PROTOCOLES 

EXPÉRIMENTAUX   

Germination 
 
Information générale 
Les tests écotoxicologiques visent à montrer l’effet toxique d’une substance sur un être vivant. L’effet peut être 
aigu ou chronique et peut être lié à la dose de substance. Toute substance peut être testée, comme les métaux, 
les hydrocarbures, les rejets industriels, les sols contaminés… L’être vivant utilisé peut être à différents stades 
de son évolution et sert généralement d’indicateur pour une plus large population selon son niveau de sensibilité.  
 
Dans le cas de test sur des végétaux, ils sont réalisés sur une population de semence et permettent de voir un 
effet inhibiteur sur la germination. Cette mesure se fait par dénombrement des semences germées après un 
temps  raisonnable  et  permet  d’exprimer  le  taux  de  germination.  Par  la  suite,  des  mesures 
complémentaires (taille et masse) permettent d’observer d’éventuels effets sur la croissance de la plante. Ces 
tests  doivent  se  dérouler  dans  un  environnement  contrôlé  pour  isoler  l’effet  des  substances  étudiées.  Les 
conditions de température, d’humidité et de luminosité seront donc fixées et surveillées. Le pH, qui influence 
grandement les équilibres chimiques et le métabolisme des organismes vivants, devrait être pris en compte. 
  
Un contrôle réalisé sur des témoins dans les mêmes conditions, mais sans substance toxique permet de s’assurer 
du bon fonctionnement de la méthode. Les tests réalisés avec du vivant sont soumis à des aléas indépendants 
de l’expérience, comme la qualité des êtres vivants sélectionnés (dans le cas présent, les semences). De ce fait, 
une erreur de 5 à 10 % est couramment utilisée au niveau  des témoins, ce qui correspond à des niveaux de 
confiances de 90 à 95 %. 
 
Étapes (échantillons et milieux de culture) 
Les milieux de culture sont constitués de boites de pétri de 10 cm de diamètre dans lesquelles deux couches de 
papier filtre servent de substrat pour une trentaine de graines de laitues (Lactuca sativa). 
a) S’assurer qu’un incubateur à 20 ± 1 °C est disponible. 
b) Mesurer le pH de chaque échantillon et le noter à 0,1 près.  
c) Pour les témoins, préparer 100 mL d’eau tamponnée à l’aide d’eau distillée en ajustant le pH entre 7,0 et 7,5 
avec du NaOH dilué (0,02 N). Noter la valeur de pH. 
d) Identifier trois boites de pétri par échantillon. Procéder de la même manière pour les témoins. 
e) Disposer deux feuilles de papier filtre dans chacune des boites. 
f) Introduire 4 mL d’échantillon par boite de pétri. Pour les boites témoins, ajouter 4 mL d’eau tamponnée. 
g) Conserver la solution d’eau tamponnée dans un contenant fermé; elle servira à l’hydratation de l’ensemble 
des graines durant l’incubation. 
h) À l’aide d’une spatule, aplatir les filtres pour former une surface plane. 
i) Déposer les graines dans une lentille de verre ou autre contenant non plastique. 
j) Disposer 30 graines dans chaque boite en s’assurant de les répartir au mieux tout en évitant qu’elles soient 
trop près de la bordure. 
k) Fermer les boites et les déposer à l’incubateur pendant 7 jours. 
l) Surveiller le niveau d’humidité des boites témoins pendant l’incubation. Au besoin, ajouter 0,5 à 1 mL d’eau 
tamponnée dans chaque boite tous les deux jours. 
 
 

 
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PROTOCOLES EXPÉRIMENTAUX   

Étapes 
1. Au 7e jour, sortir toutes les boites de pétri l’incubateur. 
2. Si nécessaire, les réhumidifier avec l’eau tamponnée. 
3. Pour chaque plantule, mesurer la taille de la racine et la taille totale à l’aide d’un réglet en mm. 
4. Déposer la plantule mesurée dans le couvercle de la boite, puis faire de même avec les suivantes. 
5. À la fin de cette caractérisation de plantules, la boite devrait contenir que des graines non germées. 
6. Pour que l’analyse soit valable, le taux de germination des témoins doit être d’au moins 90 %. Un résultat 
ne respectant pas cette condition est rejeté (tests de germination non valables). 
7. À l’aide des données récoltées aux étapes 3 et 5, établir un tableau avec les valeurs minimales, maximales 
et médianes, ainsi que les quartiles de chacun des échantillons. 
8. À l’aide des valeurs du tableau, réaliser une ou des figures exprimant les résultats. 
 
Élimination 
Dans le cas d’échantillons agressifs ou toxiques, leurs éliminations se font conformément aux consignes données 
en  laboratoire  (base  usée;  acides  inorganiques;  solvants…).  En  ce  qui  concerne  les  boites  et  plantules  en  fin 
d’expérience, elles sont jetées à la poubelle. 
 
Références  
AFNOR NF X31‐201, 1982. Qualité des sols ‐ Essai d’inhibition de germination de semences par une substance. 
5 p. 
CEAEQ MA. 500 ‐ GCR 1.0, 2003. Méthode d’analyse Inhibition de la germination et de la croissance chez les 
semences de végétaux. 30 p. 

 
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