Etalonnage Du Volume Des Pipettes - V3c

Mettler-Toledo SAS
Brochure Métrologie
Révision
3 RÉFÉRENTIELS POUR
ÉTALONNER LE VOLUME
DES AVAP À DÉPLACEMENT D'AIR
Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 1 / 55

Chapitre 1 : Table des matières
1 TABLE DES MATIÈRES

1 Table des matières ............................................................................................................................ 2
2 Objet et domaine d’application ........................................................................................................... 4
2.1 Méthode d'étalonnage .............................................................................................................. 4
2.2 Définitions .............................................................................................................................. 4
2.3 Description du fonctionnement .................................................................................................. 6
3 Étalonnage d'un volume ..................................................................................................................... 8
3.1 Vitesse de distribution et d'aspiration .......................................................................................... 8
3.2 Angle d'aspiration et de distribution ............................................................................................ 8
3.3 Profondeur d'immersion et temps d'attente .................................................................................. 9
3.4 Type de pointe ...................................................................................................................... 10
3.5 Volume et altitude .................................................................................................................. 10
3.6 Grandeurs d'influence ............................................................................................................ 14
3.7 Conditions d'environnement .................................................................................................... 14
3.8 Transfert de la chaleur de la main ............................................................................................ 14
3.9 Moyens d'étalonnage ............................................................................................................. 15
3.10 Niveau de température absolue ............................................................................................... 16
3.11 Transport ............................................................................................................................. 17
3.12 Personnel ............................................................................................................................. 17
4 Mode opératoire .............................................................................................................................. 18
4.1 Opérations préliminaires ......................................................................................................... 18
4.2 Choix des points de contrôle ................................................................................................... 18
4.3 Mode Opératoire .................................................................................................................... 18
5 Calculs ........................................................................................................................................... 21
5.1 Masse ................................................................................................................................. 21
5.2 Densité de l’eau .................................................................................................................... 21
5.3 Densité de l’air ...................................................................................................................... 22
5.4 Volume ................................................................................................................................ 22
5.5 Volume moyen à la température de référence de 20°C ................................................................ 24
5.6 Erreur .................................................................................................................................. 24
6 Incertitude de mesure ...................................................................................................................... 25
6.1 Principe applicable pour estimer l'incertitude ............................................................................. 25
6.2 Identification des composantes d'incertitudes ............................................................................ 25
6.3 Quantification des composantes .............................................................................................. 27
6.4 Calcul de l'incertitude ............................................................................................................. 31
6.5 Incertitude type élargie ........................................................................................................... 32
7 Coefficients de sensibilité ................................................................................................................ 33
7.1 Densité de l'eau .................................................................................................................... 33
7.2 Densité de l'air ...................................................................................................................... 34
7.3 Volume V20 ........................................................................................................................... 37
7.4 Volume V20 + Densité de l'air + Densité de l'eau ........................................................................ 37
8 Incertitude – Méthode GUM .............................................................................................................. 44
8.1 Balance utilisée ..................................................................................................................... 44
8.2 Paramètres de mesure de l'environnement ................................................................................ 44
8.3 Température de l'eau ............................................................................................................. 44
8.4 AVAP à étalonner ................................................................................................................... 44
8.5 Conditions de mesure ............................................................................................................ 44
8.6 Résultats de mesure .............................................................................................................. 45
8.7 Incertitude selon rapport technique ISO/TR 20461 ...................................................................... 45
8.8 Incertitude selon guide DKD .................................................................................................... 46
8.9 Incertitude selon LAB GTA 90 du COFRAC ................................................................................. 47
Page 2 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Chapitre 1 : Table des matières
8.10 Conclusion ........................................................................................................................... 48
9 Incertitude – Méthode Eurachem ....................................................................................................... 49
9.1 Rapport technique ISO/TR 20461 ............................................................................................ 49
9.2 Guide DKD R8-1 ................................................................................................................... 50
9.3 Guide technique LAB GTA 90 du COFRAC.................................................................................. 51
9.4 Comparatif ........................................................................................................................... 51
10 Identification des composantes......................................................................................................... 52
11 Documents de Référence.................................................................................................................. 53

Brochure Métrologie – 3 référentiels pour étalonner un AVAP
2 OBJET ET DOMAINE D’APPLICATION

Cette brochure a pour but de faire le point entre les 3 principaux documents de référence pour l'étalon-
nage d'Appareils Volumétriques A Piston (AVAP) :
• ISO/TR 20461:2000 – Rapport technique – Détermination de l'incertitude de mesure pour les mesurages
volumétriques effectués au moyen de la méthode gravimétrique [15]
• COFRAC LAB GTA 90 – Guide technique d'accréditation – Étalonnage des instruments volumétriques à
piston [16]
• DKD R8-1 – Guideline – Calibration of piston-operated pipettes with air cushion, issue 12/2011 [17]
Ces documents sont appliqués par les organisations en charge de l'accréditation (ex : COFRAC, SAS,
DAKKS, UKAS) pour accréditer les laboratoires l'étalonnage d'appareils volumétriques à piston (AVAP) utili-
sés pour prélever ou distribuer des volumes de l’ordre du 1 à 10 000 µL.
Le rapport technique ISO/TR 20461 a été le premier document officiel publié en novembre 2000. Il reste
à la base de nombreuses d'accréditations délivrées pour des laboratoires d'étalonnage.
Depuis novembre 2000, plusieurs comparaisons inter-laboratoires pilotées par le LNE en 2009 [27],
l'IPQ entre juillet 2011 et juin 2012 à la demande du BIPM [21] et le DKD en 2009 [18] et [19] ont eu
lieu et ont montré d'importants écarts.
2.1 MÉTHODE D'ÉTALONNAGE
Les AVAP sont étalonnés en utilisant la méthode gravimétrique de la norme ISO8655-6 [13]. La mé-
thode est basée sur la détermination du volume à une température de 20°C par pesée d’eau pure, dans des
conditions d’environnement définies.
La masse du volume de liquide est déterminée à partir de l'indication d'un instrument de pesage en te-
nant compte de la poussée de l'air et est convertie en volume par la densité de l'eau. De cette façon, la tra-
çabilité métrologique du volume est réalisée par la grandeur physique «masse» comme étalon de référence.
L’objectif est d’apprécier la performance de l’AVAP, c’est à dire son aptitude à délivrer un volume donné
par rapport à des critères de fonctionnement fixés.
Un étalonnage complet consiste à enregistrer 10 valeurs mesurées par volume à tester et par canal.
Les systèmes de mesure sont les balances d'analyse avec les accessoires correspondants (ex : récipient
de pesée, piège à évaporation, protection contre les courants d'air) fournis en même temps que le logiciel
d'étalonnage et spécialement modifiés pour l'étalonnage de AVAP.
Pour démontrer que l’AVAP est raccordé aux étalons nationaux, la balance doit être vérifiée avec des éta-
lons certifiés. D’autres méthodes d’essai comme les méthodes photométriques et titrimétriques sont décrites
dans la norme ISO8655-7 [14]. Elles apportent la preuve du raccordement de l’AVAP quand les solutions
utilisées sont certifiées.
2.2 DÉFINITIONS
Les définitions suivantes proviennent de la norme ISO 8655-2 [12]
Volume nominal
Le volume nominal (V0) d'un AVAP est le volume défini par le fabricant pour identifier et spécifier la plage
de mesure. Pour les AVAP multicanaux, le volume nominal est spécifié pour un canal individuel.
Plage utile de volume

La plage utile de volume d'un AVAP à volume variable est une sous-gamme du volume nominal ; au sein
de cette sous-gamme, la distribution peut être réalisée en respectant les erreurs maximales tolérées définies

Chapitre 2 : Objet et domaine d’application
par la norme ISO 8655-2 [12]. La limite supérieure de la plage de volume utile est toujours le volume no-
minal. Sauf indication contraire du fournisseur, la limite inférieure est de 10% du volume nominal.
Volume sélectionné – Volume d'essai

Le volume sélectionné VS d'un AVAP à volume variable est le volume défini par l'utilisateur pour distribuer
un volume sélectionné de la plage utile de volume d'un appareil volumétrique à piston. Dans le cas d'ap-
pareils volumétriques avec un volume de mesure fixe, le volume sélectionné est le volume nominal.
Volume du coussin d'air (volume mort)

Le volume du coussin d'air VT est l'espace géométrique entre le piston et l'ouverture de la pointe. L'expan-
sion du volume du coussin d'air est définie par la première butée du piston dans l'AVAP.
Le volume mort est le volume d'air entre la partie inférieure du piston et la surface du liquide. L'expansion
du volume mort est définie par la première butée du piston.
Volume mort
{AVAP à déplacement d'air} volume d'air entre la partie inférieure du piston et la surface du liquide.
Erreur maximale tolérée

Valeur extrême maximale ou minimale tolérée pour l'écart du volume distribué par rapport au volume no-
minal ou au volume sélectionné d'un AVAP.
Erreur systématique
{AVAP} différence entre le volume distribué et le volume nominal ou volume sélectionné de l’AVAP.
Erreur aléatoire
{AVAP} dispersion des volumes distribués autour de la moyenne des volumes distribués.
Incertitude de mesure
{Volume distribué par un AVAP} paramètre, associé au volume distribué, qui caractérise la dispersion des
volumes qui pourrait être raisonnablement attribuée au volume distribué.
Ajustage
{Appareil volumétrique à piston} fabrication d’un appareil dans les limites de tolérances appropriées, ou ré-
glage de l'appareil par le fournisseur, garantissant les performances métrologiques, telles que spécifiées
dans la partie applicable de l’ISO8655-2 [12], pour une température de référence.
Réglage
{Pipette à piston} ajustage employant uniquement les moyens qui sont à la disposition de l'utilisateur.

2.3 DESCRIPTION DU FONCTIONNEMENT

Le document [19] explique par le détail le fonctionnement d'un AVAP à déplacement d'air.
Le piston, scellé avec un joint racleur à l'embout, est d'abord mis en position basse (première butée). La
pointe de la pipette est immergée dans le liquide d'essai et commence à prendre du liquide alors que le pis-
ton glisse vers le haut jusqu'à atteindre sa position supérieure.
Figure 1 : Aspiration du liquide dans l'AVAP

Après aspiration du liquide et avoir observé un temps d'attente de 1 s pour les pipettes de petit et moyen
volume et d'environ 3 s pour les pipettes de grand volume, la pointe doit être retirée du liquide lentement
sans toucher la paroi intérieure du tube et sans secousse. La surface du liquide doit être plane là où la
pointe émerge.
Le volume est défini quand la colonne de liquide se détache du liquide.
Seule l'évaporation à la surface du liquide autour de l'orifice de la pointe et une distribution incomplète
du liquide pourraient entraîner une diminution du volume distribué. Le liquide résiduel restant toujours dans
les pointes doit être évalué comme objet lors de l'utilisation de l'eau comme liquide d'étalonnage. C'est
également vrai pour les gouttelettes à la surface externe de la pointe. L'apparition de gouttelettes nécessite
un changement de pointe et/ou l'utilisation d'une eau fraîche.
Immédiatement avant l'immersion, la pression barométrique pa existe dans le coussin d'air VT.
La perturbation de la colonne de liquide à la pression d'immersion dans le coussin d'air est réduite par
la pression hydrostatique de la colonne de liquide pW et la pression interne du ménisque pS. La pression
interne est dirigée vers le bas lorsque les pointes en polypropylène et de l'eau sont utilisés pour les essais.
Le coussin d'air VT est agrandi par vide partiel avec VW. V décrit le volume réel du liquide dans la pointe. Il
est donc inférieur au volume d'aspiration du volume VHub par VW.
Cela signifie que V = (VHub – VW) resp. VW = (VHub – V).
pa×VT = (pa – ph – pS)×(VT + VHub – V)
La pression hydrostatique de l'eau, pH, est calculée avec le produit de la densité du liquide ρW, de l'ac-
célération gravitationnelle g et de la hauteur d'aspiration du liquide dans la pointe hW :

pH = ρW × g × hW
Les symboles sont placés dans la formule d'origine :
pL×VT = (pa – ρW × g × hW – pS) × (VT + VHub – V)
Cette formule permet de calculer les effets résultant des changements liés à la pression barométrique, à
l'angle d'inclinaison pendant l'aspiration et aux changements liés à la densité du liquide, de la gravité, etc. Ainsi
cette équation doit être résolue au volume réel V, ce qui conduit à :
ρW × g × hW + pS
V = VHub − VT × = VHub − VW
pa − ρW × g × hW − pS
Pour utiliser ce terme pour le calcul, la hauteur d'aspiration du liquide hW et le volume du coussin d'air
doivent être mesurés. Cette formule montre que le volume de piston VHub est légèrement supérieur au vo-
lume réel V. La différence VW est égale à la dilatation du coussin d'air, créée par la pression hydrostatique
interne et du liquide d'essai.

3 ÉTALONNAGE D'UN VOLUME

Le pipetage est une opération délicate qui nécessite une formation et une bonne pratique pour obtenir
des résultats cohérents et exacts. La norme ISO8655-6 [13] propose une procédure pour déterminer le vo-
lume des AVAP mais plusieurs facteurs d'influence ne sont pas expliqués en détail, comme :
• la vitesse de distribution et d'aspiration,
• la variation de l'angle d'aspiration et de distribution de liquide,
• la profondeur d'immersion de la pointe et le temps d'attente,
• le type de pointe utilisée,
• l'altitude.
3.1 VITESSE DE DISTRIBUTION ET D'ASPIRATION
La vitesse d'aspiration et de distribution du liquide est un facteur d'influence. Actionner le piston trop ra-
pidement peut entraîner l'introduction de bulles d'air créant ainsi une erreur dans la quantité de liquide dis-
tribué. Une analyse réalisée par l'IPQ [21] conclut que la vitesse d'aspiration de l'AVAP influence l'exacti-
tude de l'étalonnage. Plus la manipulation (aspiration, distribution) est rapide, plus le volume distribué sera
inexact.
Important : durant l'étalonnage, l'opérateur conservera une vitesse d'aspiration et de distribution
identique (ex : 5 s) comme préconisé par le fabricant.
L'article [26] montre qu'une mauvaise vitesse de distribution et d'aspiration peut provoquer une erreur
de mesure comme indiquée dans le tableau suivant. L'étalonnage a été réalisé à deux vitesses différentes :
2 s (valeur inférieure à la référence) et 8 s (valeur supérieure à la référence). Pour la vitesse de distribution
et d'aspiration les résultats sont rédigés ci-dessous :
Erreur de mesure Vitesse de distribution Vitesse d'aspiration
AVAP 2s 8s 2s 8s
10 -0,53% 0,27% -0,02% 0,45%
100 -0,5% 0,1% -0,2% 0,18%
1000 -0,04% 0,03% -0,02% 0,26%
10000 -0,06% 0,1% -0,1% 0,1%
Tableau 1 : Erreur de mesure de la vitesse de distribution et d'aspiration
L'analyse des résultats permet de conclure que la vitesse de manipulation de l'AVAP est un facteur
d'influence sur l'exactitude de l'étalonnage. Plus la manipulation est rapide et moins de volume est distri-
bué.
3.2 ANGLE D'ASPIRATION ET DE DISTRIBUTION
Si un AVAP n'est pas manipulé verticalement pendant l'aspiration, un plus grand volume est pipeté, car
la pression hydrostatique d'une colonne de liquide est proportionnelle du cosinus de l'angle d'inclinaison.
La modification maximale avec la ligne verticale doit être de 10°.
Lors de l'étalonnage ou de l'utilisation d'un AVAP, celle-ci doit toujours être en position verticale pour as-
pirer le liquide.
Des erreurs peuvent se produire quand elle est inclinée, car l'AVAP aspire plus de liquide à cause de la
pression hydrostatique.
Lors de la distribution du liquide, il faut que l'AVAP touche la paroi du récipient de mesure avec un angle
de 30° à 45°, afin d'aider la distribution de tout le liquide contenu dans la pointe.
Important : durant l'étalonnage, l'opérateur aspire le liquide avec un angle de 90° et le distribue
avec un angle de 30 à 45° comme préconisé par le fabricant.

Chapitre 3 : Étalonnage d'un volume
L'article [26] montre qu'un mauvais angle de distribution et d'aspiration peut provoquer une erreur de
mesure comme indiqué dans le tableau suivant.
Erreur de mesure Angle d'aspiration Angle de distribution
AVAP 45° 60° 60° 90°
10 0,21% 0,08% -0,1% -0,2%
100 0,18% 0,03% -0,1% -0,2%
1000 0,32% 0,17% -0,14% -0,2%
10000 0,46% 0,13% -0,05% -0,19%
Tableau 2 : Erreur de mesure de l'angle de distribution et d'aspiration
L'analyse des résultats permet de conclure que la modification de l'angle de distribution diminue le vo-
lume et la modification de l'angle d'aspiration augmente le volume.
3.3 PROFONDEUR D'IMMERSION ET TEMPS D'ATTENTE
3.3.1 Profondeur d'immersion
Le volume finalement restant dans la pointe de l'AVAP est défini au moment de la rupture de la colonne
de liquide. À ce moment-là, l'orifice de la pointe se trouve un peu au-dessus de la surface du liquide. Par
conséquent, la profondeur d'immersion n'a pas d'influence directe sur le volume, mais d'autres effets exis-
tant ont un impact indirect. L'effet qui en résulte reste nettement en dessous de 0,02% sur l'exactitude par
millimètre d'écart de profondeur d'immersion. Les volumes partiels et les AVAP de petits volumes peuvent
afficher des valeurs remarquablement élevées.
Important : durant l'étalonnage, l'opérateur appliquera la profondeur d'immersion préconisé
par le fabricant ou à défaut celle du tableau 3.
3.3.2 Temps d'attente

Le processus d'étalonnage de la norme ISO 8655-6 [13] définit un temps d'attente de 1 à 2 s.
Au cours du temps d'attente après l'aspiration, le système de pipetage ne doit pas être déplacé du li-
quide d'essai.
Les AVAP de petits volumes ont besoin de 1 s, les AVAP avec des volumes nominaux supérieurs
1000 μl ont besoin d'une période d'attente plus longue d'environ 3 s pour s'assurer que l'aspiration est
terminée (différent de la norme ISO 8655-6 [13]). Un temps d'attente plus long favorise l'évaporation
dans le coussin d'air et provoque la diminution de volume. Par conséquent, la période d'attente doit être
observée d'une manière la plus exacte. Un écart avec le temps d'attente défini, augmente la valeur de
l'incertitude. Un écart de 0,5 s peut être considéré comme réaliste.
Important : durant l'étalonnage, l'opérateur appliquera le temps d'attente préconisé par le fabri-
cant ou à défaut celui du tableau 3.
Plage de volume Profondeur d'immersion Temps d'attente
0,1 – 1 µL 1 – 2 mm 1s
> 1 – 100 µL 2 – 3 mm 1s
> 100 – 1000 µL 2 – 4 mm 2s
> 1000 µL 3 – 6 mm 3s
Tableau 3 : Profondeur d'immersion et temps d'attente

3.3.3 Erreur de mesure
L'article [26] montre qu'une mauvaise profondeur d'immersion provoque une erreur de mesure comme
indiquée dans le tableau suivant :
Erreur de mesure Profondeur d'immersion
AVAP 1 mm 6 mm
10 -0,34% 0,1%
100 -0,1% 0,2%
1000 -0,1% 0,15%
10000 -0,1% 0,24%
Tableau 4 : Erreur de mesure de la profondeur d'immersion
À 1 mm de profondeur, les résultats sont plus faibles car l'air pénètre dans l'AVAP. Lorsque la pointe est
trop profondément immergée de 6 mm dans le liquide, les résultats sont plus élevés que la référence car du
liquide peut adhérer à la pointe et être transféré au récipient de pesage.
3.4 TYPE DE POINTE
L’utilisation systématique du consommable d’origine est préconisée pour respecter l'homogénéité du
système. Les AVAP sont conçus et ajustés en usine avec des pointes d’origine.
L’utilisation de pointes différentes de celles du constructeur peut être validée par comparaison des résul-
tats avec des pointes d’origine. 10 cônes au moins sont nécessaires dans ce cas.
L'article [26] montre que la pointe d'une autre marque que celle du fabricant peut provoquer une erreur
de mesure comme indiquée dans le tableau suivant :
Erreur de Diamètre de la Diamètre de la pointe
AVAP
mesure (%) pointe du fabricant d'une autre marque
10 1,48% 5,05 mm 5 mm
100 0,16% 5,05 mm 5 mm
1000 0,70% 7,7 mm 7,65 mm
Tableau 5 : Erreur de mesure de la pointe
Les deux pointes ont une forme très similaire, mais la pointe de l'autre marque a un diamètre plus petit
et le montage est à un point inférieur à celui de la pointe du fabricant. Cela signifie que le volume déplacé
ou le volume de l'air est plus grand pour la pointe du constructeur conduisant à un volume de liquide dis-
tribué plus élevé.
3.5 VOLUME ET ALTITUDE
3.5.1 Méthode gravimétrique – Poussée aérostatique
Ce phénomène sera mis en évidence en comparant les résultats fournis par 2 laboratoires (un au niveau
de la mer et le second à une altitude plus élevée) procédant à l'étalonnage du même AVAP avec la méthode
gravimétrique.
La formule (5.6) montre que le volume dépend de la densité de l'air, ρa (19).
La formule suivante montre que la pression atmosphérique (exprimée en pascal) dépend de l'altitude.
5 ,255
 0 ,0065 ⋅ Alt . 
PAlt . = PSea _ level 1 − 
 (273,15 + 20 ) 
Plus l'altitude augmente, plus la densité de l'air diminue.
On peut se retrouver dans une situation extrême : un AVAP est conforme en sortie d'usine (fabricant situé
au niveau de la mer) et est non conforme après réception dans un laboratoire situé à une altitude supé-
rieure. La figure 1 montre la variation du volume en fonction de l'altitude.

0,090 µL
200 µL 100 µL 10 µL
0,080 µL
0,070 µL
0,060 µL
0,050 µL
0,040 µL
0,030 µL
0,020 µL
0,010 µL
0,000 µL
0m 500 m 1000 m 1500 m 2000 m 2500 m 3000 m 3500 m 4000 m
Figure 2 : Influence de la variation de l'altitude sur le volume délivré
Bien que cette variation soit inférieure aux emt de la norme ISO8655-2 [13], elle peut néanmoins re-
mettre en cause la conformité quand l'erreur est importante.
3.5.2 Volume mort
Ce phénomène sera mis en évidence en comparant les volumes obtenus par un laboratoire (au niveau
de la mer) ayant effectué l'étalonnage de l'AVAP et par l'utilisateur (situé à une altitude plus élevée) procé-
dant au contrôle de réception.
La variation de volume à différentes altitudes est causée par le coussin d'air dans l'AVAP et par la
quantité mesurée de liquide (eau). Une pression barométrique basse génère une compressibilité élevée du
coussin d'air. Pour générer un vide partiel en maintenant la colonne de liquide dans la pointe, le coussin
d'air doit être expansé plus encore à la pression externe inférieure. En conséquence, de plus petits volumes
sont aspirés.
3.5.2.1 Influence du coussin d'air (volume mort)
Avec une pression d'air décroissante, la densité de l'air du coussin
d'air diminue fortement (une diminution d'environ 10% pour 1000 m de
Piston/cylindre différence d'altitude).
La densité du volume de liquide mesuré diminue peu (environ 0,01%
pour 1000 m de différence d'altitude).
Coussin d'air
(volule lort)
La taille du coussin d'air a un impact significatif sur le volume délivré.
3.5.2.2 Influence de la quantité mesurée de liquide
Cette influence n'est visible qu'avec des AVAP à volume variable.
Ppioue jeuacle Le liquide mesuré "s'accroche" avec son poids au volume mort (cous-
sin d'air). Plus la hauteur d'aspiration du liquide distribué est importante,
plus le ratio entre la densité du coussin d'air et la densité du liquide mesu-
Échantillon (eau)
ré est défavorable.
La figure 3 montre l'influence de cette erreur avec les droites de ten-
Hauteur
dance.
d’aspiration
À Hambourg, soit à 6 m au-dessus du niveau de la mer, la droite de
tendance est quasi horizontale et à faible pression (Jungfraujoch en
Suisse, à 3460 m au-dessus du niveau de la mer) la droite de tendance
Figure 3 : AVAP est fortement inclinée.
Une analyse réalisée par l'IPQ [21] propose les mêmes conclusions.

Figure 4 : AVAP à volume variable se comportant différemment selon le volume sélectionné

3.5.2.3 Altitude des différents laboratoires
- Gebenstorf à 360 m au-dessus du niveau de la mer, pression atmosphérique moyenne 969 hPa
- Thusis à 740 m au-dessus du niveau de la mer, pression atmosphérique moyenne 924 hPa
- Samedan à 1720 m au-dessus du niveau de la mer, pression atmosphérique moyenne 817 hPa
- Jungfraujoch à 3460 m au-dessus du niveau de la mer, pression atmosphérique moyenne 657 hPa
3.5.2.4 Calcul de la compensation
Si le volume mort, VT, et la hauteur d'aspiration, hW, de la colonne de liquide dans la pointe de l'AVAP
sont connus, une correction peut être calculée. La variation de volume suite à un étalonnage à un empla-
cement X2 (avec une pression atmosphérique pL, X2) comparée à un emplacement X1 (avec la pression
atmosphérique pL, X1) est déterminée en appliquant la formule suivante :
avec :
∆V - variation de volume se traduisant lors de l'étalonnage à un emplacement X1 par rapport à un em-
placement X2 (en µL)
VT - volume du coussin d'air (volume mort) (en µL)
ρW - densité de l'eau utilisée comme liquide d'essai en X2 (en kg/m3)
g - accélération de la pesanteur (en m/s2)
hW - hauteur d'aspiration de la colonne de liquide dans le cône de l'AVAP (en m)
pa - pression atmosphérique (en Pa)
X1 - emplacement 1 avec la pression atmosphérique pa (0 m au-dessus du niveau de la mer avec une
pression de 101325 Pa)
X2 - emplacement 2 avec la pression atmosphérique pa (point de mesure respectif à différentes d'alti-
tude)
La hauteur d'aspiration, hW, du liquide dépend du cône utilisé et de l'AVAP utilisée. Elle peut être sim-
plement mesurée avec un pied à coulisse.
Note : la hauteur d'aspiration est considérée comme équivalente aux deux emplacements.
Si aucune donnée spécifique sur la hauteur d'aspiration de la colonne de liquide et le volume du coussin
d'air n'existe, on peut retenir les valeurs maximales du tableau 6 pour le volume du coussin d'air et la hau-

teur d'aspiration du liquide dans la pointe pour les AVAP qui sont sur le marché afin de calculer la contribu-
tion de l'incertitude de mesure associée aux variations météorologiques de la pression de l'air.
Hauteur d'aspiration Volume du
Volume nominal
dans la pointe, hW coussin d'air, VT
> 5 000 - 10 000 µL 150 mm 20 000 µL
> 1 000 - 5 000 µL 130 mm 10 000 µL
> 300 - 1 000 µL 55 mm 3 000 µL
>100 - 300 µL 45 mm 1 000 µL
> 10 - 100 µL 30 mm 500 µL
1 - 10 µL 19 mm 100 µL
Tableau 6 : Valeurs maximales pour VT et hW
Comme ce sont des valeurs maximales typiques, un contrôle de chaque instrument doit être réalisé si
l'utilisation des valeurs indiquées est justifiée ou non. Le changement de volume qui résulte des étalon-
nages se référant à différentes altitudes et des pressions d'air respectifs, ne peut pas être calculé avec assez
d'exactitude en utilisant ces valeurs maximales.
Les valeurs du tableau ci-dessus doivent être utilisées pour calculer la contribution maximale de l'incerti-
tude de mesure liées aux changements de pression de l'air.
10,000 µL
1,000 µL
0,100 µL
ΔV 200 µL
ISO8655 (200 µL)
0,010 µL ΔV 100 µL
ISO8655 (100 µL)
ΔV 10 µL
ISO8655 (10 µL)
0,001 µL
0m 500 m 1000 m 1500 m 2000 m 2500 m 3000 m 3500 m 4000 m
Figure 5 : Influence de la variation de l'altitude sur le volume délivré

3.5.2.5 Résumé
- L'altitude au-dessus du niveau de la mer à l'emplacement où la mesure est effectuée, influence le résul-
tat de mesure de façon significative. Si un AVAP est correctement ajusté (V20 = VS) 1 à 1013 hPa, le
même AVAP (à environ 1500 m) distribuera à une pression atmosphérique de l'air d'environ 850 hPa,
un volume effectif proche de la limite inférieure de l'erreur maximum tolérée fixée par l'ISO8655.
- Les AVAP à déplacement d'air doivent être ajustés et étalonnés à l'emplacement prévu d'utilisation.
- Les AVAP électroniques peuvent appliquer un facteur de correction de manière à compenser l'erreur en
fonction de la pression atmosphérique de l'air ou de l'altitude au-dessus du niveau de la mer. Pour cela,
l'utilisateur paramétrera la pression atmosphérique de l'air ou l'altitude au-dessus du niveau de la mer.
- Pour comparer les mesures, la valeur mesurée peut être corrigée, mais le volume mort exact et la hau-
teur d'aspiration doivent être connus. Ces deux valeurs doivent être considérées dans le budget de
l'incertitude de mesure.
- Pour atteindre la comparabilité des résultats d'étalonnage, des corrections d'altitude doivent être faites.
La pression atmosphérique au moment de la mesure doit être indiquée dans le certificat d'étalonnage.
1
V20 Volume à la température de référence de 20 °C et VS Volume sélectionné
3.6 GRANDEURS D'INFLUENCE
Les grandeurs influant sur le résultat sont les suivantes :
• la densité de l’air connue par la mesure de la température ta, la pression atmosphérique pa et
l’humidité relative ha
• la densité de l’eau connue par la mesure de la température tW
• la densité des poids utilisés pour ajuster/régler et vérifier la balance
• le coefficient de dilatation cubique du cône.
3.7 CONDITIONS D'ENVIRONNEMENT
Pour maintenir l’homogénéité et la stabilité des paramètres ambiants, il est demandé de limiter l’activité
du local où les essais sont réalisés.
Durant l'étalonnage, la variation des conditions ambiantes doit être surveillée. Si des écarts se produi-
sent, la température de l'air, la pression atmosphérique et l'humidité relative doivent être corrigées.
Une exigence importante pour un bon étalonnage est que les conditions ambiantes spécifiées sont assu-
rées par l'utilisation de la climatisation. L'étalonnage peut commencer une fois que la température entre
l'AVAP à étalonner et l'environnement soit identique. Un temps d'attente d'au moins 2 h doit être observé
pour l'AVAP à étalonner.
Les essais sont effectués dans une salle où la température de l’air ta ne varie pas de plus de 1°C/h. La
pression atmosphérique pa est comprise entre 900 hPa et 1100 hPa. Il est recommandé que l'humidité re-
lative ha soit supérieure à 55 %HR afin de limiter les phénomènes d’électricité statique.
Les conditions ambiantes doivent être enregistrées.
Pour limiter la variation des résultats, l'environnement dans la salle de mesure doit être aussi stable que
possible. Le tableau 7 contient les plages recommandées pour des conditions d'environnement. La varia-
tion de valeur enregistrée au cours de la durée de la session devrait rester dans la valeur recommandée.
Conditions ambiantes Étendue Variations durant l'essai
Température de l'eau 15 – 30 °C ≤ 1 °C
Température de l'air 15 – 30 °C ≤ 3 °C
Humidité 40 – 70 % ≤ 10 %
Tableau 7 : Conditions ambiantes durant l'essai
Avec un environnement conforme au tableau 7, l'incertitude de mesure relative à l'environnement n'aura
pas d'effet significatif sur la masse lors de la conversion en volume.
3.8 TRANSFERT DE LA CHALEUR DE LA MAIN
Un autre facteur influençant l'exactitude est le transfert de la chaleur de la main. Il dépend individuelle-
ment de la conception du type d'AVAP et de l'utilisateur.
L'effet de la chaleur est plus grand au volume nominal à cause de la position du piston à l'intérieur de
l'AVAP. Pour minimiser ce facteur, un contact intense avec l'AVAP et la durée du processus doivent être
maintenus aussi faibles que possible. Le réchauffement provoqué par la main conduit à une diminution du
volume (dérive en fonction du temps).

3.9 MOYENS D'ÉTALONNAGE

3.9.1 Balance
La balance utilisée est vérifiée périodiquement. Sa portée maximale est suffisante pour peser le volume
délivré n fois. Selon les volumes mesurés, elle répondra aux performances suivantes :
Volume nominal de l'AVAP Résolution, d Répétabilité Linéarité
de 1 à 10 µL 0,001 mg 0,002 mg 0,005 mg
de 11 à 100 µL 0,01 mg 0,02 mg 0,05 mg
de 101 à 1000 µL 0,1 mg 0,2 mg 0,5 mg
de 1001 à 10000 µL 1 mg 2 mg 5 mg
Tableau 8 : Caractéristiques des balances selon le volume sélectionné
Ces valeurs permettent de minimiser l’influence de la balance sur les résultats de mesure. Si l’utilisateur
n’a pas de tels moyens de pesage, connaître l’incertitude de mesure devient indispensable.
3.9.2 Station de mesure ClimaLog 30
Les conditions ambiantes de la salle de mesure sont surveillées à l'aide d'une station de mesure ayant
une résolution et une incertitude répondant aux critères du tableau 9.
Grandeur Résolution Incertitude
Thermomètre pour le liquide 0,1 °C 0,5 °C
Thermomètre pour l'air 0,1 °C 1 °C
Hygromètre 1% 5%
Baromètre 1 hPa 1 hPa
Tableau 9 : Caractéristiques des équipements de mesure pour surveiller l'environnement
Avec une instrumentation conforme au tableau 9, son incertitude de mesure n'aura pas d'effet significatif
sur la masse lors de la conversion en volume.
Les conditions ambiantes de mesure sont obtenues avec une station de mesure
avec les caractéristiques décrites dans le tableau 10. Le thermomètre utilisé pour
mesurer la température de l'air et de l'eau est étalonné périodiquement. Sa résolu-
tion est de 0,1°C. Le baromètre utilisé est étalonné périodiquement. Sa résolution
est de 0,1 hPa (ou 0,1 mbar). L'hygromètre utilisé est étalonné périodiquement.
Sa résolution est de 0,5 % HR.
Grandeur Résolution Incertitude Étendue de mesure
Température, ta, tW 0,1 °C 0,3 °C -20 °C … 50 °C
Humidité, ha 0,5 % 2% 10 % … 95 %
Pression, pa 0,1 hPa 0,5 hPa 300 hPa … 1300 hPa
Tableau 10 : Caractéristiques de la station de mesure ClimaLog 30 utilisée
3.9.3 Air
La température de l'air et de l'humidité relative ont également une influence sur le volume distribué par
l'AVAP. La dérive de la température de l'air ne doit pas dépasser 0,5 °C et la dérive de l'humidité relative ne
doit pas dépasser 5% durant l'étalonnage.
3.9.4 Mesure de la température de l'air
Quel que soit l'AVAP, il n’est pas possible de mesurer la température de l’air à proximité du plateau
d’une balance, avec une incertitude meilleure que 0,5°C ; cela en raison de l’hétérogénéité de la tempéra-
ture de l’air. On mesure la température de l’air à l’intérieur ou au plus près de la chambre de pesée.
3.9.5 Mesure de l'humidité de l'air
L'humidité relative de l'air est mesurée avec la sonde du système ClimaLog 30. L'humidité relative de
l'air dans la salle de mesure doit être comprise entre 45% et 60%. Une faible humidité relative de l'air ré-
duit la taille du volume mesuré.

3.9.6 Mesure de la pression atmosphérique de l'air
La pression atmosphérique de l'air est mesurée avec la sonde du système ClimaLog 30 ayant la résolu-
tion minimale de 1hPa.
3.9.7 Mesure de la température de l'eau
La température de l’eau étant plus homogène et plus stable que celle de l’air, l’incertitude de la mesure
de la température peut être réduite à ± 0,2°C, en utilisant des sondes possédant des temps de réponse
adaptés à la méthode définie dans le mode opératoire.
3.9.8 Eau
L’eau utilisée pour l’étalonnage est un étalon de conversion masse/volume suivi métrologiquement. C’est
un consommable à usage unique dont les caractéristiques peuvent se dégrader. Dans le cas d’un approvi-
sionnement auprès d’un tiers, le fournisseur sera qualifié et la qualité du produit sera vérifiée à réception.
Dans le cas d’une production interne (bi-distillation ou filtration), la procédure de fabrication et les disposi-
tions pour s’assurer de sa qualité est formalisée. Dans tous les cas, il convient de documenter et de suivre
la gestion de ce consommable (en particulier sa péremption).
L’eau utilisée durant les essais est une eau pure d’un niveau de qualité '2' ou '3' obtenue à la suite
d’une seule distillation, par dé-ionisation ou par osmose inverse. Son intervalle de pH à 25 °C est de 5,0 à
7,5 et sa conductivité électrolytique est inférieure à 0,5 mS/m).
Avant et pendant l'étalonnage, il faut veiller à ce que l'eau utilisée soit exempte de bulles et ajustée à la
température de l'air avec une différence inférieure à 0,5°C.
3.9.9 Piège à évaporation
Pour sécuriser les mesures et ne pas avoir à déterminer l’évaporation du volume délivré, il est fortement
recommandé d’utiliser un piège à évaporation.
Sans ce piège, il est nécessaire de déterminer par voie expérimentale l'erreur due à l'évaporation durant
la série de mesures et de la compenser de façon mathématique.
Figure 6 : Piège à évaporation placé dans une chambre de pesée

3.10 NIVEAU DE TEMPÉRATURE ABSOLUE
Si les températures de l'AVAP et de l'eau sont à température de l'air ambiant, l'effet sur les résultats de
mesure à différents niveaux de température absolue n'a pas encore été prouvé par des expériences.
La dilatation thermique du piston et la distance entre les butées de piston provoque une augmentation de
volume. À cause des différents types d'AVAP, des matériaux et de leurs conceptions, il est impossible de
donner une valeur générale à cette augmentation.
Dans le cas d'un piston polymère associé à un mécanisme de course polymère, on peut retenir typi-
quement un coefficient de dilatation cubique pour le volume distribué par le piston de l'ordre de 150×10-6/K
(en combinant l'expansion de la section du piston et l'augmentation de la distance entre les butées de pis-
ton). Cela équivaut à un changement de volume de 0,15% pour 10 °C de changement de température.
Un changement du niveau de température modifie également le volume de coussin d'air VT, à cause de
la dilatation thermique de la pointe de l'AVAP et de l'embout. À des températures plus élevées, l'accroisse-

ment du coussin d'air montre une compressibilité plus élevée et une diminution du volume aspiré est impli-
quée.
Cependant, à des températures plus élevées, la hauteur d'aspiration du liquide d'essai dans la pointe
diminue à cause d'un volume de pointe interne plus élevé, provoquant une augmentation du volume aspiré.
De plus, la densité du liquide d'essai devient plus petite à des températures plus élevées, conduisant
également à un volume plus élevé.
L'effet de la température sur la pression de vapeur et de la constante de diffusion du liquide d'essai est
complexe à déterminer quantitativement. La constante de diffusion décrit la vitesse de propagation de la
vapeur dans le coussin d'air. Une pression de vapeur supérieure a pour effet généralement de diminuer le
volume (alcools) à une température plus élevée, car plus liquide de test s'évapore pendant la durée d'aspi-
ration et le temps d'attente.
3.11 TRANSPORT
Lors du transport, un emballage adapté permet de ne pas altérer l’étalonnage, est à prévoir afin
d’assurer des bonnes conditions d'acheminement des AVAP (ex : variations de température ou vibrations
mécaniques).
3.12 PERSONNEL
L'influence de l'opérateur pendant l'étalonnage des AVAP dépend fortement de son expérience. Pour cela
elle doit être développée et entretenue par une formation régulière :
• Temps d'attente après l'aspiration
• Rythme soutenu du pipetage
• Angle d'inclinaison pour l'aspiration / distribution
• Force de fonctionnement (sauf pour les AVAP électroniques)
• Profondeur d'immersion
Le personnel est aussi qualifié pour évaluer la balance.

4 MODE OPÉRATOIRE
4.1 OPÉRATIONS PRÉLIMINAIRES
Elles ont pour but d’assurer la validité des essais. Les opérations suivantes sont recommandées :
• La balance est calibrée et vérifiée avant l'étalonnage pour limiter ses composantes d’incertitude.
• Les moyens et les AVAP sont à la température de la pièce où s’effectuent les essais.
• S’assurer de l’identification de l'AVAP à tester.
• S’assurer de l’absence de défaut visible.
• Vérifier la validité du certificat d’étalonnage et/ou constat de vérification des moyens.
En cas de problème d’électricité statique, il est recommandé d’utiliser des dispositifs permettant de sup-
primer les perturbations qu’elle génère (ex : dé-ionisateur interne ou externe).
4.2 CHOIX DES POINTS DE CONTRÔLE
4.2.1 Volume fixe
Pour un AVAP à volume fixe, le volume d’essai est le volume nominal.
4.2.2 Volume variable
La norme internationale ISO8655-2 [12] préconise d’évaluer un AVAP à volume variable à 3 volumes :
• Volume nominal ;
• 50 % du volume nominal ;
• 10 % du volume nominal ou limite inférieure de la plage de volume (la valeur la plus élevée des 2).
Selon son besoin, l’utilisateur fixe lui-même le nombre et le choix des volumes.
4.3 MODE OPÉRATOIRE
La durée du cycle de pipetage doit être la plus régulière possible durant toute la manipulation.
L'étalonnage commencera avec le plus petit volume partiel (env. 10 % du volume nominal).
4.3.1 Cycle
Garder le même cône durant toute la série de mesure.
Procéder aux tests comme suit :
1) Relever les conditions environnantes (ta, pa, ha) ; au plus près du plateau de la balance
2) Relever la température de l’eau tW
3) Positionner un cône et vérifier l'affichage du volume à tester
4) Mouiller le cône
5) Placer le récipient de pesée contenant de l’eau sur le plateau de la balance
6) Tarer la balance
7) Retirer le récipient de pesée du plateau de la balance
8) Aspirer doucement l’eau du container et respecter la profondeur d’immersion recommandée par le
constructeur
9) Délivrer le volume dans le récipient de pesée
10) Délivrer la dernière fraction de volume par contact sur la paroi interne du récipient
11) Placer le récipient sur le plateau de la balance
12) Relever la valeur de pesée indiquée par la balance m' i après l'extinction du voyant d'instabilité de
la balance
13) Répéter 9 fois les opérations 6) à 12)
14) Relever la température de l’eau pure tW
2
La valeur indiquée par la balance correspond à m0
3
Le fond du récipient de pesée recouvert de son couvercle a été préalablement rempli d’un peu d’eau
Chapitre 4 : Mode opératoire
15) Relever les conditions environnantes (ta, pa, ha) ; au plus près du plateau de la balance
16) Calculer les volumes correspondant aux pesées mi
Nota : Certains organismes d’étalonnage, de maintenance/vérification testent les AVAP en aspirant le vo-
lume du récipient de pesée placé sur le plateau de la balance sans en informer leurs clients. Une telle pra-
tique et les résultats de mesure ainsi obtenus n’ont rien à voir avec ce cycle et le mode d’utilisation des
AVAP utilisées dans les laboratoires.
4.3.2 Nombre de mesures
10 mesures sont réalisées pour chaque volume d'essai, quand :
• la méthode gravimétrique est utilisée comme essai de conformité ou essai de type, par exemple préa-
lablement à une déclaration ou certification de conformité
• la méthode gravimétrique est utilisée comme méthode de référence.
Pour établir à nouveau la conformité, (ex : après une réparation non réalisée par le fournisseur), 10 me-
sures doivent également être effectuées à chaque volume.
Si la méthode gravimétrique est utilisée pour d'autres besoins, comme le contrôle qualité :
• le nombre de volumes à vérifier
• le nombre de mesures par volume
• le nombre de canaux à vérifier
sont adaptés de façon appropriée.
4.3.3 Perte par évaporation
Si, malgré les précautions de manipulation, l'évaporation n'est pas négligeable, il est possible de la me-
surer pour l'intégrer aux calculs. Pour cela, réaliser les étapes 5 à 12 comme pour une pesée d'échantillon,
mais prélever et distribuer le volume dans le container.
Ces étapes sont à répéter plusieurs fois pour avoir une valeur moyenne mE de perte par évaporation. Le
test d’évaporation peut être effectué avant et après les essais de vérification.
Remarque : Dans le cycle décrit ci-dessus, le récipient est rempli à l’extérieur de la balance puis pesé. Ce
n’est pas envisageable avec un piège à évaporation qui est fixé sur le plateau. Avec ce piège, il faut toucher
l’extrémité du cône sur la paroi interne du récipient. C’est supportable pour une balance avec d = 0,1 ou
0,01 mg, mais il n’est pas question de réaliser un tel protocole sur une microbalance avec un piège restant
toujours sur le plateau. Une telle pratique peut provoquer des erreurs de justesse comme d’excentration.

Chapitre 4 : Mode opératoire
4.3.4 Pointe et humidification
Pendant l'aspiration, le liquide d'essai s'évapore à sa surface dans le coussin
d'air. De petites quantités évaporées de liquide provoque de grandes variations de
volume.
La vapeur provenant du déplacement du liquide d'essai durant l'aspiration et la
période d'attente entraîne une diminution de volume. Plus le coussin d'air est saturé
de vapeur d'eau, moins il y aura de liquide qui s'évapore pendant l'aspiration.
Après la distribution du liquide, le piston coulisse vers sa position de départ et est
prêt à démarrer un autre processus de pipetage. En coulissant vers l'arrière, l'air ex-
térieur pénètre dans l'AVAP et se mêle à l'air du coussin. Ainsi, l'humidité dans le
coussin d'air dépend fortement de l'humidité de l'air ambiant, ce qui signifie : une
humidité de l'air ambiante élevée donne des volumes plus élevés et vice versa.
Des études indiquent que les AVAP avec des volumes de 1 000 µL et 100 µL ont
des coefficients de sensibilité cha d'environ 0,07% dans l'exactitude du volume aspi-
ré par 10% de changement de l'humidité. Les valeurs d'exactitude de 0,1% par
10% d'humidité relative s'appliquent aux AVAP avec des volumes de 10 µL.
Par conséquent, on peut s'attendre à un effet important pour des pointes sèches
(non humidifiées). D'abord, le volume distribué est considérablement faible, puis
augmente avec les 4 - 5 cycles suivants de pipetage pour atteindre une valeur finale
avec l'équilibre thermodynamique. Ainsi, chaque nouvelle pointe doit être humidifiée
4 - 5 fois avant de commencer le processus de pipetage, en éliminant toujours le
volume aspiré.
Selon la norme ISO 8655-6 [13], il est recommandé de remplacer la pointe
après chaque mesure individuelle. Il est autorisé de ne pas suivre cette règle. Un
AVAP peut être étalonné avec une seule pointe par canal. Cependant, le coussin d'air
a toujours besoin d'être humidifié cinq fois au début de l'étalonnage. Un pré-
mouillage doit donc être réalisé quand le volume est modifié (ajustage d'un nouveau
volume d'essai).

5 CALCULS
Le mesurande (volume de l'AVAP) n'est pas mesuré directement, mais déterminé à partir de N autres
grandeurs X1, X2, …, XN à travers une relation fonctionnelle f :
Y = f(X1, X2, …, XN)
L'estimation de Xi est désignée par x1.
Les grandeurs d'entrée X1, X2, …, XN dont dépend la grandeur de sortie Y peuvent elles-mêmes être
considérées comme des mesurandes dépendant à leur tour d'autres grandeurs, ce qui conduit à une rela-
tion fonctionnelle complexe.
5.1 MASSE
La valeur de la masse retenue est le résultat de la différence entre deux mesures, la première à zéro, la
seconde à la valeur de la masse du volume déversé.
mi = mich − m0 (5.1)
avec :
mi = masse d’eau pure
mich = valeur indiquée par la balance (masse du volume déversé)
m0 = valeur indiquée par la balance après tarage
5.2 DENSITÉ DE L’EAU
La densité de l’eau pure ρW (en kg/m³) est calculée avec la formule Tanaka [9], en fonction de la
température tW est détaillée ici.
5.2.1 Formule ISO/TR 20461
La formule (5.2) du rapport technique ISO/TR [15] indique la formule suivante pour calculer la densité
de l'eau, mais elle a été remplacée plus tard par la formule (5.3) du BIPM :
4
ρW = ∑ ai tWi = a0 + a1 × tW + a 2 × tW2 + a3 × tW3 + a 4 × tW4 (5.2)
i =0
avec
ρW = densité de l'eau en kg/m3 tW = température de l’eau en °C
et les constantes de l'échelle ITS-90 :
a0 = 999,853 08 kg/m3 a1 = 6,326 93 × 10-2 °C-1 kg/m3
a2 = -8,523 829 × 10-3 °C-2 kg/m3 a3 = 6,943 248 × 10-5 °C-3 kg/m3
a4 = -3,821 216 × 10-7 °C-4 kg/m3
5.2.2 Formule BIPM (Tanaka)
La formule (5.3) du BIPM 4 [9] st citée dans la plupart des articles récemment publiés pour calculer la
densité de l'eau :
 (
ρW = a5 1 − W
2
)(
t + a1 tW + a 2 ) (5.3)
 (
a 3 tW + a 4 ) 
avec avec ces paramètres, la densité de l'air sera en g/mL :
ρW = densité de l'eau en kg/m3 ρW = densité de l'eau en g/mL
tW = température de l’eau en °C tW = température de l’eau en °C
et les constantes : et les constantes :
a1 = -3,983 035 en °C a1 = -3,983 035 en °C

Chapitre 5 : Calculs
a2 = 301,797 en °C a2 = 301,797 en °C
a3 = 522 528,9 en °C2 a3 = 522 528,9 en °C2
a4 = 69,348 81en °C a4 = 69,348 81en °C
a5 = 999,974 950 en kg/m³ a5 = 0,999 974 950 en g/mL
5.3 DENSITÉ DE L’AIR
La détermination de la densité de l’air ρa en fonction de la température de l’air ta, de la pression
atmosphérique pa et de l’humidité relative de l’air ha est détaillée ici.
5.3.1 Formule OIML R111
La recommandation OIML R111 [10] nous donne la formule approchée suivante pour calculer la densi-
té de l'air.
0 ,34848 pa − 0,009(ha )× exp(0 ,061t a )
ρa = (5.4)
273,15 + t a
avec les caractéristiques suivantes :
pa = pression atmosphérique en hectopascal (hPa),
ha = humidité relative exprimée comme un pourcentage
ta = température de l’air en °C
5.3.2 ISO/TR 20461 (formule de Spieweck)
Le rapport technique de l'ISO [15] nous donne la formule suivante pour calculer la densité de l'air.
k1 p a − ha (k 2 t a + k 3 )
ρa = (5.5)
273,15 + t a
ρa = densité de l'air en kg/m3 ρa = densité de l'air en g/mL
ta = température de l’air en °C ta = température de l’air en °C
pa = pression atmosphérique en hPa pa = pression atmosphérique en hPa
ha = humidité relative en pourcentage ha = humidité relative exprimée en pourcentage
et les constantes de l'échelle ITS-90 : et les constantes :
k1 = 0,348 44 en °C/hPa k1 = 3,484 4 x 10-4 ºC/hPa
k2 = -0,002 52 kg/m3 k2 = -2,52 x 10-6 g/mL
k3 = 0,020 582 en °C k3 = 2,058 2 x 10-5 ºC
5.4 VOLUME
La détermination du volume V20 correspondant, à la température de référence (20 °C), est effectuée en
ρ − ρa
× (1 − αC × (t d − 20 ))
m
appliquant la formule suivante : V20 = × b (5.6)
ρb ρW − ρa
avec :
m = masse d’eau pure, en kg ρa = densité de l’air, en kg/m³
ρb = densité des poids de la balance, soit 8000 kg/m³ ρW = densité de l’eau à tW °C, en kg/m³
td = température de l'AVAP (température de l’air) αC = coefficient de dilatation 5, en°C-1
Nota : Pour des volumes inférieurs à 50 µL et si l’utilisateur n’utilise pas de piège à évaporation, m est égal
à: m = m' −mE
mE = moyenne des mesures d’évaporation (toujours une valeur négative)
5
Dans le guide technique du COFRAC [16] la valeur du coefficient est de 1, alors que dans le guide DKD-R 8-1 [17] cette va-
leur est de 0. C'est la valeur du guide DKD qu'il faut retenir
5.4.1 Volume avec densité de l'eau selon Tanaka et densité de l'air selon OIML R111
En intégrant dans la formule (5.6), les formules (5.3) et (5.4), on se rend compte de toutes les gran-
deurs agissant sur le volume final :
 0 ,34848 pa − 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) 
8000 −  
m  273,15 + t a 
V20 = × × ...
 a 1 − (tW + a1 ) (tW + a2 )  −  0 ,34848 pa − 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) 
8000   2
   
 5 a3 (tW + a4 ) 
   273,15 + t a 

 
.........(1 − αC × (t d − 20 ))
Avec
m = masse d’eau pure, en kg td = température de l'AVAP (température de l’air)
tW = température de l’eau en °C a1 = -3,983 035 en °C
a2 = 301,797 en °C a3 = 522 528,9 en °C2
a4 = 69,348 81en °C a5 = 999,974 950 en kg/m³
pa = pression atmosphérique en hPa ha = humidité relative en pourcentage
ta = température de l’air en °C αC = coefficient de dilatation cubique
5.4.2 Volume avec densité de l'eau selon ISO/TR et densité de l'air selon Spieweck
Le rapport technique ISO/TR [15] combine les formules (5.2), (5.5) et (5.6) :
 k p − ha (k 2t a + k3 ) 
8000 −  1 a 
m  273 15
, + t  × (1 − α × (t − 20 ))
V20 = × 4 a
8000  i   k1 pa − ha (k 2t a + k3 ) 
C d
 ∑ ai tW  −  
 i =0   273,15 + t a 
Avec
tW = température de l’eau en °C a0 = 999,853 08 kg/m3
a1 = 6,326 93 × 10-2 °C-1 kg/m3 a2 = -8,523 829 × 10-3 °C-2 kg/m3
a3 = 6,943 248 × 10-5 °C-3 kg/m3 a4 = -3,821 216 × 10-7 °C-4 kg/m3
αC = coefficient de dilatation, en°C-1 ρa = densité de l'air en kg/m3
ta = température de l’air en °C pa = pression atmosphérique en hPa
ha = humidité relative en pourcentage k1 = 0,348 44 en °C/hPa
k2 = -0,002 52 kg/m3 k3 = 0,020 582 en °C
5.4.3 Volume du DKD avec densité de l'eau selon Tanaka et densité de l'air selon Spieweck
Le guide DKD [17] combine les formules (5.3), (5.5) et (5.6) :
 k p − ha (k 2t a + k3 ) 
8000 −  1 a 
m  273 ,
15 + t 
V20 = × a
× ...
8000   ( )(  )
 a 1 − tW + a1 tW + a2   −  k1 pa − ha (k 2t a + k3 ) 
2
  
 5
 
(
a3 tW + a4 )
  
 273,15 + t a 

...(1 − αC × (t d − 20 ))
Avec
a2 = 301,797 en °C a3 = 522 528,9 en °C2
a4 = 69,348 81en °C a5 = 999,974 950 en kg/m³

k1 = 0,348 44 en °C/hPa k2 = -0,002 52 kg/m3
k3 = 0,020 582 en °C
5.4.4 Dilatation thermique de l'instrument de mesure du volume
À cause des différents types d'AVAP et de ses variantes, le coefficient de dilatation cubique ne peut pas
être déterminé de façon universelle.
Le coefficient de dilatation cubique d'un AVAP est composé par le coefficient de dilatation linéaire des
éléments raccordant les butées du piston et par le coefficient de dilatation de la section transversale du pis-
ton. Les propriétés des matériaux, les combinaisons de matériaux ainsi que les différentes géométries et ré-
alisations sont autant de paramètres influençant le coefficient de dilatation cubique. Mais, cette influence ne
peut pas être représentée en termes mathématiques et ne peut donc être définie par aucun fabricant.
Ainsi, le coefficient de dilatation cubique pris en compte dans le budget d'incertitude de mesure a
la valeur "zéro". (Voir document DKD-R 8-1 [17])
Le mesurande cependant se rapporte alors à la température prise durant la mesure.
Il est absolument indispensable de conserver les AVAP dans la pièce où la mesure est effectuée pendant
au minimum 2 heures. Comme il n'est pas possible de mesurer la température des AVAP directement, leur
température est assimilée à la température ambiante. La contribution à l'incertitude de mesure est estimée.
5.4.5 Facteur Z
Il combine la correction de poussée aérostatique avec la conversion de la masse en volume
1 ρ − ρa
Z = × b (5.7)
ρb ρW − ρa
Les valeurs des facteurs de correction, Z, données dans le Tableau A.1 de la norme IOS8655-6 [13]
sont fonction de la température d'essai et de la pression atmosphérique. Ces facteurs ne prenant pas en
compte l'humidité de l'air, il est préférable d'utiliser la formule (19) pour calculer la densité de l'air.
5.4.6 Facteur Y
Il correspond au facteur d'expansion thermique due l'AVAP : Y = 1 − αC × (t d − 20 ) (5.8)
Pour l'appliquer ce facteur il faut connaître le coefficient αC qui n'est pas fourni comme caractéristique
par le fabricant de l'AVAP. Il est aussi à noter que mesurer la température de l'AVAP n'est pas facile non
plus.
5.5 VOLUME MOYEN À LA TEMPÉRATURE DE RÉFÉRENCE DE 20°C
Il est calculé avec cette formule : V 20 = 1 / n ⋅ ∑V i 20 (5.9)
avec :
n = nombre de mesures
Vi 20 = volume mesuré individuel.
5.6 ERREUR
L’erreur sur le volume d’eau à la température de référence (20 °C) est calcu-
lée ainsi : E = Vn − V 20 (5.10)
Vo
ur
lu
re
m
e
Er
di
st
rib
avec :
ué
Vo
lu
m
E = erreur du volume
ec
ib
le
Vn = volume nominal
Figure 7 : Erreur du volume V 20 = moyenne du volume d’eau pure rapportée à 20°C.

6 INCERTITUDE DE MESURE
6.1 PRINCIPE APPLICABLE POUR ESTIMER L'INCERTITUDE
Le principe appliqué pour estimer l'incertitude est simple en principe. Les étapes à suivre décrivent les
tâches effectuées pour estimer l'incertitude associée au résultat de mesure.
Étape 1. Spécifier le mesurande
Poser clairement ce qui est mesuré, y compris la relation entre le mesurande et les grandeurs d'entrée (par
exemple grandeurs mesurées, constantes, étalonnage, valeurs étalons etc.) dont il dépend.
Les formules identifiées plus tôt décrivent le mesurande et les grandeurs d'entrée (ex : température, pres-
sion, humidité) dont il dépend. Cette opération a été réalisée dans le chapitre 5 précédent.
Étape 2. Identifier les sources d'incertitude
Faire la liste des sources éventuelles d'incertitude. Cela comprend les sources contribuant à l'incertitude du
mesurande et aussi comprendre d'autres sources.
Étape 3. Quantifier les composantes de l'incertitude
Mesurer ou estimer la valeur de la composante d'incertitude associée à chaque source potentielle d'incerti-
tude identifiée.
Étape 4. Calculer l'incertitude composée
Les informations obtenues à l'étape 3 consistent en un certain nombre de contributions quantifiées à l'incer-
titude globale, qu'elles soient associées à des sources individuelles ou à des effets combinés de plusieurs
sources. Les contributions doivent être exprimées en écarts types et combinés selon les règles appropriées,
pour donner une incertitude standard composée. Le facteur d'élargissement approprié est appliqué pour
donner une incertitude élargie.
6.2 IDENTIFICATION DES COMPOSANTES D'INCERTITUDES
Les figures ci-dessous reprennent les composantes d'incertitudes retenues dans les documents de réfé-
rence [15], [16] et [17].
6.2.1 Rapport technique ISO/TR
Les composantes d'incertitudes de la figure 8 sont celles retenues dans le rapport technique [15].
Balance / Masse Densité de l’eau Densité de l’air
Incertitude
Incertitude
de la balance
Résolution du thermomètre
de la balance Incertitude
Dérive de la du thermomètre Incertitude du
température
capteur d’humidité
Répétabilité
Résultat de
Perte par Incertitude
mesure ± U
évaporation du baromètre
Dilatation
Écart-type de cubique
la valeur moyenne
Température
Contribution liée au
Répétabilité
maniement de la pipette
Figure 8 : Diagramme des principales composantes d'incertitude du rapport technique

Chapitre 6 : Incertitude de mesure
6.2.2 Guide DKD

Les composantes d'incertitudes de la figure 9 sont celles retenues dans le guide [16].
Température de l’eau / Température de l’air /
Balance / Masse
Densité de l’eau Humidité relative
Incertitude Incertitude
de la balance Incertitude du thermomètre
Résolution du thermomètre Dérive lors de
de la balance Dérive lors de l’étalonnage
Dérive de la l’étalonnage Incertitude du
température Incertitude de la capteur d’humidité
Perte par densité de l’eau Dérive lors de Résultat de
évaporation l’étalonnage mesure ± U
Influences
Incertitude Différence de température mécaniques
du baromètre eau / pipette / air
Influences
Dérive lors de Écart-type de humaines
Humidité relative
l’étalonnage la valeur moyenne
Chaleur
Pression de la main
atmosphérique
Transport
Pression Influences Contribution liée au

Répétabilité
atmosphérique systématiques maniement de la pipette
Figure 9 : Composantes d'incertitudes retenues dans le guide DKD
6.2.3 Guide technique COFRAC
Les composantes d'incertitudes de la figure 10 sont celles retenues dans le guide technique [17].
Température de l’air /
Balance / Masse Température de l’eau Humidité relative
Incertitude
Incertitude du thermomètre
Pérennité du
du thermomètre
thermomètre
Incertitude Pérennité du Dérive de la température
de la balance thermomètre lors de l’étalonnage
Perte par Dérive de la Incertitude du
évaporation température capteur d’humidité
Dérive de l’humidité Résultat de
lors de l’étalonnage
mesure ± U
Temps d’attente
Incertitude Vitesse de
du baromètre distribution Méthode
Écart-type de
la valeur moyenne Angle
Dérive lors de d’inclinaison
l’étalonnage
Profondeur
d’immersion
Force
d’opération
Pression
Répétabilité Effet inter opérateur Autres influences
atmosphérique
Figure 10 : Composantes d'incertitudes retenues dans le guide technique COFRAC

6.3 QUANTIFICATION DES COMPOSANTES

La quantification des composantes listées dans les figures 8, 9 et 10 du chapitre précédent est dévelop-
pée ci-après.
6.3.1 Répétabilité
u ( xi )
L’écart-type expérimental s des mesures permet d’estimer la répétabilité :
∑ (V )
2
− V 20
s=
i 20
n −1
avec : s/ n 6.1
s = écart-type des mesures n = nombre de mesures
Vi 20 = volume mesuré individuel V 20 = volume moyen
L’incertitude type relative au volume moyen avec n mesurages est égale à :
6.3.2 Balance / Masse
Une balance étalonnée permet de s'assurer que les contributions "résolution de la balance", "répétabili-
té", "excentration" et "non-linéarité" qui sont affectés à la pesée sont inclus dans l'incertitude de son certifi-
cat d'étalonnage. La contribution de la résolution de la balance est à prendre en compte 2 fois dans le
budget de l'incertitude de mesure, car le résultat de la pesée correspond à la différence entre deux indica-
tions (à vide et en charge).
u ( xi )
Si l'emt de la balance est retenue comme source d’incertitude, en supposant une distribu-
emt / 3 6.2a
tion rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude d'étalonnage de la balance est retenue comme source d’incertitude, on
prend celle du certificat d'étalonnage indiquée avec k = 2. En supposant une distribution U IP / 2 6.2b
normale, l’incertitude type est égale à :
La linéarité est une caractéristique technique de la balance. Sa valeur est indiquée dans le
mode d'emploi. Si la linéarité de la balance est retenue comme source d’incertitude, en lin / 3 6.2c
supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
La répétabilité est une caractéristique technique de la balance. Sa valeur est indiquée dans
le mode d'emploi. Si la répétabilité de la balance est retenue comme source d’incertitude, REPbal / 3 6.2d
en supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si la résolution de la balance est retenue comme source d’incertitude, en supposant une 2× d 2
6.2e
distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à : 3
L'incertitude de la densité du poids avec k = 2, servant à ajuster la balance est donnée
dans le tableau B.7 du document OIML R111 [10]. La valeur de cette incertitude peut être U Densité
réduite quand la densité est mentionnée dans le certificat d'étalonnage du poids utilisé 6.2f
2
pour l'ajustage. Si la densité de la balance (8000 kg/m3) est retenue comme source
d’incertitude, l’incertitude type est égale à :
L'influence de la variation de la température sur les indications de la balance est calculée
avec cette formule : ∆R = (TC × ∆T) × m
Exemple : lors de la pesée d'une charge de 100 mg avec une variation ∆T, de la tempéra-
ture de l'air de 0,2 °C, on obtient une variation ∆R des indications :
∆R / 3 6.2g
∆R = (TC × ∆T)× m = (1 ppm/°C × 0,2 °C) × 100 mg = 0,02 µg
avec TC = coefficient de sensibilité à la température de la balance
Si l'influence de la dérive des indications de la balance en fonction de la température est
retenue comme source d’incertitude, l’incertitude type est égale à
Page 27 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

6.3.3 Évaporation
Durant la distribution des AVAP, le liquide en surface en contact avec l'air s'évapore. Pour cette raison, la
perte par évaporation doit être prise en compte comme composante. Elle peut être déterminée, ou estimée –
sur la base d'une expérience personnelle précédente – selon le volume de l'AVAP. Pour réduire cette in-
fluence, une balance conçue pour étalonner les AVAP est équipée d'un piège anti-évaporation. L'efficacité
démontrée du piège permet de réduire à zéro cette composante.
u ( xi )
L'erreur due à l'évaporation est déterminée par voie expérimentale durant la série de me- U IP / 2
sures et est prise en compte pour le calcul du volume. Cette évaporation ajoute une com-
ou 6.3
posante à l'incertitude de mesure. Son incertitude type est calculée à partir de celle retenue
emt / 3
pour la balance.
6.3.4 Température de l'eau / Densité de l’eau
L'incertitude du thermomètre et la variation de la température de l'eau lors de l'étalonnage sont à prendre
en compte au minimum dans le budget d'incertitude.
u ( xi )
Si l'incertitude de la formule est retenue comme source d’incertitude, l’article de la revue
Metrologia [9] indique dans son tableau 1 que la formule a une incertitude élargie de 0,00083
6.4a
0,00083 kg/m³ avec k = 2. L’incertitude type est égale à : 2
Nota : le guide DKD [17] estime cette composante à 10 ppm
Si l'incertitude de la composition de l'eau est retenue comme source d’incertitude, en rai-
son de la composition de différents échantillons d’eau purifiée (abondance isotopique, 0,015
présence ou pas de gaz dissous), sa pureté, sa compressibilité, la différence peut atteindre 6.4b
3
0,015 kg/m³ comme l’indique l’article de la revue de l’IUPAC [22]. En supposant une dis-
tribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude de la stabilité de l'eau est retenue comme source d’incertitude, elle est dé- (ρ − ρW fin )
terminée par l’écart de densité de l’eau entre le début et la fin des essais. En supposant 6.4c
Wdébut
3
une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude d'étalonnage du thermomètre servant à mesurer la température de l'eau est
U Thermeau
retenue comme source d’incertitude, on prend celle de son certificat d'étalonnage indiquée 6.4d
2
avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude relative à la pérennité du thermomètre servant à mesurer la température de
l'eau est retenue comme source d’incertitude, on prend au minimum celle de son certificat U Thermeau
6.4e
d'étalonnage indiquée avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude 2
type est égale à :
La dérive de la température correspond à la différence entre la température avant la pre-
mière mesure et après la dernière mesure. Si cette dérive est retenue comme source 0,2 K / 3
d’incertitude, on prend la valeur de 0,2 °C préconisée par le guide DKD [17] (la limite ou 6.4f
préconisée par le guide technique COFRAC [16] est de 0,5 °C). En supposant une distri- 0,5 K / 3
bution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :

6.3.5 Densité de l’air / Température / Humidité / Pression

La température de l'air et de l'humidité relative ont une influence sur le volume distribué. La variation de
la température de l'air ne doit pas dépasser 0,5 °C et celle de l'humidité relative ne doit pas dépasser 5%
entre le début et la fin de l'étalonnage.
u ( xi )
Si l'incertitude de la formule est retenue comme source d’incertitude, la recommandation
OIML R111 indique que la formule simplifiée a une incertitude relative de 2×10-4. En sup- (1,2 × 0,0002)
6.5a
posant une distribution rectangulaire, l’incertitude type de la formule est calculée comme 3
suit :
Si l'incertitude de la stabilité de l'air est retenue comme source d’incertitude, elle est déter- (ρ − ρ )
minée par l’écart de densité de l’air entre le début et la fin des essais. En supposant une 6.5b
a début a fin
3
distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude d'étalonnage du thermomètre servant à mesurer la température de l'air est
U Therm
retenue comme source d’incertitude, on prend celle de son certificat d'étalonnage indiquée air
6.5c
2
avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude relative à la pérennité du thermomètre servant à mesurer la température de
l'air est retenue comme source d’incertitude, on prend au minimum celle de son certificat U Therm air
6.5d
d'étalonnage indiquée avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude 2
Si la résolution du thermomètre servant à mesurer la température de l'air est retenue dTherm air
6.5e
comme source d’incertitude, en supposant une distribution rectangulaire, elle est égale à : 3
Si le défaut d'homogénéité de la température de l'air est retenue comme source ∆K
6.5f
d’incertitude, en supposant une distribution rectangulaire, elle est égale à : 3
Si l'incertitude d'étalonnage du baromètre servant à mesurer la pression atmosphérique de
U Baro
l'air est retenue comme source d’incertitude, on prend celle de son certificat d'étalonnage 6.5g
2
indiquée avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude relative à la pérennité du baromètre servant à mesurer la pression atmos-
phérique de l'air est retenue comme source d’incertitude, on prend au minimum celle de U Baro
6.5h
son certificat d'étalonnage indiquée avec k = 2. En supposant une distribution normale, 2
l’incertitude type est égale à :
Si la résolution du baromètre servant à mesurer la pression atmosphérique de l'air est re- d Baro
tenue comme source d’incertitude, en supposant une distribution rectangulaire, elle est 3
6.5i
égale à :
Si l'incertitude d'étalonnage de l'hygromètre servant à mesurer l'humidité relative de l'air
U Hygro
est retenue comme source d’incertitude, on prend celle de son certificat d'étalonnage indi- 6.5j
2
quée avec k = 2. En supposant une distribution normale, l’incertitude type est égale à :
Si l'incertitude relative à la pérennité de l'hygromètre servant à mesurer l'humidité relative
de l'air est retenue comme source d’incertitude, on prend au minimum celle de son certifi- U Hygro
6.5k
cat d'étalonnage indiquée avec k = 2. En supposant une distribution rectangulaire, 2
l’incertitude type est égale à :
Si la résolution de l'hygromètre servant à mesurer l'humidité relative de l'air est retenue d Hygro
6.5l
comme source d’incertitude, en supposant une distribution normale, elle est égale à : 3
La dérive de la température correspond à la différence entre la température avant la pre-
mière mesure et après la dernière mesure. Si cette dérive est retenue comme source
d’incertitude, on prend la valeur de 0,2 °C préconisée par le guide DKD [17] et le guide 0,2 K / 3 6.5m
technique COFRAC [16]. En supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est
égale à :

u ( xi )
La dérive de l'humidité relative de l'air correspond à la différence entre l'humidité relative de
l'air avant la première mesure et après la dernière mesure. Si cette dérive est retenue 5%/ 3
comme source d’incertitude, on prend la valeur de 5% préconisée par le guide DKD [17] ou 6.5n
(celle préconisée dans le guide technique COFRAC [16] est de 10%). En supposant une 10 % / 3
La dérive de la pression atmosphérique de l'air correspond à la différence entre la pression
atmosphérique de l'air avant la première mesure et après la dernière mesure. Si cette dé- 1 hPa / 3
rive est retenue comme source d’incertitude, on prend la valeur de 1 hPa préconisée par le ou 6.5o
guide DKD [17] (celle du guide technique COFRAC [16] est de 5 hPa). En supposant une 5 hPa / 3
6.3.6 AVAP
u ( xi )
Si le coefficient de dilatation cubique de l'AVAP est retenu comme source d’incertitude, on 10 ppm
prend la valeur de 10 ppm/K préconisée par le guide technique COFRAC [16]. En suppo- 6.6a
3
sant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si l'influence de la variation de la température (ex : chaleur de la main) sur l'AVAP est re-
tenue comme source d’incertitude, on peut prendre la valeur de 2 K préconisée dans le 2K
6.6b
rapport technique ISO/TR [15]. En supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude 3
La contribution relative à la manipulation de l'AVAP est une contribution à l'incertitude de
mesure provenant de l'évaluation des valeurs de mesure menée par l'étude pilote du DKD.
Les valeurs suivantes sont retenues :
Contri
• AVAP monocanal à volume fixe : 0,07% du volume nominal 3
6.6c
• AVAP monocanal et multicanal à volume variable : 0,1% du volume nominal
La contribution de la manipulation est une valeur minimale et ne peut pas être réduite.
En supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
6.3.7 Effet inter opérateur
u ( xi )
Si l'effet opérateur est retenu comme source d’incertitude, on prend la valeur préconisée
par le guide technique COFRAC [16] dans le tableau 4.
Une approche simplifiée consiste à demander à chaque opérateur d’étalonner plusieurs
fois un AVAP (3 répétitions au minimum sont recommandées) puis de calculer la moyenne a
6.6a
des erreurs systématiques Ei obtenue pour chaque opérateur, l’indice i correspondant au 3
numéro de l’opérateur. On peut alors calculer la demi-étendue de l’intervalle de dispersion
des valeurs avec : a = MAX (Ei ) − MIN (Ei )
2
6.3.8 Effet de la méthode
Les comparaisons inter laboratoires établies par le COFRAC ont mis en évidence l’existence d’un biais
propre à chaque laboratoire qui remet en cause la robustesse de la méthode utilisée pour l’étalonnage des
instruments. Il convient donc de prendre en compte cette composante liée à la mise en application de la
méthode dans chaque laboratoire qui se différenciera des autres composantes déjà intégrées dans le calcul
d’incertitudes.
u ( xi )
Si l'effet de la méthode est retenu comme source d’incertitude, on prend la valeur préconi- Méthode
6.7a
sée par le COFRAC dans le tableau 4 de son guide technique. 3

6.3.9 Influences systématiques

u ( xi )
La différence de température entre l'air et l'eau doit être inférieure à 0,5°C durant l'étalon-
nage. Pour obtenir la plus petite incertitude de mesure assignable, ou pour la comparaison
de mesures et les comparaisons inter-laboratoires, la différence de température doit être au 0,2 K
6.8a
maximum de 0,2°C. Si la différence de température entre l'eau, l'air et l'AVAP est retenue 3
comme source d’incertitude, on prend la valeur de 0,2 K préconisée par le guide DKD
[17]. En supposant une distribution rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si la variation de l'humidité relative de l'air est retenue comme source d’incertitude, on 5%
prend la valeur de 5 % préconisée par le guide DKD [17]. En supposant une distribution 6.8b
3
rectangulaire, l’incertitude type est égale à :
Si la variation de la pression atmosphérique de l'air liée à l'altitude est retenue comme 20 hPa
source d’incertitude, on prend la valeur de 20 hPa préconisée par le guide DKD [17]. En 6.9c
6
supposant une distribution triangulaire, l’incertitude type est égale à :
6.4 CALCUL DE L'INCERTITUDE

6.4.1 Les différentes méthodes
Utiliser ensemble la méthode du GUM et celle de l'EURACHEM, est presque toujours utile dans l'élabora-
tion d'une stratégie appropriée parce qu'elles donnent un aperçu de différentes parties du problème. Des dif-
férences substantielles entre le GUM et l'EURACHEM indiquent souvent la non-linéarité appréciable, tandis
que les grandes différences entre EURACHEM ou GUM peuvent signaler les écarts importants de la normali-
té. Lorsque les différentes méthodes donnent des résultats sensiblement différents, il faut donc être analyser
la raison de la différence.
6.4.2 Incertitude type composée
La relation générale entre l'incertitude type composée uc(y) d'une valeur y et l'incertitude des paramètres
indépendants x1, x2, xn dont elle dépend est :
2
 ∂y 
uC ( y (x1 , x2 , xn )) = ∑c × u (xi ) = ∑ u( y , x ) = ∑   × u 2 (xi )
2 2 2
i =1,n  ∂xi
i i
i =1,n i =1,n 
où
y(x1, x2, …) est une fonction avec plusieurs paramètres
ci est un coefficient de sensibilité évalué comme étant ci = ∂y/∂xi, la différentielle partielle de
y par rapport à xi
u(y, xi) caractérise l'incertitude sur y résultant de l'incertitude en xi
La contribution propre à chaque variable u(y, xi) est simplement le carré de l'incertitude associé expri-
mée sous la forme de l'écart-type multiplié par le carré du coefficient de sensibilité approprié. Ces coeffi-
cients de sensibilité décrivent comment la valeur de y varie en fonction des variations des paramètres x1,
x2 etc.
Le lecteur, selon ses habitudes de travail, pourra choisir entre plusieurs méthodes pour déterminer
l’incertitude type composée.
6.4.3 Méthode GUM
L'application de cette méthode nécessite de calculer les coefficients de sensibilité. Le détail de ces cal-
culs est donné dans le chapitre 7. Un exemple de calcul selon cette méthode est donné dans le chapitre 8.
6.4.4 Méthode EURACHEM
L’estimation de l’incertitude type composée est réalisée en appliquant la méthode numérique décrite
dans le guide EURACHEM [7]. Ce guide peut être téléchargé à cette adresse : www.eurachem.org.

Cette méthode permet d’estimer l’incertitude type composée sans utiliser les dérivées partielles pour dé-
terminer les valeurs des coefficients de sensibilité. Un exemple de calcul selon cette méthode est donné
dans le chapitre 9.
6.4.5 Méthode gravimétrique
Cette incertitude permet d'évaluer le système gravimétrique mis en place pour l'étalonnage indépen-
damment de l'AVAP et de l'opérateur. Elle correspond à la somme quadratique de toutes composantes rete-
nues excepté sauf celle de la répétabilité des mesures.
6.5 INCERTITUDE TYPE ÉLARGIE
L'étape finale de l'évaluation de l'incertitude consiste à multiplier l'incertitude type composée par le fac-
teur d'élargissement choisi de manière à obtenir une incertitude élargie. L'incertitude élargie est nécessaire à
l'obtention d'un intervalle susceptible d'englober une fraction importante de la distribution des valeurs pou-
vant raisonnablement être attribuées au mesurande.
L’incertitude type élargie U du volume V20 est calculée en multipliant l’incertitude type composée
uC(V20) par le facteur d’élargissement k. La valeur k = 2, est recommandée pour les étalonnages. Cela si-
gnifie, que dans le cas de distribution normale des valeurs de mesure, la valeur de mesure V20 est couverte
par l’intervalle donné par V20 ± U (k = 2) avec un niveau de confiance de 95 %.
Important : Dans la plupart des applications, il est recommandé de fixer la valeur de k à 2.

Cependant, cette valeur de k peut être insuffisante lorsque l'incertitude composée est basée sur
des observations statistiques dont le nombre de degrés de liberté est assez faible (moins de six
environ). Le choix de k dépend alors du nombre effectif de degrés de liberté.
Quand l'incertitude type composée est dominée par une contribution unique avec des degrés de liberté
inférieurs à six, il est recommandé que k soit fixé à un niveau égal à la valeur bilatérale d'un test t de Stu-
dent pour le nombre de degrés de liberté associés à cette contribution et pour le niveau de confiance néces-
saire (normalement 95%).
En général, la loi de t ne décrira pas la distribution de la variable (y-Y)/uc(y) si uC2 ( y ) est la somme de
deux ou plus composantes estimées de la variance uC2 ( y ) = ci2u 2 (xi ) , même si chaque xi est l'estimation
d'une grandeur d'entrée Xi normalement distribuée. Il est cependant possible de faire l'approximation de la
loi de cette variable par une loi de t avec un nombre effectif de degrés de liberté νeff obtenu à partir de la
formule de Welch-Satterthwaite.
uC4 ( y ) N ui4 ( y ) ( )
N
=∑ avec νeff ≤ ∑ ν i
4
ou νeff = uC y
νeff i =1 νi N
ui4 ( y )
∑
i =1
i =1 νi

7 COEFFICIENTS DE SENSIBILITÉ
Les référentiels cités proposent plusieurs formules pour calculer la densité de l'air et la densité de l'eau.
Les coefficients dépendent des formules appliqués.
Il faut garder à l'esprit que certains coefficients de sensibilité sont fonction du volume ou de la tempéra-
ture. Pour cette raison, il est nécessaire de connaître leur formule et non d'appliquer les valeurs numériques
indiquées dans le rapport technique de ISO/TR [15] ou le guide DKD [17].
7.1 DENSITÉ DE L'EAU
7.1.1 Formule ISO/TR 20461
Le rapport technique ISO/TR [15] donne la formule (5.2) pour calculer la densité de l'eau :
4
ρW = ∑ ai tWi = a0 + a1 × tW + a2 × tW2 + a3 × tW3 + a4 × tW4 (5.2)
i =0
avec
ρW = densité de l'eau en kg/m3
tW = température de l’eau en °C
et les constantes de l'échelle ITS-90 :

a0 = 999,853 08 kg/m3 a1 = 6,326 93 × 10-2 °C-1 kg/m3
a2 = 8,523 829 × 10-3 °C-2 kg/m3 a3 = 6,943 248 × 10-5 °C-3 kg/m3
a4 = 3,821 216 × 10-7 °C-4 kg/m3
La dérivée partielle de cette formule permet de déterminer l'importance des incertitudes relatives à la me-
sure de la température de l'eau sur la densité de l'eau.
∂ρW 4
= ∑ i ×a i ×t wi −1 = a1 + 2 × a2 × tW + 3 × a3 × tW2 + 4 × a4 × tW3 (7.1)
∂tW i =1
7.1.2 Formule BIPM (Tanaka)

Le BIPM [9] donne la formule (5.3) pour calculer la densité de l'eau :

ρW = a5 1 −
( )(
tW + a1 tW + a 2 
2

) (5.3)
 (
a 3 tW + a 4 )

ρW = densité de l'eau en kg/m3 ρW = densité de l'eau en g/mL
tW = température de l’eau en °C tW = température de l’eau en °C
et les constantes : et les constantes :

a1 = -3,983035 en °C a1 = -3,983035 en °C
a2 = 301,797 en °C a2 = 301,797 en °C
a3 = 522528,9 en °C2 a3 = 522528,9 en °C2
a4 = 69,34881en °C a4 = 69,34881en °C
a5 = 999,974950 en kg/m³ a5 = 0,999974950 en g/mL
La dérivée partielle de la formule BIPM permet de déterminer l'importance des incertitudes relatives à la
mesure de la température de l'eau sur la densité de l'eau. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le
calcul de la dérivée partielle :

Chapitre 7 : Coefficients de sensibilité
ρW

= a 5 1 −
( 2
tW + a1 tW + a 2 )( ) = a [(
a t + a1 tW + a 2
− 5 W
)(
2
)]
 a 3 tW + a 4( ) 
5
a 3 tW + a 4( )
Fonction u Dérivée partielle u’
[(
u = a5 tW + a1 ) (t2
W )] [(
+ a 2 = a5 t + 2a1tW + a 2
W
2
1 )(t W + a2 )]
[
u = a5 tW3 + 2a1tW2 + a12 tW + a 2 tW2 + 2a1 a 2 tW + a12 a 2 ] (
u' = a 5 3tW2 + 2tW (2a1 + a 2 ) + a12 + 2a1 a 2 )
u = a [t
5
3
W + 2a t + a t + a t + 2a1a 2 tW + a a 2
2
1 W
2
2 W
2
1 W
2
1 ]
u = a [t
5
3
W (
+ tW2 (2a1 + a 2 ) + tW a12 + 2a1 a 2 + a12 a 2 ) ]
Fonction v Dérivée partielle v’
( )
v = a3 tW + a4 = a3tW + a3a4 v' = a3
Formule pour le coefficient de sensibilité
∂ρW  u'v − v'u 
= − 
∂tW  v
2

Le coefficient de sensibilité est égal à :
∂ρW [
 a (3t 2 + 2t (2a + a ) + a 2 + 2a a ) × a (t + a ) − a a (t + a )2 (t + a ) 
= − 5 W W 1 2 1 1 2 3 W 4 3 5 W 1 W 2

] [ ] [ ]
∂tW  a3 (tW + a 4 )
2
[  ]
(7.2)
∂ρW
= −a5  W [(
 3t + 2t (2a + a ) + a + 2a a × a t + a − a t + a
1
2
2
W 1 2 3 W 4 3 W 1
2
1 )] [ ( )] [( ) (t
2
W )]
+ a2 

∂tW  a 3 tW + a 4
2
[ ( )] 
7.2 DENSITÉ DE L'AIR
7.2.1 Formule OIML R111
La recommandation OIML R111 [10] nous donne la formule suivante pour calculer la densité de l'air.
0,34848 p a − 0,009(ha ) × exp(0,061t a )
ρa = (7.3)
273,15 + t a
avec
ρa = densité de l'air en kg/m3 ta = température de l’air en °C
pa = pression atmosphérique en hPa
ha = humidité relative exprimée comme un pourcentage (ex : 80 % d’humidité relative = 80)
1/ Le coefficient de sensibilité relatif à la température de l'air est déterminé à partir de la dérivée partielle de
la formule OIML R111. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le calcul de la dérivée partielle :
0,34848 p a − 0,009(ha ) × exp(0,061t a ) 0,34848 p a 0,009(ha ) × exp(0,061t a ) w
ρa = = − =u−
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
0,34848 p a 0,34848 p a
u= u' = −
273,15 + t a (273,15 + t a )2
v = 273,15 + t a v' = 1
Fonction w Dérivée partielle w’
w = 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) w' = 0 ,061 × 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a )
∂ρ a  w' v − wv' 
Le coefficient de sensibilité est égal à : = u' − 
∂t a  v
2


∂ρa 0 ,34848 p a  [(0 ,061 × 0 ,009ha × exp(0 ,061t a )) × (273,15 + t a )] − [(0 ,009ha × exp(0 ,061t a )) × 1]
=− − 
∂t a (273,15 + t a ) 
2
(273,15 + t a )2 
∂ρ a − 0,34848 p a − [(0,061 × 0,009ha × exp(0,061t a )) × (273,15 + t a )] − [0,009ha × exp(0,061t a )]
=
∂t a (273,15 + t a )2
∂ρa − 0 ,34848 p a − {[0 ,009ha × exp(0 ,061t a )]× [0 ,061× (273,15 + t a ) − 1]}
= (7.4)
∂t a (273,15 + t a )2
2/ Le coefficient de sensibilité relatif à la pression atmosphérique de l'air est déterminé à partir de la dérivée
partielle de la formule OIML R111. On peut simplifier sa présentation :
0 ,34848 p a − 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) 0 ,34848 p a 0 ,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) w
ρa = = − =u−
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
u' ( p a ) =
0 ,34848 p a
u ( pa ) =
0 ,34848
273,15 + t a 273,15 + t a
Le coefficient de sensibilité est égal à : 0 ,34848 / (273,15 + t a ) (7.5)
3/ Le coefficient de sensibilité relatif à l'humidité relative de l'air est déterminé à partir de la dérivée partielle
de la formule OIML R111. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le calcul de la dérivée partielle :
0,34848 p a − 0,009(ha ) × exp(0,061t a ) 0,34848 p a 0,009(ha ) × exp(0 ,061t a ) w
ρa = = − =u−
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
w 0,009(ha ) × exp(0,061t a ) w' 0 ,009 × exp(0 ,061t a )
= =−
v 273,15 + t a v 273,15 + t a
Le coefficient de sensibilité ∂ρa/∂ha est égal à : -(0,009×exp(0,061ta)) / (273,15+ta) (7.6)
Coefficient de sensibilité Formule OIML R111

− 0,34848 pa − {[0,009ha × exp(0,061t a )] × [0,061 × (273,15 + t a ) − 1]}
∂ρa/∂ta (273,15 + t a )2
∂ρa/∂pa 0,34848 / (273,15 + ta)
∂ρa/∂ha -(0,009×exp(0,061ta)) / (273,15+ta)
Tableau 11 : Coefficients de sensibilité pour chaque paramètre de mesure de l’air
7.2.2 ISO/TR 20461 (formule de Spieweck)
Le rapport technique de l'ISO [15] nous donne la formule suivante pour calculer la densité de l'air.
k1 p a − ha (k 2 t a + k 3 )
ρa = (5.5)
273,15 + t a
ρa = densité de l'air en kg/m3 ρa = densité de l'air en g/mL
ta = température de l’air en °C ta = température de l’air en °C
pa = pression atmosphérique en hPa pa = pression atmosphérique en hPa
ha = humidité relative en pourcentage ha = humidité relative exprimée en pourcentage
et les constantes de l'échelle ITS-90 : et les constantes :
k1 = 0,34844 en °C/hPa k1 = 3,4844 x 10-4 ºC/hPa

k2 = -0,00252 kg/m3 k2 = -2,52 x 10-6 g/mL

k3 = 0,020582 en °C k3 = 2,0582 x 10-5 ºC
1/ Le coefficient de sensibilité relatif à la température de l'air est déterminé à partir de la dérivée partielle de
la formule du rapport technique ISO/TR [15]. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le calcul de la
dérivée partielle :
k1 p a − ha (k 2 t a + k 3 ) k1 p a h (k t + k 3 ) w
ρa = = − a 2 a =u −
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
k1 pa k1 pa
u= u' = −
273,15 + ta (273,15 + t a )2
v = 273,15 + t a v' = 1
w = ha (k 2t a + k3 )
w' = ha k 2
w = ha k 2t a + ha k3
∂ρ a  w' v − wv' 
Le coefficient de sensibilité ∂ρa/∂ta est égal à : = u' −  (7.8)
∂t a  v
2

∂ρ a k1 p a  [(ha k 2 ) × (273,15 + t a )] − [ha (k 2 t a + k 3 ) × 1]
=− −  
∂t a (273,15 + t a )2  (273,15 + t a )2 
∂ρ a − k1 p a − ([ha k 2 × (273,15 + t a )] − ha (k 2 t a + k 3 ))
=
∂t a (273,15 + t a )2
∂ρ a − k1 p a − ([ha k 2 × (273,15 + t a )] − (ha k 2 t a + hr k 3 ))
=
∂t a (273,15 + t a )2
∂ρ a − k1 p a − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
=
∂t a (273,15 + t a )2
2/ Le coefficient de sensibilité relatif à la pression atmosphérique de l'air est déterminé à partir de la dérivée
partielle de la formule OIML R111. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le calcul de la dérivée
partielle :
ρa = = − a 2 a =u −
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
u ( pa ) = u' ( pa ) =
k1 pa k1
273,15 + ta 273,15 + ta
Le coefficient de sensibilité ∂ρa/∂pa est égal à : k1 / (273,15 + ta ) (7.9)
3/ Le coefficient de sensibilité relatif à l'humidité relative de l'air est déterminé à partir de la dérivée partielle
de la formule OIML R111. On peut simplifier sa présentation pour faciliter le calcul de la dérivée partielle :

ρa = = − a 2 a =u −
273,15 + t a 273,15 + t a 273,15 + t a v
w ha (k 2t a + k3 ) w k t +k
= = 2a 3
v 273,15 + t a v 273,15 + ta
Le coefficient de sensibilité ∂ρa/∂ha est égal à : ( k 2t a + k3 ) / (273,15+ta) (7.10)
Coefficient de sensibilité Formule de Spieweck

− k1 p a − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
∂ρa/∂ta
(273,15 + t a )2
∂ρa/∂pa k1 / (273,15 + ta )
∂ρa/∂ha ( k 2 t a + k 3 ) / (273,15+ta)
Tableau 12 : Coefficients de sensibilité pour chaque paramètre de mesure de l’air
7.3 VOLUME V20
Le rapport technique ISO/TR [15] donne la formule pour calculer le volume de la pipette :
ρ − ρa
× [1 − αC × (t d − 20 )]
m
V20 = × b (5.6)
ρb ρW − ρa
avec :
m = masse d’eau pure ρa = densité de l’air à ta
ρb = densité des poids de la balance, soit 8000 kg/m³ ρW = densité de l’eau à tW
td = température de l'AVAP (température de l’air) αC = coefficient de dilatation cubique 6
Le volume de l'AVAP dépend de la densité de l'eau et de l'air calculée avec les différentes formules de
densité proposées. Cette formule n'a pas été modifiée depuis l'édition du rapport technique.
7.4 VOLUME V20 + DENSITÉ DE L'AIR + DENSITÉ DE L'EAU
Pour déterminer les coefficients de sensibilité, les approximations ρW – ρa ≈ ρW ≈ 1000 kg/m³, ρb –
ρW ≈ ρb ≈ 8000 kg/m³, ρb – ρa ≈ ρb ≈ 8000 kg/m³, [1 – αC (td – td20)] ≈ 1 et ρb – ρa ≈ ρb sont uti-
lisées sans notation spéciale. Ces approximations sont acceptables et ne sont utilisées que pour
l’évaluation de l'incertitude.
7.4.1 Coefficient de sensibilité pour la masse
Les résultats exprimés en masse sont les lectures (à vide et en charge), la résolution (à vide et en
charge), la dérive de la lecture avec la température, l'évaporation, l'incertitude de la balance. Le coefficient
de sensibilité applicable est égal à :
∂V20 V20 1
= ≈ (7.11)
∂m ρW ρW
Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient :
6
Pour le calcul d'incertitude, le guide technique COFRAC [16] utilise la valeur de 1 pour ce coefficient. Dans le document DKD-
-5
R 8-1 [17] cette valeur est de 0. Dans le rapport technique [15], la valeur du coefficient est de 10 /K.
∂V20 1 −3 m
3
l ml µl nl
≈ ≈ 1 × 10 = 1 × 10 −3 = 1 × 10 −3 = 1 × 10 −3 =1 (7.12)
∂m ρW kg g mg µg µg
7.4.2 Coefficient de sensibilité pour la pression atmopshérique

Les résultats exprimés en fonction de la pression atmosphérique de l'air sont les lectures du baromètre,
sa résolution, sa pérennité, sa dérive durant les mesures, son incertitude. Le coefficient de sensibilité appli-
cable en fonction de la formule utilisée est égal à :
∂V20 m ρ − ρa
= × [1 − αC × (t d − 20)] × b
0,34848
×
∂pa ρb ( ρW − ρa ) 273,15 + t a
2
∂V20 m ρ
≈ × (1) × 2b ×
0,34848
∂pa ρb ρW 273,15 + t a (7.13a)
∂V20 m 0,34848
≈ 2 ×
Formule
∂pa ρW 273,15 + t a
OIML R111
Ce coefficient dépend du volume et de la température de l'air
(5.4)
∂V20 m 0 ,34848
= 2 ×
∂pa ρW 273,15 + t a
(7.13b)
∂V20 0 ,34848 × m
= × 10 −6
∂pa 273,15 + t a

∂V20 m ρ − ρa
= × [1 − αC × (t d − 20 )]× b
0,34844
×
∂pa ρb ( ρW − ρa ) 273,15 + t a
2
∂V20 m ρ
= × (1)× 2b ×
0,34844
(7.14a)
∂pa ρb ρW 273,15 + t a
∂V20 m 0,34844
= 2 ×
Formule de ∂pa ρW 273,15 + t a
Spieweck
(5.5) Ce coefficient dépend du volume et de la température de l'air
∂V20 m 0 ,34844
= 2 ×
∂p a ρW 273,15 + t a
(7.14b)
∂V20 0 ,34844
= m× × 10 −6
∂p a 273,15 + t a

Tableau 13 : Coefficients de sensibilité pour la pression de l'air

7.4.3 Coefficient de sensibilité pour l'humidité relative (hygromètre)

Les résultats exprimés en humidité relative sont les lectures de l'hygromètre, sa résolution, sa pérennité,
sa dérive durant les mesures, son incertitude. Le coefficient de sensibilité applicable en fonction de la for-
mule utilisée est égal à :
∂V20 m ρ - ρa (-0,009× exp ( 0,061t a )
= × [1 - α C × (t d - 20 )]× b ×
∂ha ρb ( ρW - ρa ) 2
273,15+t a
∂V20 m ρ (-0,009× exp ( 0,061t a )

= × (1) × 2b × (7.15a)
∂ha ρb ρW 273,15+t a
∂V20 m (-0 ,009× exp ( 0 ,061t a )

Formule = 2 ×
∂ha ρW 273,15+t a
OIML R111
∂V20 m (−0,009× exp ( 0,061t a )
= 2 ×
∂ha ρW 273,15+t a
(7.15b)
∂V20 (0,009× exp ( 0,061t a ) × m −6
=− × 10
∂ha 273,15+t a
∂V20 m ρ − ρa k t + k3
= × [1 − αC × (t d − 20)]× b × 2a
∂ha ρb ( ρW − ρa ) 273,15+t a
2
∂V20 m ρ k t + k3
= × (1) × b × 2 a (7.16a)
∂ha ρb 273,15+t a
∂V20 m k t + k3
= 2 × 2a
Formule de ∂ha ρW 273,15+t a
Spieweck
∂V20 m k t + k3
= 2 × 2a
∂ha ρW 273,15+t a
(7.16b)
∂V20 (k t + k 3 ) × 10 −6
= m× 2 a
∂ha 273,15+t a

Tableau 14 : Coefficients de sensibilité pour l'humidité relative de l'air

7.4.4 Coefficient de sensibilité pour la température de l'air

Les résultats exprimés en fonction de la température de l'air sont les lectures du thermomètre, sa résolu-
tion, sa pérennité, sa dérive durant les mesures, son incertitude. Le coefficient de sensibilité applicable en
fonction de la formule utilisée est égal à :
∂V20 m ( ρ − ρa ) × − 0,34848 pa − {[0,009ha × exp(0,061ta )]× [0,061 × (273,15 + ta ) − 1]}
= × (1 − αC × (td − 20 )) × b
∂ta ρb ( ρW − ρa )2 (273,15 + ta )2
∂V20 m ρ − 0,34848 pa − {[0,009ha × exp(0 ,061ta )]× [0 ,061 × (273,15 + ta ) − 1]}
= × (1) × 2b ×
∂ta ρb ρW (273,15 + ta )2
∂V20 m 0,34848 pa − {[0,009ha × exp(0 ,061ta )]× [0 ,061 × (273,15 + ta ) − 1]}
= 2 ×
∂ta ρW (273,15 + ta )2
(7.17a)
Formule Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température, de l'humidité
OIML R111 et de la pression de l'air
(5.4) Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient :
∂V20 m 0,34848 p a − {[0,009ha × exp(0,061t a )] × [0,061 × (273,15 + t a ) − 1]}
= 2 ×
∂t a ρW (273,15 + t a )2
(7.17b)
∂V20 0,34848 p a − {[0,009ha × exp(0,061t a )] × [0,061 × (273,15 + t a ) − 1]} −6
= m× × 10
∂t a (273,15 + t a )2
Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température, de l'humidité
et de la pression de l'air
∂V 20 m ( ρ − ρ a ) − k1 p a − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
= × (1 − α C × (t d − 20))× b ×
∂t a ρb ( ρW − ρ a )2 (273,15 + t a )2
∂V 20 m ρ − k p − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
= × (1)× 2b × 1 a (7.18a)
∂t a ρb ρW (273,15 + t a )2
∂V 20 m − k p − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
= 2 × 1 a
Formule de ∂t a ρW (273,15 + t a )2
Spieweck
(5.5) Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température, de l'humidité
∂V 20 − k p − (ha [k 2 × (273,15 + t a )] − (k 2 t a + k 3 ))
= m× 1 a ×10 − 6 (7.18b)
∂t a (273,15 + t a ) 2
Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température, de l'humidité

Tableau 15 : Coefficients de sensibilité pour la température de l'air

7.4.5 Coefficient de sensibilité pour la température de l'eau (thermomètre)

Les résultats de la densité de l'eau exprimés en fonction de la température de l'eau sont les lectures du
thermomètre, sa résolution, sa pérennité, sa dérive durant les mesures, son incertitude. Le coefficient de
sensibilité applicable en fonction de la formule utilisée est égal à :
∂ρW m ( ρ − ρa )
=− × b × [1 − αC × (t d − 20 )] × (a1 + 2 × a2 × tW + 3 × a3 × tW2 + 4 × a4 × tW3 )
∂tW ρb ( ρW − ρa )2
∂ρW m ρ
= − × 2b × [1] × (a1 + 2 × a2 × tW + 3 × a3 × tW2 + 4 × a4 × tW3 ) (7.19a)
∂tW ρb ρW
∂ρW
= − 2 × (a1 + 2 × a2 × tW + 3 × a3 × tW2 + 4 × a4 × tW3 )
m
∂tW ρW
Formule
ISO/TR Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température de l'eau
20461 Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient :
(5.2) ∂ρW
= − 2 × (a1 + 2 × a 2 × tW + 3 × a3 × tW2 + 4 × a 4 × tW3 )
m
∂tW ρW
(7.19b)
∂ρW
= −m × (a1 + 2 × a 2 × tW + 3 × a3 × tW + 4 × a 4 × tW )× 10
2 3 −6
∂tW
Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température de l'eau

∂V20 ( ρ − ρa )
= − × (1 − α C × (t d − 20 )) × b
m
× ...
∂tW ρb ( ρW − ρa )2
[( W 1 2 1 )] [ (
1 2 3 W )]
 3t 2 + 2t (2a + a ) + a 2 + 2a a × a t + a − a t + a
...a5  W 4 [(
3 W 1 ) (t
2
W + a2 

)]
(7.20a)
 [ ( )]
a 3 tW + a 4
2

∂V20 m
= − 2 × a5  W
[( W 1 2 1 1 2 )] [ (
 3t 2 + 2t (2a + a ) + a 2 + 2a a × a t + a − a t + a
3 W 4 3 W 1 )] [( ) (t
2
W + a2 

)]
∂tW ρW  [ (
a 3 tW + a 4
2
)] 
Formule
Tanaka Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température de l'eau
(5.3) Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient :
∂V20 m
= − 2 × a5  W
[( W 1 2 1 1 2 )] [ (
 3t 2 + 2t (2a + a ) + a 2 + 2a a × a t + a − a t + a
3 W 4 3 W 1 )] [( ) (t
2
W + a2 

)]
∂tW ρW  [ (
a 3 tW + a 4)]
2

(7.21a)
∂V20 [(
= −m × a 5  W W 1 2 1 1 2)] [ ( 3 W 4 )]
 3t 2 + 2t (2a + a ) + a 2 + 2a a × a t + a − a t + a
3 W 1 [( ) (t
2
W + a2  )]
 × 10 −6
∂tW  [ ( )]
a 3 tW + a 4
2

Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau, de la température de l'eau

Tableau 16 : Coefficients de sensibilité pour la température de l'eau
7.4.6 Coefficient de sensibilité pour la densité de l'eau
Les résultats exprimés en fonction de la densité de l'eau sont sa dérive durant les mesures, l'incertitude
de la formule.

∂V20 ( ρ − ρa )
× (1 − α C × (t d − 20 ))
1
= −m × × b
∂ρW ρb ( ρW − ρ a )2
∂V20 ρ
≈ −m × × b2 × (1)
1
(7.22)
∂ρW ρb ρW
∂V20 1 m
≈ −m × 2 ≈ − 2
∂ρW ρW ρW
Ce coefficient dépend du volume et de la densité de l'eau

∂V20 m
Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient : ≈ − 2 ≈ −m × 10 −6 (7.23)
∂ρW ρW
Ce coefficient dépend du volume

7.4.7 Coefficient de sensibilité pour la densité de l'air
Les résultats exprimés en fonction de la densité de l'air sont sa dérive durant les mesures, l'incertitude de
la formule. Le coefficient de sensibilité est égal à :
∂V20 (ρ − ρw )
× (1 − α C × (t d − 20 ))
1
= m× × b
∂ρ a ρb ( ρW − ρ a )2
(7.24a)
∂V20 ρ
≈ m × × b2 × (1) ≈ 2
1 m
∂ρ a ρb ρW ρW
Ce coefficient dépend du volume et de la densité de l'eau

∂V20 m
Avec ρW = 1000 kg/m3, le coefficient devient : ≈ 2 ≈ m ×10 −6 (7.24b)
∂ρa ρW
Ce coefficient dépend du volume

7.4.8 Coefficient de sensibilité pour le coefficient de dilatation cubique
Les résultats exprimés en fonction du coefficient de dilatation cubique de l'AVAP sont l'incertitude attri-
buée à cette composante. Le coefficient de sensibilité est égal à :
∂V20 m ρ − ρa
× (t d − 20 ) ≈ − × (t d − 20 )
m
=− × b (7.25a)
∂α C ρb ρW − ρ a ρW
Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau et de la température de l'AVAP (tempéra-

ture de l'air)
∂V20
× (t d − 20 ) ≈ −m × (t d − 20 )×10 −3
m
=− (7.25b)
∂αC ρW
Ce coefficient dépend du volume, de la densité de l'eau et de la température de l'AVAP (température

de l'air)
7.4.9 Coefficient de sensibilité relatif à la température
Les résultats exprimés en fonction de la température de l'AVAP sont sa dérive durant les mesures. Le
coefficient de sensibilité est égal à :

∂V20 m ρ −ρ m
= − × b a × αC ≈ − × αC (7.26a)
∂t d ρb ρW − ρa ρW
Ce coefficient dépend du volume et de la densité de l'eau et du coefficient de dilatation cubique de

l'AVAP
Avec αC = 10–5 /K, le coefficient devient :
∂V20 m ρ − ρa m m
=− × b × αC ≈ − × αC ≈ − × 10 −5 ≈ −m × 10 −8 (7.26b)
∂t d ρb ρW − ρa ρW 1000
Ce coefficient dépend du volume et de la densité de l'eau et du coefficient de dilatation cubique de

l'AVAP
7.4.10 Coefficient de sensibilité relatif à la répétabilité des mesures
Ce coefficient de sensibilité est égal à 1 car la répétabilité est exprimée en volume.
7.4.11 Coefficient de sensibilité relatif à la manipulation de l'AVAP
Ce coefficient de sensibilité est égal à 1 car cette composante est exprimée en volume.
7.4.12 Autres coefficients de sensibilité
En application du document DKD R8-1 [17], voici les derniers coefficients de sensibilité à retenir qui
donneront une incertitude type en µL :
• Différence de température entre l'eau, l'AVAP et l'air ..... : 0,0019 µl/K × VN (7.27a)
• Influence des variations d'humidité ............................ : 0,00007 µl/% × VN (7.28a)
• Différence de pression atmosphérique avec l'altitude .... : (0,000012 µl/hPa × VN) + 0,0002
............................................................................. (7.29a)
Pour exprimer les incertitudes types en nL, il faut utiliser ces coefficients :
• Différence de température entre l'eau, l'AVAP et l'air ..... : 1,9 nl/K × VN (7.27b)
• Influence des variations d'humidité ............................ : 0,07 nl/% × VN (7.28b)
• Différence de pression atmosphérique avec l'altitude .... : (0,012 nl/hPa × VN) + 0,2 (7.29b)
Ces coefficients dépendent du volume

8 INCERTITUDE – MÉTHODE GUM

Pour réussir à comparer les méthodes proposées par les différents référentiels, les données suivantes
sont appliquées.
8.1 BALANCE UTILISÉE
La balance utilisée a les caractéristiques suivantes :
• Modèle......................................................................: XP26PC
• Résolution .................................................................: 1 µg
• Linéarité ....................................................................: 6 µg
• Répétabilité................................................................: 1,5 µg
• Incertitude d'étalonnage ..............................................: ± 15 µg
• Coefficient de sensibilité ..............................................: 1 ppm/K
8.2 PARAMÈTRES DE MESURE DE L'ENVIRONNEMENT
Les conditions ambiantes de la salle sont mesurées à l'aide de la station de mesure ClimaLog 30 ayant
les caractéristiques suivantes :
• Résolution du thermomètre ..........................................: 0,1 °C
• Incertitude d'étalonnage du thermomètre .......................: ± 0,3 °C
• Résolution de l'hygromètre ..........................................: 1 %
• Incertitude d'étalonnage de l'hygromètre ........................: ± 2 %
• Résolution du baromètre .............................................: 1 hPa
• Incertitude d'étalonnage du baromètre ...........................: ± 0,5 hPa
8.3 TEMPÉRATURE DE L'EAU
La température de l'eau est mesurée à l'aide d'un thermomètre ayant les caractéristiques suivantes :
• Résolution du thermomètre ..........................................: 0,1 °C
• Incertitude d'étalonnage du thermomètre .......................: ± 0,3 °C
8.4 AVAP À ÉTALONNER
L'AVAP à étalonner a les caractéristiques suivantes :
• Type .........................................................................: Volume fixe à déplacement d'air
• Volume nominal.........................................................: 100 µL
• Coefficient de dilatation linéaire ....................................: 10 ppm/K
• Coefficient de dilatation cubique ...................................: 30 ppm/K
8.5 CONDITIONS DE MESURE
Les conditions de mesure appliquées correspondent aux exigences mentionnées dans le guide DKD
[17].
• Température de l'eau ..................................................: 21,7 °C
• Dérive de la température de l'eau durant les mesures ......: 0 °C
• Masse volumique de l'eau ...........................................: 997,84 kg/m3
• Température de l'air ....................................................: 21,8 °C
• Dérive de la température de l'air durant les mesures .......: 0 °C
• Pression atmosphérique ..............................................: 1009 hPa
• Dérive de la pression durant les mesures ......................: 0 hPa
• Humidité relative ........................................................: 53 %HR
• Dérive de l'humidité relative durant les mesures .............: 0 %HR

Chapitre 8 : Incertitude – Méthode GUM
8.6 RÉSULTATS DE MESURE

Les résultats de mesure sont les suivants :
• Nombre de mesures ...................................................: 10
• Moyenne des 10 pesées .............................................: 100,059 mg
• Répétabilité des mesures .............................................: 67 nL
8.7 INCERTITUDE SELON RAPPORT TECHNIQUE ISO/TR 20461
Largeur de Incertitude-type, Coefficient de sensibilité, ci Incertitude
Grandeur xi Estimation, xi Distribution Formule
l'intervalle, a u(xi) Valeur Formule ci × u(xi)
1 Incertitude d'étalonnage 100,059 mg 15 µg rectangle 8,7 µg 6.2a 1 nl/µg 7.11 8,7 nl
2 Linéarité 0 µg 6 µg rectangle 3,5 µg 6.2c 1 nl/µg 7.11 3,5 nl
ère
3 Répétabilité de la 1 pesée 0 µg 1,5 µg rectangle 0,87 µg 6.2d 1 nl/µg 7.11 0,87 nl
ème
4 Répétabilité de la 2 pesée 0 µg 1,5 µg rectangle 0,87 µg 6.2d 1 nl/µg 7.11 0,87 nl
Balance ère
5 Résolution de la 1 pesée 1 µg 0,5 µg rectangle 0,29 µg 6.2e 1 nl/µg 7.11 0,29 nl
ème
6 Résolution de la 2 pesée 1 µg 0,5 µg rectangle 0,29 µg 6.2e 1 nl/µg 7.11 0,29 nl
7 Dérive en température 0 µg 0,1 µg rectangle 0,06 µg 6.2g 1 nl/µg 7.11 0,058 nl
8 Correction pour l'évaporation 15 µg 15 µg rectangle 8,7 µg 6.2a 1 nl/µg 7.11 8,7 nl
Eau 9 Température eau 21,7 °C 0,3 K rectangle 0,17 K 6.4d 22 nl/K 7.19 3,9 nl
10 Température air 21,8 °C 0,3 K rectangle 0,17 K 6.5c -0,36 nl/K 7.18a 0,06 nl
Air 11 Pression 1009 hPa 0,5 hPa rectangle 0,29 hPa 6.5f 0,12 nl/hPa 7.16a 0,03 nl
12 Humidité relative 53 %HR 2 %HR rectangle 1,2 %HR 6.5j -0,012 nl/% HR 7.14a 0,01 nl
13 Coefficient dilatation cubique 3E-5 /K 3E-6 /K rectangle 1,7E-6 /K 6.6a -2E+5 nl/K 7.25a 0,31 nl
Pipette
14 Température 21,8 °C 2K rectangle 1,15 K 6.6b -3 nl/K 7.26a 1,74 nl
incertitude type du volume mesuré V20 avec le système gravimétrique 14 nl
15 écart-type de la moyenne des mesures 67 nl normale 21 nl 6.1 1 / 21 nl
incertitude type composée 26 nl
incertitude élargie (k = 2) 52 nl
Tableau 17 : Calculs d'incertitude selon ISO/TR 20461

Commentaires
• Ce rapport technique a été diffusé en novembre 2000. Il est à la base de nombreuses d'accréditations
délivrées pour des laboratoires d'étalonnage.
• Depuis novembre 2000, plusieurs comparaisons inter-laboratoires pilotées par le LNE en 2009, l'IPQ
entre juillet 2011 et juin 2012 à la demande du BIPM et le DKD en 2009 ont eu lieu et ont montré d'im-
portants écarts.
• La formule de la masse volumique de l'eau retenue dans le rapport technique n'est plus utilisée. C'est
celle de Tanaka [9] qui est employée par les laboratoires d'étalonnage.
• La distribution retenue est systématiquement rectangulaire pour toutes les composantes, même pour
celles provenant d'un d'étalonnage.
• Les composantes 3 à 7 et 10 à 14 n'ont pas d'impact significatif sur le système gravimétrique.
• Seules les composantes 1, 8 et la répétabilité ont un impact significatif sur le système gravimétrique.
La norme ISO 8655 étant en cours de révision, on peut penser qu'elle intégrera les nouveaux éléments
mis en évidence durant les inter-comparaisons réalisées.

25 nL
21 nl
20 nL
15 nL
10 nL 8,7 nl 8,7 nl
5 nL 3,5 nl 3,6 nl
0,87 nl 0,87 nl 0,29 nl 0,29 nl
0,058 nl 0,08 nl 0,03 nl 0,01 nl 0,35 nl 0,58 nl
0 nL
Figure 11 : Bilan des incertitudes ISO/TR 20461

8.8 INCERTITUDE SELON GUIDE DKD
Largeur de Incertitude-type, Coefficient de sensibilité, ci Incertitude
l'intervalle, a u(xi) Valeur Formule ci × u(xi)
1 Incertitude d'étalonnage 100,059 mg 15 µg normale 7,5 µg 6.2b 1 nl/µg 7.11 7,5 nL
2 Résolution en charge 1 µg 0,5 µg rectangle 0,29 µg 6.2e 1 nl/µg 7.11 0,3 nL
Balance 3 Résolution à zéro 1 µg 0,5 µg rectangle 0,29 µg 6.2e 1 nl/µg 7.11 0,3 nL
4 Dérive de la température 0 µg 0,2 K rectangle 0,115 K 6.2g 1 nl/µg 7.11 0,1 nL
5 Correction pour l'évaporation 0 µg 15 µg rectangle 8,7 µg 6.3 1 nl/µg 7.11 8,7 nL
6 Incertitude du thermomètre 21,7 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.4d 28 nl/K 7.18a 4 nL
Eau 7 Dérive durant les mesures 0,0 °C 0,2 K rectangle 0,115 K 6.4e 28 nl/K 7.18a 3,2 nL
8 Incertitude de la densité de l'eau 997,84 kg/m³ 10 ppm rectangle 5,8E-6 mg/µL 6.4a -100 µl²/mg 7.22 0,6 nL
9 Incertitude du thermomètre 21,8 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.5c 0,44 nl/K 7.18a 0,07 nL
10 Dérive durant les mesures 0,0 °C 0,2 K rectangle 0,115 K 6.5c 0,44 nl/K 7.18a 0,05 nL
11 Incertitude du baromètre 1009 hPa 0,5 hPa normale 0,3 hPa 6.5g 0,12 nl/hPa 7.16a 0,03 nL
Air
12 Dérive durant les mesures 0 hPa 1 hPa rectangle 0,58 hPa 6.5g 0,12 nl/hPa 7.16a 0,07 nL
13 Incertitude de l'hygromètre 53 %HR 2 %HR normale 1,0 %HR 6.5i 0,012 nl/% HR 7.14a 0,01 nL
14 Dérive durant les mesures 0 %HR 5 %HR rectangle 2,9 %HR 6.5i 0,012 nl/% HR 7.14a 0,03 nL
incertitude type du volume mesuré V20 avec le système gravimétrique 13 nl
18 Répétabilité des mesures 0 mg 67 nl normale 21 nl 6.1 1 / 21 nL
Pipette
19 Manipulation 0 mg 100 nl rectangle 58 nl 6.6c 1 / 58 nL
Différence de température eau /
15 0,0 °C 0,2 K rectangle 0,115 K 6.8a 190 nl/K 7.27b 22 nL
pipette / air
Autres
16 Humidité relative 53 %HR 5 %HR rectangle 2,9 %HR 6.8b 7 nl/% HR 7.28b 20 nL
17 Pression / Altitude 1009 hPa 20 hPa triangle 8,2 hPa 6.8c 1,4 nl/hPa 7.29b 11 nL
Incertitude type composée 71 nl
Incertitude élargie (k = 2) 142 nL
Tableau 18 : Calculs d'incertitude selon DKD R 8-1

Commentaires
• Le guide DKD [17] est très récent (12/2011) et intègre les résultats de la comparaison qui a eu lieu en
2009.
• Comparé au rapport technique ISO/TR [15], le guide DKD [17] utilise de nouvelles composantes (surli-
gnées en jaune) qui ont été mises en évidence lors de comparaisons inter-laboratoires. Avec elles,
l'incertitude élargie est 3 fois plus grande que celle du rapport technique ISO/TR [15].
• Les distributions retenues correspondent à celles appliquées habituellement.
• Les composantes 9 à 14 pour la densité de l'air n'ont pas d'impact significatif.
• La composante sur la densité de l'eau n'a pas d'impact significatif.
• Seules les composantes 1, 5 et 18 à 19 ont un impact significatif sur le système gravimétrique.

70 nL
60 nL 58 nL
50 nL
40 nL
30 nL
21 nL 22 nL
20 nL
20 nL
11 nL
7,5 nL 8,7 nL
10 nL
3 nL 2,4 nL
0,3 nL 0,3 nL 0,1 nL 0,6 nL 0,07 nL 0,05 nL 0,03 nL 0,07 nL 0,01 nL 0,03 nL
0 nL
Figure 12 : Bilan des incertitudes DKD R 8-1

8.9 INCERTITUDE SELON LAB GTA 90 DU COFRAC
Largeur de Incertitude- Coefficient de sensibilité, ci Incertitude
l'intervalle, a type, u(xi) Valeur Formule ci × u(xi)
1 Incertitude d'étalonnage 100,059 mg 15 µg normale 7,5 µg 6.2b 1 nl/µg 7.11 7,5 nL
Balance
2 Correction pour l'évaporation 0 µg 15 µg rectangle 8,7 µg 6.3 1 nl/µg 7.11 8,7 nL
3 Incertitude thermomètre 21,7 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.4d 28 nl/K 7.18a 4 nL
Eau 4 Pérennité thermomètre 0,0 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.4e 28 nl/K 7.18a 4 nL
5 Dérive durant les mesures 0,0 °C 0,2 K rectangle 0,115 K 6.4f 28 nl/K 7.18a 3,2 nL
6 Incertitude thermomètre 21,80 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.5c 0,44 nl/K 7.18a 0,07 nL
7 Pérennité thermomètre 0,0 °C 0,3 K normale 0,15 K 6.5d 0,44 nl/K 7.18a 0,07 nL
8 Dérive durant les mesures 0,0 °C 0,2 K rectangle 0,115 K 6.5m 0,44 nl/K 7.18a 0,05 nL
Air 9 Incertitude baromètre 1009 hPa 0,5 hPa normale 0,25 hPa 6.5g 0,12 nl/hPa 7.16a 0,030 nL
10 Dérive durant les mesures 0 hPa 1 hPa rectangle 0,58 hPa 6.5o 0,12 nl/hPa 7.16a 0,069 nL
11 Incertitude hygromètre 53 %HR 2 %HR normale 1 %HR 6.5h 0,012 nl/% HR 7.14a 0,012 nL
12 Dérive durant les mesures 0 %HR 5 %HR rectangle 2,9 %HR 6.5n -0,012 nl/% HR 7.14a 0,034 nL
Pipette 13 Coefficient dilatation cubique 3E-5 /K 3E-6 /K rectangle 1,7E-6 /K 6.6a -2E+5 nl/K 7.25a 0,31 nl
Incertitude type pour la détermination du volume avec la méthode gravimétrique 14 nl
14 Répétabilité des mesures 0 mg 67 nL normale 21 nL 6.1 1 / 21 nL
Pipette 15 Effet opérateur 0 µL 120 nL normale 40 nL 6.6a 1 / 40 nL
16 Effet de la méthode 0 µL 80 nL rectangle 46 nL 6.7a 1 / 46 nL
Incertitude type composée 67 nl
Incertitude élargie (k = 2) 134 nL
Tableau 19 : Calculs d'incertitude selon guide technique LAB GTA 90 du COFRAC

• Le guide technique COFRAC [16] est aussi très récent (06/2015) et intègre les résultats de la comparai-
son qui a eu lieu en 2009.
• Comparé au rapport technique ISO/TR [15], le guide technique COFRAC [16] utilise de nouvelles com-
posantes (surlignées en jaune). Avec les composantes 15 et 16, l'incertitude élargie aussi importante
que celle du guide DKD [17].
• Les composantes 4, 6, 7, 9 et 11 n'ont pas d'impact significatif sur le système gravimétrique.
• Les distributions retenues correspondent à celles appliquées habituellement.

50 nL
46 nL
45 nL
40 nL
40 nL
35 nL
30 nL
25 nL
21 nL
20 nL
15 nL
8,7 nL
10 nL 7,5 nL
5 nL 3 nL 3 nL 2,4 nL
0,07 nL 0,07 nL 0,05 nL 0,03 nL 0,07 nL 0,01 nL 0,03 nL 0,35 nl
0 nL
Figure 13 : Bilan des incertitudes LAB GTA 90 du COFRAC

8.10 CONCLUSION
Les modes opératoires basés sur le rapport technique ISO/TR [15] doivent être mis à jour pour être en
accord avec les inter-comparaisons réalisées par le LNE, le DKD et le BIPM.

9 INCERTITUDE – MÉTHODE EURACHEM

Les mêmes données que le chapitre précédent sont appliquées pour la méthode numérique, suggérée
par Kragten [7].
9.1 RAPPORT TECHNIQUE ISO/TR 20461
9.1.1 Volume
Le rapport technique ISO/TR [15] combine les formules (5.2), (5.6) et (5.5) pour déterminer le volume.
Cette combinaison permet d'appliquer la méthode numérique développée dans le document EURACHEM.
 k p − ha (k 2t a + k3 ) 
8000 −  1 a 
m  273 ,
15 + t  × (1 − α × (t − 20 ))
V20 = × 4 a
8000  i   k1 pa − ha (k 2t a + k3 ) 
C d
 ∑ ai tW  −  
 i =0   273 ,
15 + t a 
Avec
tW = température de l’eau en °C a0 = 999,853 08 kg/m3
a1 = 6,326 93 × 10-2 °C-1 kg/m3 a2 = 8,523 829 × 10-3 °C-2 kg/m3
a3 = 6,943 248 × 10-5 °C-3 kg/m3 a4 = 3,821 216 × 10-7 °C-4 kg/m3
αC = coefficient de dilatation, en°C-1 ρa = densité de l'air en kg/m3
ta = température de l’air en °C pa = pression atmosphérique en hPa
ha = humidité relative en pourcentage k1 = 0,34844 en °C/hPa
k2 = -0,00252 kg/m3 k3 = 0,020582 en °C
9.1.2 Incertitude
Comme la formule ne mentionne pas la résolution de la balance ou sa linéarité par exemple, les incerti-
tudes types relatives 1 à 7 du chapitre 8.7 sont regroupées avec une somme quadratique pour former
l'incertitude type de la grandeur masse.
Grandeur masse évaporation temp. eau temp. air pression humidité coef. dilatation température répétabilité
Valeur 100,059 mg 0,000 mg 21,70 °C 21,8 °C 1009 hPa 53 % 3,0E-5 /K 21,8 °C 1
Incertitude type 0,0094 mg 0,0087 mg 0,17 °C 0,17 °C 0,29 hPa 1,2 % 1,7E-6 /K 0,58 °C 0,021%
temp. air 21,8 °C 21,8 21,8 21,8 22,0 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8
humidité air 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 54,2 % 53 % 53 % 53 %
pression air 1009 hPa 1009 1009 1009 1009 1009,3 1009 1009 1009 1009
temp. eau 21,7°C 21,7 21,7 21,87 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7
masse 100,059 mg 100,068 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059
évaporation 0,000 mg 0,000 0,0087 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000
coef. dilatation 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,0000317 0,00003 0,00003
température 21,8 °C 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 22,38 21,8
répétabilité 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00021
V20 100,376 µl 100,385 100,385 100,380 100,376 100,376 100,376 100,376 100,374 100,397
u(y, xi) 9,4 nl 8,7 nl 3,9 nl 0,06 nl 0,03 nl 0,01 nl 0,31 nl 1,7 nl 21 nl
Inc. type composée 26 nl Système gravimétrique 14 nl
Inc. élargie ± 52 nl
Tableau 20 : Calculs d'incertitude selon ISO/TR 20461

9.1.3 Commentaires
Pas de différence significative avec la méthode GUM, les incertitudes composées sont identiques de
même pour l'incertitude du système gravimétrique.

Chapitre 9 : Incertitude – Méthode Eurachem
9.2 GUIDE DKD R8-1

9.2.1 Volume
Le guide DKD [17] utilise les formules (5.6), (5.3) et (5.5) pour déterminer le volume. Cette combinai-
son permet d'appliquer la méthode numérique développée dans le document EURACHEM.
 k p − ha (k 2t a + k3 ) 
8000 −  1 a 
m  273 ,
15 + t 
V20 = × a
× ...
8000   2
 (
 )(
 a 1 − tW + a1 tW + a2   −  k1 pa − ha (k 2t a + k3 )  )
 5
 
a3 tW + a4   
 (
273,15 + t a )


...(1 − αC × (t d − 20 ))
Avec
a2 = 301,797 en °C a3 = 52 2528,9 en °C2
a4 = 69,348 81en °C a5 = 999,9749 50 en kg/m³
k1 = 0,348 44 en °C/hPa k2 = -0,002 52 kg/m3
k3 = 0,020 582 en °C
9.2.2 Incertitude
Comme la formule ne mentionne pas la résolution de la balance ou sa linéarité par exemple, les incerti-
tudes types relatives 1 à 7 du chapitre 8.7 sont regroupées avec une somme quadratique pour former
l'incertitude type de la grandeur masse.
Grandeur temp. air humidité pression temp. eau densité de l'eau masse évaporation manipulation répétabilité autres
Valeur 21,8 °C 53 % 1009 hPa 21,70 °C 1 100,059 mg 0,000 mg 1 1 1
Incertitude type 0,19 °C 3,1 % 0,6 hPa 0,189 °C 0,0006% 0,0075 mg 0,0087 mg 0,058% 0,021% 0,032%
temp. air 21,8 °C 22,0 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8
humidité air 53 % 53 % 56,1 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 %
pression air 1009 hPa 1009 1009 1009,6 1009 1009 1009 1009 1009 1009 1009
temp. eau 21,7°C 21,7 21,7 21,7 21,9 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7
densité de l'eau 1 1 1 1 1 1,000006 1 1 1 1 1
masse 100,059 mg 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059 100,067 100,059 100,059 100,059 100,059
évaporation 0,000 mg 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,009 0,000 0,000 0,000
manipulation 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00058 1 1
répétabilité 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00021 1
autres 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00032
V20 100,379 µl 100,379 100,379 100,379 100,384 100,380 100,387 100,389 100,438 100,401 100,412
u(y, xi) 0,25 nl 0,03 nl 0,07 nl 4,3 nl 0,58 nl 8,1 nl 9,3 nl 58 nl 22 nl 33 nl
Inc. composée 72 nl Système gravimétrique 13 nl
Tableau 21 : Calculs d'incertitude selon DKD R 8-1

9.2.3 Commentaires

Chapitre 9 : Incertitude – Méthode Eurachem
9.3 GUIDE TECHNIQUE LAB GTA 90 DU COFRAC

9.3.1 Volume
À part la formule (5.6) pour calculer le volume, le guide technique COFRAC [16] ne mentionne pas de
formules particulières pour calculer les densités de l'air et de l'eau. Pour d'appliquer la méthode numérique
du document EURACHEM, les formules (5.3) et (5.5) sont appliquées.
9.3.2 Incertitude
Grandeur temp. air humidité pression temp. eau masse évaporation coef. dilatation opérateur répétabilité méthode
Valeur 21,8 °C 53 % 1009 hPa 21,70 °C 100,059 mg 0,000 mg 3,0E-5 /K 1 1 1
Incertitude type 0,24 °C 3,1 % 0,6 hPa 0,24 °C 0,0075 mg 0,0087 mg 1,7E-6 /K 0,040% 0,021% 0,046%
temp. air 21,8 °C 22,04 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8 21,8
humidité air 53 % 53 % 56,1 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 % 53 %
pression air 1009 hPa 1009 1009 1009,6 1009 1009 1009 1009 1009 1009 1009
temp. eau 21,7°C 21,7 21,7 21,7 21,94 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7 21,7
masse 100,059 mg 100,059 100,059 100,059 100,059 100,067 100,059 100,059 100,059 100,059 100,059
évaporation 0,000 mg 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,009 0,000 0,000 0,000 0,000
coef. dilatation 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,00003 0,000032 0,00003 0,00003 0,00003
opérateur 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00040 1 1
répétabilité 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00021 1
méthode 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1,00046
V20 100,376 µl 100,375 100,376 100,376 100,381 100,383 100,384 100,375 100,416 100,397 100,422
u(y, xi) 0,80 nl 0,03 nl 0,07 nl 5,5 nl 7,5 nl 8,7 nl 0,31 nl 40 nl 21 nl 46 nl
Inc. composée 67 nl Système gravimétrique 13 nl
Tableau 22 : Calculs d'incertitude selon guide technique LAB GTA 90 du COFRAC

9.3.3 Commentaires
9.4 COMPARATIF
La figure 14 montre que l'incertitude élargie en application pure du rapport technique ISO/TR [15] est
optimiste. Il est important d'adapter son référentiel pour prendre en compte les travaux des comparaisons.
La figure 14 montre que l'incertitude liée au système gravimétrique est de proportion semblable avec les
différents référentiels.
Le calcul de l'incertitude selon l'article SFSTP [1] publié en 2004 est intégré dans la figure 14.
160 nl
GUM - Incertitude élargie EURACHEM - Incertitude élargie
GUM - Incertitude composée EURACEHM - Incertitude composée

140 nl
142 nl144 nl
GUM - Système gravimétrique EURACHEM - Système gravimétrique
134 nl134 nl
120 nl
100 nl
80 nl
60 nl 71 nl 72 nl
67 nl 67 nl
50 nl 48 nl 52 nl 52 nl
40 nl
20 nl 25 nl 24 nl 26 nl 26 nl
13 nl 12 nl 14 nl 14 nl 13 nl 13 nl 14 nl 13 nl
0 nl
SFSTP ISO/TR 20461 DKD R8-1 LAB GTA COFRAC
Figure 14 : Comparatif des incertitudes

10 IDENTIFICATION DES COMPOSANTES
La signification et l'identification des composantes utilisées dans cette brochure sont résumées dans le
tableau 23 :
Unité
Identification Composante
SI Usuelle
E Erreur du volume m³ ml
mi Indication de la balance de la masse d’eau pesée kg g
m Masse d’eau pure kg g
mich Valeur indiquée par la balance (masse du volume délivré) kg g
m0 Valeur indiquée par la balance après tarage kg g
n Nombre de mesures / /
ρa Densité de l’air kg/m³ g/ml
pa Pression atmosphérique de l'air hPa hPa
ha Humidité relative % %
ta Température de l’air °C °C
ρb Densité des poids de la balance kg/m³ g/ml
ρW Densité de l’eau à tW °C kg/m³ g/ml
s Écart-type des mesures m³ ml
tW Température de l’eau °C °C
td Température du cône °C °C
αC Coefficient de dilatation cubique de l'AVAP °C-1 °C-1
V20 Volume à la température de référence de 20°C m³ ml
V20 Volume moyen à la température de référence de 20°C m³ ml
Vi20 Volume individuel mesuré m³ ml
uC(V20) Incertitude type composée du volume V20 kg/m³ ml
U(V20) Incertitude élargie du volume V20 m³ ml
Tableau 23 : Signification et identification des composantes utilisées

11 DOCUMENTS DE RÉFÉRENCE
Cette brochure a été rédigée sur la base des référentiels suivants :
[1] Article STP PHARMA PRATIQUES – Volume 14, n°1, pages 23–55, janvier/février 2004 – Procédure
pour l’étalonnage d’instruments volumétriques
[2] Article STP PHARMA PRATIQUES 8 (6) 500–518 1998 – Procédure pour la vérification de balances
[3] Article STP PHARMA PRATIQUES 10 (4) pages 181–211, juillet/août 2000 – Procédure pour
l’étalonnage de thermomètres
[4] Article STP PHARMA PRATIQUES 12 (1) pages 11–11, 2002 – Procédure pour l’étalonnage
d’hygromètres
[5] Article STP PHARMA PRATIQUES 8 (6) pages 500–518, 1998 – Procédure pour la vérification de pi-
pettes automatiques
[6] Article STP PHARMA PRATIQUES 9 (2) pages 141–159, 1999 – Guide de bonnes pratiques de mé-
trologie
[7] EURACHEM/CITAC Guide CG 4, Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement – Second Edition
[8] NF ENV 13005:1999, Normes fondamentales – Guide pour l'expression de l'incertitude de mesure
[9] Metrologia, 2001, 38(4), 301-309, Recommended table for the density of water between 0°C and
40°C based on recent experimental reports – Tanaka M., Girard G., Davis R., Peuto A., Bignell N.
[10] Recommandation OIML R111, 2004, Poids des classes E1, E2, F1, F2, M1, M1–2, M2, M2–3 et M3 Par-
tie 1 : Exigences métrologiques et techniques
[11] ISO 10012:2003, Systèmes de management de la mesure — Exigences pour les processus et les
équipements de mesure
[12] ISO8655-2:2002, Appareils volumétriques à piston – Pipettes à piston
[13] ISO8655-6:2002, Appareils volumétriques à piston – Méthodes gravimétriques pour la détermination
de l’erreur de mesure
[14] ISO8655-7:2006, Appareils volumétriques à piston – Méthodes non gravimétriques pour l’estimation
de la performance d’équipement
[15] ISO/TR 20461:2000, Détermination de l'incertitude de mesure pour les mesurages volumétriques ef-
fectués au moyen de la méthode gravimétrique
[16] COFRAC LAB GTA 90 – Guide technique d'accréditation – Étalonnage des instruments volumétriques à
piston
[17] Guideline DKD-R 8-1 – Calibration of piston-operated pipettes with air cushion, issue 12/2011
[18] Expert Report DKD-E 8-1 – Experimental study on the calibration of piston-Operated pipettes with air
cushion, Issue 09/2013
[19] Expert Report DKD-E 8-2 – Analysis of influencing parameters on calibration of piston-operated pi-
pettes with air cushion, issue 05/2013
[20] Expert Report DKD-E 8.3 – The influence of altitude on the volume result of a piston pipette with air
cushion, issue 09/2013
[21] IPQ Article "Performance studies in micropipette calibration" by Nelson Almeida, Elsa Batista, Eduarda
Filipe

Chapitre 11 : Documents de Référence
[22] IUPAC Role of reference materials for the realization of physicochemical properties. Past, present, and
future by Kenneth N. Marsh – Pure Appl. Chem., Vol. 72, No. 10, pp. 1809–1818, 2000
[23] Metrologia, 1992, 29, 67-70, Equation for the determination of the density moist air (1981/91) by
R. S. Davis.
[24] ISO 3696 Eau pour laboratoire à usage analytique – Spécification et méthodes d'essai, 1995
[25] JCGM 200:2008 VIM – Vocabulaire international de métrologie – Concepts fondamentaux et géné-
raux et termes associés, 2008
[26] 16th International Congress of Metrology – Performance studies in micropipette calibration – by Nel-
son Almeidaa, Elsa Batista, Eduarda Filipe, IPQ - Instituto Portugues da Qualidade, Portugal
[27] Comparison of Micropipettes Calibration by Accredited Laboratories » 4th International Metrology Con-
ference CAFMET Marrakech, Morocco 23-27 April 2012, by Tanguy Madec, Soraya Amarouche

Mettler-Toledo SAS n'assume aucune responsabilité

des erreurs éventuelles et de leurs conséquences.
Toute reproduction, par quelque procédé que ce soit, n'est acceptée qu'avec l'accord de Mettler-Toledo SAS
 Brochure « Étalonnage du volume des micropipettes »

ETALONNAGE DU VOLUME DES µPIPETTES_V3B.DOCX, édité à Viroflay, juillet 2015

Etalonnage Du Volume Des Pipettes - V3c

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Etalonnage Du Volume Des Pipettes - V3c

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Mettler-Toledo SAS

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 1 / 55

1 TABLE DES MATIÈRES

Page 2 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 3 / 55

2 OBJET ET DOMAINE D’APPLICATION

Plage utile de volume

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 4 / 55

Volume sélectionné – Volume d'essai

Volume du coussin d'air (volume mort)

Erreur maximale tolérée

Page 5 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

2.3 DESCRIPTION DU FONCTIONNEMENT

Figure 1 : Aspiration du liquide dans l'AVAP

Page 6 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 7 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

3 ÉTALONNAGE D'UN VOLUME

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 8 / 55

3.3.2 Temps d'attente

Page 9 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 10 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 11 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Figure 4 : AVAP à volume variable se comportant différemment selon le volume sélectionné

Page 12 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Figure 5 : Influence de la variation de l'altitude sur le volume délivré

Page 14 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

3.9 MOYENS D'ÉTALONNAGE

Page 15 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Figure 6 : Piège à évaporation placé dans une chambre de pesée

Page 16 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 17 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 19 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 20 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 21 / 55

Page 23 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 24 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 25 / 55

6.2.2 Guide DKD

Pression Influences Contribution liée au

Page 26 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

6.3 QUANTIFICATION DES COMPOSANTES

Page 27 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 28 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

6.3.5 Densité de l’air / Température / Humidité / Pression

Page 29 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Page 30 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

6.3.9 Influences systématiques

6.4 CALCUL DE L'INCERTITUDE

Page 31 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Important : Dans la plupart des applications, il est recommandé de fixer la valeur de k à 2.

Page 32 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

et les constantes de l'échelle ITS-90 :

7.1.2 Formule BIPM (Tanaka)

et les constantes : et les constantes :

Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx Page 33 / 55

Page 34 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Coefficient de sensibilité Formule OIML R111

Page 35 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

k2 = -0,00252 kg/m3 k2 = -2,52 x 10-6 g/mL

Page 36 / 55 Etalonnage du volume des µpipettes_V3b.docx

Coefficient de sensibilité Formule de Spieweck

7.4.2 Coefficient de sensibilité pour la pression atmopshérique

Ce coefficient dépend du volume et de la température de l'air