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Azote et Protéines
NUTRITION
L'alimentation azotée des
animaux domestiques
1770 Découverte de l'azote
~ 1840 Formes alimentaires d'azote nécessaires aux animaux
(Boussingault, vers 1843)
Terme "protéine" (Mulder 1839: importance primaire)
1900 Notion de qualité des protéines
1906-1935 Découverte des acides aminés
1910 Notion d'acide aminé essentiel
1990 Acides aminés digestibles
• Généralités
– Définition
– Importance
• Utilisation de l'Azote alimentaire
R2
NH CO CH NH CO
CH NH CO CH
R1 R3
acide aminé 1 acide aminé 2 acide aminé 3
20 acides aminés dont 10 indispensables
Glycine Sérine
• Simples • Hydroxylés
Alanine Thréonine
Valine Lysine
• Ramifiés Leucine Arginine
Isoleucine • Basiques Histidine
Cystéine
• Soufrés Méthionine Proline
• Cycliques
ac. Aspartique Phénylalanine
• Diacides ac. Glutamique
Tyrosine
et leur • Aromatiques Tryptophane
Asparagine
dérivé aminé Glutamine
Matières azotées alimentaires : classification
Critères
Analyse
globale MAT
MA protéiques ANP
Analyse
biochimique
Peptides Amines
Protéines
Acides aminés Urée
Analyse
physico-chimique MA insolubles MA solubles
Protéines ingérées
Ni Fèces = Nf
Acides Aminés
Renouvellement Protéines :
des Protéines - structurales
corporelles (muscle, os, peau)
- fonctionnelles
Urée = Nu (enzymes, hormones)
Importance des Protéines
23 %
Carnivores 60 % 15 %
4m
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques / Polygastriques
FERMENTATION
DIGESTION MICROBIENNE
GASTRIQUE NH3 RUMINALE
simplification DIGESTION
INTESTINALE GASTRIQUE
DIGESTION
hydrolyse ± totale INTESTINALE
AA libres
ABSORPTION ABSORPTION
oligo-peptides
FERMENTATION FERMENTATION
MICROBIENNE NH3 MICROBIENNE
TERMINALE TERMINALE
FECES FECES
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques vs Ruminants
- Digestion enzymatique gastrique coupure de caséine K
(paracaséinate de Ca)
jeunes non Chymosine = présure Coagulation caséine
sevrés (pH 6,5) (veau, agneau, chevreau) Protéolyse modérée
Polypeptides
INTESTIN
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques vs Ruminants
- Digestion enzymatique intestinale intraluminale (suc panc.)
activité Protéines Polypeptides
(Entero- Trypsinogène
coup. li. COOH kinase)
Trypsine
+ AA
ap. AA(bas) Lys, Arg Polypeptides
Chymotrypsinogènes
libres
coup. li. COOH
Chymotrypsines ABC
ap. AA(Ar)
Pro-carboxypeptidases
libère AA-Cterm
Oligopeptides AA
Carboxypeptidases* AB libres
ap. AA sauf Pro
Pro-elastase
coup. li COOH
ap. AA(non polR) Elastase
type Gly, Ala, Val Oligopeptides et dipeptides
(membranaires) Protéines
indigestibles
activ. tryposine Enterokinase
(exopeptidase) Dipeptidylpeptidase IV
hydrolyse Oligopeptides AA
dipeptides (intracellulaire) et Dipeptides libres
(endopeptidase) Iminodipeptidase (=prolinase)
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
Site d'action des protéases digestives
H2N - Ala - Glu - Leu - Lys - Ala - Cys - Ile - Phe - Pro - Asp - Ala - His - COOH
acides transp.
aminés AA
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques vs Ruminants
- Catabolisme azoté dans le réticulo-rumen
Protéines dégradables N non protéique
30 - 50 % des bactéries
sont protéolytiques Peptides
(protéases extracellulaires)
+
protozoaires Acides aminés NH3
(70 % de N soluble rumen)
pH optimal 6 à 7
Leu
AF ramifiés (isoacides) Ile
Val
AGV
Facteurs de croissance de la
flore (cellulolytique ++) Met
Soufre Cys
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
Métabolisme azoté du réticulo-rumen NH3 > 0,4
mg/100ml
salive
RATION MAT sg jugulaire
MA non dégradables intoxication
RUMEN MA dégradables
paroi
• pH 6,8 A non Prot.
• NH3 (mg/l) Foie
excès
mini 50 AGV NH3 urée
maxi 500
ENERGIE CO2
• Synth µbiN
195 g MA MA microbienne
par kgMOD (80% prot., 20% ac. nucléiq.) lait
jusqu'à 30-50% d'ANP glucopept.…)
urine
Protéines Protéines d'origine
INTESTIN microbienne
d'origine
Protéines AA
alimentaire sang
digestibles
Côlon N Indigestible NH3
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques vs Ruminants
- Digestion azotée dans le réticulo-rumen
Rumen Int. grêle Côlon
MANDég
MADég
salive MAM Digest. NH3
65-90 %
NH3 Digest.
80 % Acides
ATP RUMEN
Aminés • pH 6,8
• NH3 (mg/l)
urée mini 50
recyclage maxi 500
Foie • Synth µbiN
Rein 195 g MA
(urine) par kgMOD
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
1- Modalités : Monogastriques vs Ruminants
- Cinétique de la dégradation ruminale des protéines
100
protéines tannées
phase
s/p distillerie &
de
brasserie
latence
graines de coton
• Liés à l'animal
– âge : jeune et âgé < adulte
– race : grandes races < autres
– état de santé : Syndrome malassimilation-
malabsorption (SIBO, protein loosing enteropathy)
• Liés à l'aliment
Utilisation digestive des protéines :
2- facteurs de variation
• Liés à l'animal
• Liés à l'aliment
– origine des protéines : protéines animales >protéines
végétales (anti-enzyme ; glucides associés)
• (ex : CN) CUD prot: panse 93,2 %
poumon 88,7 % > T.
soja 77,8 %
filet 91,7 %
- attention : protéines enzymo-résistantes :
collagène cru - scléro-protéines - phanères (Neirick et al., 1990)
– traitements thermiques des aliments
– autres composants de la ration (fibres sol > fibres insol)
L'alimentation azotée : Utilisation digestive
2- Facteurs de variation
Cinétique de la dégradation ruminale des protéines
Tps de 1/2 dégradation (h) Dégradation MAT (%)
100 95
50
T. tannés 80 72
maïs
Luz.DH 60
30 Far. poisson 63
P. Bett. T. soja
blé, orge, Fourrages crues, grille 1mm
extrudées 150°C, grille 1mm
Pois
10 crues, grille 5 mm
0
40 60 80 100 8 16 24
Dégradabilité (%) Heures d'incubation in sacco
(INRA, 1988) de Graines de Lupin
(Cros, 1991 ; Kibelolaud, 1991)
• Généralités
• Utilisation de l'Azote alimentaire
– Utilisation digestive
– Utilisation métabolique
– Evaluation de l'efficacité protéique de la ration
• Protéines et alimentation de l'animal sain
Synthèses Désamination
(protéines corporelles)
(Hb, prot. cellulaires) Partie non azotée NH3
(hormones, enzymes)
(productions)
Amination Oxydation
C.Cétoniq. Glucose Urée
corps terniaires du pool métabolique CO2 , H2O
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
1- facteurs intrinsèques : Notion d'AA indispensable
PV
souris zéïne Sans ajout de Tyr, la zéine comme
adulte + Tyr seule source d'azote ne permet pas la survie
+ tryptophane L'ajout de Try est nécessaire à maintenir le poids
Tyr & Try sont des AAi
t
Willcock & Hopkins 1906
PV
gliadine
souris + Lys La gliadine (protéine du blé) est pauvre en Lys
jeune L'ajout de Lys est nécessaire permettre la
+ tryptophane croissance de jeunes souris
Lys est un AAi
t
Osborne & Mendel 1911
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
1- facteurs intrinsèques : Notion d'AA indispensable
AA indispensables Rat Chien Souris Poulet Homme Porc
Nb : Ent (Croiss) 7 (9) 9 (9) (11-12) 8 (10)
Val + + + + + +
Thr + + + + + +
Ileu + + + + + +
Met + + + + + +
Try + + + + + +
Lys + + + + + +
Leu 0 (+) + + + + +
Phe 0 (+) + + + + +
His 0 (+) + + + 0 +
Arg 0 (±) ± 0 ± 0 +
Tyr + (0) 0 0 0 0 0
Glu 0 0 0 +? 0 0
Gly 0 0 0 + 0 0
Terroine 1952, modifié par Jacquot et Rérat, 1966
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
1- facteurs intrinsèques : Notion d'AA indispensable
Equilibre qualitatif, notion variable, non extrapolable à tous
AA Espèce Stade physio Forme Précurseur
Val L
Leu 0 c/z rat ad. + rat en croiss L
Ileu L
Gly Vol
S Met DL Met(2CH)Cys
OH Thr L 0
diN Lys L 0
diN His 0 c/z H, rat ad rat en croiss L
diN Arg CT, PC (vit cr) L
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
Mise en évidence du rôle primordial de l'acide aminé le + limitant
Etude chez le porcelet après sevrage (Lewis, 1977)
GMQ (g/j)
150
0,97 % Lys
100
0,57 % Lys
50
10 AAIndispensables
Niveau du besoin (GMQ max)
Niveau permis (GMQ observé)
1 seul facteur limitant : Lys
par défaut Lys
3 facteurs limitants
I : Lys
II : Thr
III : Met
Met Thr Lys
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
3- facteurs intrinsèques : Apport simultané
Equilibre quantitatif
Repas d'AA sans arginine en quelques heures :
• vomissements
• spasmes musculaires par
• ataxie Hyperammoniémie
• hyperesthésie
• spasmes tétaniformes (Morris & Rogers, 1977, 1978)
Coma puis Mort
Disponibilité rétardée de la lysine (poudre de lait
surchauffée - veau)
retard de performance
L'alimentation azotée : Utilisation métabolique
CCL Valeur biologique : facteurs de variation intrinsèques
protéine à synthétiser i i i i
i i i
protéine i i i i
alimentaire i i i i i i
i i
facteur limitant
i
TOUS les TOUS
acides aminés en QUANTITES disponibles
INDISPENSABLES (i) EQUILIBREES SIMULTANEMENT
E apport Energie
(kcal/P0,75) apport Azoté
jusqu'à saturation des capa. (mg N/P0,75)
génétiques de rétention d'N
e - Additifs
- Anabolisants : modif. équil. hormonal & croissance (Chapon)
favorise anabolisme <> anabolisme
=> GMQ et N retenu / N urinaire (Oestrogènes, Veau)
(oestrogènes, androgènes, progestagènes, acétate de trembolone (TBA),…)
interdits CEE 31 déc . 1986
CUD VB
Coefficient d'utilisation digestive Valeur biologique
CUP
Coefficient d'utilisation Pratique
L'alimentation azotée : Efficacité protéique
Efficacité protéique à 3 niveaux :
DIGESTIF
Fèces Urine
ENTRETIEN
N ingéré N digéré N retenu
PRODUTIONS
CUD VB
X METABOLIQUE
CUP
GLOBAL
L'alimentation azotée : Efficacité protéique
Méthodes d'appréciation de la qualité protéique d'un aliment
MAt • Mesures in vivo : Digest. apparente
Digest. réelle
CUD +/- Digest. iléale
• Mesures in vitro : solub. pepsine/HCl
solub. multienzym.
MAd • Mesures directes /
• Dosage d'AA : dans l'aliment - méthodes des bilans
- AAi : ap. hydrolyse chim. : AA totaux - analyse des carcasses
ap. hydrolyse enz. : AA disponibles CUPN
fixation dinitrofluorobenzène : Lys dispo
- OH-proline => collagène (VB<)
VB • Evaluations indirectes /
dans tissus animaux
- AAi libres sang.ou tissul. tests de croissance:
- urémie - CEP
- act. enzym : larves, moississures - CEPnet
protoZ : Tetrahymena pyriformis - comp. courbes de
MAn • Mesure directe in vivo : Nretenu/Ndigéré croissance "Slope-ratio"
L'alimentation azotée : Efficacité protéique
1- Efficacité digestive de l'azote alimentaire
a - Mode d'expression
NI - NF
CUD apparent = CUDa = x 100
NI
Absorbé (NA)
Ingéré
(NI)
? Excrété
(NF)
CUD réel
Le CUD réel de l'azote
gaz Absorbé (gaz)
Excrété
Ingéré
Fi (F)
(I)
fe
Endogène
I - (F - fe) I - F - Gaz
CUDr = x 100 CUDr = x 100
I I
CUDr > CUDa CUDr < CUDa
ex. : fe = 150 mg prot./kg/j plutôt chez les ruminants
c/z Chien (Meyer, 1982) Ru > CV > PC > carnivores
L'alimentation azotée : Efficacité protéique
1- Efficacité digestive de l'azote alimentaire
b - méthodes d'appréciation
• Méthodes expérimentales
• In vivo Directe : CUDa : Ningéré-Nfécal/Ningéré
Indirecte : méthode des traceurs - fistulisation
• In vitro
• N(fe) estimé / solubilité dans pepsine-HCl ( prot. indigestibles fécales)
même si les prot. bact. ne sont pas toutes digest.
(MonoG 0,1-0,25 g/100gMSi - CN150mg/kg/j - Ru 0,4-0,5 g/100 gMSi)
• MonoG : Solubilité pepsiq. puis syst. multienzymatique (Dufour, 1988&1992)
• Ru : Solubilité MA dans tampon bicarbonate-phosphate-Na (Durand, 1974)
90 ORGE
70
ORGE + 0,04%Lys
50
0 2 4 6 % N de la ration
• Généralités
• Utilisation de l'Azote alimentaire
• Protéines et alimentation de l'animal sain
– Le besoin azoté
• origine, aspects quantitatifs et qualitatifs
– Recommandations
• niveau d'appréciation
• modalités d'expression
• recommandations pratiques
• Conséquences pratiques : productivité et santé
animale
L'alimentation azotée : Le besoin azoté
1- Origine du besoin azoté
• dépense endogène Flux d'azote dans l'organisme
• dépense de production
I Fa
Fm Ft
Entretien
Productions
Croissance
Gestation Um
Lactation
U
Oeufs
Ut
L'alimentation azotée : Le besoin azoté
2- Besoin quantitatif
= qté globale d'azote à fournir à l'animal pour couvrir ses dépenses
Chat 19 29
Renard 16 24
Vison 20 31
Chien 4 12
Homme 5 8
Rat 4,2 12
80 20
70 15
60 10
50 5
Aliment à
8 10 12 14 16 18 20 22 % de protéine
Besoin azoté quantitatif des carnivores :
quel critère retenir ?
Croissance et Rétention azotée chez le chien (d’après Burns, 1982)
Gain (g/j) 19 21
Gain / Ingéré (g/g) 0,34 0,29
apport AAi
besoin (g/kg alit ou mg/P0,75)
• aminoacidémie libre
[AAi]plasma
apport AAi
besoin (g/kg alit ou mg/P0,75)
Détermination des acides aminés indispensables
chez le chaton
10 12
vitesse de Excrétion Ur.
croissance 5 ac. orotique
GMQ (g/j) 0
9 (x10-3 µg/j)
-5
6
témoin de
-10 l'apport
en arginine
-15 (en absence d'Arg,
3
-20
ac. orotique excrété)
-25 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1 Arginine (%)
Recommandation : 1.1 % de MS
soit 0.23 g/100 kcal EM ou env. 4 % des protéines
Synthèse de
Glutamine Proline
l'Arginine
chez le Chat -glutamyl-phosphate
proline oxydase
'-Pyrroline 5-carboxyliq.
* * glutamate réductase Intestin
-glutamyl-semialdéhyde
NH2
* ornithine amino transférase O=C
NH2
carbamyl- Ornitine arginase UREE
phosphate
Asp (NH3)
activités peu * ou pas * * actives chez le Chat (Morris, 1985)
Arginine chez le Chat
activité de l'ornithine amino-transférase
• Activité de l'ornithine amino-transférase dans
différents tissus chez le Chat et le Rat
(en µmol/min/g tissu frais) (Costello & al., 1981)
2
Rat
1,5
Chat
1
0,5
ND
0
Foie Cortex Médullaire Muqueuse Séreuse Int. Muscle
rénal rénale Int. squel.
La Taurine : NH3+-CH2-CH2-SO3-
1- Niveau d'appréciation
très variable
Ruminants PB
difficilement
PDI organ.
prévisible
Le + fiable
adaptation de l'azote à l'ingéré énergétique :
gage de l'efficacité maximale (PC, Vo)
Modalités d'expression du besoin azoté
Ex. Poule pondeuse Leghorn, 2,2 kg exportant 55 g d'œuf / jour
env. 17 g MATreçues par l'aliment / jour
Utilisation digestive de la lysine : 0,85
Besoin d'entretien = 73 mg/kg
Besoin de production = (7,9 mg Lys/g œuf x 79% efficacité) = 10 mg/g d'œuf
Soit un besoin d'apport quotidien de :
(73 x 2,2 + 10 x 55) / 0,85 = 836 mg de lysine / j
NH3
PDIA
ATP + + +
PDIM PDIMN + PDIME
|| || ||
urée PDIN PDIE
recyclage
Foie
PDI
Rein
(urine)
Modalités d'expression du besoin azoté
Ruminants : le système LysDi-MétDi (INRA)
ATP
Acides Aminés (Lys, Met)
digestibles dans l'intestin
3- Recommandations pratiques
32 - 40 28 - 35 CHAT
p. cent de MS
28 - 36 22 - 30 CHIEN
a - Intersupplémentation
Sources complémentaires
b - Supplémentation
Apport d'un AA de synthèse
Possibilité de formes protégées : Ru
c - Autosupplémentation
Cas des ruminants
L'alimentation azotée : Couverture du besoin
a- Intersupplémentation b- Supplémentation
%besoin + 1 AA de synthèse
Lys FL
100
AAS FL Mélange
... plusieurs
Maïs Far. viande sources AA non I
de
VB54 VB42
Protéines
2/3 + 1/3 Lys : rendue indisponible
VB 61 lors de traitement par la chaleur
Lys Lys
AAS AAS
Thr Thr
Protéine 1 Protéine 2
ex : Céréales ex : Soja
Supplémentation
%du besoin
+ 1 acide aminé de synthèse
100
Apport
par
mélange
de plusieurs AA non I
sources
de
Protéines
Lys :
rendue indisponible
lors de traitement par la chaleur
L'alimentation azotée : Couverture du besoin
4- Autosupplémentation : cas particulier des Ru
grâce à µflore ruminale, le pb des AAi ne se pose pas aux Ru
l'apport d'azote soluble, disponible pour les µO permet les synthèses
d'AAi, qui seront abs. dans l'IG fournissant les AAi au Ru
(supplé/AA protégés dans cas très particuliers, coût à considérer)
- Apport aux Ru d'N au meilleur coût
- Quantité qui satisfait les besoins de µpop.
% CB
Performance Performance Aliment non
réduite modeste réalisable
15
Performance Risque de
modeste OPTIMUM
diarrhée +
12
Risque de Risque de DIARRHEE
diarrhée + diarrhée +++
pH élevé abs. Mg
Energie
Minéraux
hypo Mg IIR
météorisation, entérotox, tétanie, mammite, abcès foie, fourbure
L'alimentation azotée : Conséquences sanitaires
2- Qualité des protéines et santé
a - Monogastriques
• Défaut
MonoG : carence en un AAi # carence protéique totale
+ signes spécifiques :
ex. taurine et arginine c/z CT
b - Polygastriques
Equilibre azote dégradable/non dégradable PDIM/PDIA :
- azote protéique est toujours moins dangereux que l'ANP
- satisfaction des besoins de la flore / de l'animal (productions)
Equilibre PDIN/PDIE : tolérance PDIN<PDIE grâce au recyclage
de l'urée, mais pour VLHP…
- recherche TP lait par Met protégée (coût)
Carence en Arginine chez le Chat
Repas d'AA sans arginine en quelques heures :
• vomissements
• spasmes musculaires par
• ataxie Hyperammoniémie
• hyperesthésie
• spasmes tétaniformes
Coma puis Mort
(Morris & Rogers, 1977, 1978)