Imagerie du petit animal de laboratoire

La vie en transparence

Laurence Canaple,
Ecole Normale Supérieure de Lyon
laurence.canaple@ens-lyon.fr

14 Juin 2022
 Imagerie du petit animal de laboratoire

Généralités / introduction de concepts

Courte présentation de chaque modalité

Principe de fonctionnement
Applications principales

Tomodensitométrie Imagerie par rayons X

(µCTscan)
Acoustique : Echographie
Imagerie par résonance magnétique : IRM
Isotopique : tomographie par émission de positons
TEP

Imagerie optique: BLI, Fluorescence

 Imagerie médicale

L’imagerie médicale regroupe l’ensemble des techniques utilisées par la

médecine pour acquérir et restituer des images d’un tissu ou d’un organe en
utilisant des caractéristiques physiques ou chimiques de la matière.

Permet un accès immédiat et fiable à des informations jusqu’alors «invisibles»

comme les caractéristiques anatomiques, physiologiques ou encore certains
aspects du métabolisme des organes.

Largement utilisée dans un but préventif, pour le diagnostic, mais aussi pour
suivre l’évolution d’un grand nombre de pathologies.
Aussi utilisée pour assister certaines interventions.

Intérêt en recherche biomédicale : aide à la compréhension du fonctionnement

de l’organisme et a largement contribuée à la connaissance des fonctions
sensorimotrices et cognitives chez l’homme.
Intérêt en pharmacologie : efficacité des nouveaux traitements thérapeutiques
Quelques repères historiques

1895 : première image radiologique par Wilhelm Röntgen

 Quelques repères historiques
Des grands principes de la physique…

●1895 : découverte du principe des rayons X par W. Röntgen (PN 1901)

●1896 : découverte de la radioactivité par H.Becquerel (PN 1903)
●1915 : propagation des ultrasons par les SONAR (Sound Navigation Ranging)
●1934 : découverte de la radioactivité artificielle par F. et I. Joliot (PN 1935)
●1945 : découverte de la résonance nucléaire par E. Purcell et F.Bloch (PN 1952)

….aux grandes modalités d’imagerie

●1951 : premier échographe par J.Wild et J.Reid

●1955 : première échocardiographie par Inge Edler
●1972 : scanner mis au point par A. Mc Cornack et G. Hounsfield (PN 1979)
●1973 : première image IRM d’un animal par P. Lauterbur
●1980 : Echographie Doppler / Spectroscopie par RM
●1990 : développement de la médecine nucléaire avec la scintigraphie et la TEP
scanner à émission continue de Rayons X et déplacement constant de
la table d’examen
●1992 : Premières images du cerveau en fonctionnement par IRM
 Evolution de l’imagerie médicale

Imagerie cérébrale par TEP

Trois types d’imageries

Imagerie morphologique, anatomique ou structurelle

●sert à étudier l’anatomie d’un organe et tout ce qui peut la perturber

Imagerie fonctionnelle - Sondes spécifiques

●étude de la fonction d’un organe :analyse des phénomènes

biochimiques, métaboliques ou physiologiques
Ce fonctionnement est –il normal?

Imagerie moléculaire - Notion de gènes rapporteurs

●pour visualiser l’expression de gènes ou de protéines à

l’intérieur des cellules et leur rôle dans le fonctionnement
cellulaire de façon directe ou non,
 Intérêt de l’imagerie médicale en recherche

Méthode non invasive sans sacrifice de l’animal

→ Examens répétés chez un même animal : réduction de l’hypervariabilité, études
longitudinales

Current methodology : 24 souris pour 4 points d’analyse

Imaging methodology : même groupe de 6 animaux pour 4 points d’analyse

→ réduction considérable du nombre d’animaux par protocole : respect de la règle

des 3R (Remplacer, Réduire, Raffiner)
 Intérêt de l’imagerie médicale en recherche

● Etudier in vivo dans un environnement « entier » des processus biologiques en

temps réel
→ dynamique de processus biologiques
→ étudier les mécanismes physiopathologiques par mesures sur
un même animal au cours du temps en conditions physiologiques et/ou
pathologiques: suivi de l’évolution d’une pathologie, évaluation de la sévérité
d’une pathologie
→ évaluer l’efficacité d’un traitement thérapeutique:
pharmacocinétique/biodistribution, évolution d’une pathologie avant et après
traitement
● Etudier in vivo l’expression spatiotemporelle des gènes en conditions
physiologiques ou non
imagerie directe : sonde spécifique, sonde activable
imagerie indirecte : gène rapporteur luc GFP
Le petit animal de laboratoire
 Le petit animal de laboratoire

Caractéristiques du petit animal de laboratoire : petite taille, sociabilité,

taux de prolificité élevé avec des temps de gestation court, résistance et
facilité d’élevage

La drosophile: l’outil du généticien

Le poisson zèbre: en biologie du dvpt, toxicologie, pharmacologie et

médecine régénerative
 Le petit animal de laboratoire

Le rat Rattus norvegicus: en physiologie

La souris Mus musculus

• La souris est un excellent modèle car elle présente de grandes

similitudes génétiques, immunologiques, reproductives, physiologiques et
pathologiques avec l’homme.
• De plus, on dispose actuellement d’outils performants pour manipuler le
génome de cet animal → technologies de la génétique expérimentale et
de la transgénèse → des études approfondies de la fonction des gènes
chez la souris, et d’établir plus facilement des "modèles souris" de
maladies humaines.

Le lapin Oryctolagus cunniculus : immunologie, toxicologie, dermatologie,

diabètologie, bon modèle pour les maladies osteo-articulaires
 De l’homme au petit animal de laboratoire
 Changement d’échelle sur corps entier

Voxel = unité indivisible d'un objet volumétrique ; pixel en 3D ou pixel volumétrique

Voxel≈ 10 mm3

homme 80 kg
/3000

Voxel ≈ 0.005 mm3

souris 25 g
 De l’homme au petit animal de laboratoire
Imagerie clinique Imagerie du petit animal in vivo
Système conventionnel

Système adapté

Contraintes

 Changement d’échelle sur corps entier

Dimension réduite du volume de la zone à
imager

Nécessité d’avoir des appareils dédiés aux

petits animaux de laboratoire
 De l’homme au petit animal de laboratoire
Imagerie clinique Imagerie du petit animal in vivo
Système conventionnel

Système adapté

Contraintes

 Changement d’échelle sur corps entier

Dimension réduite du volume de la zone à
imager

 Immobilisation de l’animal
Couplage à l’Anesthésie, Monitoring
 Méthode : Anesthésie obligatoire
Induction anesthésie : cage d’induction isofluorane 3%/air - débit 1-1.5 L/min – qqs
minutes
Anesthésie continue pendant l’examen au masque isofluorane 1 à 2.5%/air
 Méthode : monitoring

Maintien de la température corporelle sous anesthésie: plateforme chauffée,

circuit d’eau chaude ; suivi par sonde température

Monitoring physiologique possible : capteur de pression pour la fonction

respiratoire, ECG

anesthésie

ECG
Capteur de
pression

injection iv cathéter
 De l’homme au petit animal de laboratoire
Imagerie clinique Imagerie du petit animal in vivo
Système conventionnel

Système adapté

Contraintes

 Changement d’échelle sur corps entier

Dimension réduite du volume de la zone à
imager

 Immobilisation de l’animal
Couplage à l’Anesthésie, Monitoring

 Mouvements physiologiques de l’animal

Battements cardiaques : 300-500 bpm
Mouvements respiratoires
Synchronisation des acquisitions

 Spécificité de la méthode d’imagerie :

Administration de produits, rasage et gel
de couplage, temps d’acquisition
 Méthode : spécificités liées à la modalité d’imagerie
Si administration de produits en iv par un cathéter via la veine caudale : agents de
contraste, traceurs

anesthésie

ECG
Capteur de
pression

injection iv cathéter
 De l’homme au petit animal de laboratoire

Pluridisciplinarité
Prévention/prognostic Physiciens des systèmes de détection et des
techniques d’imagerie
diagnostic
Informaticien pour logiciel et data processing
Optimisation des thérapies
Mathématiciens pour modèles biologiques intégratifs
Développement de nouvelles thérapies
et de nouveaux médicaments

Biologie
Chimie SHS pour éthique

Imagerie clinique Imagerie du petit animal in vivo

Système conventionnel Système adapté
 Agents de contraste

En imagerie, les agents de contraste sont des produits utilisés pour améliorer le rendu, la qualité de l'image par un meilleur
contraste afin de différencier les différentes régions des tissus. Ils sont généralement injectés par voie intra veineuse.

IRM cérébral: Examen effectué après un AVC sans injection d’agent de

Scanner avec fenestra : mise en évidence des vaisseaux sanguins contraste (A) et avec injection d’agent de contraste (B) permettant la
détection de dommages à la barrière hémato-encéphalique.

•En tomodensitométrie: produit à base d'iode va absorber les rayons X et ainsi éclaircir les zones traversées par celui-ci (par
exemple les vaisseaux sanguins).

•L'échographie : microbulles de gaz

•Pour les examens IRM, les produits les plus courants sont à base de gadolinium ou des nanoparticules de fer

•Imagerie nucléaire : radioéléments et radiotraceurs

 Tomodensitométrie ou Computed Tomography scan
consiste à mesurer l'absorption des rayons X par des tissus de
composition et de densité différentes : Une structure dense comme les
os absorbera plus de x-rays (hyperdense, en blanc) qu’une structure
aérée comme les poumons (hypodense, en noire).

Le scanner explore un volume de la zone étudiée

Le principe de détection

Source RX
SkyScan 1076 Micro-CT System
Low Dose In-Vivo Scanning of Small Specimens

La source de rayons X et le détecteur tourne

autour de l’objet statique

Résolution: 10 µm
Détecteurs Translation
Challenge: compromise between the highest resolution (→ time acquisition and time reconstruction) and the exposure time
(→ radiation dose)

Agents de contraste : Il est possible d’opacifier des structures en injectant un produit de contraste, opaque aux rayons X,
tel que l’iode ou le baryum, ce qui va rendre très visibles les tissus où il est présent (qui apparaissent alors hyperdenses,
c'est-à-dire plus "blancs" sur l'image).
 µCT scan : Imagerie osseuse
Imaging of calcified tissues
° bone / bone structure Détection d’anomalies osseuses :
Analysis of bone microarchitecture Mise en évidence du role de ERRα dans la
Calculations of bone parameters régulation de la masse osseuse
Follow-up of bone regeneration wild type mouse

ERR-deficient mouse
Micro-CT 3D souris entière (Skyscan-Bruker)

Delhon I et al. Endocrinology 2009;150:4463

Visualisation 3D, 9;m : articulation genou de souris in vivo Skyscan,

µCT scan : Imagerie des dents

Chez les cyprinidés

Various morphotypes of Cypriniformes teeth

PLoS One. 2010 24;5(6):e11293
 µCT scan : Imagerie tissulaire
Imagerie du rein Coeur de souris

systole

diastole

C57BL/6 mouse in vivo after injection of the blood-pool

contrast agent Fenestra VC.

abdominal vena cava (1), renal vein

(2), right iliac vein (3), spleen (4),
kidney (5), ureter (6).
 µCT scan : Imagerie vasculaire

Architecture vasculaire du poumon de souris

Scanner: SkyScan1172/100kV/10Mp using contrast agent + CTan processing software

Image: pseudo3D visualization (MIP) of lungs vascular structure, 5.7um pixel size (2020)
 µCT scan : détection et suivi longitudinal des tumeurs
Aussi utilisé en cancérologie car il permet de visualiser une modification de volume ou une anomalie de
structure
Carcinome basocellulaire chez le zebra-cobalt Tumeurs du colon

Computed tomographic images of cobalt-zebra. (c) Dorsal, sagittal and transverse
images showing osteolytic lesions of upper jaw (arrows) and invasion of mass to
the intraoral space (arrowheads). (d) Reconstructed 3D images showing more
details of severe osteolytic lesions (o) of right side of skull compared to the
normal bones (lacrimal) (N) of left side ( J of fish diseases. 2022 May 28).
Sagittal (A), coronal (B) from microCT colonography in an anesthetized
mouse show two colonic tumors (arrows) outlined by negative luminal
contrast that both measured 2 mm on gross pathologic examination.
* Tumor detection is greatly affected by the size of colonic tumors
(mean size 3.0mm) Detection of polyps as small as 2mm
Imagerie par ultrasons ou Echographie HR

Des ultrasons émis par une sonde en direction d’une zone d’intérêt sont
absorbés ou réfléchis par les substances qu’ils rencontrent. Les liquides
les absorbent tous. Le temps que ces US mettent à revenir à la sonde
(écho) est aussi fonction de la distance à laquelle se trouve la zone
d’intérêt. Permet d’obtenir des images précises des organes dans le
corps.
Images en temps réel, permettant de visualiser des tissus en mouvement
et des processus dynamiques, 2D imaging

30-60 MHz
a transducer/receiver 70-120 images/s
scanhead
Résolution: 70 µm

Imagerie échographique
par balayage mécanique ou électronique

Enregistrement Temps-Mouvement TM pour échocardiographie

Echographie Doppler : visualisation du sang circulant, vitesse du

flux à travers les vaisseaux…
 Echographie: Biologie du développement
Echo Doppler de la souris à 50MHz : analyse des flux sanguins
Suivi de gestation
Doppler pulsé 50 MHz Aorte nouveau-né 1.5j
dans l’artère ombilicale
d’embryons de souris

Artère rénale

Développement embryonnaire de l’œil chez la souris

J7

Chez l’embryon de poisson zèbre

Axialsweep of 40h ZF embryo Doppler of 72h ZF embryo

J11 Flux mitral

 Echographie: Imagerie tissulaire
Détection d’altérations tissulaires et de pathologies :taille, volume et forme de la tumeur, suivi de
la progression /régression, flux dans la tumeur

Rein de souris adulte 20MHz

Tumeur abdominale chez un zebrafish p53−/−

Tumeur kystique rénale
 Echographie: Imagerie cardiaque
Evaluation quantitative du fonctionnement du cœur (SV, CO, EF, FS, Lvmass…) et visualisation du flux chez
la souris
Détection de plaques d’athérome chez la souris
 Echographie: imagerie interventionnelle

Injection dans E11.5j au niveau du septum interventriculaire

Guided-injection into mouse kidney

Injection dans E11.5j au niveau du mésencéphale

 Imagerie par Résonance Magnétique IRM
Magnetique = aimant pour créer un fort champ magnétique
Résonance = vibration des noyaux d’hydrogène de la matière, ici les
protons de l’eau et des graisses.

In the absence of a strong When the
magnetic field, hydrogen field Bo
nuclei are randomly aligned hydrogen
about the
field
Bruker 7T
strong magnetic When a radio-frequency (RF)
is applied, the pulse Brf is applied perpendicular When the RF pulse stops, the
nuclei precess to Bo, it causes the net magnetic nuclei return to equilibrium
direction of the moment M of the nuclei, , to tilt such that M is again parallel
away from Bo to Bo . During relaxation, the
nuclei lose energy and emits
a measurable RF signal.

A 7T magnetic field is approximately •Cet aimant dégage un champ magnétique permanent puissant qui va orienter les
140000 times stronger than that of atomes d'hydrogène selon un axe donné.
the earth.
•Puis une antenne émet une onde de radio fréquence courte modifiant
l'orientation des protons ceux-ci vont ensuite revenir à leur état initial en restituant
De 4.7T à 17T de l'énergie et en emettant des signaux de RF enregistrable s
•Ces différents signaux seront ainsi analysés => production d’une "image" dont les
informations seront variables en fonction de la technique utilisée.
Résolution: 50µm •images 3D
•Signal intensity can be increased using contrast agents (Gd, iron nanoparticles)
 IRM: Imagerie cérébrale
Imagerie anatomique Imagerie fonctionnelle
Détection d’anomalies structurelles
IRM du cerveau d’une souris après
Activité MPO dans le cerveau dans un modèle
injection sous-cutanée de MnCl2
d’encephalomyelite induite

s s

c c

c c
Chen JW et al, Brain 2008; Epub

A lesion in the cerebellum positive for the MPO sensor

résolution 120µm isotropic
 IRM: Imagerie cardiaque
Imagerie anatomique Imagerie fonctionnelle
Activité MPO dans le cœur dans un modèle d’ischémie du myocarde
Gd-MPO
Efficacité d’un anti-inflammatoire sur le processus de remodelage

Nahrendorf M et al, Circulation 2008;177:1153

 IRM: Imagerie vasculaire
Schmieder et al, MRM 2005

Nat Med. 2007 Apr;13(4):498-503.

Modèle de souris transgénique

Détection de la vasculature maternelle et du placenta

Ciblage de la néoangiogénèse par injection de

nanoparticules paramagnétiques ciblant les intégrines
αvβ3 exprimées par une tumeur mélanique.
 IRM: Imagerie tissulaire
IRM haute résolution du poisson zèbre

a b
mouth
brain
heart
liver
stomach swim bladder
ovary
intestine
eggs

c d

horizontal myoseptum

e MRI of adult zebrafish. MR images were performed on a 4.7T

horizontal system using a 72 mm inner diameter birdcage coil
47x47x47 μm 39 min for RadioFrequency transmitting and a 15-mm-diameter surface
coil for receiving. As mentionned, in vivo imaging of adult
zebrafish revealed several anatomical details.
 IRM: Oncologie

Détection et volume de tumeurs du colon chez la souris

Détection d’une tumeur abdominale chez le zebrafish

cor

sag

Kabli et al., 2010

MRM, 52:524–529 (2004)

Modèle souris de tumeur colorectale

IRM: Expression de gènes

• Embryons Xenopus Laevis

•Co- injection à droite d’un ARNm LacZ + un
EgadMe
agent de contraste sensible à la b-galactosidase

X-gal staining Nature Biotechnology, 2000, 18, 321 IRM

expression de -Gal visualisée sur le flanc droit de l’embryon en optique et en IRM

IRM: Biologie du développement

lc1
Tomographie par émission de Positons TEP
Imagerie fonctionnelle utilisant des molécules radioactives
based on the detection of pairs of gamma rays emitted indirectly by a
positron-emitting radiotracer using a high performance gamma-camera or
PET scanner

18F 15O 11C 13N

Synthèse sur place

cyclotron T: 114 min. 2 min. 20 min. 10 min.
Isotopes standards émetteurs +

3-Emission de 2 photons
antiparallèle détectable par
deux gamma caméras opposées

2- Annihilation avec des

électrons de la matière

1- Pendant le processus de décroissance,

émission de positrons +
Specific radiotracer = precise loaction over time, accurate
Résolution: 1-2mm quantitative
Diapositive 40

lc1 laurence canaple; 22/06/2020

 TEP: Radiotraceurs
Radiotraceurs non spécifiques : suivi de voies biochimiques ou évaluation de paramètres physiologiques ; TEP
permet d’obtenir des informations sur le fonctionnement des tissus.

[15O]oxygen oxygen metabolism

[15O]carbon monoxide blood volume
[15O]carbon dioxide blood flow
[15O]water blood flow
[13N]ammonia blood flow
[18F]FDG glucose metabolism hexokinase
[18F]FMISO hypoxic tissue
[18F]FLT DNA proliferation thymidine kinase
TEP: Corps entier [18FDG]
[11C]choline biosynthesis of phospholipids
[18F]nitroisatin caspase-3 inhibitor
[18F]mustard hypoxic tissue
[11C]methionine Transporteurs des AA
 TEP: Oncologie
Détection de tumeurs
Détection de cellules cancereuses pancréatiques avec du
18F-2-Fluorodeoxyglucose

Détection de tumeurs dans le GTI de souris

Apc1/1638N avec [18F]FDG

Serrao, 2015
Souris KPC avec
adenocarcinome Souris contrôle
pancreas
 TEP: Oncologie
Détection et suivi de tumeurs, suivi de régression lors de thérapie

Suivi de cellules tumorales in vivo par TEP

Effet d’un inhibiteur de la thymidine kinase PKI166 sur

un carcinome avec [18F]FLT
J Nucl Med.2007; 48: 819
L’expression du gène de la thymidine kinase 2 humaine dans des
tumeurs sous cutanées est évalué comme gène rapporteur chez control
la souris par utilisation de deux radiotracers dérivés d’uracyl:
18F FEAU et 124I FIAU.

treated
 TEP: Imagerie cérébrale
[11C]raclopride dopamine receptor
radioligands spécifiques pour mapper et [11C] flumazenil central benzodiazepine receptor
quantifier les neurorécepteurs [11C]PK11195 peripheral benzodiazepine receptor
[18F]MPPF
D2+/+ serotonin 5HT D2-/-
receptors
1A
[18F]A85380 nicotinic acetylcholine receptors
[11C]AG1478 EGF receptors
[11C]AG957 BCR-abl receptors
[11C]MP4A Acétylcholine estérase
[18F]Dopa Dopamine2 receptor

Transverse images of iv injected mice with C11 raclopride

 TEP: Expression de gènes
Modèle d’expression bicistronic pour détection TEP: D2R et TK

Science2003, 302

D0: Injection iv de la construction (Pr CMV)

D2: Injection 18F FESP ligand D2R + TEP
D3: Injection 18F FHBG substrat de TK + TEP
Bonne corrélation d’expression des 2 gènes dans le foie, foyer d’accumulation adénoviral chez la souris
 Imagerie Optique : Fluorescence, Bioluminescence
based on the detection of photons by a highly sensitive camera cooled to -95°C.

Notion de gènes rapporteurs CCD

camera

Scanning laser
assembly, customs
lens + filters

Résolution: 2-3mm
Imagerie Optique : Bioluminescence

Luciferine
+ ATP
Very sensitive method
+ O2
10-15 M

luciferase

 Emission spectrum of oxyluciferine

Oxyluciferine
at 37°C is largely above 600nm,
quantification + AMP
and penetrates tissue
localisation + light
very efficiently.
Bioluminescence : grande: sensibilité de détection

Exp : 5 min
 Bioluminescence : Oncologie
Détection précoce de cellules tumorales et suivi du développement de la tumeur

Détection de métastases

Injection de
5.105 4T1 luc cells

Kim et al, pLoS ONE, 2010

 Bioluminescence : expression de gène
Suivi de la régulation circadienne d’un gène chez une souris transgénique luciférase
ATG ATG
P2/I1 I2 PEST
P1
E1A E1B E2 Luciferase Reverb 3’UTR 2,0E+06
Ventral
Dorsal

Radiance (phot./sec/cm2/sr)
ZT3 ZT8 ZT14 ZT24 x106
10
1,5E+06
8
6
4 1,0E+06
2

ZT3 ZT8 ZT14 ZT24 x106 5,0E+05

5
4
3 0,0E+00
2 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48
1 Zeitgeber Time (h)

Mise en évidence de la synchronisation d’un gène chez une souris transgénique luciférase en fonction de la
période de nourriture
1,5E+06
Before FR

After FR

Radiance (photons/sec/cm2/sr)
1,0E+06

FR
5,0E+05

Normal 0,0E+00
0 4 8 12 16 20 24
ZT3 ZT8 ZT14 ZT24 ZT (h)

Canaple et al, CMLS, 2018

 Bioluminescence : expression de gène
6E+04 6E+06

5E+04 5E+06

9E+04

Radiance (photons/sec/cm2/sr)
4E+04 4E+06
8E+04

7E+04 3E+04 3E+06

6E+04 ***
2E+04 2E+06
Radiance (photons/sec/cm2/sr)

5E+04
E18.5
4E+04 1E+04 1E+06
C57 gestantes
3E+04 Rev-Luc uterus
0E+00 0E+00
2E+04 0 4 8 12 16 20 24
1E+04 ZT (h)

0E+00 ZT3 ZT8 ZT14 ZT24

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
Embryonic days

E18.5
Pregnant C57xRev-Luc
E7 E11 E15 E16 E17 E18

Pregnant C57xRev-Luc - FR

Canaple et al, CMLS, 2018

 Bioluminescence : Apoptose

Détection de l’apoptose grâce à une luciférine proluminescente , substrat des

caspases 3 et 7

Hickson et al, Cell Death Differentiation, 2010

 Imagerie Optique : Fluorescence

Both exc and em light below 600nm are efficiently absorbed by

tissue and generally do not penetrate more than a few microns.
Near-infrared fluorescent proteins are currently in progress.

Limitations of fluorescent imaging in tissue: Autofluorescence

 Fluorescence: suivi de cellules tumorales
Détection de tumeur, suivi de cellules tumorales, progression et régression, efficacité d’une thérapie

Imagerie optique de myelomes GFP+ et Efficacité de l’antitumoral Velcade à differentes doses après 4 wks
de traitement.

Vue antéropostérieure

Vue postéroantérieure

Mol Cancer Ther.2007; 6: 1701-1708

Fluorescence : Oncologie
In vivo detection of glucose uptake using the 2-DG-750 fluorescent probe
 Fluorescence/Luminescence: imagerie cérébrale

EJN, 2011,33, 1037

Detection of neuronal precursors
Following intraperitoneal injection of d-
expressing eGFP under the control of the
luciferin (300 mg/kg of bodyweight) in a
doublecortin promoter in an acute brain Bioluminescence recordings of transgenic
2-month-old transgenic mouse, photons are
slice of a 10-day-old transgenic mouse. neural stem cells (105 cells) implanted in
emitted from the neuronal precursors
Fluorescence signals reveal the adult the subventricular region of a wild-type
expressing the firefly’s luciferase gene
neurogenic regions – the dentate gyrus mouse. Grafted neuronal precursors
under the control of the doublecortin
(DG) and the subventricular zone–rostral expressed luciferase under the control of
promoter. The bioluminescence signal from
migratory stream–olfactory bulb system the doublecortin promoter, and their
the hippocampus is masked by the intense
(SVZ–RMS–OB). migration from the site of implantation
signal emitted from the ventricular
regions. towards the olfactory bulb can be seen
from day 6 (C) to day 10 (D) post-grafting.
Bioluminescence intensity is coded in
pseudo-colour – weaker blue–stronger red.
Fluorescence : Rapporteurs d’évènements moléculaires
Fluorescence : Oncologie
Etude de l’activité Cathepsine dans un modèle de tumeur humaine grâce à un agent
fluorescent activable
En résumé : différentes technologies

IRM : Imagerie par Résonance magnétique

Résonance des H+ par utilisation de champs magnétiques intenses
Imagerie anatomique des tissus mous et fonctionnelle du flux de
sang
Echographie ultrasons : exploite la propogation des US
pour l’observation anatomique des tissus à 5-15 mm de
profondeur (Doppler = système vasculaire)

Imagerie rayons X : imagerie anatomique par mesure de la

densité de RX absorbées par les tissus traversés

Imagerie nucléaire : TEP

Utilisation de radiotraceurs émettant des positons pour de
l’imagerie fonctionnelle

Imagerie Optique: bioluminescence, fluorescence;

Détection de photons émis par des rapporteurs
En résumé: différentes imageries

Imagerie morphologique ou anatomique S

e
●sert à étudier l’anatomie n
●point clef : la résolution spatiale des images s
i
Scanner, IRM, échographie b
Résolution spatiale de l’ordre du µm i
l
Imagerie fonctionnelle i
t
●sert à étudier des phénomènes biochimiques ou physiologiques é
●point clef : la spécificité de la substance utilisée pour étudier S
le phénomène physiologiques p
é
TEP, IRM, échographie
c
Résolution spatiale de l’ordre du mm
i
f
Imagerie moléculaire i
c
●visualise directement ou non des gènes ou des protéines i
●point clef : la spécificité de la substance utilisée pour cibler t
l’expression d’un gène é
TEP, IRM, optique
Résolution spatiale de l’ordre du mm
 Modalités d’imagerie
Technique Spatial Depth Time Imaging Small animal Clinical Sensitivty Advantages
resolution resolution agents use use Limitations

MRI 10-100µm No limit Min-Hours Gd, SPIO Versatile Y 10-3 - 10-5 M HR

(1000k€) imaging
brain, heart,
GTI,
osteoarticular
CT 9-50µm No limit Minutes Iodine Lung, y resolution+reconstructi
(200k€) pancreas, on time
GIT and
bone imaging

US 50µm cms Minutes microbubbles Vascular, y In real time

(250k€) liver spleen, Fast
bladder, Experimentateur
kidney, dependance
development
and
interventioal
imaging

PET 1-2mm No limit Sec -Min 18F, 11C, Versatile Y 10-10 -10-12 M Short half time
(500k€) 13N, 15O imaging lung, life+reconstruction time
tracers brain, heart, Sensitive quantitative
oncology
with different
tracers

BLI 2-3 mm cms Min Luciferins as Gene N 10-15 -10-17 M Simple/cheap

(200k€) substrate expression, instrumentation
cell tracking Quantitative

Fluorescence 2-3 mm µm - cms Min Exciting NIR tracers N 10-9 -10-12 M Autofluorescence, food
photons fluo, strong absortion
by tissue, light
propagation
 Des progrès permanents vers une imagerie multimodale

Imagerie multimodale
- Obtenir sur une même image des données anatomiques, fonctionnelles voire moléculaires =
combiner résolution spatiale, sensibilité et spécificité avec des temps d’acquisition réduits
 2 possibilités
- Fusion d'images obtenues par des technologies différents = nécessité du calage
des images
- Développer des machines polyvalentes capables d'acquérir plusieurs types d'images
différentes au même moment et de les fusionner en quasi-temps réel
Le principal défi est de développer des instruments qui combinent des physiques différentes
et un logiciel commun capable d’imager un petit volume d'organisme dans les trois dimensions

-Imagerie moléculaire
- Développer de nouveaux agents d’imagerie moléculaire spécifiques, dotés d’une plus
grande sensibilité, sélectivité et d’une toxicité minime.
- Développer de nouveaux rapporteurs multimodaux
 Imagerie multimodale : IRM-TEP
IRM TEP (18F fluoro-déoxyglucose ) Fusion

Tumeur 1

Tumeur 1

Tumeur 2

Détection de deux tumeurs sur une souris APC agée d’un an

 Imagerie multimodale : IRM-TEP

PET/MRI 3.0
 Imagerie multimodale : µCT-TEP

Distribution de FDG dans le cœur et la vessie

Détection of tumeurs chez le lapin (FDG)

1h post injection , 200µCi FDG

CT show that the focal PET tracer uptake corresponds

to a 7-mm diameter metastatic lesion. A known
granuloma (G) associated with the tumor implantation
procedure is also seen clearly on CT.

Cancer Research, 2003

 Imagerie multimodale : µCT-TEP

PET/CT
 Imagerie multimodale : IRM-TEP-µCT

Rat model of bone metastase induced by injection of MDA-MB-231 cancer cells

Obese (HFD) and non obese (ND)

The number of the osteolytic lesions by CT and the soft tissue tumors by MRI were higher in
obese animals compared to those fed with the Normal Diet.
Obesity results in enhanced glucose metabolism in metastatic bone lesions as shown by
significantly increased [18F]FDG-PET/CT signals in HFD group .
Cancer Research, 2022
 Imagerie multimodale : BLI-Fluo-TEP
système multirapporteurs : vecteurs qui hébergent plusieurs gènes rapporteurs en fusion

mluc mrfp ttk

BLI Fluorescence TEP

hrl-mrfp-ttk ttk Injection de cellules transfectées avec le vecteur portant les trois
gènes rapporteurs en fusion
hrl

mrfp1

RFP LUCIFERASE TK +FHBG

cor

ax

Le suivi de la même souris par imagerie sur une période de 10 jours montre des signaux augmentés pour les 3
gènes rapporteurs avec le temps proportionnel à l’augmentation du volume de la tumeur.

Cancer Research, 2004, 64, 1323