TP 02 

: "Dosage de l’activité enzymatique d’une

protéase"
 But
Le but de ce TP est de mesurer l’activité enzymatique d’une enzyme
protéolytique. Celle-ci est mise en évidence dans le milieu exo
cellulaire d’une culture de moisissure(Penicillium) .

 Matériel utilisé
-Tube à essai
-Pipettes graduées de 1 et 5 ml
-Agitateur Vortex
-Bain -Marie
-Entonnoir
-papier Filtre
-Spectrophotomètre
 Réactifs
-Extrait enzymatique
-Tampon phosphate /citrate 0,2M , PH 5
-Substrat :solution de caséine à 2,5% dans le citrate de sodium
0,02M
-Solution de TCA à 4%
-Solution de Na2CO3 à 2% dans le NaOH 0,1N
-Réactif du Folin-Ciocalteu dilué à 1/2
  Résultats :

1 .L’origine, la nature et le rôle de la protéase utilisée : sont des

enzymes qui brisent les liaisons peptidique des protéines .On parle
alors de coupure protéolytique ou de protéolyse.

2 . on a utilisé les moisissures pour la préparation de l’extrait

enzymatique: parce que la protéases peuvent être produites par les
moisissures(c’est des microorganisme qui produites des enzymes
fongiques)

3 . Le rôle de TCA :est pour précipiter les protéines non transformés

4. L’Acide Aminé qui mis en évidence dans ce TP est : la tyrosine

5 .La concentration correspondante par référence au courbe étalon

de la tyrosine est :

6 .Calcule l’activité enzymatique de la protéase :

On a :DO =1,98

[C]=DO/a

a=tangα=0,32_0,16

Activité enzymatique : c’est la quantité de la tyrosine en

microgramme (μg) par 1ml par heure, la réaction se déroule en
30min donc :

[Tyr]=0,37×10-3µg/ml
 En heure :
[Tyr]= (2×0,37) ×10-3

[Tyr]= 0,74×10-3µg/ml

Donc : m= [tyr]×V

m= (5×0,74) ×10-3

m= 3,7×10-3µg/ml

L’activité de la protéase : 3,7UI