Micropropagation of adult avocado

Résumé

Une procédure a été mise au point pour micropropager avec succès la sélection IV-8, un porte-greffe d'avocat adulte. Les
cultures ont été initiées à partir de pousses basales obtenues après la taille d'un arbre jusqu'au niveau du sol. Les
bourgeons ont germé dans un milieu solide de Murashige et Skoog avec des macroéléments à demi-force et un
supplément de benzyladénine 1,3 μM. Pour induire la prolifération, les pousses ont été cultivées pendant 2 semaines en
milieu liquide dans un rollordrum avec la formulation de sel de Gamborg et de la benzyladénine 1.3 μM, suivies de 6
semaines dans des conditions de double phase (milieu solide avec une couche de milieu liquide sur le dessus) en utilisant
la même formulation de sel et deux suppléments de benzyladénine différents, 2.8 μM en phase solide et 0.4 μM en phase
liquide. Quatre-vingt-dix pour cent des pousses sont enracinées après une culture de 3 jours en milieu liquide dans un
rollordrum avec des macro-éléments MS à 0,3× et 4,9 μM d'acide indolebutyrique, suivie d'un transfert en milieu solide
en l'absence d'auxine mais avec 1 g l-1 de charbon actif. Le taux de survie pendant l'acclimatation en serre était de 70 %.
Abréviations : BA - benzyladénine ; IBA - acide indolebutyrique ; MS - Murashige & Skoog

Introduction
L'avocat est une espèce très hétérozygote et l'utilisation de porte-greffes de semis entraîne une grande variabilité dans le
comportement au champ ; par exemple, la résistance au stress biotique et abi- otique et la productivité des arbres
individuels (Ben Ya'acov, 1987). Actuellement, les génotypes sélectionnés peuvent être multipliés par voie végétative en
utilisant la technique de Frolich (Frolich et Platt, 1972), qui consiste à greffer le matériel à enraciner sur un semis
nourricier, puis à étioler la partie inférieure du scion en croissance. Les racines émergent à la base étiolée de la pousse
greffée. Cette méthode est coûteuse et son applicabilité dépend du type de génotype (Fernández-Galván et Galán-Sauco,
1987). Il est donc souhaitable de développer des méthodes de multiplication végétative pour l'avocat. La culture in vitro
a donné des résultats positifs lorsque du matériel juvénile était utilisé (Cooper, 1987 ; Barceló-Muñoz et al., 1990) ;
cependant, les réponses obtenues avec des explants adultes étaient médiocres (Cooper, 1987 ; Pliego-Alfaro et al., 1987).
Cette in- a été entreprise pour développer une méthode de micropropagation de l'avocat adulte.

Matériels et méthodes
Un arbre de 10 ans d'un verger en pleine production, situé à la station expérimentale de La Mayora
(Malaga) a été choisi. Cet arbre était une combinaison du cul- tivar Hass (scion) et d'un semis
mexicain (IV-8) comme porte-greffe, et avait été sélectionné en raison de sa production élevée et de
son faible indice de croissance bisannuelle sur une période de 4 ans (Pliego-Alfaro et al., 1987).

Initiation des cultures

L'arbre a été taillé jusqu'au niveau du sol et les pousses issues de la partie basale du porte-greffe ont
été utilisées pour l'établissement de la culture. Après l'enlèvement des feuilles, les pousses de 20 à 25
cm de long ont été désinfectées dans une solution d'hypoclorite de sodium à 0,5 % avec quelques
gouttes de Entre 20 et 10 min. Ensuite, ils ont été lavés à l'eau et divisés en sections nodales de 1 à
1,5 cm de long avec un bourgeon latéral. Selon la taille du bourgeon, deux à quatre feuilles ont été
enlevées. Ensuite, ces explants ont été à nouveau désinfectés pendant 10 minutes et lavés trois fois à
l'eau stérile avant d'être mis en culture dans des tubes à essai.

Un milieu MS modifié (Murashige et Skoog, 1962), avec des macro-éléments à demi-force (MS 0,5×)
et un supplément de 1,3 μM BA, solidifié avec de la gélose A-1296 (Sigma Chemical) à 6 g l-1, a été
utilisé pour l'initiation de la culture (Pliego-Alfaro et al., 1987).

Une réplique du porte-greffe IV-8 a été obtenue en utilisant la technique de Frolich (Frolich et Platt,
1972) et plantée sur le terrain. Après la floraison de cet arbre, des sections nodales de pousses en
croissance active de l'up par partie de l'arbre ont été établies in vitro en suivant la procédure
indiquée ci-dessus ; bien que dans ce cas, la formulation de sel de Gamborg (Gamborg, 1966) ait été
utilisée au lieu du mélange de base modifié MS. Des sections nodales avec des bourgeons latéraux
provenant des pousses basales de l'arbre élagué original, IV-8, ont également été établies dans ce
milieu pour servir de témoins.

Multiplication des tirs

Toutes les expériences ont été réalisées avec du matériel provenant des pousses basales de l'arbre taillé. En
utilisant des pousses de 1,5 cm de long qui avaient germé des sections nodales sur le milieu d'initiation, un
stock proliférant dans un milieu à double phase a été établi selon la procédure de Pliego-Alfaro et al.
(1987). Le milieu à double phase comportait une phase solide inférieure et une phase liquide superposée.
La phase solide contenait du MS medium avec des macroéléments à la moitié de leur concentration et 2,8
μM BA, tandis que la phase liquide avait la même composition mais la concentration en BA était de 0,4
μM. Après une sous-culture, des pousses apicales de 1 cm de long ou des sections nodales avec des
bourgeons latéraux obtenus à partir de ce stock, ont été utilisées pour étudier l'effet, sur la réactivation de la
croissance des bourgeons, de la culture en milieu liquide dans un rollordrum (5 tr/min). Les effets de
différentes concentrations de BA (0-1,3 μM) en tant que compléments au milieu MS avec des macro-
éléments à demi-force ont été évalués. Dans la seconde expérience, l'effet d'un autre système de culture, par
exemple la culture en milieu liquide dans un tambour (2 semaines), suivie d'une culture en conditions de
double phase (4 semaines), sur la prolifération des pousses a été évalué. La culture en continu dans des
conditions à double phase a été utilisée comme contrôle. Après cette expérience, les effets sur les pousses

de qualité variable, de 4 à 8 semaines, dans des conditions de double phase ont été évaluées.

Enfin, une expérience a été menée pour tester les effets de différentes formulations de sel, c'est-à-dire la
MS avec des macro-éléments à demi-force ou le mélange de sel de Gamborg (Gamborg, 1966) sur la
prolifération des pousses. Dans tous les cas, les ajouts organiques étaient ceux de la MS moyenne. Les
effets de deux cytokinines, la zéatine et la BA, ont été évalués. Dans cette expérience, le système de culture
était de 2 semaines en milieu liquide dans un rollordrum, suivies de 6 semaines en milieu à double phase.
Dans le milieu liquide (rollordrum), la concentration de cytokinine était de 1,3 μM, tandis que dans la
double phase, les concentrations de cytokinine étaient de 2,8 et 0,4 μM dans les milieux solide et liquide,
respectivement.

Enracinement et acclimatation des pousses

La procédure d'enracinement standard utilisée est celle développée par Barceló-Muñoz et al. (1990) pour
les avocats juvéniles ; par exemple, des pousses de 1,5 à 2 cm de long ont été incubées pendant 3 jours dans
un milieu MS solide avec des macro-éléments à un tiers et 4,9 μM IBA. Ensuite, elles ont été transférées
dans le même milieu sans auxine mais avec 1 g l-1 de charbon actif (Sigma Chemical).

Afin d'optimiser l'enracinement, les effets de la culture des pousses en milieu liquide dans le rollordrum (5
tr/min) pendant la première (avec auxine) ou la deuxième (sans auxine) phase du processus d'enracinement
ont été étudiés. Le matériel pour cette expérience a été obtenu à partir d'un stock proliférant avec la
méthode alternative utilisant la formulation modifiée de sel MS et la BA comme cytokinine (1,3 μM en
milieu liquide dans le rollordrum, 2,8 et 0,4 μM dans les milieux solides et liquides, respectivement, de la
double phase).

A second experiment was carried out to test the effect of the salt formulation used in the
multiplica- tion medium, MS 0.5× or Gamborg, on the rooting capacity of the shoots. Material had
been multiplied using the alternate method, with BA as cytokinin. In this experiment, liquid
medium was used during the first stage of the rooting process (3 days). Over 300 shoots were used
per treatment.

Finally, the rooting capacity of shoots derived from the clonal tree obtained by the Frolich
technique (Fro- lich and Platt, 1972), in relation to shoots obtained from the pruned tree, was
evaluated. In this experi- ment, liquid medium was used during the first part (3 days with auxin) of
the rooting process. The mater- ial was obtained from nodal sections with lateral buds qui avait
germé dans le milieu d'initiation de la culture avec le mélange de sel de Gamborg (Gamborg,
1966).

Les plantes enracinées in vitro ont été transplantées sur des plateaux avec des cellules de 3×3×5,5
cm avec du sustrat de racine De Baat Spec Mixt 20/80 (Coevorden, Hollande) et maintenues
pendant 4 semaines sous des tunnels en polyéthylène avec une humidité relative de 100 % et une
irradiance de 110-120 μmol m-2 s-1. Pendant cette période, les plantes ont été exposées
quotidiennement à des périodes de froissement (5 min le premier jour, 5 h le dernier jour) de faible
humidité relative (30-40%), comme indiqué par Marín et Gella (1987). Au bout de 4 semaines, les
plantes pouvaient être transportées dans des tunnels ouverts. La température dans la serre a fluctué
dans la fourchette de 15-30◦C.

Conditions générales des expériences

L'eau distillée déionisée a été utilisée pour préparer les médias. Le pH a été ajusté à 5,74 avant d'ajouter le

agar. Le milieu solide a été chauffé dans l'autoclave pendant 7 minutes (121 C, 0,1 MPa) pour faire fondre
l'agar, puis il a été distribué en aliquotes de 25 ml dans des tubes à essai Bellco de 25×150 mm. Enfin, il a
été stérilisé pendant 15 minutes. Dans la culture à double phase, 3 ml de milieu liquide ont été ajoutés au
 milieu solide stérile dans la hotte à flux laminaire. Dans les expériences réalisées dans le tambour à
rouleaux, seuls 5 ml de milieu liquide ont été utilisés.

La température a été maintenue à 25±1◦C pendant le jour et la nuit. Le niveau d'irradiation était de 45 μmol
m-2 s-1, fourni par des lampes Grolux avec une photopériode de 16 heures.

Données recueillies et analyse statistique

Dans les expériences de multiplication et d'élongation des pousses, des données ont été prises sur la
longueur des pousses principales, le nombre de feuilles, le nombre et la longueur des pousses axillaires et
l'apparition de pousses nécrotiques ou hyperhydriques.

Dans les expériences d'enracinement, le nombre et la longueur des racines, ainsi que l'apparence des
pousses nécrosées ou hyperhydriques ont été évalués à deux semaines d'intervalle sur une période de six
semaines.

Dans les expériences de multiplication, 20 à 25 pousses ont été utilisées par traitement et elles ont été
conservées pendant au moins 5 sous-cultures. Lors de l'enracinement, sauf indication contraire, 30 à 50
pousses ont été utilisées par traitement et les expériences ont été répétées deux fois. Pour les distri- butions
normales, un plan en blocs randomisés et le test LSD ont été utilisés (programme Statgraphics). Pour les
distributions binomiales, le test χ2 a été choisi (Sokal et Rohlf, 1981).

Tableau 1. Effet de la BA en milieu liquide, sur un rollordrum, sur l'allongement des bourgeons sur les
explants d'avocatiers matures. Données prises après 2 semaines. Les pousses apicales avaient initialement
une longueur de 1 cm. Les différentes lettres indiquent des différences significatives au niveau de 99 %.

tableau 2. Effet de la culture alternée en milieu à double phase et en milieu liquide avec agitation dans un
tambour à rouleaux, par rapport à la culture continue en milieu à double phase (témoin)
a Différence significative par rapport au contrôle (double phase) à 99%.
b significativement différent du contrôle (double phase) à 95 %.

Résultats
Effet de la culture sur un milieu liquide, avec agitation dans un tambour

Des observations antérieures de Pliego-Alfaro et al. (1987) avaient montré que la culture continue dans des conditions
de double phase induisait une hyperhydratation et un gonflement des bourgeons qui montraient une croissance plutôt
lente. Pour surmonter ce problème, l'effet de la culture sur milieu liquide dans un rollordrum en présence de différentes
concentrations de BA (0, 0,4 et 1,3 μM) a été étudié. Avec les deux types de propagules utilisés, les meilleurs résultats
ont été obtenus en présence de BA 1.3 μM, où les pousses apicales ont pratiquement doublé leur longueur (tableau 1).
Après 2 semaines, les pousses s'étaient allongées et ne présentaient que des symptômes légers d'hy- perhydricité ;
cependant, si le matériel était conservé plus longtemps dans ces conditions, l'allongement continuait mais des
symptômes d'hyperhydricité graves apparaissaient (données non présentées). Ainsi, pour les bourgeons apicaux ou
latéraux, une période de réactivation en milieu liquide de 2 semaines est suffisante.
Tableau 3. Effet de différentes combinaisons de formulations de sel, Gamborg et MS 0,5×, et de cytokinines, BA
et zéatine, sur la prolifération des pousses d'avocat adulte. Les différentes lettres indiquent des différences
significatives au niveau de 99 %.

Effet des sous-cultures successives utilisant un système de culture alternatif

Après avoir observé les résultats positifs que la culture en milieu liquide sous agitation avait sur la croissance des
pousses, un autre système de culture a été examiné, à savoir la culture en milieu liquide sous agitation suivie de la
culture en milieu à double phase par rapport à la culture continue dans des conditions à double phase (contrôle). Le
système de culture alternatif a permis la production de pousses plus longues avec plus de feuilles, et a
considérablement augmenté le nombre de pousses axillaires (tableau 2). De plus, les pousses poussant en continu dans
des conditions à double phase avaient des bases succulentes qui formaient des callosités et de graves symptômes de
hype- rhydricité étaient perceptibles. Les pousses poussant alternativement en milieu biphasique et liquide n'étaient pas
succulentes et avaient un aspect plus normal mais le pourcentage d'hyperhydricité était élevé (70%). À cette époque,
une expérience a été réalisée en faisant varier le temps de culture en conditions de double phase (4, 6 et 8 semaines),
après la période d'allongement de 2 semaines en milieu liquide dans un rollordrum. La durée du traitement en double
phase n'a pas affecté la capacité de prolifération ; cependant, à la 6e semaine de traitement, seulement 20 % des
cultures présentaient des symptômes d'hyperhydratation légère, tandis qu'à la 8e semaine de traitement, des symptômes
de nécrose apicale étaient visibles. Compte tenu des observations ci-dessus, le traitement de 6 semaines a été choisi
comme standard (données non présentées). En utilisant ce système de culture alternatif (2 semaines en milieu liquide
 agité suivies de 6 semaines en conditions de double phase), les cultures de pousses peuvent être maintenues en
permanence en prolifération active

Effet de la formulation du sel et du type de cytokinine sur le taux de prolifération

Les cultures de stock peuvent être maintenues par la méthode de l'alternance ; cependant, il arrive que des feuilles et Des
pousses à la base gonflée sont apparues dans ces conditions. Une autre expérience a donc été réalisée pour tester l'effet
d'une formulation de sel de force ionique plus faible (formulation de Gamborg par rapport au contrôle, formu- lation
MS avec des macro-éléments à mi-force ; chaque mélange de sel a été testé en combinaison avec de la BA ou de la
zéatine). La longueur de la pousse principale était légèrement plus élevée en présence de zéatine ; toutefois, des
différences spectaculaires ont été observées dans la formation des pousses axillaires, la BA donnant de meilleurs
résultats que la zéatine, indépendamment de la formulation de sel utilisée (tableau 3). La formulation minérale n'a pas
affecté le nombre de pousses axillaires. La longueur des pousses axillaires en présence de BA était de l'ordre de 0,3 à
1,3 cm. Aucune différence dans le nombre de feuilles n'a été détectée entre les traitements ; cependant, les feuilles
trouvées en présence de zéatine étaient beaucoup plus grandes que celles formées en présence de BA. Aucune feuille
ou pousse nécrotique avec des bases gonflées n'a pu être observée dans les cultures cultivées avec la formulation de
Gamborg, c'est pourquoi ce mélange de sel a été choisi comme standard.

Enracinement et acclimatation
L'effet de la consistance moyenne, solide ou liquide, dans le processus d'enracinement a été étudié lors de la première
expérience. Quatre traitements ont été utilisés : solide-solide (con- trol), liquide-solide, solide-liquide, liquide-liquide.
La consistance moyenne a eu une forte influence sur l'enracinement de l'avocat (tableau 4). Des pourcentages
d'enracinement plus élevés ont été obtenus lorsque la première partie du processus d'enracinement (3 jours) a eu lieu en
milieu liquide indépendamment de la consistance moyenne pendant la deuxième phase, liquide ou solide ; cependant, si
la deuxième phase était li-quid, pratiquement 100% des pousses étaient hyperhydriques, mais lorsqu'elle était solide,
les pousses étaient normales, de sorte que la combinaison liquide-solide a été choisie comme norme.
Les boutures ont commencé à s'enraciner au bout d'une semaine et le processus s'est poursuivi pendant cinq semaines
pour tous les traitements. le nombre de racines / boutures de racines a fluctué ; c'est-à-dire que le nombre le plus faible
a été obtenu dans le milieu solide-solide, alors qu'aucune différence significative n'a été obtenue parmi les autres
traitements (tableau 4).
Dans la deuxième expérience, l'effet sur l'enracinement du mélange de sel utilisé dans la phase de multiplication des
pousses a été évalué. Le pourcentage moyen d'enracinement obtenu avec des pousses provenant de la formulation MS
0,5× était de 74 %, tandis que 90 % de l'enracinement a été obtenu lorsque les pousses ont été prélevées sur le stock
cultivé avec le mélange de sels Gam- borg (figure 1). Ces différences étaient statistiquement significatives à la page ≤
0.01.
Lors de la dernière expérience d'enracinement, l'effet de l'état physiologique de la plante mère, taillée au niveau du sol
ou non taillée, a été évalué. Le pourcentage d'enracinement des pousses de l'arbre élagué était de 92 %, alors que celui
de l'arbre non élagué n'était que de 50 %.
En utilisant la procédure de micropropagation établie, le taux de survie pendant la phase d'acclimatation était de 70%
après 8 semaines dans des conditions in vivo. Une plante micropropagée âgée de 5 mois est présentée à la figure 2.
Figure 1. Pousses d'avocat adultes enracinées du porte-greffe IV-8. Le mélange de sel de Gamborg a été utilisé dans la
phase de prolifération. L'enracinement a été réalisé en deux étapes, à savoir 3 jours en milieu liquide avec de l'auxine
(4.9 μM IBA) et le transfert ultérieur en milieu solide sans auxine mais avec 1 g l-1 de charbon actif (5 semaines).

Figure 2. Plante d'avocat adulte micropropagée de cinq mois du porte-greffe IV-8.

La culture dans ces conditions a induit la succulence des bases des pousses et l'apparition de cul- tures hyperhydriques.
De plus, après 9 à 11 sous-cultures, on a observé un ralentissement progressif de la croissance des pousses apicales,
avec formation de nombreux bourgeons axillaires qui ne s'allongeaient pas (Pliego-Alfaro et al., 1987). Drew (1988)
sur Carica papaya a obtenu une réactivation de la croissance après avoir cultivé des bourgeons en milieu liquide dans
un rollordrum pendant de courtes périodes.

Discussion
L'avocat, ainsi que de nombreuses autres plantes ligneuses, présente une diminution de sa capacité morphogénétique
avec l'âge (Cooper, 1987 ; Pliego-Alfaro et Murashige, 1987) et, jusqu'à présent, les tentatives de micropropagation des
adultes n'ont pas réussi. La prolifération des pousses de matériel adulte dans un milieu MS solide modifié complété par
de la BA n'a pas été possible en raison de la forte incidence de la nécrose apicale (Pliego-Alfaro et al., 1987). Ce
problème a pu être surmonté en utilisant la technique de culture en double phase. Cependant, la culture continue La
 culture dans ces conditions a induit la succulence des bases des pousses et l'apparition de cul- tures hyperhydriques. De
plus, après 9 à 11 sous-cultures, on a observé un ralentissement progressif de la croissance des pousses apicales, avec
formation de nombreux bourgeons axillaires qui ne s'allongeaient pas (Pliego-Alfaro et al., 1987). Drew (1988) sur
Carica papaya a obtenu une réactivation de la croissance après avoir cultivé des bourgeons en milieu liquide dans un
rollordrum pendant de courtes périodes. Ce traitement a donné d'excellents résultats chez l'avocat car il a permis la
production de pousses allongées avec des feuilles élargies qui pouvaient être utilisées pour une multiplication ultérieure
dans des conditions de double phase. La culture en milieu liquide dans le rollordrum a pu prouver l'apport de
nutriments, de régulateurs de croissance et d'oxygène aux propagules (George, 1993). En outre, dans le cas de l'avocat,
lorsqu'on utilise la méthode à double phase, il est essentiel de contrôler le volume du milieu liquide ajouté à la phase
solide et d'avoir une période ex-tendue (environ 6 semaines) pour permettre aux pousses de se remettre de la période de
croissance en milieu liquide. Aitken-Christie et Jones (1987) et Arrillaga et al. (1992) ont également souligné la
nécessité de prévoir des périodes prolongées pour permettre aux propagules de récupérer après une exposition continue
au milieu liquide.

Chez l'avocat, Pliego-Alfaro et al. (1987) avaient montré que la réduction des macro-éléments MS à la moitié de leur
force était bénéfique pour le développement des pousses. Lorsque cette formulation saline était utilisée dans la
méthode de multiplication alternative (milieu liquide dans un rollordrum suivi d'une double phase), certaines cultures
avaient des bases succulentes et quelques feuilles nécrosées ; en revanche, l'utilisation de la formulation Gam- borg
(Gamborg, 1966) induisait une croissance normale. Cette formulation contient 43 % de l'azote total de MS 0,5× et un
plus petit (0,23 contre 0,34) NH+4 /N ra- tio. Nos résultats sur le porte-greffe d'avocat IV-8 confirment les
observations antérieures d'autres auteurs (Vieitez et al., 1983 ; Preece, 1995) sur l'importance des éléments minéraux
dans la régulation de la morphogenèse in vitro.
La formation de grandes feuilles en présence de zéatine a également été observée chez d'autres espèces (López- Encina
et al., 1994), mais son utilisation chez l'avocat n'est pas recommandée en raison de ses effets négatifs sur la formation
des pousses axillaires.

L'utilisation d'un milieu liquide avec agitation a eu un effet très significatif pour favoriser l'enracinement du porte-greffe
adulte IV-8 de l'avocat. Cette observation avait déjà été rapportée dans des culs-tivars de Malus difficiles à enraciner
par Sriskandarajah et Mullins (1981). Ces auteurs ont indiqué que l'agitation elle-même favorisait l'enracinement, car la
culture en milieu liquide stationnaire ne donnait pas de bons résultats ; probablement, les meilleures absorptions
d'auxines et de nutriments pourraient expliquer ces effets positifs. Cependant, selon Loach (1988), il faut également
tenir compte de l'importance de la croissance cellulaire et de la syn- thèse de nouveaux composants au cours du
processus d'enracinement. La nécessité de maintenir une pression turgorifique adéquate pour la croissance cellulaire est
bien connue (Green, 1968). L'utilisation d'un milieu liquide améliore la disponibilité de l'eau, ce qui pourrait avoir des
effets favorables sur la formation des racines. Le rôle important des nutriments minéraux dans la rhizogenèse est bien
établi (Blazich, 1988). Le mélange de sel utilisé au stade de la multiplication a également affecté la capacité
d'enracinement des pousses ; les meilleurs résultats ont été obtenus avec la formulation de sel de force ionique
inférieure, Gam- borg, ce qui est conforme aux résultats précédents de Haun et Cornell (1951) qui ont observé une
diminution de la capacité d'enracinement des pousses de Pélargonium lors de l'augmentation du niveau de
macroéléments de la solution utilisée pour fertiliser les plantes mères. Moe et Andersen (1988) ont également constaté
une corrélation négative entre la teneur en azote des microboutures et leur capacité d'enracinement.

Il a été démontré qu'une taille sévère augmente la capacité morphogénétique des pousses nouvellement formées chez
différentes espèces (Howard et al., 1989 ; Selby et al., 1990). Dans le porte-greffe d'avocat IV-8, l'enracinement ca-
La capacité des pousses basales nouvellement formées d'un arbre élagué était plus élevée que celle des pousses prélevées
sur le haut par partie d'un arbre qui était une réplique clonale du premier. L'augmentation de la capacité d'enracinement
des pousses basales après un élagage intensif a été expliquée par Fortanier et Jonkers (1976) comme une conséquence
de l'augmentation de la vigueur physiologique qui a lieu en raison d'une meilleure disponibilité de l'eau et des
 nutriments, tandis que Franclet (1983) indique que les pousses basales se forment mieux que les pousses adultes, car
elles proviennent de méristèmes qui sont restés juvéniles. La méthode décrite ici permet, pour la première fois, de
réussir la micropropagation d'un porte-greffe adulte d'avocat, la sélection IV-8.

Remerciements
Les auteurs remercient l'Instituto Nacional de Investigaciones Agrarias, subvention INIA 8186 et la Comisión
Interministerial de Ciencia y Tecnología, subvention AGR 95-0588-CO2-01 pour leur soutien.

Références
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