UNIVERSITE CADI AYYAD, FACULTE DES SCIENCES SEMLALIA

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

TD 1
REPLICATION ET MAINTIEN

I. Compléter les propositions suivantes :

1. Dans les processus de réplication et de réparation, l’enzyme responsable de la
synthèse du DNA est : …………………………..

2. Pendant la réplication, la région active du chromosome est une structure en forme de

Y. Elle est appelée :…………………………………….

3. Pendant la réplication chez E. coli, les DNA les plus récemment synthétisés qui
consistent transitoirement en des molécules de 1000 à 2000 nucléotides sont :
……………………………………..

4. Contrairement à la RNA polymérase, la DNA polymérase a absolument besoin de

l’extrémité 3’OH d’une……………………. appariée, à laquelle elle ajoute des
nucléotides.

5. L’initiation de la synthèse du DNA sur le brin à réplication discontinue nécessite de

petites amorces fabriquées par une enzyme appelée ……………….. , qui a pour
substrats (ou précurseurs) des ribonucléotides triphosphates.

6. La fusion de la double hélice du DNA au niveau de la fourche de réplication est

catalysée par …………………. , qui se déplace unidirectionnellement le long du
DNA grâce à l’énergie fournie par l’hydrolyse d’ATP.

7. Les ……………………………………. , participent à la stabilisation du DNA simple

brin formé au niveau de la fourche de réplication de sorte que les bases azotées restent
disponibles pour servir de matrice.

8. Si la DNA polymérase positionne un nucléotide incorrect, un domaine catalytique

distinct possédant une activité ………………………………. 3’-5’ enlève le résidu
mal apparié.

9. Si la DNA polymérase commet une erreur, créant ainsi une paire de base
incorrectement appariée, la correction est faite immédiatement par l’activité dite
…………………………………………….. , ou bien par la suite par la
……………………………………………. , système particulier utilisant la
méthylation pour distinguer les brins nouveaux des anciens.

10. Les ……………………………….. , qui compensent le surenroulement positif créé

par l’avancement de la fourche de réplication peuvent être considérées comme des
‘nucléases réversibles’ puisqu’elles créent des cassures transitoires soit
monocaténaires (type I), soit bicaténaires (type II).

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II. Indiquer si les déclarations suivantes sont vraies ou fausses. Expliquer pourquoi :
1. Chez E. coli, où la fourche de réplication progresse à raison de 500 paires de bases par
seconde, le DNA en aval de la fourche effectue environ 3000 tours par minutes.

2. La synthèse du DNA s’effectue dans le sens 5’-3’ sur la chaîne précoce (directe) et
dans le sens 3’-5’ sur la chaîne tardive (indirecte).

3. Chez E. coli, le système de réparation des mésappariements, dépendant de la

méthylation, est capable de distinguer le brin parental du brin fils si l’un ou l’autre des
deux brins est méthylé, mais pas si aucun des brins n’est méthylé.

III. Origine(s) et direction(s) du mécanisme de réplication ?

Le laboratoire que vous avez rejoint étudie le cycle de vie d’un virus à hôte animal. Le
génome du virus est formé d’un DNA bicaténaire circulaire. Votre projet est de localiser
la ou les origines de réplication et de déterminer si la réplication s’effectue dans une ou
deux directions à partir d’une origine donnée (réplication uni- ou bi-directionnelle).

Pour atteindre votre objectif, vous isolez des molécules de DNA viral en réplication. Vous
les coupez avec une enzyme de restriction qui coupe le génome viral en un site unique,
linéarisant ainsi la molécule circulaire. Vous examinez ensuite les molécules obtenues au
microscope électronique.

Certaines des molécules que vous observez sont schématisées ci-dessous : 1 à 7.

molécule d’origine linéarisée

yeux
1
2

3
4

formes en H
6
7

Vous devez présenter aussitôt vos conclusions au reste du laboratoire. Comment

répondez-vous aux questions que votre professeur a définies ?

1- Y a-t-il une seule ou plusieurs origines de réplication ?

2- La réplication est-elle uni- ou bi-directionnelle ?

-2-
 3- Peut-on déterminer avec précision l’emplacement de ou des origines de réplication par
rapport au site de restriction étudié ? Sinon, que doit-on faire pour le ou les localiser ?

IV. Direction et vitesse du mécanisme de réplication ?

Vous étudiez la synthèse du DNA dans une lignée de cellules eucaryotes en culture. De la
3
H-thymidine est fournie aux cellules qui l’incorporent au niveau des fourches de
réplication. Les cellules sont ensuite lysées de façon très ménagée dans une poche de
dialyse. Quand cette poche est percée et que l’on fait écouler lentement la solution,
certains brins de DNA adhèrent aux parois et sont étirés dans le sens général du drainage
(ou de l’écoulement).
Cette technique permet ainsi d’isoler de très longs brins de DNA intacts et de les étudier.
Toutefois, l’étirement masque les yeux de réplication de sorte que les brins fils sont côte à
côte.
La membrane de dialyse et le DNA qui y est collé sont fixés sur une lame en verre,
recouverts d’une émulsion photographique puis exposés pendant 3 à 6 mois. Le DNA
marqué est révélé sous forme de grains d’argent.
Les cellules en culture sont prétraitées pour les synchroniser en début de phase S (fin G1).
Expérience A : Le blocage de synchronisation est levé. La thymidine tritiée est ajoutée
immédiatement. Après 30 minutes d’incubation, La concentration du milieu en thymidine
tritiée est ramenée au 1/3 et les cellules sont incubées pendant 15 minutes
supplémentaires.
Expérience B : Le blocage de synchronisation est levé. Les cellules sont incubées sans
thymidine tritiée pendant 15 minutes. La thymidine tritiée est alors ajoutée et les cellules
sont traitées de la même manière que dans la première expérience (30 min + 15 min).

Interpréter les résultats obtenus et expliquer la différence entre les deux expériences.
Estimer, (en μm / min et en pb/seconde), la vitesse de progression des fourches de réplication
dans ces deux expériences.
Si la taille génomique de ces cellules est connue, peut-on utiliser cette information pour
estimer le temps nécessaire à la réplication du génome entier.

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 QUESTIONS III ET IV DE L’EXAMEN DU 12 AVRIL 2007

I. Compléter la légende et donner un titre à la figure suivante (8 points) :

Titre :

II. Analyser et commenter la figure suivante. Donner un titre approprié. (4 points)

Commentaire :

Titre :

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 QUESTIONS I ET II DE L’EXAMEN DU 18 JUIN 2008

I) Expérience de Meselson et Stahl :

1. Enumérez brièvement les plus importantes mises au point techniques qui ont permis la
réalisation et la réussite de l’expérience de Meselson et Stahl.

2. Quel sera le résultat de l’expérience de Meselson et Stahl si les bactéries analysées

sont récoltées après quatre générations ( 4 cycles de réplication). Donner avec
précision le pourcentage en chaque type de DNA.

1) Schématisez et légendez le fonctionnement de la télomérase chez l’homme sahant

que la séquence (5’- GTTGGG- 3’) constitue l’élément répété en série au niveau
des télomères humains.

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PARTIE I DE L’EXAMEN DU 18 JUIN 2009

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