Fiche méthode

Synthèse peptidique

Chargement de la résine 2 chloro-trityl (100-200 mesh, loading 1.56 mmol/g) avec le

premier acide aminé

Load : taux de substitution en mol/g de résine (en général : 0,5-0,7 mmol/g de résine)
⤷ Il faut diminuer la quantité d’acide aminé 1 soit : 0,3125 eq AA1/résine

 Peser 1g de résine (1,6 mmol) dans une seringue de 20 ml bien étiquetée – ajouter du
DCM – agiter pendant 30 min (seringue de 20 ml) – jeter la solution
 Préparer une solution de Fmoc-AA1 (0,5 mmol, 0,3125 eq) et de DIEA (2 mmol, 4eq) dans
environ 10 ml de DCM.
 Prélever la solution préparer avec la seringue de 20 ml – agiter pendant 3h a RT.
 Lavage DCM/MeOH/DIEA (17:2:1) x3
 Lavage DCM x3, DMF x3, DCM x3, MeOH x3
 Sécher la résine

Pour calculer le load de la résine : ratio entre la quantité d’AA1 utilisé en mmol / mass de la
résine sèche en g.

Synthèse peptidique manuelle sur support solide

 Préparer une seringue de 10 ml contenant 500 mg de résine (0,25 mmol)

 Regonflée la résine pendant 30 min avec du DCM
 Déprotection de l’AA1 : traitement de la résine avec une solution 20% piperidine/DMF
pendant 5 min, puis 10 min – lavage de la résine avec du DMF (3 fois)
 Élongation de la chaine :
o Couplage :
 Préparer une solution de AA (1 mmol, 4eq/résine, m=M mg), HBTU (360
mg, 0,95 mmol, 3,8 eq/résine), DIPEA (348 µl,2 mmole, 8eq/résine) dans 7
ml de DMF.
 Transférer la solution dans la seringue et laisser agiter pendant 30
minutes
o Lavage 3x DMF
o Test colorimétrique (Kaiser, Chloranil -après Pro -, TNBS)
o Lavage 3X DMF
o Déprotection : traitement de la résine avec une solution 20% piperidine/DMF
pendant 5 min, puis 10 min – lavage de la résine avec du DMF (3 fois)
o Lavage 3x DMF
 Fin de l’élongation : lavage DMF x3, DCM x3 et MeOH x3 et sécher la résine

Clivage

 Gonflée la résine pendant 30 min avec du DCM

 Traitement de la résine avec 25% HFIPA/DCM pendant 1h
Fiche méthode

 Transférer la solution dans un ballon taré

 Traitement de la résine avec 25% HFIPA/DCM pendant 30min et transferer la solution
dans le ballon
 Évaporation à sec

Macrolactamisation

 Dissoudre le résidu obtenu dans 300 ml de DMF

 Ajouter 91 mg de HATU (0,24 mmol, 0,95 eq) et 580 µl de DIPEA (3,4 mmol, 14eq)
 Laisser agiter toute la nuit à RT
 Évaporer le DMF

Déprotection des peptides et précipitation

 Traiter le produit avec 7 ml d’une solution de TFA/TIS/EDT/H2O (94:1:2.5:2.5) pendant 3

à RT
 Évaporation à sec
 Précipitation :
o Ajouter le liquide résiduel au goutte à goutte dans Et2O froid
o Centrifugation à 8500 rpm pendant 5 min
o Retirer l’éther froid
o Répéter l’opération x2
 Dissoudre le produit dans H2O/ACN/TFA (90:10:0,1)
 Lyophiliser pour purification

Conditions particulières

- Dap
o mAA = 184 mg ; mHBTU = 180 mg ; VDIPEA = 174 µl
o Sous agitation pendant 1h
- DAPA 
o mAA = 250 mg, mHATU = 185mg ; VDIPEA = 178 µl
o Sous agitation pendant 1h
o Test au TNBS puis déprotection 2% DBU/DMF jusqu’à la fin de la synthèse