou
gnitales ; d'autres sont des saprophytes issus du milieu extrieur qui infectent l'homme par voie
alimentaire, arienne ou transcutane (traumatisme, corps trangers, ...). Les levures rencontres
chez l'homme ont un comportement opportuniste variable selon les espces et selon le terrain
concern. Par leur comportement parasitaire, certaines levures peuvent envahir les organes
profonds et tre l'origine d'infections graves, surtout chez des patients amoindris et/ou
immunodprims. Les principales levures rencontres chez l'homme sont les Candida et les
cryptocoques, plus rarement les Malassezia, les Trichosporon, les Rhodotorula, les Saccharomyces
et les Geotrichum.
Les champignons dimorphiques qui prsentent un stade "levure" l'tat parasitaire et un stade
filamenteux en culture, sont essentiellement d'origine exotique (Histoplasma, Blastomyces,
Paracoccidioides, ) et ne seront pas traits dans cet ouvrage.
Les affections levures sont de plus en plus frquentes en mdecine ; leur incidence a fortement
augment ces dernires dcennies, notamment parmi les patients fragiliss ou haut risque et en
particulier dans les units de soins intensifs et en onco-hmatologie.
SOMMAIRE
SOMMAIRE
CHAPITRE I
Gnralits sur les levures dintrt mdical et les levuroses ...........................................13
SOMMAIRE
La cryptococcose ........................................................................................................................................................28
Les malassezioses.......................................................................................................................................................28
Les rhodotoruloses, les saccharomycoses, les trichosporonoses et les gotrichoses ............29
La cryptococcose ........................................................................................................................................................49
Cryptococcose neuromninge ..............................................................................................................................50
Cryptococcose pulmonaire.......................................................................................................................................50
Cryptococcose cutane ............................................................................................................................................50
Cryptococcose viscrale ou profonde...................................................................................................................51
Les malassezioses.......................................................................................................................................................52
Pityriasis versicolor .....................................................................................................................................................52
Dermite sborrhique ...............................................................................................................................................55
Pityriasis capitis ...........................................................................................................................................................55
Folliculite pityrosporique ...........................................................................................................................................56
Atteintes profondes Malassezia ...........................................................................................................................56
CHAPITRE II
Diagnostic biologique des levuroses ...................................................................................59
............................................................................................................................................................60
La culture .........................................................................................................................................................................65
Ensemencement ..........................................................................................................................................................69
Milieux de culture ........................................................................................................................................................70
............................................................................................................................70
..................................................................................82
.......................................................................................................................................85
SOMMAIRE
a. Mthodes par dilution ...................................................................................................................................90
b. Mthodes par diffusion ................................................................................................................................92
c. Mthode par dilution diffusion
Index de colonisation
..............................................................................................................92
...............................................................................................................................................94
Conclusion ....................................................................................................................................................................109
CHAPITRE III
Fiches diagnostiques ..........................................................................................................111
Le genre Candida...........................................................................................................................................................113
Candida albicans .......................................................................................................................................................114
Candida ciferrii............................................................................................................................................................116
Candida dubliniensis ................................................................................................................................................118
Candida famata ..........................................................................................................................................................120
Candida glabrata .......................................................................................................................................................122
Candida guilliermondii ............................................................................................................................................124
Candida kefyr ..............................................................................................................................................................126
Candida krusei ............................................................................................................................................................128
Candida lusitaniae .....................................................................................................................................................130
Candida parapsilosis ...............................................................................................................................................132
10
Le genre Geotrichum...................................................................................................................................................146
Geotrichum candidum ............................................................................................................................................146
CHAPITRE IV
Traitement des levuroses superficielles et profondes .......................................................169
11
SOMMAIRE
Les candidoses profondes ou systmiques.................................................................................................176
Traitement des candidoses invasives chez le non neutropnique ..............................................................177
Traitement des candidoses invasives chez le neutropnique ......................................................................177
RFRENCES .......................................................................................................................181
GLOSSAIRE ..........................................................................................................................187
ANNEXES.............................................................................................................................195
12
13
CHAPITRE I
Dfinition - Taxinomie
Ce que l'on appelle communment "levures" se dfinit comme le stade asexu (imparfait)
de champignons unicellulaires appartenant aux Ascomyctes ou aux Basidiomyctes. Sur
les milieux usuels de mycologie mdicale, la forme sexue est rarement obtenue ; il est
donc habituel de regrouper ces levures asexues parmi les Deutromyctes (champignons
imparfaits se multipliant sur le mode asexu). Au sein des Deutromyctes, les levures
constituent la classe des Blastomyctes, champignons se multipliant sur le mode asexu
et prsentant un thalle unicellulaire avec production de spore par bourgeonnement
(blastospores), ce qui les distingue des autres Deutromyctes, les Hyphomyctes et les
Clomyctes, dont le thalle est constitu de filaments mycliens cloisonns, fins et
rguliers (Figure 1).
De nombreuses espces de levures n'ont pas de forme sexue connue. Nanmoins, les
tudes molculaires rvlent qu'elles ont pour la plupart des affinits avec les
Ascomyctes (exemple : Candida albicans, Candida glabrata, ). Certaines espces,
comme celles appartenant aux genres Rhodotorula ou Trichosporon, ont cependant des
affinits avec les Basidiomyctes.
14
Par ailleurs, en mycologie mdicale, il est habituel d'assimiler aux levures les Geotrichum.
Il s'agit de champignons filamenteux arthrospors (Deutromyctes Hyphomyctes se
multipliant sur le mode thallique arthrique avec production d'arthrospores) dont la
reproduction sexue n'est connue que pour deux d'entre eux : Geotrichum candidum et
Geotrichum capitatum dont les formes sexues respectives, Galactomyces candidum et
Dispodascus capitatus, sont des Ascomyctes.
Figure 1 : Systmatique simplifie des principales levures asexues d'intrt mdical.
FUNGI
Septomyctes
Siphomyctes
Ascomyctes
Zygomyctes
Basidiomyctes
Deutromyctes
Blastomyctes
Hyphomyctes
Coelomyctes
15
Figure 2 : Systmatique des levures d'intrt mdical dont le stade sexu est connu (le nom du
stade asexu est indiqu entre parenthses).
FUNGI
Ascomyctes
Basidiomyctes
Hmiascomyctes
Tliomyctes
16
Les Candida
Le genre Candida comprend plus de deux cents espces, mais un nombre restreint (environ une vingtaine) peut tre responsable de manifestations pathologiques (Tableau 1).
C. albicans
C. glabrata
C. krusei
C. parapsilosis
C. tropicalis
Onychomycoses
C. dubliniensis
C. guilliermondii
C. haemulonii
C. inconspicua
C. kefyr
Candidoses systmiques
C. lipolytica
C. lusitaniae
C. norvegensis
C. pulcherrima
C. rugosa
C. viswanathii
Mningites
C. zeylanoides
Candidmies, arthrites
17
a. Candida albicans
Parmi les levures, C. albicans est la principale espce d'intrt mdical puisqu'elle reprsente au moins 60% des isolements de levures en pratique mdicale. Candida albicans
est avant tout un commensal des cavits naturelles de lhomme, en particulier du tube
digestif de l'homme. On le retrouve aussi dans la flore intestinale de divers mammifres
et oiseaux. Chez l'homme, cette levure est aussi isole des voies gnito-urinaires. Dans
ces sites, C. albicans est en quilibre avec les flores bactriennes locales qui maintiennent la population de levures une faible densit. Candida albicans, en revanche, ne fait
pas partie de la flore cutane de l'individu sain. Il peut se dvelopper par contre sur un
pithlium ls. Levure opportuniste par excellence, C. albicans profitera d'un dsquilibre
de la flore endogne ou d'un dficit immunitaire pour se multiplier et se comporter en
vritable pathogne pouvant envahir un certain nombre de tissus. Candida albicans est
responsable d'environ 50 60% des candidoses invasives. Cependant, son importance
relative dcrot depuis quelques annes au profit des autres espces groupes sous le
terme de levures non albicans.
b. Candida glabrata
Candida glabrata vit aussi en commensal dans les voies digestives et gnito-urinaires de
l'homme. Son incidence a augment ces dernires annes sous la pression des antifongiques azols. Candida glabrata reprsente 10 20% des isolements de levures en pratique mdicale, mais 20% des candidoses invasives. Considre classiquement comme
rsistante au fluconazole, cette espce prsente en fait une sensibilit de type intermdiaire aux azols. Elle est dite sensible dose-dpendante, et la survenue d'isolats de
C. glabrata rsistants aux azols lors d'un traitement par fluconazole est devenue beaucoup plus rare depuis que l'on prconise d'augmenter la posologie.
c. Candida tropicalis
Candida tropicalis est un saprophyte du milieu extrieur (sol, eau, air). Il peut aussi se
comporter comme un commensal des voies digestives et gnito-urinaires chez l'homme,
mais aussi de la peau saine. Son incidence en Europe ne dpasse pas 10%. La virulence
de cette levure est voisine de celle de C. albicans. On la rencontre plus frquemment chez
l'adulte que chez l'enfant. Candida tropicalis est l'origine d'environ 10% des candidoses
18
d. Candida parapsilosis
Candida parapsilosis est une levure commensale de la peau et des phanres o elle peut
tre parfois l'origine de lsions, notamment d'onyxis. Aprs C. albicans, c'est la
2me levure en frquence dans des tats de septicmies provoques par des implants
intra-vasculaires, par la nutrition parentrale, ou par des cathters souills. Ces fongmies
s'observent principalement chez les patients non cancreux, et plus particulirement
chez l'enfant, mais la ltalit associe aux fongmies C. parapsilosis reste toutefois infrieure celle des fongmies engendres par les autres espces du genre Candida.
e. Candida krusei
Candida krusei est un saprophyte du milieu extrieur. L'mergence de cette levure d'origine alimentaire a t attribue la pression de slection exerce par les antifongiques
azols (fluconazole). Elle est l'origine de septicmies, surtout chez les patients cancreux neutropniques. Paradoxalement, son incidence reste faible chez les patients infects par le VIH et soumis une chimioprophylaxie antifongique base d'azol.
f. Candida dubliniensis
Cette espce mergente, trs proche de C. albicans, a t dcrite la suite de l'apparition du sida o elle est implique dans des candidoses oropharynges. Son incidence au
cours des candidmies reste cependant faible. L'amlioration des outils d'identification de
cette nouvelle espce devrait permettre de mieux cerner sa prvalence en dehors du sida.
g. Candida lusitaniae
Candida lusitaniae colonise le tube digestif de l'homme et de nombreux animaux (mammifres, oiseaux). C'est une levure considre comme mergente, notamment chez les
patients immunodprims (cancreux, greffs de moelle) ou hospitaliss dans des Units
de Soins Intensifs o elle est l'origine de petites pidmies. De nombreux isolats prsentent une rsistance primaire l'amphotricine B.
19
Les cryptocoques
a. Cryptococcus (Cr.) neoformans
Parmi les cryptocoques, Cr. neoformans est l'espce la plus frquemment isole en
pathologie humaine. Il existe trois varits :
Cr. neoformans var. neoformans, qui correspond au srotype D, est une levure
rencontre principalement en Europe, et notamment en France. Elle infecte surtout les patients immunodprims (sida, hmopathies svres, maladie de
Hodgkin, corticothrapie, greffes d'organes, ...). Cette levure vit en saprophyte sur
les fientes de pigeons ou le guano de chauve-souris. La contamination de l'homme se fait par inhalation de poussires infectantes contenant les spores issues du
stade sexu de cette levure : Filobasidiella neoformans.
Cr. neoformans var. gattii, qui correspond aux srotypes B et C. Sa forme sexue,
qu'on appelle Filobasidiella bacillispora, est rencontre en zone tropicale. Cette
forme sexue vit en saprophyte, et elle est infode certaines plantes
(Eucalyptus). Cette varit est plus rarement retrouve chez les immunodprims.
Et la varit grubii, qui correspond au srotype A. Cette varit cosmopolite individualise rcemment n'a pas de forme sexue connue.
20
Les Malassezia
Les levures appartenant au genre Malassezia sont cosmopolites. Elles font partie de la flore
cutane habituelle des mammifres et des oiseaux. Elles sont assimiles aux
Basidiomyctes. Malassezia furfur n'est plus l'espce dominante chez l'homme, o on
isole surtout M. globosa, M. sympodialis et M. restricta. D'autres espces sont aussi
retrouves chez l'homme : M. sloofiae (issue du porc) et M. pachydermatis (issue du chien)
qui est en fait, parmi les levures du genre Malassezia, la seule espce non lipo-dpendante.
Chez l'homme, les Malassezia sont particulirement abondants sur les rgions du corps
o la peau est grasse, riche en glandes sbaces (thorax, visage, cuir chevelu, oreilles).
Ces levures lipophiles, quand elles sont abondantes et en prsence de facteurs favorisants, sont l'origine de mycoses. La contagiosit est ngligeable pour ces levures.
Les Rhodotorula
Les levures du genre Rhodotorula qui se caractrisent par des colonies de couleur rouge
corail, sont classes parmi les Deutromyctes Blastomyctes. Nanmoins, elles ont des
affinits avec les Basidiomyctes. Ces levures cosmopolites sont trs rpandues dans le
milieu extrieur, notamment dans l'eau.
Trois espces sont retrouves l'tat commensal dans l'intestin et sur la peau chez
l'homme : R. mucilaginosa (ex R. rubra), R. glutinis et R. minuta.
Elles peuvent tre l'origine d'infections superficielles (kratites) ou profondes. La porte
d'entre peut tre cutane (cathters intra-veineux souills) ou digestive par ingestion
d'eau ou d'aliments contamins.
21
Les Trichosporon
Les levures du genre Trichosporon sont issues du milieu extrieur (sol, eau, ...), mais certaines espces sont aussi retrouves l'tat commensal sur le revtement cutan (peau,
phanres) et sur les muqueuses digestives de l'homme. Comme les Rhodotorula, les
Trichosporon sont affilis aux Basidiomyctes.
Environ 7 espces (toutes cosmopolites et issues de la peau) peuvent tre impliques dans
des mycoses humaines. Il s'agit de T. mucoides, T. asahii, T. inkin, T. asteroides, T. cutaneum, T. ovoides (= T. beigelii) et T. filamenta.
Trichosporon mucoides qui est l'espce la plus frquemment isole chez l'homme, est
retrouve sur des ongles et dans les espaces interdigitaux plantaires. Trichosporon inkin,
hte habituel de la muqueuse anale et des plis inguinaux, est l'agent de la piedra blanche.
Trichosporon asahii est isol surtout des ongles, aussi bien au niveau des pieds que des
mains. Trichosporon ovoides, quant lui, est davantage retrouv au niveau du cuir chevelu, de la barbe et de la moustache. ces niveaux, Trichosporon ovoides est responsable
de lsions de piedra blanche.
Les lsions superficielles dues aux Trichosporon sont favorises par l'humidit, la chaleur
et une mauvaise hygine. Vraisemblablement, des modifications de la flore cutane dues
un dficit immunitaire local favorisent galement la survenue de ces mycoses. La prsence de ces levures sur la peau et dans l'intestin explique la survenue, en cas d'immunodpression svre, de formes profondes ou dissmines.
Les Saccharomyces
Les levures du genre Saccharomyces sont classes parmi les Ascomyctes
Hmiascomyctes. Elles sont largement rpandues dans l'alimentation (pain, vin, bire,
fruits, lgumes, ...). L'Ultralevure qui est utilis dans le traitement des diarrhes, contient
de fortes concentrations de Saccharomyces boulardii (proche de S. cerevisiae). En relation
avec leur frquence dans les produits alimentaires, ces levures sont souvent isoles l'tat commensal partir des prlvements digestifs. Les infections Saccharomyces sont
en gnral rares. Ces levures ne peuvent diffuser dans le sang et les urines que chez des
patients trs affaiblis ou immunodprims, l'occasion d'un dsquilibre de la flore intestinale et/ou d'une utilisation mal contrle de mdicaments anti-diarrhiques contenant la
levure.
22
Les Geotrichum
Les Geotrichum sont des champignons filamenteux thalle sept hyalin appartenant aux
Deutromyctes Hyphomyctes Mucdins. La reproduction sexue, avec production
d'asques et d'ascospores, n'est connue que pour deux espces : G. candidum et G. capitatum. En consquence, les Geotrichum sont rattachs dans les classifications rcentes
aux Ascomyctes.
Deux espces de Geotrichum sont rencontres l'tat commensal dans le tube digestif et
les voies ariennes de l'homme et de nombreux mammifres : G. capitatum et G. clavatum.
Une 3me espce, d'origine alimentaire, peut tre isole du tractus digestif chez l'homme.
Il s'agit de G. candidum, que l'on retrouve dans de nombreux produits laitiers (notamment
dans des fromages pte molle ou crote fleurie), mais aussi dans le sol, les eaux uses
et les fruits. Les affections humaines lies aux Geotrichum restent toutefois rares.
23
Cancers digestifs
24
25
Mineurs
Neutropnie
Diabte
Chirurgie pralable
Tableau 4 : Distribution des espces de Candida dans 2089 pisodes de septicmie survenus en
Europe (d'aprs Tortorano et al., 2004).
Espces isoles
C. albicans
1178
(56,4%)
C. glabrata
284
(13,6%)
C. parapsilosis
278
(13,3%)
C. tropicalis
152
(7,2%)
C. krusei
40
(1,9%)
C. guilliermondii
30
(1,4%)
C. lusitaniae
15
(0,7%)
C. kefyr
10
(0,5%)
C. pelliculosa
(0,4%)
C. famata
(0,3%)
C. dubliniensis
(0,3%)
C. lipolytica
(0,3%)
C. norvegensis
(0,2%)
C. inconspicua
(0,1%)
C. sake
(0,1%)
C. utilis
(0,1%)
Candida sp.
(0,6%)
54
(2,4%)
Association d'espces
26
Tableau 5 : Distribution des quatre principales espces du genre Candida isoles d'hmocultures
en fonction de l'ge et du terrain sous-jacent (d'aprs Tortonaro et al., 2004).
C. albicans
C. glabrata
C. parapsilosis
C. tropicalis
Chirurgie (934)
58,0%
16,3%
12,6%
6,1%
60,5%
11,9%
12,9%
6,1%
58,0%
15,9%
10,6%
8,3%
34,6%
9,7%
14,8%
17,9%
Prmaturit (125)
60,8%
4,8%
28,8%
2,4%
65,1%
9,5%
6,3%
6,3%
< 1 an (158)
59,6%
3,1%
27,9%
3,1%
47,9%
3,6%
32,9%
5,7%
57,1%
14,0%
11,2%
8,3%
60,0%
19,3%
6,9%
7,1%
Total
56,4%
13,6%
13,3%
7,1%
Terrain sous-jacent
Tranche d'ge
Certains facteurs gnraux, comme les ges extrmes de la vie et les facteurs de co-morbidit (pathologies associes, ...), sont des facteurs de risque de candidose systmique
en ranimation. Il faut galement signaler les sjours prolongs en Units de Soins
Intensifs. Certains patients appartiennent des catgories risque accru de candidose :
les grands brls, les polytraumatiss, les patients neutropniques, les transplants, les
patients prsentant un dficit immunitaire, ... Les interventions de chirurgie digestive lourde,
compliques de perforations intestinales, ou de fuites d'anastomose digestive, biliaire ou
pancratique, constituent galement un facteur de risque de candidose systmique.
Parmi les pratiques mdicales corrles avec un risque accru de candidmie, notamment
en ranimation, il convient de souligner le port prolong d'un cathter veineux central. La
nutrition parentrale, et l'puration extra-rnale sont aussi associes une majoration du
risque de candidose invasive ou de candidmie.
Concernant les facteurs extrinsques d'origine mdicamenteuse, il faut souligner le rle
de l'antibiothrapie large spectre qui, en permettant la multiplication des levures diges-
27
La cryptococcose
La cryptococcose survient prfrentiellement en cas d'immunodpression, plus prcisment
en cas de dficit de l'immunit mdiation cellulaire. Les patients sropositifs pour le VIH
avec un taux de lymphocytes CD4 infrieur 100/mm3 sont particulirement exposs.
Depuis l'arrive de la trithrapie, la cryptococcose au cours du sida est devenue plus rare
(sauf en cas d'chappement aux antirtroviraux). La corticothrapie prolonge, la sarcodose, la maladie de Hodgkin et certains lymphomes favorisent aussi la survenue d'une cryptococcose. l'inverse de ce qui est observ pour les candidoses, la granulopnie et l'agammaglobulinmie ne sont pas des facteurs favorisants. Dans bon nombre de cas, la cryptococcose peut aussi survenir sans que l'on puisse dceler un quelconque facteur prdictif.
Les malassezioses
Les malassezioses ne sont pas des infections transmissibles. La survenue d'un pityriasis
versicolor, d'un pityriasis capitis, d'une dermite sborrhique ou d'une folliculite semble
tre la consquence du passage de la levure d'un tat commensal l'tat parasitaire. Ce
passage serait favoris par une teneur leve en acides gras libres et en triglycrides. Une
rceptivit individuelle est aussi voque (peau sborrhique, transpiration, hypercorticisme, immunosuppresseurs). L'application de corps gras (cosmtique ou huile corporelle)
sur la peau favorise le dveloppement de ces levures. De mme, la multiplication de ces
28
levures est favorise par la chaleur et l'humidit. Le pityriasis versicolor est donc plus
frquent durant l't.
Enfin, les septicmies Malassezia ont souvent pour origine la colonisation des implants
vasculaires chez les prmaturs ou les adultes immunodprims recevant une alimentation
parentrale riche en lipides.
29
Levuroses
Candida albicans
C. glabrata
C. tropicalis
C. parapsilosis
C. krusei
C. lusitaniae
C. famata
C. guilliermondii
Cryptococcoses
- Cryptococcoses neuromninges
- Cryptococcoses viscrales
- Cryptococcoses cutanes
Cr. neoformans
Malassezioses
- Pityriasis versicolor
(peau, thorax)
- Dermite sborrhique
- Pityriasis capitis (cuir chevelu)
- Septicmies
Malassezia furfur
M. globosa
M. sympodialis
M. pachydermatis
- Piedra blanche
(poils et cheveux)
- Trichosporonoses cutanes
- Onyxis
- Septicmies
Trichosporon mucoides
T. asahii
T. inkin
T. ovoides
Candidoses
Trichosporonoses
30
Les candidoses
Les candidoses sont des affections fongiques cosmopolites provoques par des levures
appartenant au genre Candida. Ces levures sont l'origine d'infections superficielles qui
peuvent affecter aussi bien le revtement cutan et les phanres (ongles, poils, cheveux),
que les muqueuses (digestives et urognitales), ou de mycoses profondes qui touchent de
nombreux organes, notamment le foie, la rate, les reins, les os, les articulations (Figure 3).
De nombreux facteurs locaux ou gnraux favorisent la survenue de ces infections.
Candidoses superficielles
Les candidoses superficielles sont les plus frquentes des infections Candida. Elles
tmoignent le plus souvent du passage d'espces dj prsentes au niveau digestif
(C. albicans, C. dubliniensis et C. glabrata) de l'tat commensal l'tat parasitaire.
a. Candidoses buccales
On regroupe sous ce terme de nombreuses formes cliniques.
La candidose rythmateuse aigu : dans cette forme clinique, la muqueuse
buccale est rouge, inflammatoire, lisse et vernisse, sans plaques blanchtres.
La langue est rouge et dpapille. Le patient ressent une sensation de brlure
douloureuse.
La candidose pseudomembraneuse aigu ou muguet buccal : ici, la muqueuse
buccale et la langue sont recouvertes d'un enduit blanchtre qui en se dtachant
rvle une muqueuse rouge rosive (Figure 4). Le patient se plaint d'un got
mtallique et peut prsenter dysgueusie et dysphagie.
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- Muqueuses digestives :
langue, bouche, pharynx,
intestin, anus
- Muqueuses gnito-urinaires :
vulve, vagin, urtre,
sillon balano-prputial, vessie
Muqueuses
- Onyxis et prionyxis
- Intertrigos des grands plis
(axillaires, sous-mammaires, inguinaux)
- Intertrigos des petits plis
(perlche, espaces interdigito-palmaires
ou plantaires)
- Candidoses granulomateuses
- Folliculites (cuir chevelu,
barbe, moustache)
Peau et phanres
Spectre clinique
des candidoses
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La candidose aigu localise : elle se caractrise par des lsions rythmateuses ou rythmato-pultaces, limites en foyers sur la langue et le palais.
La candidose atrophique chronique : dans cette forme clinique, les lsions sont
localises ou gnralises, et se traduisent par un rythme sur une muqueuse
lisse dpapille.
La candidose pseudomembraneuse chronique (muguet chronique) : elle se traduit par des enduits blanchtres adhrant une muqueuse rythmateuse.
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La candidose gastrique :
Elle complique la candidose sophagienne. Elle se traduit l'examen endoscopique par une muqueuse inflammatoire recouverte de dpts membraneux
d'aspect nacr.
La candidose intestinale :
La clinique est peu spcifique : diarrhes, douleurs abdominales, mtorisme
avec mission de gaz. La numration des levures dans les selles permet d'en
suspecter l'existence.
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La candidose anale :
Elle se traduit par des lsions prianales rouges parsemes de petits lments
maculo-papuleux. Le prurit anal est habituel dans cette localisation.
c. Candidoses gnito-urinaires
Vulvovaginite Candida ou candidose vulvovaginale :
La candidose vaginale, dans sa forme aigu, se traduit par l'mission de leucorrhes blanchtres, d'aspect crmeux ou grumeleux (caillebott). Les muqueuses
vulvaires et vaginales (au spculum) sont rythmateuses, oedmaties et
recouvertes d'un enduit blanchtre (Figure 7). Prurit, sensation de brlures et
dyspareunie accompagnent souvent ces lsions qui, en l'absence de traitement,
ont tendance s'tendre aux plis inguinaux et au prine.
La candidose vaginale n'est pas considre comme une infection sexuellement
transmissible. C'est la consquence d'un dysfonctionnement hormonal (imprgnation progestative) ou immunitaire (dficit de l'immunit mdiation cellulaire).
Des facteurs locaux sont aussi suggrs pour expliquer les rcidives (Tableau 7).
Figure 7 :
Candidose vaginale.
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Tableau 7 : Principaux facteurs expliquant la survenue et les rechutes des candidoses vulvovaginales.
Facteurs locaux
Facteurs gnraux
- Corticodes
- Diabte
- Sudation excessive
- Infection par le VIH, surtout si le taux de
lymphocytes CD4 est infrieur 400/mm3
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Candidoses urinaires :
Les candidoses du tractus urinaire ont peu de spcificit par rapport aux infections bactriennes et ne sont pas toujours associes de la fivre. L'urtrite se
prsente le plus souvent comme une atteinte du mat avec des dpts blanchtres et un coulement associ des brlures mictionnelles. Les cystites sont
lies une colonisation rtrograde ; elles imposent de rechercher, chez la
femme, une localisation vaginale associe. Isoles, elles doivent faire rechercher
un ventuel diabte. Elles sont frquentes chez le porteur de sonde urtrale.
Lors des infections ascendantes touchant l'arbre pylocaliciel, la levure peut se
retrouver sous forme de boule fongique. Enfin, lors dune dissmination hmatogne, une localisation rnale peut se voir, type dabcs non spcifique.
d. Candidoses cutanes et unguales
Intertrigo Candida :
Les lsions dbutent habituellement au fond des plis inguinaux (Figures 9 11),
sous-mammaires, interfessier ou axillaires. Ces lsions rythmateuses et mal
limites sont souvent suintantes et recouvertes d'enduits blanchtres, avec une
priphrie constitue d'une collerette de vsicules.
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Au niveau des petits plis, interdigito-palmaires principalement (Figure 12), plus rarement plantaires l'inverse des dermatophytes (Figure 13), les lsions sont souvent
ulcres, avec une bordure blanchtre et dcolle. Ces lsions se rencontrent plus
frquemment chez les individus dont les mains sont soumises de faon rptitive
l'humidit (mnagres, mtiers de la restauration, ptissiers, plongeurs, coiffeurs) ou
des produits dcapants, et le troisime espace est le plus souvent touch.
Prionyxis et onyxis Candida :
Plus frquentes chez la femme que chez l'homme, les atteintes des ongles
Candida sigent essentiellement au niveau des mains, l'inverse des dermatophytes qui affectionnent plutt les ongles des pieds. Les facteurs favorisants
sont identiques ceux prcdemment dcrits pour les intertrigos interdigito-palmaires, mais il faut galement signaler les microtraumatismes rpts par les
soins de manucure excessifs.
Les lsions dbutent par une atteinte pri-unguale aboutissant un bourrelet
rouge autour de la zone matricielle de l'ongle (Figure 14). Parfois la pression de
la lsion qui est souvent douloureuse, permet l'coulement d'une srosit.
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L'atteinte unguale est secondaire ; elle touche la partie proximale, puis gagne
les bords latraux et la partie distale de l'ongle. L'ongle devient rugueux, stri et
friable. Parfois compltement fragilis, il se dcolle de son lit et s'en dtache.
Contrairement aux onyxis dermatophytes ou mme moisissures, les onyxis
levures voluent rapidement vers la destruction totale de l'ongle.
l'inverse, dans les paronychies chroniques (bourrelets pri-unguaux douloureux), le rle pathogne des Candida est discut bien que leur prsence puisse
tre note. Les lsions relvent plutt d'une raction d'hypersensibilit des
protines souvent d'origine alimentaire.
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Figure 15 :
Candidose cutane
nonatale.
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tiss ou des grands brls, services d'onco-hmatologie. La mortalit reste leve puisqu'elle se situe entre 45 et 60% selon le terrain sous-jacent. La symptomatologie lors
d'une septicmie Candida n'est pas spcifique. Une fivre isole qui se prolonge malgr une antibiothrapie large spectre, est souvent le seul signe clinique observ. Par
ordre dcroissant de frquence, Candida albicans, C. glabrata et C. parapsilosis sont les
espces les plus souvent isoles (Tableau 4).
b. Localisations secondaires des Candida lies une dissmination hmatogne
Cutanes :
Environ 10% des dissminations hmatognes prsentent des localisations
cutanes. Les lsions ne sont pas spcifiques. L'aspect habituel est celui de
papules et pustules avec un centre ncrotico-purpurique. Ces lsions apparaissent souvent dans un contexte fbrile associ des myalgies.
Oculaires :
Il s'agit d'endophtalmies endognes. Elles surviennent dans 10 40% des septicmies Candida, et principalement chez les patients non neutropniques et
les hronomanes (toxicomanie intraveineuse). Le fond d'il objective un exsudat cotonneux blanchtre saillant dans le vitr (Figure 17). La symptomatologie
clinique est fruste et peu spcifique : baisse de l'activit visuelle, photophobie,
scotomes, et douleurs oculaires.
Figure 17 :
Candidose
oculaire.
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Cardiaques :
L'endocardite Candida reprsente 1 2% des endocardites infectieuses de l'enfant et de l'adulte, mais 10% des endocardites du nouveau-n. Elle survient le plus
souvent chez des patients ayant des lsions prexistantes sur une valve native ou
prothtique. Elle touche aussi des patients porteurs d'un cathter veineux central
(endocardite du cur droit) et les toxicomanes. Elle est principalement due
C. parapsilosis (50% des observations) alors que C. albicans n'est retrouv que
dans 15% des cas. Les endocardites fongiques se caractrisent aussi par un dlai
de survenue souvent trs tardif (plusieurs mois) aprs un pisode candidmique.
Les symptmes sont voisins de ceux d'une endocardite bactrienne (sueurs nocturnes, fivre, souffle cardiaque lauscultation). Le point d'appel peut tre une
fivre isole avec hyperleucocytose ou des signes cutans (nodules douloureux).
Les hmocultures ne sont pas toujours positives. Il faut avoir recours des techniques d'imagerie spcialises (chographie trans-oesophagienne) pour visualiser
des vgtations habituellement plus volumineuses que celles d'origine bactrienne
(Figure 18).
diastole
VD
Ao
OD
Vgtation
tricuspidienne
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Hpato-splniques :
La candidose hpato-splnique, appele aussi candidose chronique dissmine,
survient habituellement chez le patient neutropnique soumis une antibiothrapie large spectre (qui favorise la colonisation digestive) et une chimiothrapie
gnrant des ulcres digestifs (qui favorisent l'invasion tissulaire). La symptomatologie clinique est non spcifique. Le plus souvent, il s'agit d'une fivre rsistant
aux antibiotiques en sortie d'aplasie. L'chographie, et surtout le scanner sont
plus contributifs au diagnostic ; ils mettent en vidence des lsions arrondies avec
un rehaussement priphrique voquant la prsence de micro-abcs Candida.
Ces lsions ne sont dcelables qu'en sortie d'aplasie. Le diagnostic sera suggr,
comme dans les autres localisations profondes, devant une lvation du taux
d'anticorps anti-Candida, souvent associe dans ce cas une augmentation des
phosphatases alcalines. La confirmation ne pourra tre faite que par la biopsie
d'une lsion, et son tude anatomo-pathologique et mycologique.
Osto-articulaires :
Comme pour les lsions cardiaques, l'ostoarthrite Candida survient gnralement plusieurs mois (2 12 mois) aprs un pisode septicmique. Les spondylodiscites dorso-lombaires, mais aussi des atteintes costales et sternales, sont
frquentes. Chez les hronomanes, la localisation sterno-claviculaire est habituelle. La symptomatologie clinique et radiologique n'est pas diffrente de celle des
atteintes bactriennes. Comme pour les autres localisations profondes, le diagnostic repose sur l'isolement et l'identification de la levure responsable partir
d'une ponction ou d'une exploration chirurgicale du foyer lsionnel.
Neuromninges :
Les localisations neuromninges restent rares chez l'adulte (sauf chez le toxicomane), mais elles sont plus frquentes chez le nouveau-n. Le diagnostic est
cependant difficile. Le LCR est inconstamment positif. Le diagnostic ncessite
une biopsie des lsions suspectes avec tude anatomo-pathologique et mycologique.
Pulmonaires :
Les pneumopathies primitives Candida restent exceptionnelles. Elles sont secondaires une dissmination hmatogne. Le diagnostic de certitude impose une tude
anatomo-pathologique et mycologique aprs biopsie du tissu pulmonaire.
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Rnales :
Des atteintes rnales peuvent survenir secondairement une dissmination hmatogne. La symptomatologie, non spcifique, associe fivre, frissons et douleurs
lombaires simulant une pylonphrite. La localisation rnale peut aussi tre rvle
par un bilan biologique rnal perturb (insuffisance rnale), suivi par une chographie montrant de nombreux abcs tissulaires. Il convient dans ce contexte d'liminer une atteinte rnale secondaire par voie basse (ou rtrograde) lie une colonisation Candida mal contrle, gnrant des "boules fongiques" au niveau des
voies urinaires avec le risque d'un retentissement sur la fonction rnale.
Pritonales :
Elles sont favorises par la nutrition parentrale et l'antibiothrapie. Elles compliquent aussi une manuvre chirurgicale (perforation, lchage de sutures) ou une
dialyse pritonale. Les perforations gastro-intestinales sont les plus frquentes.
Candida albicans et C. glabatra sont les levures les plus souvent isoles. Le pronostic de ces pritonites post-opratoires reste svre.
Candidose des hronomanes :
La candidose des hronomanes occupe une place part parmi les candidoses
systmiques. Cette forme clinique est lie l'utilisation d'hrone souille par une
levure appartenant au genre Candida (C. parapsilosis dans 50% des cas). Elle se
prsente d'abord comme un syndrome fbrile, survenant quelques heures ou
quelques jours aprs une injection intra-veineuse d'hrone, associ des frissons, des myalgies et des douleurs articulaires (symptmes qui peuvent aussi
tmoigner d'une endocardite). Puis apparaissent des lsions cutanes sur n'importe quelle rgion pileuse, principalement le cuir chevelu et la barbe (Figure 19).
Dans les poils prlevs, on visualise des filaments mycliens et la culture des poils
et des produits de grattage des pustules met en vidence les levures.
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La cryptococcose
La cryptococcose est une mycose cosmopolite humaine et animale voluant sur un mode
subaigu ou chronique. Cette mycose est due une levure capsule appartenant au genre
Cryptococcus (Cr.), principalement Cr. neoformans. Parmi les cryptocoques, Cr. neoformans est en effet l'espce qui prsente le comportement opportuniste le plus marqu.
La contamination se fait le plus souvent par inhalation de spores de cette levure qui vit
dans le milieu extrieur en saprophyte sur les fientes de pigeons ou le guano de chauvesouris. Plus rarement, elle s'effectue par inoculation transcutane. Cryptococcus neoformans prsente un tropisme pour le systme nerveux central et peut diffuser par voie sanguine dans tout l'organisme chez les patients fortement immunodprims.
On distingue plusieurs tableaux cliniques.
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Cryptococcose neuromninge
Le tableau clinique est celui d'une mningo-encphalite au dbut insidieux (cphales
rebelles aux antalgiques, fivre modre). Puis surviennent d'autres signes qui compltent
le tableau initial : vertiges, modification du caractre, paralysie des nerfs crniens. Enfin,
s'installe un syndrome mning franc avec raideur de la nuque et vomissements. Le diagnostic est port par l'examen du LCR, avec mise en vidence des levures capsules
l'aide d'encre de Chine. La dtection des antignes polysaccharidiques dans le LCR, le
sang, ou les urines, est aussi trs contributive au diagnostic.
Cryptococcose pulmonaire
La pneumopathie cryptocoques est rarement dcele, bien que l'arbre arien soit la
porte d'entre principale. Elle est soit inaugurale soit tardive. Quand elle est symptomatique, elle n'est pas spcifique : toux, dyspne, et douleurs thoraciques associes un
syndrome fbrile. Chez les patients non immunodprims, les signes radiologiques sont
polymorphes simulant une tuberculose ou une noplasie. Chez les patients immunodprims, le tableau s'enrichit souvent de lsions cutanes.
Le diagnostic repose sur la dcouverte des levures l'examen direct et par culture des
produits d'expectorations, du lavage broncho-alvolaire ou des biopsies des lsions.
Cryptococcose cutane
Aprs traumatisme ou brlure avec souillure tellurique, des infections cutanes peuvent se
rencontrer surtout chez le patient immunocomptent. Mais les atteintes cutanes rsultent
presque toujours d'une dissmination hmatogne chez des patients immunodprims.
La lsion typique est une papule qui devient pustule ombilique et/ou ulcro-ncrotique
(Figure 20).
Des aspects acniformes et de "molluscum contagiosum" sont aussi observs. Ces
lsions sigent principalement au niveau du visage et des extrmits des membres, sans
induire habituellement d'adnopathies satellites.
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a. Cryptococcose osseuse
La cryptococcose osseuse se manifeste par des abcs froids d'aspect pseudotuberculeux
sigeant au niveau des os plats (crne, ctes, ) ou des vertbres. Ces abcs peuvent
s'ouvrir la peau.
b. Cryptococcose oculaire
Elle se manifeste de faon non spcifique sous forme d'une choriortinite ou d'une
kratite.
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c. Autres localisations
Dans les cryptococcoses dissmines, le cryptocoque peut tre isol aussi du sang, des
urines ou de biopsies d'organes profonds : foie, endocarde, myocarde, pancras, surrnales, prostate, moelle osseuse. Ces localisations sont souvent rencontres chez le patient
siden au stade terminal.
Les malassezioses
Les malassezioses sont des affections cosmopolites dues des levures habituellement
lipophiles, appartenant au genre Malassezia. Les levures sont l'origine d'atteintes superficielles (pityriasis versicolor, dermite sborrhique, pityriasis capitis, folliculites du tronc) ou
profondes (septicmies sur terrain particulier : prmaturs, immunodprims).
Pityriasis versicolor
Le pityriasis versicolor est l'affection Malassezia la plus rpandue. Dans sa forme
habituelle, il se prsente comme une dermatose qui dbute sur le thorax (Figure 21)
et le cou (Figure 22) pour s'tendre ensuite sur tout le corps en respectant la paume
des mains et la plante des pieds. La lsion lmentaire est constitue de macules de
couleur chamois, finement squameuses, limites nettes qui s'tendent de faon centrifuge. Le prurit est le plus souvent absent. Sur peau noire ou aprs exposition au
soleil, les lsions apparaissent comme des tches dpigmentes (Figure 23) .
Le diagnostic clinique est aid par l'examen en lumire de Wood : les lsions actives mettent une fluorescence jaune verte caractristique. L'examen direct du prlvement ralis
par grattage superficiel de la lsion (signe du copeau) ou par application d'un morceau de
cellophane adhsive sur la lsion (Scotch test ; Figure 24) permet d'affirmer immdiatement le diagnostic par la mise en vidence des levures disposes sur de courts filaments
mycliens.
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Dermite sborrhique
La dermite sborrhique est une affection frquente aussi bien chez l'enfant et le nourrisson que chez l'adulte. Malassezia globosa et M. restricta sont les espces les plus frquemment impliques. Les lsions rythmato-squameuses et plus ou moins prurigineuses sigent au niveau du visage, des sourcils, des plis nasogniens, et la base du cuir
chevelu. Chez le nourrisson, les lsions sigent sur les fesses et le cuir chevelu ("crotes
de lait").
Pityriasis capitis
Le pityriasis capitis se manifeste par une desquamation abondante du cuir chevelu gnrant de nombreuses pellicules. Secondairement, des crotes paisses se forment sans
provoquer de chute de cheveux (Figure 25). Dans les formes avances, l'hyperkratose
aboutit la formation de crotes adhrentes, c'est la "fausse teigne amiantace d'Alibert".
Le pityriasis capitis est favoris par le stress et la sborrhe, et un prurit est frquemment
associ.
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Folliculite pityrosporique
Les folliculites Malassezia sont caractrises par des lsions pustuleuses et papuleuses
plus ou moins prurigineuses. Les lsions sigent essentiellement au niveau du thorax, du
dos et des paules. Elle touche surtout l'homme jeune. La frquence est augmente chez
les patients atteints de sida. L'antibiothrapie (cyclines) et la corticothrapie sont aussi des
facteurs favorisants.
Les rhodotoluroses
Les rhodotoruloses sont des affections cosmopolites, rares, dues des levures rouges
appartenant au genre Rhodotorula.
Ces levures, parfois isoles de la peau ou des phanres (ongles), des conjonctives, des
voies urinaires, digestives, ou respiratoires, sont habituellement commensales, n'entranant
alors aucune lsion particulire. l'inverse, chez des patients immunodprims, ces levures peuvent tre impliques dans des atteintes profondes : septicmies, endocardites,
mningites, pritonites, infections oculaires.
Les facteurs dclenchants les plus souvent associs ces infections sont les matriels
implantables souills (cathters intraveineux, ...), mais aussi l'antibiothrapie, la neutropnie, le diabte et l'insuffisance rnale.
Les saccharomycoses
Les saccharomycoses sont des affections cosmopolites rares, dues des levures appartenant au genre Saccharomyces. Saccharomyces cerevisiae, l'espce la plus frquemment incrimine, est habituellement isole de prlvements issus du tractus digestif.
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Cette levure ne devient pathogne que dans de rares circonstances. Elle est incrimine
dans des lsions de stomatite pseudomembraneuse, de vaginite rcidivante, ou d'infection urinaire. Des atteintes profondes sont dcrites : septicmie (lie un cathter souill),
endocardite (sur prothse), pritonite (post-opratoire ou aprs dialyse pritonale), pneumopathie et sophagite (en particulier lors du sida).
Les trichosporonoses
Comme les rhodotoruloses et les saccharomycoses, les trichosporonoses sont des affections cosmopolites rares. Elles sont dues des levures appartenant au genre Trichosporon
que l'on retrouve souvent l'tat commensal sur la peau, les ongles et les muqueuses
digestives. Elles peuvent tre l'origine de lsions superficielles (piedra blanche, onyxis) ou
profondes (septicmies chez des patients immunodprims, notamment neutropniques).
La piedra blanche
Il sagit dune atteinte des cheveux, de la barbe, de la moustache et des poils pubiens,
inguinaux ou axillaires. Les lsions se prsentent comme de petits nodules mous, blanchtres ou gristres, fixs autour du poil sans l'altrer. Au niveau inguinal ou scrotal (Figure
26), la piedra blanche dtermine un intertrigo prurigineux.
Figure 26 : Piedra blanche.
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Onyxis Trichosporon
Des atteintes unguales Trichosporon sont dcrites, comparables celles dcrites pour
les levures du genre Candida, mais touchant surtout les mains.
Les gotrichoses
Les gotrichoses sont des affections opportunistes, cosmopolites, rares. Elles sont dues
des Hyphomyctes Mucdins (hyalins) arthrospors appartenant au genre Geotrichum.
Il est habituel d'isoler les Geotrichum partir de prlvements issus de la sphre digestive
du fait du caractre commensal de ces champignons et de leur origine alimentaire (fromages et produits laitiers). Leur rle pathogne ne peut tre suspect que dans des circonstances particulires (thrapeutique immunosuppressive) et en cas de culture abondante.
On dcrit des gotrichoses superficielles, bucco-pharynges, digestives (colites, entrites),
respiratoires, oculaires (kratites) ou unguales (onychomychoses) et des atteintes profondes ou dissmines, notamment en cas d'immunodpression svre. Ces mycoses profondes ou dissmines sont dues surtout G. capitatum. Elles prsentent des localisations
diverses (hpato-splniques, cardiaques, rnales) et leur pronostic est sombre.
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Diagnostic biologique
des levuroses
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CHAPITRE II
Diagnostic mycologique
Le prlvement
Le diagnostic d'une levurose repose sur un prlvement de qualit, c'est--dire adapt
la demande. Le prlvement qui sera recueilli dans un rcipient strile, devra tre achemin rapidement au laboratoire.
A dfaut, il sera conserv pendant 24 h 48 h au rfrigrateur. Il est impratif de raliser
les prlvements distance de toute thrapeutique antifongique locale ou gnrale.
Les modalits de prlvement, d'acheminement et de conservation varient selon les localisations (Tableau 8).
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Clinique
et
localisation
Conditionnement
(volume minimal)
Prlvement
Conservation
en cas
d'acheminement
diffr
Lsions superficielles
Lsions cutanes
sches et ongles
(prionyxis secs)
Curette de Brocq,
Recueil
vaccinostyle,
ciseaux (Scotch-test du produit de raclage
pour une recherche
en flacon strile
de pityriasis versicolor)
Lsions suintantes :
plis, prionyxis
Ecouvillonnage
avec pus, muqueuses
et orifices naturels
Pustules, abcs
Curette (gratter)
et couvillonnage
1- 3 jours + 4C
Plusieurs
couvillons striles
< 24 h + 4C
Recueil
du pus d'abcs
en flacon strile,
couvillons striles
< 24 h + 4C
Recueil
en flacon strile
< 24 h + 4C
Broncho-pulmonaires
Pleurales
Liquide de ponction
Recueil
Traitement immdiat
en flacon strile (1 ml) (< 2 h)
Articulaires
Liquide de ponction
Recueil
Traitement immdiat
en flacon strile (1 ml) (< 2 h)
Pritonales
Liquide de dialyse,
redons, drains
Recueil en flacon
strile (1 ml)
Traitement immdiat
(< 2 h)
Crbrales
LCR
Recueil en flacon
strile (1 ml)
Traitement immdiat
(< 2 h)
Biopsie
Partage en 2 flacons,
un pour la mycologie,
< 24 h + 4C
l'autre pour
l'anatomo-pathologie
Sang, cathters
Hmocultures
Flacons striles
(5 10 ml)
Tissus profonds
(foie,...)
Septicmies
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< 24 h + 4C
< 24 h temprature
ambiante
L'examen direct
L'examen direct est la premire tape du diagnostic au laboratoire. Il permet en effet de
constater la prsence l'tat parasitaire de la levure au niveau du site prlev, d'orienter
ventuellement le diagnostic et de dbuter une thrapeutique approprie.
On doit distinguer l'examen direct de prlvements superficiels de celui des prlvements
profonds.
62
C
Coloration de May-Grnwald Giemsa sur frottis buccal (A) montrant des amas de
blastospores ovales, parfois bourgeonnantes.
Coloration de May-Grnwald Giemsa sur frottis vaginal (B) montrant des filaments
mycliens septs, avec formation de blastospores au sommet des articles.
Imprgnation argentique de Gomori-Grocott sur prlvement buccal (C). Noter la prsence de
filaments mycliens rguliers desquels naissent des blastospores organises en
pseudofilaments, se terminant parfois par des chlamydospores (flches).
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Les frottis, fixs la chaleur ou l'alcool, sont colors au MGG (Figure 29) ou selon la technique d'imprgnation argentique de Gomori-Grocott (Figure 30). La mise en vidence de
levures avec ou sans filaments au sein de ces produits pathologiques normalement striles permet d'affirmer le statut parasitaire de ces levures.
Un examen direct doit galement tre ralis, paralllement aux cultures, sur le liquide de
conservation des greffons conformment la rglementation.
La culture
l'exception des Malassezia lipodpendants, les levures rencontres chez l'homme peuvent pousser sur les milieux de culture utiliss en bactriologie (gloses ordinaires, gloses
au sang, bouillon cur-cervelle...). Toutefois, le milieu de Sabouraud est le plus adapt.
Les botes de Ptri offrent une surface d'ensemencement plus importante que les tubes,
elles permettent de bien isoler les colonies et facilitent la dtection des associations de
levures. Par contre, elles comportent, lors de l'ensemencement et de la manipulation des
botes, un risque de contamination par des spores aroportes de moisissures environnementales. Il convient de souligner que les gloses en bote de Ptri se desschent assez
rapidement et ne permettent pas une incubation prolonge. Leur utilisation est dconseille si la culture excde 3 semaines (recherche de cryptocoques).
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Ensemencement
Pour les produits biologiques liquides, l'ensemencement se fait de faon strile, par puisement progressif du liquide (en quadrants ou en toile). La calibration de l'inoculum (par
exemple 100 l pour les urines) permet de dnombrer les levures. Les produits biologiques
plus pais tels que le liquide bronchique (aspiration), gastrique ou synovial, et les crachats
doivent tre pralablement fluidifis l'aide d'un agent mucolytique (digest-EUR, Eurobio).
Aprs broyage des prlvements biopsiques au potter strile, des fragments seront dposs sur la glose.
Le sang est le plus souvent recueilli directement dans les flacons d'hmoculture. La technique de lyse-centrifugation (Isolator, Oxod) est parfois utilise pour concentrer les lments fongiques. Elle permet de librer les levures contenues dans les cellules phagocytaires de l'hte, et d'inactiver le complment et autres agents antimicrobiens qui pourraient
freiner la croissance du champignon. Cette technique, de ralisation dlicate, expose au
risque de contamination du manipulateur par les produits sanguins. Elle est donc essentiellement utilise pour la recherche des formes "levures" d'Histoplasma capsulatum var.
capsulatum.
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Milieux de culture
a. Milieux standard
Le milieu glos de Sabouraud additionn de chloramphnicol et/ou de gentamicine est
le plus utilis (Figure 34). On y associe parfois le cycloheximide (Actidione) qui empche
la croissance de nombreuses moisissures susceptibles de contaminer les cultures. Mais
ce produit peut inhiber ou freiner aussi la pousse de certaines espces du genre Candida
telles que C. glabrata, C. parapsilosis, C. tropicalis et C. famata.
La temprature d'incubation dpendra du site de prlvement. Pour les prlvements
superficiels, les botes de Ptri (ou tubes) seront incubes temprature comprise entre
20 et 25C. Pour les prlvements profonds, les gloses sont incubes 37C. Une
dure d'incubation de 24 48 h est gnralement suffisante pour isoler la majorit des
levures appartenant aux genres Candida ou Trichosporon.
Cependant, pour les produits biologiques issus de prlvements profonds, et pour les
cryptocoques en particulier, une dure d'incubation suprieure 5 jours, voire d'une
4 semaines, sera parfois ncessaire.
b. Milieux fluorogniques pour isolement et identification des levures
Le milieu Fluoroplate Candida (Merck) permet, aprs 24 48 heures d'incubation, la
dtection et l'identification directe de C. albicans par la fluorescence bleute des colonies
lorsque les botes sont examines sous lumire ultra-violette 366 nm.
c. Milieux chromogniques
Comme dans le domaine de la bactriologie mdicale, la mycologie a bnfici d'importants progrs en matire de milieux d'isolement et d'identification avec la mise disposition de gloses chromogniques (Figures 35 et 36). Ces milieux confrent aux colonies
qui s'y dveloppent une coloration particulire, variable en fonction de l'espce. Cette
coloration repose sur l'hydrolyse d'un substrat chromognique sous l'effet d'une enzyme
de type hexosaminidase plus ou moins spcifique de telle ou telle espce (exemple :
N-actyl--D-galactosaminidase spcifique de C. albicans).
70
71
72
Figure 36 : Association de levures (C. albicans, C. krusei, C. tropicalis, C. glabrata et C. parapsilosis) sur CHROMagar Candida (A), Candida ID 2 (B), Candi Select4 (C) et Candida
Brilliance (D).
73
Les milieux chromogniques sont particulirement indiqus pour le diagnostic des candidoses. Ils permettent d'identifier directement C. albicans (Figure 35) dont les colonies se
colorent en bleu (Candida ID2, bioMrieux), en vert (CHROMagar Candida, BectonDickinson ; Candida Brilliance, Oxoid) ou encore en rose violet (CandiSelectTM4, BioRad). Sur CHROMagar Candida, des nuances dans l'intensit de la coloration verte sont
signales, et C. dubliniensis qui est trs proche de C. albicans, produit aussi des colonies
vertes sur ce milieu. De mme, les colonies de C. dubliniensis ne sont pas diffrenciables
de celles de C. albicans sur les autres milieux chromogniques.
Ces milieux de culture ne permettent donc pas de diffrencier C. dubliniensis de C. albicans.
En revanche, ils permettent l'identification prsomptive d'autres espces de levures d'intrt mdical. Ainsi, C. tropicalis, C. glabatra et C. krusei forment des colonies bleues
d'aspects diffrents sur le milieu CandiSelectTM4 ; Candida tropicalis, C. lusitaniae et
C. kefyr forment des colonies roses sur Candida ID 2. Sur le milieu Candida Brilliance,
C. tropicalis forme des colonies bleutes et C. krusei des colonies roses irrgulires ; sur
CHROMagar Candida, C. tropicalis forme des colonies bleu mtallique et C. krusei des
colonies rose ple, plutt rugueuses. L'identification des espces non-albicans sur ces
milieux chromogniques reste cependant prsomptive, et il est ncessaire de recourrir
dans un second temps des tests complmentaires.
Mme si ces milieux sont plus onreux que les milieux standards, ils permettent une identification directe du complexe C. albicans/C. dubliniensis (aprs 24 48 heures de culture) et ils facilitent la dtection des associations de levures (Figure 36). noter que la
socit ElitechGroup commercialise galement un milieu chromognique (Candichrom II)
sur lequel C. albicans (et C. dubliniensis) produisent des colonies bleues, se diffrenciant
ainsi des autres espces pour lesquelles les colonies restent incolores.
74
d. Autres milieux
Pour les levures lipodpendantes appartenant au genre Malassezia, il convient d'utiliser
soit les milieux de Dixon ou de Caprilli avec de l'huile d'olive, soit le milieu de Sabouraud
quon recouvrira avant l'ensemencement d'une fine couche d'huile d'olive.
Les colonies de Malassezia poussent en 8 jours. Toutes les espces poussent 30C.
Seuls M. furfur, M. sympodialis et M. slooffiae poussent 37C pour les espces lipodpendantes, de mme que M. pachydermatis qui est le seul Malassezia non lipodpendant.
Pour les Cryptococcus, on utilisera le milieu de Sabouraud standard sans cycloheximide
(Actidione), mais la glose l'inositol peut s'avrer intressante pour la recherche de ces
levures dans des prlvements polymicrobiens.
e. Hmocultures
Pour les hmocultures, il est recommand d'utiliser un milieu spcifique favorisant la
croissance fongique (Bactec IC/F Mycosis, Becton-Dickinson) avec un systme de lecture automatise fonde sur la mesure du CO2 produit au cours de la croissance de la
levure (automates Bactec, Becton-Dickson). Le systme Bact/ALERT (bioMrieux), lui
aussi automatis, utilise un mme milieu de culture pour la dtection des bactries et des
champignons. La dtection de la croissance fongique repose sur une mthode colorimtrique (BacT/ALERT) ou fluorimtrique (Bactec). Les flacons devront tre maintenus
dans l'appareil au minimum 2 semaines.
dfaut de mthodes automatises, les hmocultures pour la bactriologie peuvent tres
utilises pour les levures, en particulier les flacons destins aux bactries arobies, car
certaines levures comme C. glabrata sont incapables de se multiplier en anarobiose.
L'utilisation du systme Isolator (lyse-centrifugation), avec la libration des levures intracellulaires par lyse des cellules sanguines, leur concentration par centrifugation, et l'ensemencement du culot sur des milieux de mycologie, permettrait de raccourcir le dlai de
culture. Ces milieux pour hmocultures ne permettent pas d'identifier directement les
levures. En cas de positivit, il convient de raliser un repiquage sur un milieu standard
ou mieux sur un milieu chromognique.
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76
77
78
Figure 40 : Aspect macroscopique des principaux genres de levures sur milieu de Sabouraud.
79
Figure 41 : Aspect microscopique des principaux genres de levures en culture sur milieu de
Sabouraud.
80
81
a. Test de blastse
Ce test, appel aussi test de germination, est bas sur le fait que C. albicans (mais aussi
C. dubliniensis) produit en 3 heures 37C dans du srum humain ou animal, un tube
germinatif partir des blastospores (Figure 43).
Ce tube germinatif, fin et flexueux, ne prsente pas de constriction sa base (par diffrence avec du pseudomyclium de levure qui est form par bourgeonnement, et prsente une cloison l'mergence de la cellule fille). Il est impratif de ne pas dpasser 3 h car
d'autres espces de levures pourraient alors produire des tubes germinatifs. Ce test peut
aussi donner lieu des faux ngatifs et expose, par ailleurs, l'oprateur aux risques lis
l'utilisation de produits sanguins.
b. Recherche de la chlamydosporulation
Sur milieu PCB (pomme de terre, carotte, bile) ou RAT (crme de riz, agar, Tween 80),
C. albicans produit en 24 h 48 h 20-25C des chlamydospores l'extrmit de
pseudofilaments (Figure 44). Il faut cependant noter que C. dubliniensis produit lui aussi
des chlamydospores sur ces milieux. Elles sont plus abondantes et disposes par paires
ou par triplets.
c. Bichro-latex albicans (Fumouze Diagnostics)
Le principe de ce test sur lame repose sur l'agglutination, en prsence de blastospores
de C. albicans, de particules de latex sensibilises par un anticorps monoclonal spcifique d'un antigne de la paroi de cette levure. Ces particules de latex colores en rouge
sont en suspension dans un contre-colorant vert.
Ainsi, s'il s'agit de C. albicans, l'agglutination des particules de latex par les blastospores
se traduira par la formation d'agglutinats rouges sur un fond vert (Figure 45). Ce test prsente une excellente sensibilit et une grande spcificit, du moins pour le complexe
C. albicans/C. dubliniensis. En effet, il est galement positif pour C. dubliniensis et ne permet pas de diffrencier les deux espces.
82
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C. albicans
C. krusei
C. dubliniensis
C. glabrata
C. albicans
C. albicans
84
b. Tests immunologiques
Ces tests sont bass sur l'agglutination par les blastospores de C. dubliniensis
(BichroDubli, Fumouze Diagnostics) ou de C. krusei (Krusei Color, Fumouze
Diagnostics) de particules de latex sensibilises par un anticorps monoclonal spcifique
de ces espces.
Le Candida check (Iatron Laboratories) est un kit bas sur des tests d'agglutination sur
lame (et ltude de lassimilation du saccharose) utilisant un panel dimmunsrums polyclonaux de lapin, qui permet d'identifier les 8 principales espces du genre Candida en
fonction du profil d'agglutination. La diffrenciation entre C. albicans et C. tropicalis est
nanmoins impossible par ces tests dagglutination, ncessitant le recours ltude de
lassimilation du saccharose.
c. Tests biochimiques
Le test Glabrata RTT (Fumouze Diagnostics), de ralisation simple, permet d'identifier
rapidement C. glabrata par sa capacit hydrolyser le trhalose et l'absence d'hydrolyse du maltose (Figure 46). D'autres espces peuvent en effet hydrolyser ces deux hydrates de carbone.
Candida glabrata
Candida albicans
Figure 46 :
Glabrata RTT.
Candida tropicalis
Candida glabrata
Mais, la grande majorit de ces tests repose sur l'tude de l'assimilation des hydrates de
carbone en arobiose (auxanogramme du carbone), et pour certains de la fermentation
de ces sources de carbone (zymogramme).
De nombreux dispositifs miniaturiss et standardiss sont commercialiss (Tableau 9),
tels que les galeries Api 20C Aux ou ID 32C commercialises par bioMrieux.
85
Paramtres
API 20C
AUX
(bioMrieux)
Auxacolor2
Candifast Fungichrom Fungifast
ID32C
(Bio-Rad)
(ElitechGroup) (ElitechGroup) (ElitechGroup) (bioMrieux)
VitekYBC
(bioMrieux)
Nombre
de taxons
43
33
10
24
10
63
50
Nombre
de tests
19
20
15
20
31
20
Cycloheximide
Oui
Oui
Oui
Oui
Non
Oui
Non
Urase
Non
Non
Oui
Oui
Oui
Non
Oui
Phnoloxydase
Non
Oui
Non
Oui
Oui
Non
Oui
Inoculum
2 McF
1,5 McF
2 McF
2 McF
2 McF
1,8 2,2
McF
48 72 h
24 72 h
24 72 h
24 48 h
24 72 h
48 72 h
18 h
Obligatoires
Obligatoires
Non
obligatoires
Non
obligatoires
Obligatoires
Non
demands
Obligatoires
Dure
Caractres
morphologiques
Manipulation
Manipulation Manipulation Manipulation
Manipulation Manipulation
simple, mais
simple, mais simple, mais
simple.
simple.
simple.
Manipulation
ce test est
ce test est
Nombre
Commentaires ce test est
Test
Test
simple
peu discrimipeu discrimi- peu discrimilimit
performant
performant
nant
nant
nant
de taxons
86
Dans l'auxanogramme, la levure est place en arobiose en prsence d'un panel plus ou
moins large d'hydrates de carbone (oses simples, polyols, osamines, ). Les sources de
carbone sont dj distribues sous forme lyophilise au fond des cupules de la galerie
d'identification. Lorsque la levure assimile le sucre, sa multiplication se traduit par un
trouble dans la cupule ou par le virage d'un indicateur de pH.
Dans le zymogramme, l'tude de l'assimilation des hydrates de carbone comme source
de carbone et d'nergie est effectue en anarobiose (ralise en recouvrant les cupules
d'huile de paraffine) et l'assimilation par la voie fermentative entrane un virage de l'indicateur de pH en raison de la production de mtabolites acides. Aprs traduction du profil d'assimilation en un code numrique, l'identification de l'espce est assure par comparaison des bases de donnes. Selon les dispositifs commerciaux, 10 63 espces
peuvent tre identifies appartenant principalement au genre Candida, mais aussi d'autres genres comme Cryptococcus, Trichosporon, Rhodotorula ou Saccharomyces.
Le systme API 20C AUX (bioMrieux) repose sur l'tude de l'assimilation de
19 sources de carbone.
Le test Auxacolor2 (Bio-Rad) comprend 15 tests colorimtriques dont 13 reposent sur l'assimilation de carbohydrates, les deux derniers correspondant la
sensibilit au cycloheximide (Actidione) et la recherche de la phnoloxydase.
Les dispositifs Candifast et Candifast Es Twin (ElitechGroup) qui permettent
respectivement lidentification des levures ou lidentification et ltude simultane
de la sensibilit aux antifongiques, comportent ltude de la fermentation de
7 sucres, de la sensibilit au cyloheximide et de lhydrolyse de l'ure.
Les dispositifs Fungichrom et Fungifast (ElitechGroup) qui permettent respectivement lidentification des levures ou lidentification et ltude simultane de la
sensibilit aux antifongiques, comprennent ltude de lhydrolyse de
2 substrats chromognes, de lassimilation de 5 carbohydrates, de lhydrolyse
de l'ure et la recherche de la phnoloxydase.
La galerie ID 32C (bioMrieux) comprend l'tude de l'assimilation de 29 sources de carbone, l'tude de la sensibilit l'Actidione et la recherche de l'hydrolyse de l'esculine. Cette galerie d'identification est aujourd'hui la plus performante. Elle peut tre automatise et sert souvent de rfrence.
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88
Morphologie
microscopique
sur RAT
Aspect
des colonies
Microscopie
Blastospores
pseudofilaments
Blastospores
filaments
et/ou pseudofilaments
chlamydospores
Blanches, luisantes,
lisses bords nets
Blastospores ovodes
(3-14 x 3-7 m)
Blastospores, filaments,
pseudofilaments
et chlamydospores
Blastospores ovodes
(3-14 x 3-7 m)
Blastospores, filaments,
pseudofilaments
et nombreuses
chlamydospores
C. glabrata
Blanches, brillantes,
lisses bords nets
Blastospores rondes
ovodes (3-4 x 2-3 m)
Blastospores rondes
ovodes
Pas d'eumyclium
ni pseudomyclium
C. tropicalis
Blanches crmes,
lisses bords nets
Blastospores ovodes
(6-10 x 4-7 m)
Blastospores ovodes
et nombreux
pseudofilaments
C. parapsilosis
Crmes,
lisses bords nets
Blastospores rondes
ovodes (5-15 x 5-10 m)
Blastospores rondes
ovodes
et pseudofilaments courts
C. krusei
Blanches, mates
bords festonns
odeur d'alcool de fruit
Blastospores ovodes
cylindriques
(5-12 x 3-6 m)
Blastospores ovodes
cylindriques
Pseudofilaments
C. kefyr
Blanches crmes,
translucides
odeur fruite
Blastospores ovodes
allonges
(7-10 x 3-5 m)
Blastospores ovodes
allonges
Nombreux pseudofilaments
Rouges
ou oranges
Blastospores globuleuses
Blastospores globuleuses
Pas d'eumyclium
ni pseudomyclium
Blanches crmes,
lisses bords nets
Blastospores globuleuses
ou allonges
(5-15 x 3-10 m)
Asques globuleux
(1 4 ascospores)
Blastospores globuleuses
ou ovodes
Pas d'eumyclium
ni pseudomyclium
Blanches, sches,
bords fissurs
Blastospores allonges
avec arthrospores
Filaments et
pseudofilaments abondants
+ arthrospores
+ blastospores
Blanchtres,
puis chamois
Lisses
Blastospores ovodes,
globuleuses ou allonges,
avec souvent
une large base
Pas de pseudomyclium
Candida spp.
C. albicans
C. dubliniensis
Rhodotorula spp.
Saccharomyces spp.
Trichosporon spp.
Malassezia
lipodpendants
89
Indications
Paralllement l'identification, la dtermination de la sensibilit aux antifongiques doit tre
ralise dans les situations suivantes :
- lorsque la levure est isole d'une hmoculture ou d'un site profond
- lorsque la levure est isole d'un site superficiel, notamment cavitaire, en cas de
rcidive ou d'chec thrapeutique
- et enfin lorsqu'il s'agit de patients immunodprims ou soumis une forte pression de slection lie une prophylaxie ou un traitement antifongique en cours.
Les mthodes
Le CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) aux USA et l'EUCAST (European
Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) en Europe ont propos une standardisation de ces techniques. Les mthodes proposes, qui constituent aujourd'hui les techniques de rfrence, ont par ailleurs permis la mise au point de nouveaux tests.
a. Mthodes par dilution
Dilution en milieu solide :
Pour un antifongique donn, une gamme de dilutions est ralise. Les dilutions sont
ensuite incorpores dans un milieu glos maintenu en surfusion qui est alors distribu
en botes de Ptri. L'ensemencement des souches tester se fait l'aide de l'appareil de
Steers, qui permet de repiquer simultanment 36 souches sur le mme milieu. Le milieu
Casitone est indiqu pour les drivs azols. Il existe une bonne corrlation avec la
mthode CLSI.
Dilution en milieu liquide :
La macromthode en tube initialement propose par le CLSI a t miniaturise pour faciliter son application en routine. La technique de l'EUCAST diffre de celle du CLSI par une
supplmentation du milieu en glucose, un inoculum cent fois suprieur et une incubation
courte de 24 heures. Les deux techniques sont bien corrles.
Minigaleries commercialises (dilutions en milieu semi-solide) :
En pratique, il existe des tests commercialiss sous forme de galeries (Fungitest,
90
Bio-Rad ; ATB Fungus 3, bioMrieux) qui permettent de tester la sensibilit des Candida
dans des conditions trs proches des techniques de microdilution en milieu liquide.
Ainsi la galerie Fungitest permet de tester la sensibilit 6 antifongiques : la 5-fluorocytosine (5-FC), l'amphotricine B (Am B), le fluconazole, l'itraconazole, le ktoconazole et
le miconazole. Chaque antifongique est test deux concentrations, ce qui permet de
classer la levure en sensible (aucune croissance dans les deux cupules), rsistante (croissance dans les deux cupules) ou intermdiaire (croissance uniquement dans la cupule de
faible concentration en antifongique). La galerie ATB Fungus 3, pour sa part, teste 5
molcules : la 5-FC, l'Am B, le fluconazole, l'itraconazole et le voriconazole avec une
gamme de concentration croissante de 6 10 valeurs (deux seulement pour la 5-FC qui
n'est plus gure utilise en thrapeutique), ce qui permet la dtermination des CMI. Pour
cette mthode, la lecture doit imprativement tre ralise aprs 24 2h d'incubation. Au
del, il est difficile, pour les azols, d'apprcier la plus faible concentration en antifongique
engendrant 80% d'inhibition de croissance.
Les tests commercialiss sont d'utilisation simple, rapides et reproductibles. Des erreurs
sont nanmoins possibles lors de la lecture. Par ailleurs, il faut veiller homogniser parfaitement l'inoculum dans le milieu de culture. Les seuils de sensibilit, bien tablis pour
la 5-FC, le fluconazole et l'itraconazole, le sont moins pour l'Am B (Tableau 11).
Tableau 11 : Concentrations critiques (en g/ml) recommandes par le CLSI pour Candida.
Sensible
Intermdiaire
(ou sensible
dose-dpendante)
Rsistante
5-FC
< 4 g/ml
8 16 g/ml
> 32 g/ml
Fluconazole
< 8 g/ml
16 32 g/ml
> 64 g/ml
Itraconazole
> 1 g/ml
Molcules
91
92
93
Index de colonisation
L'index de colonisation (IC) et l'index de colonisation corrig (ICC) de Pittet ne sont utiliss
en pratique que pour le suivi de patients hospitaliss en Units de Soins Intensifs, plus
prcisment ceux de ranimation chirurgicale.
La dtermination de ces indices ncessite la mise en culture rgulire de prlvements
issus de sites priphriques facilement accessibles (bouche, narines, anus, ...), de selles
et de liquides biologiques (urines, produits d'expectoration, ). Au moins 5 sites priphriques doivent tre explors.
L'index de colonisation est dfini comme suit :
IC =
Au del d'une valeur de 0,4, on considre qu'il existe un risque important d'infection profonde Candida.
L'ICC est un indice qui prend en compte l'intensit de la colonisation des diffrents sites
prlevs. Un site est fortement colonis quand le nombre d'units formant colonies (UFC)
est suprieur ou gal 104.
ICC = IC x
L'ICC prsenterait une sensibilit et une valeur prdictive positive de 100% pour des
valeurs suprieures ou gales 0,4.
Le calcul de ces indices permettrait de cibler la prophylaxie par des antifongiques en slectionnant les patients "haut risque".
94
dans ce cas, on s'attachera dnombrer les colonies. Ainsi une candidurie suprieure
104 UFC par ml chez un patient non sond est en faveur d'une infection urinaire.
Pour les sites cutans et les sites cavitaires, la prsence de levures peut correspondre
un simple portage. L'interprtation ncessitera la confrontation des rsultats mycologiques
avec les donnes cliniques. Quand elle est possible (donc principalement pour les prlvements liquides), la dtermination de la charge fongique est souvent contributive au diagnostic. Par exemple, la prsence de plus de 10 colonies de levures sur une culture issue
d'un prlvement vaginal, de 5 10 colonies par cm2 de surface oropharynge couvillonne, de 102 UFC par ml de solution de rinage buccal ou de 104 UFC par gramme de selles, est en faveur du caractre pathogne de la levure isole.
En l'absence de biopsies issues de tissus ou d'organes profonds, les hmocultures reprsentent des prlvements essentiels dans le diagnostic des levuroses systmiques. Leur
sensibilit demeure cependant dcevante (en gnral infrieur 50% selon les diffrentes
tudes ralises) malgr l'amlioration des techniques et, notamment, le dveloppement
de milieux spcifiques. Par ailleurs, cette sensibilit varie en fonction des espces : par
exemple, C. albicans, C. tropicalis et C. parapsilosis sont dtects plus prcocment que
C. glabrata ou C. krusei. Enfin, elle varie galement avec la localisation. Ainsi, en cas de
candidose hpato-splnique, seuls 20% des prlvements sont positifs.
Il est donc important de rpter les prlvements chez tout patient risque et de prfrence au moment de pics fbriles.
Sans attendre les rsultats de l'identification de la levure isole d'une hmoculture ou d'un
prlvement profond (normalement strile), il convient d'avertir rapidement le clinicien de la
positivit de l'hmoculture, de manire mettre en uvre un traitement antifongique qui
pourra tre adapt par la suite en fonction de l'espce identifie. Il a en effet t clairement
montr que tout retard linstauration du traitement systmique tait prjudiciable en cas
de septicmie levures.
Dans le cadre d'une infection fongique dissmine, les critres diagnostiques ont t
dfinis par un consensus international (Tableau 12).
95
Candidose possible
Infection tissulaire profonde
Candidmie
ET
ET
96
Le caractre pathogne d'une levure doit tre discut dans un contexte clinique et pidmiologique, en particulier lorsqu'elle est isole de sites superficiels normalement coloniss
(peau, bouche, trache, selles, vagin) ou qu'elle provient de prlvements pouvant tre
contamins (LBA, urines, ...).
L'interprtation doit, en effet, tenir compte de nombreux facteurs : l'espce isole, l'intensit de la colonisation (culture pure et/ou abondante), la valeur des indices de Pittet quand
ils peuvent tre dtermins, l'isolement plusieurs reprises d'une mme levure, ainsi que
les donnes de l'examen direct qui est fortement contributif devant la mise en vidence de
filaments mycliens ou de pseudofilaments. Le terrain (patient immunodprim) et la maladie sous-jacente (notamment l'infection par le VIH) sont aussi des informations prcieuses prendre en compte. Pour illustrer ces propos, on peut signaler certains exemples :
L'isolement de Candida dans les selles tmoigne le plus souvent d'une simple
colonisation. Celle-ci doit cependant tre prise en compte dans la surveillance
des patients risque, notamment dans les services de ranimation et d'oncohmatologie.
La prsence de Candida dans une urine peut tre fortuite et la responsabilit de
la levure ne sera dmontre que devant une culture pure et abondante et en l'absence de sonde. C'est dans ce contexte que la numration des levures dans les
liquides biologiques prend tout son intrt. La plupart des auteurs s'accordent
valuer 104 UFC/ml le seuil significatif d'une candidurie.
La prsence de levures dans un prlvement des voies ariennes (expectoration,
aspiration bronchique, lavage broncho-alvolaire) est d'interprtation difficile en
raison d'une colonisation frquente de la sphre oropharynge. Seule la biopsie
(rarement pratique) est contributive au diagnostic d'une levurose pulmonaire. En
l'absence de biopsies, le caractre habituellement commensal ou non de l'espce identifie est important pour l'interprtation.
Pour les prlvements profonds (normalement striles) comme pour les hmocultures, l'isolement de levures, quelle qu'en soit la quantit ou l'espce, suffit porter le diagnostic et instaurer un traitement antifongique qui sera secondairement
adapt si besoin en fonction de l'espce identife et des rsultats de l'antifongigramme.
97
techniques innovantes
Ces deux dernires dcennies ont connu d'importants progrs technologiques, avec
notamment le dveloppement de la biologie molculaire et l'essor des approches protomiques. Ces techniques utilises depuis longtemps dans le cadre des levuroses pour le
typage des souches des fins pidmiologiques, ou dans un but taxinomique pour l'identification de certaines espces, ont galement t envisages des fins diagnostiques et
des applications sont aujourd'hui disponibles ou pourraient l'tre dans un avenir proche.
98
La performance de cette approche relve donc du savoir-faire et des protocoles dvelopps par lquipe en place. Il convient nanmoins de signaler la commercialisation rcente
de kits permettant le diagnostic des septicmies levures bass sur l'utilisation du systme Lightcycler (Lightcycler SeptiFast Test, Roche) ou de la technique d'hybridation in
situ (PNA FISH, peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridation).
Mthodes d'identification
En dpit des nombreuses techniques dveloppes, les applications de la PCR lidentification des levures partir dun produit de culture (flacons d'hmocultures ou cultures sur
glose) restent actuellement limites, en raison de la performance et de la simplicit d'utilisation des techniques conventionnelles (milieux chromogniques, tests dagglutination et
galeries didentification). Cependant, 48 96 heures sont souvent ncessaires avant d'aboutir l'identification de l'espce, alors que lapproche molculaire permet de rduire
considrablement ce temps d'analyse. Son cot (notamment pour la PCR en temps rel
et le squenage) est cependant trs suprieur celui des techniques mycologiques classiques, et le recours la biologie molculaire ne senvisage gnralement que lors des
levuroses profondes. En effet, dans ce contexte, le choix de l'antifongique ncessite lidentification rapide de lespce en cause. Les cibles vises sont gnralement des squences
hautement conserves chez les champignons (donc autorisant lutilisation dun seul couple damorces), entre lesquelles on trouve des rgions variables. Les rgions ITS1 et ITS2
(Internal Transcribed Spacer ou espaceurs internes transcrits), situes sur les gnes
codant pour lARN ribosomal 5,8S, 18S et 28S, sont les rgions variables les plus utilises.
La rgion ITS2 semble plus particulirement intressante, en raison de son haut degr de
polymorphisme au sein des espces du genre Candida. Une des approches molculaires
les plus concluantes concerne la diffrenciation entre C. albicans et C. dubliniensis, difficilement ralisable avec la plupart des systmes didentification phnotypiques classiques.
L'amplification par PCR des rgions ITS est suivie le plus souvent d'un squenage, mais
il est galement possible d'analyser le polymorphisme de longueur des amplicons ou de
raliser une hybridation avec des sondes fluorescentes spcifiques d'espces, ou encore
d'avoir recours une PCR multiplex ou des puces ADN. Cette dernire technique (DNA
array), qui consiste raliser l'hybridation des produits d'amplification sur des sondes oligonuclotidiques spcifiques d'espces immobilises sur lames de verre ou sur membranes, est beaucoup plus rapide et moins coteuse que le squenage. Elle s'est rvle
capable d'identifier en moins de 24 heures, 77 espces de levures diffrentes partir d'hmocultures positives. La lecture est par ailleurs possible l'il nu (rvlation colorimtrique
99
de spots de 400 m de diamtre). Cette technique, qui permet une identification plus rapide que le systme Vitek, est trs prometteuse. Elle semble rellement applicable en routine hospitalire, mais pose le problme des espces rares qui ne seraient pas dtectes
par les sondes oligonuclotidiques.
Rcemment, trois dispositifs didentification par hybridation in situ (PNA FISH, peptide
nucleic acid fluorescent in situ hybridation) ont t dvelopps par la socit AdvanDx (distribus en France par i2a). Ces tests permettent d'identifier partir des hmocultures positives les principaux agents pathognes responsables de septicmies (Staphylocoques,
Entrocoques et levures). A partir des hmocultures positives, sont raliss des talements
sur lames qui sont hybrids avec des sondes marques par diffrents fluorochromes, et la
lecture est effectue au microscope fluorescence. Ainsi, le kit Yeast Traffic Light PNA
FISHTM repose sur l'hybridation des levures avec des sondes fluorescentes spcifiques des
ARNr 26S des principales espces de levures rencontres dans les candidmies (Figure
48). Ces tests permettent de s'affranchir de la PCR, tout en assurant une identification
d'espces fiable et rapide (en moins de 3 heures).
Figure 48 : Dtection de levures partir des hmocultures positives l'aide du kit Yeast Traffic
Light PNA FISHTM.
100
Le kit Lightcycler SeptiFast kit (Roche) permet quant lui la dtection directe de septicmies levures par amplification par PCR multiplex des rgions ITS des principales bactries Gram positif, bactries Gram ngatif et levures, partir du prlvement de sang,
avec une identification de l'espce en cause, en moins de 6 heures, par analyse de la temprature de fusion des produits d'amplification.
La spectromtrie de masse MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption/ionisation-timeof-flight) reprsente galement une alternative intressante l'identification molculaire.
Cette approche protomique permet une identification rapide directement partir des cultures. Des solutions commerciales sont disponibles (comme le systme AXIMA@SARAMIS, de Shimadzu, distribu par i2a ou le systme Microflex de Bruker Daltonics) qui permettent d'identifier en quelques minutes seulement les bactries (Gram positives ou Gram
ngatives), mais aussi les levures et les champignons sur la base de leurs empreintes
MALDI-TOF MS. Les temps de prparation et le cot des consommables sont considrablement rduits par rapport aux techniques molculaires.
Enfin, dautres techniques sont galement en cours de dveloppement, comme la spectroscopie infrarouge transforme de Fourier, mais elles ncessitent un appareillage encore inhabituel dans un laboratoire de microbiologie.
101
PFGE) ou de fragments d'ADN (polymorphisme de taille des fragments de restriction enzymatique ou Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP; Empreinte d'ADN ou DNA
fingerprinting ; et l'amplification alatoire de fragments d'ADN polymorphes ou Random
Amplification of Polymorphic DNA, RAPD) ou sur l'tude du polymorphisme de squences
nuclotidiques identifies (squenage multiloci ou Multi Locus Sequence Typing, MLST;
analyse de squences microsatellites). La reproductibilit ou le pouvoir discriminant des
diffrentes mthodes de typage est cependant variable, et elles manquent parfois de standardisation. Pour le typage des souches de Candida, la MLST et l'analyse des microsatellites sont les deux mthodes les plus performantes.
La technique MLST (Multilocus Sequence Typing) est base sur lanalyse du polymorphisme nuclotidique de 6 ou 7 loci indpendants. Les fragments squencs correspondent
des gnes de mnage, rgions de grande variabilit encadres par des squences
conserves et qui prsentent des variations intra-spcifiques. Cette technique hautement
discriminante a par ailleurs l'avantage d'tre hautement reproductible, et la standardisation
des donnes obtenues a permis la constitution dune banque publique permettant de
retracer
la
circulation
des
souches
lchelon
national
et
international
(http://www.mlst.net). Les squences MLST d'un grand nombre de souches de C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. krusei et C. neoformans var. grubii sont actuellement
disponibles dans cette base de donnes.
Dautres marqueurs prsentant des squences rptes et un certain degr de polymorphisme au sein de familles multigniques sont utiliss, parmi lesquels il faut citer les rgions
microsatellites. Il s'agit de rptitions de courts motifs de 1 6 paires de bases, extrmement polymorphes. Le nombre de rptitions un locus donn est variable. Le squenage de ces rgions est un outil de typage trs utile. Comme la MLST, cette technique est
standardisable pour chaque espce de Candida. Son pouvoir discriminant augmente galement avec le nombre de microsatellites tudis. Enfin, elle est moins onreuse et plus
rapide que la MLST, mais cette dernire est actuellement plus prcise et davantage standardise.
Outre son application dans l'identification des espces, la spectroscopie infrarouge
transforme de Fourier s'est montre capable de discriminer les souches de Candida,
mais les tudes bases sur cette mthode restent peu nombreuses.
102
Diagnostic indirect
Les difficults de mise en place de procdures invasives ou l'impossibilit d'avoir recours
de telles procdures pour l'isolement des levures lors d'une suspicion de levurose
profonde ou systmique, ont conduit au dveloppement de mthodes immunologiques de
mise en vidence d'anticorps sriques ou d'antignes circulants marqueurs d'une infection
fongique invasive. Ces deux types d'approches sont complmentaires.
103
104
Les candidoses
Diffrents antignes ou mtabolites de la levure peuvent tre recherchs dans les liquides
biologiques.
a. Recherche dantignes non dfinis
Les laboratoires Ramco commercialisent aux Etats-Unis un kit appel Cand-Tec
Candida Detection System, bas sur l'agglutination de particules de latex sensibilises
par des anticorps polyclonaux dirigs contre un antigne parital non dfini de C. albicans
(exoantigne thermolabile). Ce test peu spcifique nest gure utilis en France.
b. Recherche de mannanes circulants
Actuellement, trois tests bass sur la dtection des antignes mannanes qui constituent
les polysaccharides majeurs de la paroi des levures du genre Candida, sont commercialiss pour le diagnostic des candidoses invasives.
Test Pastorex Candida (Bio-Rad) :
Il consiste en l'agglutination de particules de latex sensibilises par un anticorps
monoclonal anti-mannane. Il prsente une excellente spcificit, mais sa sensibilit est mauvaise, ne dpassant pas 30%. De ce fait, il est peu utilis bien qu'il
permette une rponse immdiate.
Test Platelia Candida Ag (Bio-Rad) :
Il dtecte les manannes circulants par une technique ELISA sandwich en microplaques. Si sa spcificit est excellente, sa sensibilit n'excde pas 50%. De
plus, comme le test Pastorex Candida, il reconnat de faon inconstante les
mannanes de la paroi des blastospores des espces non albicans (C. krusei,
105
C. kefyr et C. parapsilosis). Il est recommand d'associer la recherche des anticorps anti-mannanes la recherche des mannanes circulants. Des tudes ont
montr qu'avec ce double suivi, plus de 80% des pisodes infectieux causs par
C. albicans, C. glabrata ou C. tropicalis peuvent tre dtects. De mme, ces
tests Platelia permettraient de raliser plus prcocment le diagnostic de candidose systmique, en moyenne 4 jours avant la positivit des hmocultures.
Test Serion ELISA antigen Candida (Virion/serion) :
Ce test, voisin du prcdent, est bas sur la dtection des antignes mannanes
par une technique ELISA en microplaques.
c. Recherche de -glucanes circulants
D'autres tests ont t dvelopps rcemment, bass sur la dtection des (1,3)-D glucanes qui, avec la chitine, sont les polysaccharides de structure majeurs de la paroi fongique. Ces polysaccharides, normalement prsents dans le srum de sujets sains des
valeurs basses, sont librs dans la circulation en cas dinfections fongiques et des taux
levs de (1,3)-D glucanes peuvent alors tre retrouvs. Plusieurs tudes ont dailleurs
montr que le taux de (1,3)-D glucanes augmente bien avant lapparition des signes cliniques, ce qui permet denvisager un diagnostic prcoce. De plus, la spcificit de ces
tests ne se limite pas au genre Candida puisque les -glucanes sont produits par pratiquement tous les champignons. Ils sont cependant peu contributifs pour le diagnostic
des cryptococcoses et des zygomycoses (faible production de -glucanes).
A lheure actuelle, seul le test Fungitell (Associates of Cape Cod, Inc.) est commercialis en France par la socit Biogenic. Le principe de ce test ralis en microplaques est
prsent dans la Figure 51. En prsence dendotoxine, de facteur C et de facteur G, les
(1,3)-D glucanes vont permettre lhydrolyse dun substrat peptidique chromognique
avec libration de paranitroaniline (pNA) et lintensit de la coloration obtenue sera fonction de la concentration en (1,3)-D glucanes circulants.
Ce test prsente une sensibilit comprise entre 70 et 100% selon les tudes. Chez les
patients risque, des taux sriques dau moins 80 pg/ml sont hautement corrls avec
des infections fongiques invasives, et inversement des valeurs basses ont une haute
valeur prdictive ngative.
106
107
Lorsque le dispositif est introduit dans l'chantillon tester, obtenu partir d'un prlvement vaginal trait avec le milieu dextraction, les antignes mannanes de Candida ventuellement prsents, se fixent sur l'anticorps monoclonal 5B2 (IgM) li aux particules d'or
et forment des complexes antignes-anticorps-particules dor. Ces complexes migrent et
se fixent, par l'intermdiaire des antignes, sur lanticorps 5B2 immobilis sur la bandelette. Une bande colore en rose ou rose violac apparat (R). Lexcs danticorps monoclonal li aux particules dor se fixe ensuite sur la ligne "Contrle" (C) o sont immobiliss
des anticorps anti-IgM. Il apparat alors sur cette ligne une coloration rose ou rose violac, qui tmoigne de la bonne migration. L'apparition dune seule bande (C) indique un
rsultat ngatif, et l'apparition de deux bandes (R et C) un rsultat positif.
La cryptococcose
Pour la cryptococcose, 4 tests sont actuellement commercialiss. Ils reposent tous sur une
technique d'agglutination de particules de latex sensibilises par des anticorps polyclonaux (CryptoLa-test, International Biologica Laboratories ; Cryptococcal Antigen Latex
Agglutination-System ou CALAS, Meridian Diagnostics ; Latex Cryptococcal Antigen
Detection System, IMMY ou Myco-Immun) ou des anticorps monoclonaux (Pastorex crypto plus, Bio-Rad).
Tous ces tests prsentent une trs bonne sensibilit et une excellente spcificit. Pour le
srum, il est recommand de chauffer celui-ci au pralable pendant 10 minutes 100C
pour dissocier d'ventuels complexes immuns et liminer le facteur rhumatode.
108
Conclusion
Les techniques mycologiques classiques suffisent largement poser le diagnostic d'une
levurose superficielle. Concernant les localisations profondes, les hmocultures peuvent
rester ngatives en dpit d'une large dissmination de la levure dans l'organisme. Dans
ces situations, l'approche srologique peut aussi tre prise en dfaut, en raison du statut
immunitaire des patients qui sont souvent immunodprims. La recherche des antignes
(mannanes, (1,3)-D glucanes) peut pallier ces difficults. Cependant, elle n'est utilisable
en pratique que pour les candidoses et les cryptococcoses. La biologie molculaire s'avre tre une alternative intressante, mais pour l'instant aucun dispositif commercial n'est
valid et sa performance relve du savoir-faire des quipes qui la pratiquent.
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Page 1
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Fiches
diagnostiques
111
CHAPITRE III
112
Le genre Candida
Le genre Candida est le plus reprsent avec plus de 190 espces, dont moins d'une
vingtaine est rencontre chez l'homme. Les Candida sont des levures rondes ou ovodes
le plus souvent, mais parfois plus allonges. Beaucoup d'espces produisent du
pseudomyclium, et parfois de vrais filaments mycliens. D'autres ne produisent pas de
pseudofilaments en culture, y compris sur milieu RAT ou PCB.
Les levures du genre Candida sont issues de prlvements trs varis, d'origine cutanomuqueuse ou profonde. Nombre des levures responsables des candidoses vivent au
pralable en commensal sur le revtement cutan ou dans les cavits naturelles de
l'organisme, et profitent de facteurs favorisants intrinsques ou extrinsques pour devenir
pathognes.
113
Candida albicans
(Robin) Berkhout (1923)
Caractres culturaux
Colonies blanches, lisses et crmeuses, bords nets. Cette levure est rsistante au cycloheximide (Actidione).
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Blastospores ovodes, de 6 10 m de long sur 4 7 m de large, associes des filaments mycliens et du pseudomyclium. Sur certains milieux de culture (RAT ou PCB
notamment), C. albicans produit des chlamydospores.
Multiplication sexue
Particularits biochimiques
Candida albicans produit diffrentes enzymes, notamment une N-actyl-glucosaminidase
dont la dtection est l'origine de la plupart des tests rapides d'identification de cette
espce, mais aussi de son identification directe sur les milieux fluorogniques ou chromogniques.
Pouvoir pathogne
Hte habituel des cavits naturelles de lhomme, C. albicans est la principale levure opportuniste. la faveur d'un dsquilibre de la flore endogne ou d'un dficit immunitaire, cette
levure peut se comporter en pathogne et prsenter un caractre invasif. C'est le principal
agent des candidoses cutano-muqueuses, mais aussi des candidoses systmiques et
des candidoses dissmines. C'est par ailleurs le 4me agent causal des septicmies d'origine nosocomiale en France.
114
115
Candida ciferrii
Kreger-van Rij (1965)
Caractres culturaux
Colonies petites, blanches, crmeuses, brillantes, bombes, lisses ou lgrement filamenteuses. Candida ciferrii pousse jusqu' 42C et rsiste au cycloheximide.
Morphologie microscopique
La morphologie microscopique est trs proche de celle de C. albicans.
Multiplication vgtative
Stephanoascus ciferrii.
Caractres biochimiques
Candida ciferrii assimile de trs nombreux hydrates de carbone, fermente le glucose, le
galactose, le sorbose et le maltose (mais pas le lactose et le raffinose). Elle n'utilise pas le
nitrate de potassium, et n'hydrolyse pas l'ure.
Pouvoir pathogne
Candida ciferrii est une levure commensale de la peau, des phanres et des oreilles. Son
incidence reste faible. Elle est souvent retrouve chez le btail, mais elle est rarement dcrite dans des tats pathologiques chez l'homme. Elle est signale essentiellement dans des
lsions d'onychomycoses chez des personnes ges (notamment diabtiques), prsentant des troubles trophiques des membres infrieurs, peut-tre en lien avec la capacit de
cette levure dassimiler les produits du catabolisme des acides amins, putrescine et cadavrine.
116
117
Candida dubliniensis
Sullivar et al. (1995)
Caractres culturaux
Ils sont identiques ceux dcrits pour C. albicans, avec des colonies blanches, luisantes
et lisses, bords nets. Candida dubliniensis est galement rsistant au cycloheximide.
Morphologie microscopique
La morphologie microscopique est trs proche de celle de C. albicans.
Multiplication vgtative
Particularits biochimiques
Comme C. albicans, C. dubliniensis produit une N-actyl-glucosaminidase. Les deux
espces ne sont donc pas diffrenciables sur les milieux chromogniques (colonies de
couleur vert fonc sur glose CHROMAgar Candida).
Biotope naturel
Candida dubliniensis qui a t dcrit seulement en 1995, est trs proche de C. albicans
avec lequel il est souvent confondu. Il est isol principalement de la muqueuse oro-pharynge de l'homme. Cependant, les tudes pidmiologiques restent insuffisantes pour
prciser son habitat naturel.
Pouvoir pathogne
Candida dubliniensis est apparu en pathologie humaine avec l'mergence du sida. Il est
frquent chez les patients positifs pour le VIH, et dtermine principalement des candidoses oro-pharynges. Les outils diagnostiques rcemment dvelopps devraient permettre
de mieux connatre l'pidmiologie et le spectre clinique de cette levure.
118
Aspect macroscopique (1) et microscopique (2) des cultures sur glose de Sabouraud.
Morphologie sur milieu RAT l'objectif 10 (3) ou 40 (4) : sur milieu RAT, Candida dubliniensis
produit des filaments mycliens sur lesquels se forment des blastospores en bouquets, ainsi que
de nombreuses chlamydospores souvent disposes par paires ou en triplets.
119
Candida famata
(Harrison) Meyer et Yarrow (Yarrow & Meyer 1978)
Caractres culturaux
Colonies blanches crme, brillantes et lisses, mais parfois rugueuses.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Debaryomyces hansenii.
Caractres biochimiques
Cette levure prsente des caractres biochimiques trs voisins de ceux de C. guilliermondii.
Elle assimile de nombreux hydrates de carbone. Elle est aussi capable de fermenter le glucose, le saccharose, le maltose et le raffinose (mais pas le galactose), et produit des colonies rose sur glose contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida famata qui, comme C. glabrata, appartenait autrefois au genre Torulopsis (caractris par l'absence de filaments mycliens et de pseudomyclium), est un commensal de
la peau et des muqueuses.
Pouvoir pathogne
Contrairement C. glabrata, cette levure est rarement incrimine en pathologie humaine
(0,3% des septicmies Candida).
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121
Candida glabrata
(Anderson) Meyer et Yarrow (Yarrow et Meyer 1978)
Caractres culturaux
Colonies blanches, lisses et brillantes. Cette levure ne pousse pas en prsence de cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Particularits biochimiques
En dehors du glucose qui est utilis par toutes les levures, C. glabrata n'assimile que le trhalose. Cette proprit est mise profit dans le kit Glabrata RTT (Fumouze Diagnostics)
rcemment dvelopp pour l'identification rapide de cette levure.
Biotope naturel
Candida glabrata est une levure commensale des voies digestives et gnito-urinaires de
l'homme. Elle est plus rarement isole du milieu extrieur.
Pouvoir pathogne
Candida glabrata est la 2me espce de levure isole partir des produits pathologiques en
France (10 20% des isolats de levures selon les tudes). Elle est principalement implique dans des candidoses digestives et gnitales (vaginites chez la femme), mais aussi
profondes (septicmies), en particulier chez les patients hospitaliss dans les services de
cancrologie et de chirurgie digestive.
122
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Candida guilliermondii
(Castellani) Langeron et Guerra (1938)
Caractres culturaux
Colonies lisses, de couleur blanche ou crme. Cette levure pousse mal en prsence de
cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Pichia guilliermondii.
Caractres biochimiques
Cette levure est difficilement diffrenciable de C. famata sur les caractres biochimiques. Elle
assimile en effet de nombreux hydrates de carbone, fermente le glucose, le saccharose, le
maltose et le raffinose (mais pas le galactose), et produit des colonies rose sur milieu contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida guilliermondii est une levure issue du milieu extrieur o elle est assez rpandue.
Chez l'homme, on la retrouve l'tat de commensal sur la peau, mais aussi dans les voies
respiratoires ou digestives.
Pouvoir pathogne
Candida guilliermondii peut tre l'origine de candidoses systmiques chez l'immunodprim. Des endocardites sont galement rapportes chez le toxicomane par voie intraveineuse.
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Candida kefyr
(Beijerinck) Van Uden et Buckley (1970)
Caractres culturaux
Colonies crmeuses, de couleur blanche crme, translucides et d'odeur fruite et acide.
Cette levure est rsistante au cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Blastospores ovodes, ou allonges (7 10 m de long sur 3 5 m de large) avec parfois un pseudomyclium abondant.
Multiplication sexue
Kluyveromyces marxianus.
Caractres biochimiques
Candida kefyr assimile lui aussi de nombreux hydrates de carbone. Cette levure fermente le
glucose, le galactose et le saccharose et, pour certaines souches, le lactose et le raffinose,
mais jamais le maltose ou le trhalose. Elle produit, elle aussi, des colonies rose sur milieu
contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida kefyr (ex C. pseudotropicalis) est issu principalement de produits laitiers ferments. Chez l'homme, cette levure est considre comme une espce commensale de la
peau et des muqueuses respiratoires ou digestives.
Pouvoir pathogne
Cette levure peut tre l'origine de septicmies et de candidoses profondes et/ou
systmiques.
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Candida krusei
(Castellani) Berkhout (1923)
Caractres culturaux
Colonies blanches, plates, mates et sches. Elles prsentent des bords festonns et une
odeur d'alcool de fruits. Cette espce est sensible au cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Issatchenkia orientalis.
Caractres biochimiques
Cette levure ne fermente que le glucose. Ses capacits dassimilation sont galement limites puisquelle nutilise que le glucose, le glycrol, le lactate et le N-actylglucosamine.
Biotope naturel
Candida krusei est une levure commensale (colonisation transitoire) des voies digestives,
respiratoires et urognitales de l'homme. Elle est issue du milieu extrieur (sol, eau, air) et
largement rpandue dans les produits laitiers et les fruits, mais aussi le vin et la bire.
Pouvoir pathogne
D'origine gastro-intestinale, C. krusei est responsable d'un petit nombre des septicmies
(1,9%). Cette espce merge de faon sporadique dans les populations de patients adultes cancreux neutropniques. Toutefois, le taux lev de mortalit attribue cette levure (40%) en fait un pathogne redoutable dans les services d'onco-hmatologie. Elle est
aussi incrimine dans des observations de diarrhe chez le nouveau-n, d'endophtalmie,
d'endocardite, et plus rarement d'infection urinaire.
128
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Candida lusitaniae
Van Uden et do Carmo-Sousa (1959)
Caractres culturaux
Colonies blanches, crme, lisses et brillantes. Cette levure ne pousse pas en prsence de
cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Clavispora lusitaniae.
Caractres biochimiques
Cette levure assimile de nombreux hydrates de carbone et produit des colonies rose sur
glose contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida lusitaniae est retrouv dans le tube digestif de nombreux mammifres et d'oiseaux. Cette levure peut aussi tre isole l'tat commensal partir de prlvements
digestifs, urinaires ou respiratoires.
Pouvoir pathogne
Candida lusitaniae qui tait trs rare jusque dans les anne 80, a vu son incidence augmenter et reprsente aujourd'hui 2% des isolats cliniques de levures. Dans les Units de
Soins Intensifs, elle est l'origine de petites pidmies nosocomiales, mais cette levure est
surtout implique dans des tats septicmiques et des infections dissmines chez des
patients cancreux soumis des chimiothrapies aplasiantes.
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Candida parapsilosis
Langeron et Talice (Ashford) (1932)
Caractres culturaux
Colonies blanches crme, luisantes et lisses. Cette levure ne pousse pas en prsence de
cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Caractres biochimiques
Cette levure assimile de nombreux hydrates de carbone et produit des colonies rouges sur
glose contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida parapsilosis est une levure commensale de la peau et parfois du tube digestif. Elle
est isole de crales et de produits laitiers.
Pouvoir pathogne
Sa frquence est en augmentation et son pouvoir pathogne s'exprime avant tout par des
septicmies et des candidoses profondes (endocardites, arthrites, pritonites) en raison de
sa capacit adhrer des matriaux synthtiques (cathters centraux et autres dispositifs de perfusion pour soluts de nutrition parentrale). Elle se situe au deuxime rang
(aprs C. albicans) parmi les agents de candidmie chez le nouveau-n, la prmaturit
constituant un facteur de risque supplmentaire.
Candida parapsilosis est aussi l'origine de lsions superficielles, notamment d'onyxis et
de lsions cutanes.
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Aspect macroscopique (1) et microscopique (2) des cultures sur glose de Sabouraud.
Morphologie sur milieu RAT l'objectif 20 (3) ou 40 (4) : alors que Candida parapsilosis se
prsente sur glose de Sabouraud exclusivement sous forme de blastospores solitaires, ovodes
ou elliptiques et parfois bourgeonnantes, on observe sur milieu RAT un pseudomyclium abondant constitu de cellules allonges et des amas de blastospores rondes ou ovodes en position
subapicale des articles des pseudohyphes.
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Candida tropicalis
(Castellani) Berkhout (1923)
Caractres culturaux
Colonies crme, luisantes et lisses ou plisses. Cette levure pousse mal en prsence de
cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Caractres biochimiques
Cette levure assimile de nombreux hydrates de carbone et produit des colonies rouges
violette sur glose contenant des sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Candida tropicalis est issu de l'environnement (sol, eau, crales) et est galement isol
chez certains mammifres.
Chez l'homme, C. tropicalis reprsente 4 5% des isolements de levures. Il colonise le
revtement cutan, ainsi que les muqueuses des voies digestives et urinaires.
Pouvoir pathogne
Candida tropicalis est impliqu dans des candidoses systmiques, notamment chez des
patients atteints d'hmopathies malignes (leucmies ou greffs de moelle osseuse). Chez
ces patients, il est l'origine de prs de 18% des septicmies Candida. Le taux de mortalit dans les septicmies et candidoses systmiques C. tropicalis dpasse bien souvent celui observ dans les infections lies C. albicans.
134
135
136
Le genre Cryptococcus
Le genre Cryptococcus (Cr.) regroupe des levures qui, dans la majorit des cas, prsentent
une capsule polysaccharidique, produisent un pigment carotnode, et donnent des
colonies beiges ocres.
Les levures du genre Cryptococcus ne produisent pas de filaments mycliens ni de
pseudomyclium. Elles produisent une urase, ne fermentent pas les sucres, mais
assimilent l'inositol comme source de carbone et d'nergie. Ces caractristiques
biochimiques, jointes aux donnes molculaires, justifient leur affiliation aux
Basidiomyctes. Par ailleurs, certaines espces comme Cr. neoformans pour lequel on
distingue quatre srotypes et trois varits, ont une forme sexue appartenant aux
Tliomyctes (Basidiomyctes thalle levuriforme). La varit neoformans et la varit gattii
qui correspondent respectivement au srotype D et aux srotypes B et C, ont pour forme
sexue respective Filobasidiella neoformans var. neoformans et F. neoformans var.
bacillispora, alors que la varit grubii (srotype A) na pas de forme sexue connue.
Cryptococcus neoformans pousse 37C et peut tre l'origine de mycoses superficielles
ou dissmines, mais le genre Cryptococcus comprend aussi d'autres espces qui
poussent mal 37C et qui ne sont que rarement incrimines dans les mycoses humaines.
Il s'agit principalement de Cr. albidus, Cr. laurentii et Cr. uniguttulatus. Les infections
engendres par ces levures restent en gnral superficielles. De trs exceptionnelles
atteintes profondes sont dcrites.
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Cryptococcus neoformans
(Sanfelice) Vuillemin (1901)
Caractres culturaux
Colonies blanches crme, luisantes et coulantes, de croissance lente. Pas de croissance en prsence de cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Blastospores rondes de taille variable (2 12 m de diamtre) pour la varit neoformans, plus allonges (6 15 m de long sur 3 8 m de large) pour la varit gattii.
Cryptococcus neoformans est caractris par la prsence d'une capsule plus ou moins
paisse et un bourgeonnement multiple. Il n'y a pas de pseudomyclium, aussi bien sur
milieu de Sabouraud que sur milieu RAT ou PCB.
Multiplication sexue
Particularits biochimiques
Comme tous les cryptocoques, cette levure est incapable de fermentation et nassimile
pas le nitrate comme source dazote. Par contre, C. neoformans assimile de nombreux
hydrates de carbone.
Cette levure produit une phnoloxydase qui jouerait un rle protecteur contre les dfenses
de lhte, et une urase. La recherche de lurase reste un lment important pour lidentification de cette levure (dgradation rapide de lure, en moins de 4 h). Cryptococcus
neoformans est aussi capable dassimiler linositol, proprit qui est mise profit pour la
prparation dune glose semi-slective (glose linositol) particulirement intressante
pour la recherche de C. neoformans dans des prlvements polymicrobiens (produits
dexpectorations, lavage broncho-alvolaire).
Biotope naturel
Cryptococcus neoformans var. neoformans est une levure cosmopolite, issue du sol et
associe aux fientes d'oiseaux (pigeons, ...) et au guano de chauve-souris. La contamination se fait par inhalation de poussires contenant les spores de la forme sexue.
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La varit gattii est par contre confine aux rgions subtropicales (Afrique, Asie, sud des
USA et Australie). De plus, le biotope principal de cette varit est trs diffrent, puisqu'il
s'agit de certains arbres, notamment des Eucalyptus (Eucalyptus calmadulensis) en
Australie et aux USA. Elle a galement t isole des fcs de certains animaux (koala en
Australie).
Particularits pidmiologiques
Le nombre de cas de cryptococcose en France mtropolitaine ainsi que dans les DOMTOM, reste stable depuis 1997, avec moins de 100 cas dclars chaque anne. Le profil
des patients concerns sest par contre modifi : les patients sropositifs pour le VIH sont
moins nombreux que les patients immunodprims pour dautres tiologies (tumeurs
solides, hmopathies, maladies de systme, corticothrapie prolonge,). Chez les
transplants dorganes, les chiffres augmentent et la prvalence varie entre 0,25 et 5%
selon le sexe.
Les nouveaux anticorps monoclonaux anti-CD52 (Alemtuzumab) utiliss au cours des
traitements anti-rejet seraient des facteurs favorisants.
Enfin, il convient de souligner que 10 14% des cryptococcoses surviennent chez des
patients ne prsentant pas de cause vidente dimmunodpression.
Pouvoir pathogne
Cryptococcus neoformans reste un redoutable opportuniste lorigine de manifestations
neuro-mninges principalement, mais aussi de formes pulmonaires ou cutanes, ainsi
que datteintes dissmines (atteintes osseuses, oculaires ou rnales, prostatites, ).
La varit grubii est retrouve de manire quasi-exclusive chez les patients sropositifs
pour le VIH.
La varit gattii, qui est rarement rencontre chez les patients immunodprims, est plus
frquente chez des individus immunocomptents. Elle est lorigine de manifestations cliniques voluant habituellement sur un mode chronique (lsions granulomateuses, pulmonaires ou dissmines).
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Cryptococcus albidus
(Saito) Skinner (1947)
Caractres culturaux
Colonies lisses, blanc-crme, devenant plus fonces (ocre) et coulantes dans les cultures
ges. Cryptococcus albidus est sensible au cycloheximide, et l'optimum thermique est de
25 30C. A 37C, la croissance est nulle ou trs rduite.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Filobasidium floriforme.
Caractres biochimiques
Cette levure assimile de nombreux hydrates de carbone (notamment le glucose, le saccharose, le maltose et le raffinose, mais pas le galactose et le lactose) et faiblement le nitrate de
potassium. Comme les autres cryptocoques, elle est incapable de fermentation et la recherche d'urase est positive, mais tardivement (en 10 24 h).
Biotope naturel
Cryptococcus albidus est une levure cosmopolite isole du sol, de l'air, de l'eau et de substrats organiques divers. Elle vit galement en commensale sur la peau.
Pouvoir pathogne
Son pouvoir pathogne est exceptionnel. De trs rares atteintes cutanes ou unguales
ont t dcrites.
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Crytococcus laurentii
(Kufferath) Skinner (1947)
Caractres culturaux
Colonies lisse et coulantes (elles forment un culot dans les cultures sur glose en pente),
de couleur crme bruntre. Cette levure est sensible au cycloheximide, et l'optimum
thermique est de 25 30C, mais certaines souches poussent 37C.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Caractres biochimiques
Cette levure nassimile pas le nitrate de potassium, mais assimile de nombreux hydrates de
carbone. Comme les autres cryptocoques, elle est incapable de fermentation et la recherche
d'urase est positive, mais tardivement (en 10 24 h).
Biotope naturel
Cryptococcus laurentii est une levure cosmopolite, isole du milieu extrieur, du sol, de l'air,
mais aussi de milieux marins. On la retrouve aussi dans des fruits et des fleurs, dans le vin
et la bire. C'est une levure que l'on retrouve aussi en tant que commensale dans les produits d'expectoration et dans les selles.
Pouvoir pathogne
Cette levure est habituellement dnue de toute pathognicit et est parfois retrouve
partir de prlvements de peau ou dongles.
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Le genre Geotrichum
Geotrichum candidum
Link : Fries (1832)
Caractres culturaux
Colonies plates, pltreuses muqueuses, glabres finement duveteuses. La croissance
est lente.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Le myclium vgtatif est constitu de longs filaments rguliers, mais assez larges (7
12 m de diamtre), septs, donnant naissance des filaments latraux s'articulant
angle aigu ou angle droit. Ces ramifications latrales sont plus troites (2,5 4 m de
diamtre). Elles sont cloisonnes, et se dsarticulent en court segments cylindriques
(arthrospores ) de 5 17 m de long sur 4 6 m de large. Il n'y a pas de blastospores.
Multiplication sexue
Il existe un stade sexu, Galactomyces geotrichum, mais il est rarement obtenu sur les
milieux usuels de mycologie mdicale.
Caractres biochimiques
L'identification du genre Geotrichum repose sur la morphologie des filaments mycliens et
des arthrospores, et les caractres auxanographiques permettent le diagnostic despce.
Biotope naturel
Geotrichum candidum est cosmopolite. On le retrouve dans le milieu extrieur (air, sol,
eau), et il participe la dgradation des fruits. Dans l'alimentation, G. candidum est utilis
pour l'affinage de nombreux fromages, mais il est aussi retrouv dans les produits laitiers
(lait, crme, beurre). Ce champignon colonise habituellement les voies digestives, parfois
les voies respiratoires et le revtement cutan de l'homme et de nombreux animaux.
Pouvoir pathogne
Geotrichum candidum peut tre l'origine d'atteintes digestives (muguet buccal, colopathies) ou respiratoires (infections bronchiques, pneumopathies). Les septicmies et les formes dissmines sont exceptionnelles.
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Le genre Malassezia
Le genre Malassezia regroupe des levures caractrises par leur lipophilie (sauf
M. pachydermatis). Elles vivent habituellement en commensales sur le revtement cutan,
et peuvent dans certaines circonstances exprimer un pouvoir pathogne. Chez l'homme,
ces levures sont responsables du pityriasis versicolor, mais elles sont aussi impliques
dans des lsions de pityriasis capitis, de folliculites du tronc et de dermites sborrhiques
sans que l'on puisse affirmer leur responsabilit dans ces affections.
Le terrain joue un rle important dans ces mycoses. En effet, la survenue d'un pityriasis
versicolor rsulte souvent du passage de ces levures de l'tat commensal l'tat parasitaire.
Sur le plan morphologique, les espces du genre Malassezia se prsentent sous forme de
blastospores globuleuses, ellipsodales ou cylindriques. Le genre Malassezia comprend
6 espces lipophiles et anthropophiles, M. furfur qui est le principal agent du pityriasis
versicolor, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta et M. slooffiae, ainsi qu'une
espce zoophile lipo-indpendante, M. pachydermatis, bien connue des vtrinaires car
agent d'otites chez le chien. L'identification en culture est fonde sur la lipophilie, la
morphologie microscopique (Tableau 14), l'activit catalasique et le profil d'assimilation
des Tween 20, 40 et 80.
La combinaison de ces facteurs permet de proposer un schma d'identification des
diverses espces de Malassezia (Figure 53).
Tableau 14 : Aspect microscopique des levures du genre Malassezia.
Malassezia
Aspect microscopique
M. pachydermatis
Blastospores ovodes
(2,5 4,5 m de long sur 1,5 2,5 m de large)
M. furfur
M. sympodialis
M. globosa
Blastospores sphriques
(2,5 8 m de diamtre)
M. obtusa
M. restricta
M. slooffiae
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Malassezia furfur
(Robin) Baillon (1889)
Caractres culturaux
Malassezia furfur ne pousse pas spontanment sur milieu de Sabouraud. Il convient, avant
d'ensemencer, de recouvrir la surface de la glose d'un film d'huile d'olive strile. En 8 15
jours 37C, les colonies apparaissent, d'aspect cireux, dabord blanches, puis chamois.
Sur milieu de Dixon, les colonies sont bombes, sches, lisses, de couleur chamois clair.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Biotope naturel
Malassezia furfur fait partie de la flore habituelle du revtement cutan de l'homme, mais aussi de
nombreux mammifres et des oiseaux. Il est exceptionnellement retrouv dans le milieu extrieur.
Pouvoir pathogne
Malassezia furfur est impliqu dans de nombreuses infections cutanes : le pityriasis versicolor, la dermite sborrhique et le pityriasis capitis. Plus rarement, il sera l'origine d'infections
systmiques chez les prmaturs, les nouveaux-ns et les patients immunodprims. Ces
infections systmiques sont souvent associes une alimentation parentrale riche en lipides.
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Le Genre Rhodotorula
Le genre Rhodotorula regroupe des levures produisant en culture un pigment carotnode
(colonies oranges rouge) et caractrises par des blastospores ovodes et allonges.
Quelques souches produisent galement un pseudomyclium rudimentaire.
Ces levures ne fermentent pas les sucres.
Ce genre affili aux Basidiomyctes comprend 8 espces, dont 3 peuvent tre isoles chez
l'homme : R. mucilaginosa (ex R. rubra), R. glutinis et R. minuta.
Elles sont reconnaissables par la couleur orang rouge des colonies sur milieu de
Sabouraud (en primoculture comme lors de repiquages).
Ce sont habituellement des levures commensales de la peau ou des muqueuses. Leur
pouvoir pathogne, trs limit, doit tre discut au cas par cas.
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Caractres culturaux
Colonies bombes, surface lisse et luisante, de couleur rose rouge saumon. Cette
espce ne pousse pas sur glose additionne de cycloheximide.
L'optimum thermique est compris entre 20 et 25C, mais cette levure pousse 37C.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Caractres biochimiques
Les levures du genre Rhodotorula ne fermentent pas les sucres, et prsentent une urase.
Rhodotorula mucilaginosa nassimile pas le nitrate et ne rduit pas les sels de ttrazolium.
Cette levure assimile le glucose, le maltose, le saccharose et le raffinose (et pour certaines
souches, le galactose), mais jamais le lactose.
Biotope naturel
Rhodotorula mucilaginosa est une levure cosmopolite trs rpandue, qu'on retrouve dans
le milieu extrieur (terre, eau de surface, air), mais aussi dans certains aliments (fruits, produits laitiers). Comme d'autres espces du genre Rhodotorula, notamment R. glutinis et
R. minuta, R. mucilaginosa est un commensal des tractus urinaire, gastro-intestinal et
respiratoire, mais aussi de la peau et des phanres (ongles). On peut donc les isoler partir
de prlvements issus de ces sites, mme en labsence de mycose.
Pouvoir pathogne
Chez les patients immunodprims, les levures du genre Rhodotorula peuvent tre impliques dans des atteintes superficielles (kratites) ou profondes (septicmies, mningites,
endocardites, pritonites, ...), notamment chez des patients atteints de cancer, d'hmopathie maligne ou de sida. En dehors du statut immunitaire de l'hte, le principal facteur de
risque est la prsence de cathters centraux.
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Le genre Saccharomyces
Le genre Saccharomyces regroupe des levures d'aspect ellipsodal, ou cylindriques, ne
produisant habituellement ni filaments mycliens ni pseudofilaments.
Les cultures sont constitues principalement de blastospores (la reproduction asexue
tant le mode principal de multiplication), associes des asques lis la reproduction
sexue qu'on observe sur des milieux de cuture particuliers.
Le genre Saccharomyces qui est class parmi les Ascomyctes, comporte 7 espces.
Saccharomyces cerevisiae, qui est la levure de bire classique, est largement utilise dans
l'industrie agro-alimentaire. Elle peut tre retrouve dans les selles sans qu'elle exerce de
rle pathogne. Saccharomyces boullardii qui est considre comme une varit de
S. cerevisiae, rentre dans la composition de l'Ultralevure et de la Carbolevure.
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Saccharomyces cerevisiae
Meyer ex Hansen (1883)
Caractres culturaux
Colonies luisantes et lisses, ou plus ou moins rugueuses, de couleur blanche crme,
bords nets qui poussent en 4 5 jours sur milieu de Sabouraud sans cycloheximide ou sur
glose au Malt.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Caractres biochimiques
Lidentification de cette levure repose sur ltude du profil dassimilation des hydrates de carbone. Saccharomyces cerevisiae assimile de nombreux hydrates de carbone. Elle est galement capable de fermenter le glucose, et parfois le galactose, le saccharose, le maltose et le
raffinose. Elle ne rduit pas les sels de ttrazolium.
Biotope naturel
Saccharomyces cerevisiae est une levure bien connue, cosmopolite et largement utilise
dans l'industrie agro-alimentaire en raison de son pouvoir fermentaire (pain, vin, bire, ...).
Dans le milieu extrieur, cette levure est rencontre dans les fruits et les lgumes. On peut
aussi retrouver S. cerevisiae sous forme lyophilise dans certains anti-diarrhiques comme
l'Ultralevure ou la Carbolevure. Il est donc frquent de retrouver cette levure dans les
prlvements digestifs.
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159
Pouvoir pathogne
l'occasion d'un dsquilibre de la flore intestinale, S. cerevisiae peut diffuser dans le
sang. Une contamination par voie arienne lors de l'ouverture de sachets contenant des
levures lyophilises (Carbolevure ou l'Ultralevure) peut aussi se produire, entranant
ventuellement la souillure de sites de pntration des caththers. Les infections S. cerevisiae restent toutefois rares, elles touchent les prmaturs ou les patients trs amoindris.
Cette levure est l'origine de lsions superficielles, buccales (muguet), anales (anites), ou
gnitales (vulvo-vaginites), ou profondes : fongmies transitoires suite la souillure d'un
cathter, endocardites sur prothse, septicmies. Des cas de pritonites post-opratoires
ou aprs dialyse pritonale, d'sophagites et de pneumopathies ont t signals.
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Le genre Trichosporon
Le genre Trichosporon regroupe des levures qui se caractrisent par la prsence de
nombreux filaments mycliens se dissociant en arthrospores et de blastospores
polymorphes associes des pseudofilaments.
Ces levures ne fermentent pas les sucres, mais prsentent une urase.
On distingue une vingtaine d'espces, dont 6 peuvent tre incrimines en pathologie
humaine :
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Trichosporon asahii
Akagi ex Sugita et al. (1994)
Caractres culturaux
Colonies sches, en forme de dme. De couleur blanche, ces colonies prsentent un
aspect farineux, et les bords sont fissurs.
Trichosporon asahii pousse bien 37C et rsiste au cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Pas de reproduction sexue connue, mais cette levure est affilie aux Basidiomyctes.
Caractres biochimiques
Comme les autres Trichosporon, cette levure est incapable de fermentation. Elle assimile
de nombreux hydrates de carbone, notamment le L-arabinose, mais pas le mlibiose.
Biotope naturel
Trichosporon asahii est une levure issue du milieu extrieur (sol, eau) que l'on retrouve
l'tat commensal sur la peau et les ongles des pieds et des mains.
Pouvoir pathogne
Trichosporon asahii est principalement l'origine d'atteintes superficielles (onyxis), mais
aussi d'atteintes profondes (septicmies), en particulier chez des patients leucmiques en
phase terminale.
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Trichosporon cutaneum
(De Beurmann et al.) Ota (1926)
Caractres culturaux
Levures polymorphes selon le milieu et l'ge de la culture. Sur milieu de Sabouraud, les
colonies sont de couleur blanche jauntre. Les colonies sont glabres, mates ou humides,
de surface lisse ou plisse, et parfois crbriformes. Trichosporon cutaneum pousse bien
30C, plus difficilement 37C. Il est sensible au cycloheximide.
Morphologie microscopique
Multiplication vgtative
Comme pour les autres Trichosporon, pas de reproduction sexue connue, mais affiliation aux Basidiomyctes.
Caractres biochimiques
Cette levure assimile de nombreux hydrates de carbone, mais elle est incapable de fermentation comme les autres levures affilies aux Basidiomyctes.
Elle rduit faiblement les sels de ttrazolium. Les recherches de phnoloxydase et durase sont positives, mais tardivement.
Biotope naturel
Trichosporon cutaneum est frquemment retrouv dans le milieu extrieur (sol, eau, air) et
sur de nombreux substrats organiques. Cette levure est aussi isole du tube digestif de
nombreux mammifres. Chez l'homme, on la retrouve l'tat commensal sur la peau et
les phanres, mais aussi dans les selles et les crachats.
Pouvoir pathogne
Trichosporon cutaneum est parfois l'origine d'atteintes superficielles (onyxis), plus rarement d'atteintes profondes.
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CHAPITRE IV
170
Nom commercial
et formulations
Posologie
et rythme d'application
Polynes
Amphotricine B (Am B)
Nystatine
Bifonazole
Amycor 1% crme,
solution pour application locale ou poudre
Bifonazole-ure
Butoconazole
Azols
Econazole
Gynopvaryl 150 (ovules 150 mg) et 150
LP (ovules 150 mg libration programme)
Lomexin crme 2%
Fenticonazole
Ktoconazole
Miconazole
Oxiconazole
Sertaconazole
Monazol crme 2%
Monazol ovules 300 mg
Sulconazole
Tioconazole
Isoconazole
Omoconazole
171
Tableau 16 : Autres antifongiques locaux utiliss dans le traitement des candidoses superficielles et modalits d'application.
Nom commercial
et formulations
DCI
Ciclopiroxolamine
Posologie
et rythme d'application
Ciclopirox
Allylamines
Terbinafine
Sur l'ongle,
1 application par semaine
Sporiline lotion 1%
Morpholines
Amorolfine
Thiocarbamates
Tolnaftate
172
Indications principales,
posologie
et rythme d'application
Nom commercial
et formulations
Candidoses, cryptococcoses,
gotrichoses, malassezioses,
trichosporonoses
Polynes
Amphotricine B
dsoxycholate de sodium (Am B)
Am B liposomale
Ambisome
Abelcet
Ktoconazole
Fluconazole
Itraconazole
Voriconazole
Caspofungine
Cancidas
50 ou 70 mg poudre pour solution
injectable
Micafungine
Candidoses systmiques,
candidoses sophagiennes
Anidulafungine
Ecalta IV 100 mg
Candidoses systmiques
chez ladulte non neutropnique
Candidoses, cryptococcoses,
rhodotoruloses et gotrichoses
(jamais en monothrapie)
50 200 mg en 4 fois par jour
Azols
Posaconazole
Echinocandines
Fluoropyrimidines
5-Fluorocytosine (5-FC)
173
En cas d'chec de ces traitements ou de lsions plus importantes, surtout chez les
patients immunodprims (sida, ...), un traitement par voie gnrale est ncessaire. Le fluconazole, qui est gnralement bien tolr, est habituellement propos en premire intention. La dure du traitement est de 7 14 jours. En cas d'utilisation prolonge, la sensibilit de la levure aux antifongiques devra tre vrifie. L'itraconazole suspension, le voriconazole, le posaconazole ou les chinocandines peuvent tre une alternative. Les traitements au long cours vise prophylactique sont en gnral proscrire.
174
partenaire sera trait par application 2 fois par jour d'un imidazol en crme pendant environ
2 semaines.
175
raison de 200 400 mg par jour pendant 10 15 jours. Les autres formes cliniques (dermites sborrhiques, pityriasis capitis) se traitent de la mme faon.
176
Candida. Avant de traiter, il faut aussi s'assurer qu'il s'agit d'une vritable infection
Candida et non d'une simple colonisation. Cependant, devant la gravit des infections systmiques Candida dont la mortalit peut atteindre 60% dans certaines sries, le traitement empirique (sans attendre les rsultats de l'examen mycologique et l'identification prcise de l'espce en cause) est de rgle aujourd'hui. Toute hmoculture positive Candida,
mme isole, suffit dcider la mise en route du traitement. D'autres pratiques complmentaires sont largement admises comme le retrait immdiat du cathter chez le patient
non neutropnique. Pour le patient neutropnique, on peut discuter d'abord l'ventualit
d'une porte d'entre digestive.
La dcouverte d'une levure dans un site normalement strile impose la mise en place d'un
traitement antifongique. Par contre, la prsence de levures en nombre lev dans des sites
normalement ou frquemment coloniss (tube digestif, selles, vagin, urines) pose le problme du traitement prventif. Chez les patients non neutropniques en ranimation, un
indice de colonisation suprieur 0,5 ou un IC corrig suprieur 0,4 (selon Pittet)
implique d'instituer un traitement pour prvenir une ventuelle dissmination hmatogne.
Il reste cependant que les indices de Pittet n'ont pas t valids chez les patients neutropniques.
177
Les cryptococcoses
La cryptococcose neuromninge est une infection grave, et un traitement doit tre entrepris rapidement devant la dcouverte de levures capsules dans le LCR.
L'amphotricine B, la 5-fluorocytosine et les triazols (fluconazole, itraconazole, voriconazole) sont actifs sur les cryptocoques. Cependant, le traitement repose gnralement sur
l'administration d'une association d'amphotricine B (0,7 1 mg par kg et par jour) en perfusion intra-veineuse lente et de 5-fluorocytosine (150 mg par kg et par jour) durant 2
3 semaines, avec ensuite un relai par un azol (fluconazole 400 mg par jour). Le fluconazole peut aussi tre utilis en premire intention raison de 200 400 mg par jour pendant 4 6 semaines. Le traitement d'entretien pour viter les rechutes (utilisant de prfrence un triazol) dpend du contexte pathologique sous-jacent. L'volution du titre en
antignes cryptococciques permet de juger de l'efficacit thrapeutique.
178
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RFRENCES
181
182
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186
GLOSSAIRE
187
A
Actidione
Agar
(= agar-agar)
Anamorphe
Arthrospore
Ascomycte
Ascomycotina
Voir Ascomycte.
Ascospore
Asque
Auxanogramme
Technique d'identification des levures base sur ltude du profil dassimilation (propre chaque espce) des hydrates de carbone (oses, osamines,
polyols, acides uroniques, ) comme source de carbone et dnergie.
B
Basidiomycte
Blastomyctes
Blastospores
188
Bote de Ptri
Rcipient plat en verre ou en plastique avec base et couvercle permettant de couler les milieux de culture en microbiologie (milieu de
Sabouraud notamment).
Bourgeonnement
C
Candidoses
Terme regroupant toutes les infections cutanes, muqueuses ou profondes dues des levures du genre Candida. Autrefois appeles monilioses.
Champignon
(en Anglais Fungi) Vient dun vieux mot franais, Champignuel, du latin
campagniolus : qui vit dans les champs. Au sens littraire (Larousse, Petit
Robert), il dsigne un vgtal form dun pied surmont dun chapeau
correspondant de nombreuses espces comestibles ou vnneuses.
Sur un plan scientifique, il dfinit tout organisme appartenant au rgne
des Myctes.
Chilite
Chlamydospore
Commensal
Commensalisme
Se dit dune espce qui vit en commensale, cest dire qui profite pour sa
nourriture et/ou sa reproduction dun autre organisme vivant sans engendrer de prjudice pour ce dernier. Littralement, parasitisme bien tolr.
189
Conidiognse
Cycloheximide
Voir Actidione.
D
Dermite
sborrhique
Dimorphique
E
Electrosynrse
Technique immunologique de recherche danticorps par mise en vidence des arcs de prcipitation forms au point de rencontre avec les antignes correspondants lors de la migration sous leffet dun champ lectrique. Lors de la migration lectrophortique, les protines charges
ngativement au pH du tampon de migration migrent vers la cathode,
mais pas les anticorps. Ces derniers, trs peu chargs ce pH, migrent
en sens inverse du courant lectrique, sous leffet du courant dlectroendosmose.
Eucaryote
F
Filament myclien
Filamenteux
Qualitatif courant en mycologie pour dsigner les champignons qui produisent des filaments par opposition aux levures au thalle unicellulaire.
190
Folliculite
Fongicide
Fongique
Fongistatique
G
Glose
Voir agar.
Genre
Unit de classification des tres vivants qui se situe entre lunit de base
qui est lespce et un niveau taxonomique plus lev qui est la famille.
Dans la dnomination binomiale des tres vivants, le premier nom qui
commence toujours par une majuscule dsigne le genre. Exemple :
Candida albicans, genre Candida, espce albicans.
Gotrichose
H
Hyalin
Terme utilis en mycologie pour caractriser les spores ou les filaments dont
la paroi est non pigmente, et apparat donc incolore ou transparente.
Hyphe
I
Immunofluorescence Technique immunologique dans laquelle un anticorps (ou un antigne)
dtermin est conjugu un fluorochrome, ce qui permet de dtecter sa
prsence en lumire UV et de visualiser sa fixation lantigne (ou lanticorps) correspondant.
Immunoempreinte
Technique immunologique de recherche danticorps par mise en vidence de leur fixation sur des antignes spars par lectrophorse, puis
transfrs sur une membrane de nitrocellulose, de nylon ou dImmobilon.
En anglais : western-blot.
Immunotransfert
Voir immmunoempreinte.
Imparfait
191
Intertrigo
L
Levure
M
Malasseziose
Milieu de Sabouraud Milieu de culture habituel en mycologie. Il contient de la glose (agaragar), de la peptone, du glucose et de leau distille. On y ajoute souvent
des antibiotiques (chloramphnicol, gentamicine), et parfois du cycloheximide pour inhiber la croissance de certaines moisissures, mais celui-ci
inhibe aussi la croissance de certaines levures.
Muguet buccal
Myclium
Mycte
Mycose
N
Nosocomial
O
Onycholyse
Onychomycose
192
Onyxis
Opportuniste
Se dit d'un organisme qui, chez son hte, profite dune dficience locale
ou gnrale (par exemple, une diminution des dfenses immunitaires de
lhte) pour exprimer son pouvoir pathogne.
Otomycose
P
Parfait
Paroi
Peptone
Prionyxis
Perlche
Atteinte inflammatoire de la commissure des lvres qui peut tre d'origine fongique, due en particulier des levures issues de la cavit buccale.
Pityriasis capitis
Voir malasseziose.
Pseudofilament
Chane de blastospores plus ou moins allonges, formes par bourgeonnements successifs. A la suite du bourgeonnement et du cloisonnement,
il ny a pas de libration des spores. Les blastospores restent accoles
les unes aux autres, ralisant ainsi un filament plus ou moins long, parfois
ramifi, et prsentant des tranglements au niveau des cloisons ou septa
(exemple du pseudomyclium de Candida albicans).
Pseudomyclium
Voir pseudofilament.
193
R
Reproduction
Rhodotorulose
S
Saccharomycose
Saprophyte
Se dit dun organisme vivant qui se nourrit partir de substrats organiques en dcomposition (matire morte).
Saprophytisme
Septum
Sept
Spore
Symbiose
T
Tlomorphe
Thalle
W
Western-blot
Voir immmunoempreinte.
194
ANNEXES
195
1 - Eclaircissants
pour examen direct
Potasse leau
Hydroxyde de potassium
20
Eau distille
80
ml
Lactophnol dAmman
Phnol
10
ml
Acide lactique
10
ml
Glycrine
20
Eau distille
10
ml
Chloral-lactophnol
Hydrate de chloral
20
Phnol
10
ml
Acide lactique
10
ml
Phnol
20
ml
Acide lactique
20
ml
Glycrine
40
0,5 g
20
ml
196
Fluorochromes
3 - Milieux disolement
Nopeptone
10
Glucose
20
Agar
20
1000
ml
me pendant 1 5 min :
Blankophor P Flssig (Bayer) 0,1% en
eau distille,
Eau distille
q.s.p.
pH : 5 - 5,6
distille,
Uvitex 2B 1% en tampon phosphate
du glucose.
Bleu au lactophnol
10
Acide lactique
10
Glycrine
20
0,25 g
10
ml
197
25
Tween 80
10
ml
1000
ml
Eau distille
Milieu de Dixon
Cinq socits commercialisent aujourd'hui
des milieux de Sabouraud prts l'emploi
20
20
bioMrieux.
Tween 40
10
ml
Peptone
Glycerol
ml
Acide olique
ml
Agar
12
Chloramphnicol
0,5
Cycloheximide
0,5
1000
ml
Dickinson,
Bio-Rad,
Oxoid,
AES
et
Eau distille
4 - Milieux didentification
des levures
pH : 6,2
Intressant pour l'isolement des Malassezia.
20
10
Agar
15
198
ml
20
1000
ml
Agar
15
Peptone
10
22
Agar
Eau distille
Chloramphnicol
Eau distille
Lecture et interpretation
Incubation 37C puis lecture 36 heures.
Colonies de levures
vertes : identification de C albicans/C. dubliniensis
bleues : pr-identification de C. tropicalis
rose crneles : pr-identification de C. krusei
roses ou incolores : autres espces
0,5 g
1000 ml
pH : 5,5
199
ISSN : 1293-2892
ISBN : 2-913633-56-0
SOUS-TITRE
19, avenue dItalie 75013 Paris
Dpt lgal : Juin 2010
200
CAHIER DE
CAHIER DE
Formation
Biologie mdicale
Cahiers de formation dj parus
N 1 : Hmatologie
N 2 : Immunoanalyse
N 3 : Parasitologie
N 4 : Bactriologie
N 5 : Hormonologie - Gazomtrie
N 6 : G.B.E.A
N 7 : Immuno-allergie (1)
N 8 : Hmoglobines glyques - Lipides
N 9 : Dosage des mdicaments Tome I
N 10 : Hmatologie Cas illustrs
N 11 : Amibes et flagells intestinaux
N 12 : Les maladies Prions
N 13 : Autoimmunit et autoanticorps
N 14 : Lexploration de la thyrode
N 15 : Dpistage de la trisomie 21
N 16 : Immuno-allergie (2)
N 17 : Virus des hpatites A (VHA) et E (VHE)
N44
Biologie mdicale
2010
N 28 : Immunoglobulines monoclonales
N 30 : Exploration de la fonction
de reproduction - versant fminin
N 31 : Les dermatophytes
N 32 : Les marqueurs tumoraux sriques
des tumeurs solides
N 33 : Sport et Biologie
N 34 : Borrliose de Lyme
N 35 : L'Inflammation
N 36 : Le virus Epstein-Barr
et les marqueurs de l'infection
N 37 : Maladies auto-immunes du foie
N 38 : Les vitamines
BIOFORMA est la structure nationale qui gre et organise la formation continue conventionnelle des directeurs et
directeurs adjoints de L.a.b.m privs.
Cette formation continue est finance par les trois Caisses Nationales de lAssurance Maladie (C.N.A.M.T.S.,
C.C.M.S.A. et R.S.I.) dans le cadre de la convention passe entre elles et les trois syndicats de biologistes (S.d.B.,
S.N.M.B. et S.L.B.C.).
A ce titre, BIOFORMA dite des cahiers de formation comme celui-ci.
Ces ouvrages sont distribus chaque laboratoire danalyse de biologie mdicale, priv ou hospitalier, aux inspecteurs des DRASS, aux pharmaciens et mdecins conseils des CRAM, aux responsables de la DGS et du Ministre
de la Sant. Les prcdents numros sont disponibles la consultation sur le site Internet www.bioforma.net.
Ces livres ne sont pas en vente dans le commerce et le tirage est de 6500 exemplaires.
ISSN : 1293-2892
ISBN : 2-913633-56-0
Dpt lgal : JUIN 2010
N 29 : Mycobactries - Mycobactrioses
Les levures
et levuroses