Je dédie ce travail accompagné d’un profond amour

A mon père LOKO Georges Marcos et à ma mère MONTONDJI Charlo e

REMERCIEMENT

i
Au Président du jury : Pr. NGOUNGOU qui nous a fait l’honneur de présider notre jury.
A Monsieur MOUENGOFOU KOUMBA Jean, Notre directeur de mémoire. Pour votre dévouement,
pour avoir accepté de nous encadrer et pour tous les conseils, les astuces pour la rédac on de ce
mémoire. Perme ez-nous, de vous témoignez notre profond respect et notre reconnaissance.

A Monsieur NZENGUE Directeur de l’Ecole de Santé de Libreville (ESL). Perme ez-nous de vous
témoigner notre profonde gra tude pour l’améliora on con nue de la qualité des enseignements
dans votre établissement.

A Monsieur BENGONE Maturin, Major Adjoint du laboratoire du CHU d’Owendo. Pour le temps
que vous avez consacré à notre encadrement professionnel. Perme ez-nous de vous témoignez
notre profond respect et notre reconnaissance pour votre par cipa on à l’améliora on de la
qualité de ce travail et avoir accepté de partager vos connaissances de manière très
pédagogique.

Au Personnel du laboratoire du Centre Hospitalier d’Owendo(CHUO), pour la par cipa on à la

réalisa on de notre étude, pour les conseils, idées, apprécia ons et remarques ayant permis
l’améliora on de notre travail.

Au Corps Administra f de l’Ins tut Supérieur de L’Ecole de Santé de Libreville (ESL), pour la
par cipa on à ma réussite au fil du temps pendant mon parcours académique de prêt et de loin.

A tous mes Camarades de la promo on de licence en biologie 2022. Ma profonde gra tude
pour les échanges et les moments passés ensemble.

A tous, nous leur vouons une reconnaissance sans limite.

ii
 LISTE DES TABLEAUX

Tableau I : Liste des antibiotiques utilisés dans cette étude.

Tableau II : Aspect macroscopique de l’urine.

Tableau III : Interprétation bactério-clinique liée à l'infection urinaire.

Tableau IV : Répartition des souches isolées selon le Gram.

Tableau V : : Répartition des souches isolées selon l’âge.

Tableau VI : Répartition des souches isolées en fonction des germes retrouvés.

Tableau VII : Profil de résistance globale des entérobactéries isolées aux antibiotiques
n=14.

Tableau VIII : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Pseudomonas

aéroginosa n=1.

Tableau IX : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Staphylococcus n=3.

Tableau X : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Streptococcus n=2.

iii
 LISTE DES FIGURES

Figure 1 : Appareil urinaire de la femme.

Figure 2 : Aspect macroscopique des colonies d’E.coli sur EMB.

Figure 3 : Aspect macroscopique des colonies de K. pneumoniae.

Figure 4 : Présentation de cocci GRAM négatif après coloration au bleu de méthylène à

gauche et après coloration de GRAM à droite.

Figure 5 : Présentation de colonies de Neisseria sur gélose au sang cuit.

Figure 6 : Incubateur et jarre et uriline.

Figure7 : Vitek-2. Instrument automatises pour l’identification et antibiogramme.

Figure8 : Uriline. Culture et numération des bactéries urinaires.

Figure 9 : Cellule Kovaslide sur la platine d'un microscope

Figure 10 : Etapes de la coloration de GRAM.

iv
 LISTE DES ABREVIATIONS

ADH : Adenine dehydrogenase.

BGP : Bacilles Gram Négatif.

BGN : Bacilles Gram Négatif.

BA : bactériurie asymptomatique.

BLSE : β-lactamases à spectre étendu.

C1G : Céphalosporine de 1ere Génération.

C2G : Céphalosporine de 2eme Génération.

C3G : Céphalosporine de 3eme Génération.

CHU : Centre Hospitalier Universitaire.

CHUO : Centre Hospitalier Universitaire d’Owendo.

CLED : Cystine Lactose Electrolyte Deficient.

CNA : Acide Nalidixique Colistine.

C3G : Céphalosporine de 3ème génération.

DCI : Dénomination Commerciale Internationale.

ECBU : Examen Cytobactériologique des Urines.

EMB :Eosine Bleu de Méthylène.

IVU : Infections des voies urinaires.

v
LDC : Lysine décarboxylase. Ofloxacine.

MSA2 : Mannitol Salt Agar.

ONPG : Orthonitrophényl-β-D-galactopyrannoside.

PVX : PolyViteX

TDA : Tryptophane désaminase.

VP : Vosges-Pro

vi
 TABLE DES MATIERES

DEDICACE……………………………………………………………………………………i
REMERCIEMENTS…………………………………………………………………………. ii
LISTE DES TABLEAUX…………………………………………………………………… iii
LISTE DES FIGURES………………………………………………………………………. iv
LISTE DES ABREVIATIONS………………………………………………………………. v
TABLE DES MATIERES…………………………………………………………………… vi
INTRODUCTION……………………………………………………………………………. 1
I. GENERALITES.................................................................................................................2

I.1.1 Infections urinaires................................................................................................2

I.1.2 Infections urinaires simples..................................................................................2

I.1.3 Infections urinaires à risque de complication.......................................................2

I.1 DEFINITIONS.............................................................................................................2
I.2 ETUDES DES PRINCIPAUX GERMES RESPONSABLE DES INFECTIONS
URINAIRES...........................................................................................................................4
I.2.1 Les Entérobactéries...............................................................................................4

I.2.1.1 Escherichia........................................................................................................4
I.2.1.2 Klebsiella pneumoniae......................................................................................5
I.2.1.3 Enterobacter sp..................................................................................................7
I.2.1.4 Serratia marcescens...........................................................................................7
I.2.1.5 Entérobactéries opportunistes...........................................................................8
I.2.1.6 Pseudomonas...................................................................................................10
I.2.2 Coques gram négatifs..........................................................................................11

I.2.3 Coques gram positifs...........................................................................................13

I.3 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE DES INFECTIONS URINAIRES.............14

I.4 PLACE DES BETA LACTAMINES DANS L’ARSENAL THERAPEUTIQUE. . .16
I.4.1 Classification des β-lactamines...........................................................................16

I.4.2 MODE D’ACTION DES β LACTAMINES......................................................18

I.4.3 LES SPECTRES D’ACTIVITES.......................................................................19

II. MATERIELS ET METHODES.......................................................................................21

II.1 TYPE ET PERIODE D’ETUDE................................................................................21

vii
 II.2 CADRE D’ETUDE....................................................................................................21
II.3 ECHANTILLONNAGE ET TAILLE DE L’ECHANTILLON................................21
II.3.1 Critères d’inclusion et d’exclusion.....................................................................21

II.3.1.1 Critères d’inclusion.........................................................................................21

II.3.1.2 Critères d’exclusion.........................................................................................21
II.4 MATERIEL TECHNIQUE........................................................................................21
II.4.1 Matériels pour la réalisation................................................................................21

II.4.2 Matériel pour l’isolement des souches................................................................21

II.4.3 Matériel pour la réalisation de l’identification et de l’antibiogramme...............22

II.4.3.1 Méthode automatisée.......................................................................................22

II.4.3.2 Méthode manuelle...........................................................................................22
II.4.3.3 Autres matériels :............................................................................................22
II.5 PROCEDURE............................................................................................................23
II.5.1 PRELEVEMENT................................................................................................23

II.5.1.1 Prélèvement de l’urine....................................................................................23

II.5.1.2 Réalisation du prélèvement.............................................................................23
II.5.2 PROTOCOLE D’ANALYSE DE L’ECBU AU LABORATOIRE...................24

II.5.2.1 PREMIERE ETAPE : Examen macroscopique..............................................24

II.5.2.2 DEUXIEME ETAPE : Examen microscopique..............................................25
II.5.2.3 La culture.........................................................................................................27
II.5.2.4 L’identification................................................................................................27
II.5.2.5 Antibiogramme................................................................................................28
III. RESULTATS.................................................................................................................29
IV. DISCUSSION................................................................................................................34
V. CONCLUSION.................................................................................................................36

viii
 INTRODUCTION

Les infections des voies urinaires (IVU) sont parmi les infections bactériennes les plus
communes [CITATION BOU13 \l 1036 ]. Elles sont courantes chez les femmes enceintes et
constituent un défi thérapeutique majeur, car le risque de complications graves chez la mère
et son enfant est élevé. C’est une pathologie très connue tant en médecine de ville qu’en
pratique hospitalière. Elles sont situées en seconde position, après les infections respiratoires
[CITATION SEK08 \l 1036 ] .

Ainsi, l’urine est un liquide organique de couleur jaune ambrée, d’odeur safranée, souvent
acide. Elle est sécrétée par les reins puis emmagasinée dans la vessie entre les mictions.

L’infection des voies urinaires se produit lorsque les micro-organismes, habituellement des
bactéries du tube digestif grimpent à l’ouverture de l’urètre et se multiplient pour provoquer
une infection [ CITATION BOU13 \l 1036 ].

En outre, les infections urinaires inférieures comprennent la cystite (Infection de la vessie) et

les infections urinaires supérieurs impliquent le rein. La résistance aux antibiotiques des
bactéries rencontrées en milieu communautaire peut être naturelle ou acquise [ CITATION
BOU13 \l 1036 ]. Depuis plus de 20 ans, la résistance des entérobactéries aux céphalosporines
de 3ième génération ne cesse de se renforcer . Le mécanisme le plus fréquent est la
résistance aux ß-lactamines qui peut se manifester par différents profils de sensibilité.
Pourquoi les germes urinaires résistent à la famille des ß-lactamines chez la femme enceinte ?

Nous nous proposons, pour notre part comme obdjectif général d’étudier le profil de
résistances aux ß-lactamines liés à l’infection urinaires chez la femme enceintes aux CHUO.

Pour cela nous nous sommes fixés comme objectifs spécifiques :

 Déterminer la fréquence de l’infection urinaire associé à la grossesse.

 Décrire le profil clinique des patients.
 Identifier les germes en cause et leur résistances aux β-lactamines.

1
I. GENERALITES

I.1 DEFINITIONS

I.1.1 Infections urinaires

Les infections urinaires sont des affections du tractus urinaire qui peuvent toucher une ou
plusieurs parties du système urinaire, notamment : les reins, les uretères, la vessie et l’urètre.
Elles se manifestent le plus souvent par des douleurs ou des sensations de brulures lors de la
mictions (l’émission de l’urine) parfois par des douleurs abdominales et des fièvres.

On distingue au niveau du système urinaire les fonctions suivantes :

-Les reins : assurent la filtration du sang. Ils permettent l’élimination des déchets et jouent
également un rôle important dans la régulation des liquides corporels et de la pression
sanguines.

-Les uretères : sont des petits canaux qui permettent le passage de l’urine des reins à la
vessie.

-La vessie : fait office de réservoir d’urine.

-L’uretère : conduit l’urine de la vessie à l’extérieur du corps.

I.1.2 Infections urinaires simples

Ce sont des infections urinaires survenant chez des patients sans facteurs de risque de
complication.

I.1.3 Infections urinaires à risque de complication

Ce sont des infections urinaires survenant chez des patients ayant au moins un facteur de
risques pouvant rendre l’infection plus grave et le traitement plus complexe.

I.1.3.1 Infection urinaire grave

C’est soit une infection urinaire masculine, soit une pyélonéphrite aigue associé à un sepsis
grave, ou un choc septique ou une indication du drainage chirurgical.

 Les différents types d’infections urinaires

 On distingue 3 types d’infections urinaires, selon la localisation de l’infection.

 La cystite infectieuse

2
De loin la forme d’infection urinaire la plus courante, la cystite touche presque uniquement
les femmes. Il s’agit d’une inflammation de la vessie. Le plus souvent, cette inflammation est
provoquée par la prolifération de bactéries intestinales de types Escherichia coli, qui sont
nombreuses aux environ de l’anus. Les bactéries passent de la région anale et vulvaire a la
vessie en remontant par l’urètre. Tout ce qui gêne la vidange de la vessie augmente le risque
de cystite, car cela augmente la rétention d’urine, donc le temps de prolifération des bactéries.
La cystite s’accompagne toujours d’une urétrite.

 L’urétrite infectieuse

C’est une infection qui touche uniquement l’urètre (le conduit qui relie la vessie au méat
urinaire), on l’appelle urétrite. Il s’agit souvent d’infections sexuellement transmissibles
(IST), très courante chez les hommes et les femmes peuvent aussi en souffrir. Différents
agents infectieux peuvent causer l’urétrite. Les plus rencontres sont la chlamydiae et le
Nesseria gonorrhée (la bactérie responsable de la gonococci).Chez l’homme l’urétrite peu
s’accompagner d’une prostatite.

 La pyélonéphrite

La pyélonéphrite est une affection plus grave. Elle désigne l’inflammation du bassinet (la
cavité du rein collectant les urines) et du rein lui-même. Celle-ci résulte généralement d’une
infection bactérienne. Il peut s’agir d’une complication due à une cystite non traitée ou mal
traitée qui conduit à la remontée des bactéries de la vessie vers les reins. Et à leur
prolifération à ce niveau. La pyélonéphrite aigue survient plus souvent chez la femme
enceinte. Ainsi que chez les enfants dont une malformation des uretères provoque un reflux
de l’urine de la vessie vers les reins.

3
Figure 1: Appareil urinaire de la femme. Source : http://www.google.com

Appareil urinaire produisant l’urine,la stocke et l’élimine avec les toxines et les déchets.

L’urètre est un tube qui conduit l’urine de la vessie jusqu’à l’orifice urinaire.

I.2 ETUDES DES PRINCIPAUX GERMES

I.2.1 Les Entérobactéries
I.2.1.1 Escherichia
a) Principaux caractères bactériologiques :
Elle est mobile, indole (+), lactose (+), et citrate (-)
Il existe différents sérotypes selon :
-Ag somatique O et flagellaire H (ex: E. coli O157:H7)
-Ag capsulaire K (ex: E. coli K1)

4
 b) Habitat :
 C’est un hôte normal du tube digestif de l'homme et des animaux (107-109/g selles)
 C’est l’espèce dominante de la flore aérobie (car un a 99 % d'anaérobies strictes)
 Elle est retrouvée dans l'environnement (contamination fécale et colimétrie)
c) Pouvoir pathogène :
� Infections extra-intestinales :
. Infections urinaires (cystites, pyélonéphrites)
. Infections abdominales : cholécystites, péritonites, appendicites
. Infections génitales : prostatites
. Infections ostéo-articulaires
. Bactériémies (risque de choc endotoxinique) :50 % des cas
. Méningites néonatales (dues à E. coli K1) et neurochirurgicales
. Infections puerpérales
. Infections de plaies chirurgicales (nosocomiales)
� Infections intestinales : diarrhées infectieuses
Il existe de 6 pathovars selon les facteurs de virulence
d) Diagnostic biologique :
-L’isolement se fait sur gélose ordinaire ou milieu sélectif (type Drygalski)
-On peut utiliser des milieux chromogènes
- On peut utiliser des milieux spécifiques pour la recherche des EHEC (E coli Entero
hémorragique)

Figure2: Aspect macroscopique des

colonies d’E.coli sur EMB. Source :
IMG_20201024_143515.jpg .
La particularité des colonies sur EMB est le reflet métallique qui est la caractéristique propre
à E.coli.

-L’identification par galerie biochimique (type Api20E)

-On peut utiliser les antisérums pour typage Ag O, H (Ag K1)
-Recherche de gènes de virulence par PCR

I.2.1.2 Klebsiella pneumoniae

a) Caractères morphologiques et culturaux

5
Les Klebsielles sont des bacilles à coloration de Gram négative, immobiles, de dimensions
comparables à celles d’E.coli.

En général ils ont une culture très facile sur tous les milieux usuels. Sur les milieux
classiques d’isolement pour entérobactéries (Drigalski, Hektoen, Mac Conkey), les colonies
de Klebsiella pneumoniae sont bombées, muqueuses, parfois filantes à l’anse de platine, d’un
diamètre de 3 à 4 mm [ CITATION SOU03 \l 1036 ].

b) Caractères biochimiques
 Fermentation des sucres : glucose (+), lactose (+) ;
 Réduction des nitrates en nitrites : NO3+ ;
 Métabolisme du tryptophane en indole : indole (-) ;
 ONPG (+), LDC (+); ¾ H2S (-).
 Urease (+), TDA (-).
 VP (+) [ CITATION SEK11 \l 1036 ].

c) Pouvoir pathogène

Klebsiella pneumoniae est le chef de file du groupe des entérobactéries pathogènes

opportunistes très incriminé dans les infections nosocomiales, Elle est responsable
d'infections diverses : infections suppuratives, urinaires, respiratoires, biliaires, hépatiques
intra-abdominales, bactériémies, septicémies, Infections de sites opératoires [ CITATION
SEK11 \l 1036 ]. Elle est également incriminée dans les infections urinaires 5-15 % des
infections urinaires [ CITATION MAU96 \l 1036 ].

d) Résistance aux antibiotiques

 Résistance naturelle

K. pneumoniae est naturellement résistante aux pénicillines (amoxicilline, ticarcilline) par

production d’une β-lactamase de classe A d’espèce (chromosomique) appelée K2, inhibée par
l’acide clavulanique.

 Résistance acquise

-Résistance aux inhibiteurs des β-lactamases : des bêta-lactamases de classe A de type IRT
insensibles à l’acide clavulanique (mutants d’enzymes TEM) ont été décrites.

6
 β-lactamases de classe A à spectre étendu (BLSE): de nombreuses souches de K.
Pneumoniae sont productrices de BLSE. Pour la plupart d’entre elles, la production de BLSE
se traduit par des images de synergie très caractéristiques entre les céphalosporines de 3ème
génération et l’acide clavulanique (disque d’augmentin ou de claventin).

-ß-lactamases plasmidiques de classe C: chez Klebsiella pneumoniae, on connait un grand

nombre de ß-lactamases plasmidiques de classe C qui dérivent des céphalosporinases
chromosomiques.

-La résistance à la céfépime et au cefpirome: a été récemment décrite chez K. pneumoniae et

semble liée à la combinaison de deux mécanismes: la production à haut niveau d’une BLSE
(ß-lactamases à spectre étendu) et une diminution de la perméabilité de la membrane externe.

-La résistance à l’imipénem: elle peut être due à l’association d’une imperméabilité de la
membrane externe, ou une production à haut niveau d’une ß-lactamase plasmidique de classe
C [ CITATION SOU03 \l 1036 ].

Figure 3 : Aspect macroscopique des colonies de K. pneumoniae sur Source :

http://www.google.com

Croissance de l’espèce klebsiella pneumonia sur milieux de culture avec agar sanguin :
colonies opaques,lisses et mucoides.

I.2.1.3 Enterobacter sp
a- Caractères morphologiques et culturaux

Enterobacter sp est un bacille à coloration de Gram négative biochimiquement très

semblable à klebsiella mais il est mobile, et ne possède pas de capsule polysaccharidique.

7
 Enterobacter sp comprend plusieurs espèces dont Enterobacter. aerogenes et Enterobacter.
Cloacae qui sont les agents les plus fréquents d’infections urinaires. Ces espèces se déplacent
de la flore fécale vers les voies urinaires grâce aux flagelles [ CITATION GOU00 \l 1036 ].

b- Caractères biochimiques

-Enterobacter cloacae

C’est l’espèce type du genre Enterobacter

- Adenine dehydrogenase (ADH) (+), lysine décarboxylase LDC (-), ornithine

décarboxylase ODC (-), ¾ Fermente le D-sorbitol le saccharose et le mélibiose.

-Enterobacter aeroginosa

- Métabolisme du tryptophane en indole : indole (-); ODC (+);uréase(-) (Freny et al.,

2006).

I.2.1.4 Serratia marcescens

a- Caractères morphologiques et culturaux

Famille des Enterobacteriaceae, qui peut produire des pigments.

b- Caractères biochimiques

Serratia marcescens appartient au groupe des bactéries : ONPG (+), VP(+), fermentation des
sucres : glucose (+), réduction des nitrates en nitrites (+), métabolisme du tryptophane en
indole (-), H2S (-), urease (-), TDA (-) [ CITATION SOU03 \l 1036 ].

c- Pouvoir pathogène

Serratia marcescens, généralement est un pathogène opportuniste qui cause l’infection chez
les patients immunodéprimés. Parmi les facteurs pathogéniques trouvés à des souches de
Serratia sont ; formation des fimbriaes, production de protéine sidérophores, capacité de
résister à des actions bactéricides de sérum et production de protéase [ CITATION GRI06 \l
1036 ].

d- Résistance aux antibiotiques

 Résistance naturelle

S. marcescens d’habitude est résistant à l’ampicilline, à l’amoxicilline, l’amoxicilline

8
clavulanate, céphalosporine à spectre étroit, céphamycine, céfuroxime, nitrofuranto ٨ ne et
colistine. Il porte aussi un gène chromosomique ampC qui peut élargir la résistance à
plusieurs antibiotiques de β-lactamine [ CITATION STE11 \l 1036 ].

 Résistance acquise
- β-lactamases de classe A à spectre étendu (BLSE) : des variantes de type TEM et
SHV ont été décrits,
- Mutants de céphalosporinases de classe C : on a récemment décrit une β-lactamase
chromosomique, appelée SRT-1, dans une souche de S. marcescens résistante aux
céphalosporines de troisième génération, en particulier à la ceftazidime et au
céfuroxime,
- Carbapénèmases de classe A : une enzyme de classe A, Sme- 1, capable de conférer
la résistance aux carbapénèmes, a été décrite chez S. marcescens,
- Métallo-ß-lactamases : en 1994, une métallo-β- lactamase à zinc, IMP-1, a été décrite
chez une souche de S. marcescens isolée au Japon [ CITATION SOU03 \l 1036 ].

I.2.1.5 Entérobactéries opportunistes

Proteus mirabilis

a- Caractères morphologiques et culturaux

- Les Proteus sp sont des bacilles à coloration de Gram négative, très généralement
mobiles, polymorphes, mesurant de 0,4 à 0,8 µm de diamètre sur 10 µm à 80 µm de
longueur.
En milieu gélosé. P. mirabilis et P. vulgaris peuvent envahir la surface de milieu en
formant des ondes concentriques. Cet essaimage ou swarming, est dû à la grande
mobilité de la bactérie.
- L’envahissement des cultures par les Proteus peut être réduit par la présence dans le
milieu des sels biliaires ou de détergents, par accroissement de teneur en gélose ou par
une diminution de la teneur en NaCl [CITATION AVR92 \l 1036 ].

b- Caractères biochimiques

Les Proteus sont caractérisés par leur uréase très active, la production d’H2S, d’une
gélatinase et leur pouvoir glucidolytique faible.

9
  Fermentation des sucres : glucose (+) ;
 Réduction des nitrates en nitrites : NO3+ ;
 Métabolisme du tryptophane en indole : indole (-) ;
 Orthonitrophényl-ȕ-D-galactopyrannoside : ONPG (-) ;
 Ornithine décarboxylase : ODC (+) ;
 Tryptophane désaminase : TDA .[ CITATION AVR00 \l 1036 ] ,[ CITATION
SOU03 \l 1036 ]

c- Pouvoir pathogène

P. mirabilis grâce à son uréase puissante peut alcaliniser les urines et être responsable
de lithiases (présence de calculs dans l’appareil urinaire).
Ces lithiases se comportent comme du matériel étranger qui permet à l’infection de
devenir chronique, entraînant ainsi une destruction progressive du parenchyme rénal.
Elle est également incriminée dans les infections urinaires ( 1-10 %) [ CITATION
SOU03 \l 1036 ] ; [ CITATION ARC04 \l 1036 ].
d- Résistance aux antibiotiques
 Résistance naturelle

P. mirabilis est naturellement résistant à la colistine, cyclines (spécificité de l’espèce

P.mirabilis) et furanes. Souches sensibles à toutes les ß-lactamines (pas de céphalosporinase
chromosomique de classe C). Les autres antibiotiques testés sur les bacilles à coloration de
Gram négative type entérobactéries sont habituellement actifs (aminosides, quinolones,
cotrimoxazole, chloramphénicol).

 Résistance acquise

Mécanismes identiques à ceux décrits pour E. coli.

- β-lactamase de classe A à haut niveau (pénicillinase): des carbénicillinases (type PSE-4)

ont été décrites

- Résistance aux inhibiteurs des β-lactamases : un mutant de type TEM, IRT-2 (Arg244Ser),
a été décrit en association avec TEM-1 dans une souche insensible aux inhibiteurs des ß-
lactamases de classe A.

- β-lactamases de classe A à spectre étendu : une souche produisant TEM-10 a été décrite.

10
 - Résistance à l’imipénem: chez P. mirabilis. Elle n’est pas d’origine enzymatique. La
résistance à l’imipénem semble associée à une altération des PLP1A et 2 (protéines liant la
pénicilline) [ CITATION SOU03 \l 1036 ]; [ CITATION ARC04 \l 1036 ].

I.2.1.6 Pseudomonas
a- Caractères morphologiques et culturaux

P. aeruginosa est un bacille à coloration de Gram négative en forme de bâtonnet de 1 à 3 ȝm

de long et 0,5 à 0,8 ȝm de large.Elle est dépourvue de spores et de capsules, mobile grâce à la
présence d’un flagelle monotriche polaire, mésophile capable de se développer dans des
températures allant de +4°C à +45°C avec une température optimale de croissance entre 30°C
et 37°C. C’est est une bactérie aérobie possédant un métabolisme oxydatif, mais en absence
d’oxygène elle peut utiliser les nitrates comme accepteur d’électrons [ CITATION SEF15 \l
1036 ].

b- Caractères biochimiques

Pseudomonas aeruginosa n'est pas capable de fermenter les sucres mais peut les attaquer (le
glucose en particulier) par voie oxydative, entraînant une acidification du milieu. Comme la
plupart des Pseudomonas, elle possède une oxydase. D'autres caractères sont utiles pour le
diagnostic d'espèce : Indole (-), urée (-), TDA (-), H2S (-), gélatine (+), ONPG (-), nitrate-
réductase (+), LDC (-), ODC (-), ADH (+), oxydase (+) [ CITATION LIA12 \l 1036 ].

c- Pouvoir pathogène

P. aeruginosa est un agent pathogène opportuniste, sa pathogénicité est attribuée à la

production de plusieurs facteurs de virulence, hautement induits dans l’infection et
s’expriment préférentiellement sur les terrains immunodéprimés (SEFRAOUI, 2015).

Des toxines et des protéases qui provoquent des lésions tissulaires facilitant aussi la
multiplication et la dissémination bactérienne dans les tissus de l’hôte : l'exotoxine, l'élastase,
les phospholipases C, les rhamnolipides et les exoenzymes sécrétées par le système de
sécrétion de type III [ CITATION BRI09 \l 1036 ].

e- Résistance aux antibiotiques

 Résistance naturelle

Il est naturellement résistant aux pénicillines des groupes V, G, M et A, aux céphalosporines

de première et deuxième génération, à la plupart des céphalosporines de troisième génération,

11
aux quinolones de première génération, à la kanamycine, chloramphénicol et triméthoprime
[ CITATION SEF15 \l 1036 ].

 Résistance acquise

La résistance aux β-lactamines chez Pseudomonas pose souvent de sérieux problèmes car
elle entraîne souvent la résistance à la plupart des antibiotiques [ CITATION SOU03 \l 1036 ].

I.2.2 Coques gram négatifs

 Neisseria
a) Principaux caractères bactériologiques :
Les Neisseria sont des Cocci à Gram négatif, en diplocoques, aérobies stricts, oxydase
positive. Certains sont des commensaux des cavités naturelles, tandis que deux espèces : (
Neisseria meningitidis et Neisseria gonorrhoeae) sont des pathogènes.
 Identification du Neisseria gonorrhoeae: repose essentiellement sur les caractères
biochimiques suivant :
 Oxydase +
 Catalase +
 Glucose +
 Maltose –
 Fructose –
 Saccharose -
 ONPG –
 A quelque différence près l’identification du Neisseria meningitidis: repose
essentiellement sur les caractères biochimiques suivant :
 Oxydase +
 Catalase +
 Glucose +
 Maltose +
 Fructose -
 Saccharose -
 Lactose –
b) Habitat et épidémiologie :
Bactérie strictement humaine qui ne survit pas dans l'environnement. Le réservoir connu est
le rhinopharynx de l'homme, parfois les voies génitales dont le Neisseria gonorrhoeae est la

12
Figure 5: Colonies de Neisseria sur gélose au sang cuit. Source : http://www.microbes-
edu.org
I.2.3 Coques gram positifs
 Les Staphylocoques
Les staphylocoques sont classés en fonction de leur capacité à provoqué la coagulation du
sang .Le staphylocoque impliqué dans les pathologies les plus graves chez l’homme :
Staphylococcus aureus est un staphylocoque coagulase positif, d’autres staphylocoques,
coagulase négatifs, peuvent également provoqués des infections. Ce sont des pathogènes dis
opportunistes qui devront profiter d’une entrée dans l’organisme pour provoquer une
infection. Ils sont en général considérés comme moins dangereux que S.aureus. C’est le cas
notamment de staphylococus épidermidis , ou staphylocoques blancs qui est une bactérie
commensale de l’homme faisant partie de la flore cutanéo-muqueuse de la quasi-totalité de
population. Ce staphylocoque peut néanmoins devenir pathogène dans certaines
circonstances, lorsque le sujet présente une immuno- déficience (sida, radiothérapie,
chimiothérapie, néonatalité).

Parmi les staphylocoques responsables d’infections humaines, on peut aussi citer

staphylococcus saprophyticus, associé à des cystites aiguës survenant principalement chez les
jeunes femmes.

I.3 DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIQUE DES INFECTIONS URINAIRES

Le diagnostic bactériologique est un ensemble de moyens permettant de confirmer telle ou
telle étiologie infectieuse d’origine bactérienne en vue de proposer le diagnostic. On
distingue le diagnostic direct et le diagnostic indirect :

DIAGNOSTIC DIRECT : C’est le diagnostic de certitude qui permet la mise en évidence

de la bactérie elle-même, donc finalement sa culture ou l’isolement qui permettra

14
l’identification ultérieure mais de préciser sa sensibilité aux antibiotiques (antibiogramme). Il
comporte un examen macroscopique et un examen microscopique.

L’examen microscopique permet d’ensemencer le produit pathologique pour un éventuelle

isolement d’un ou plusieurs germes.

Culture-isolement : Les milieux de type CLED et EMB se prête bien à la culture des germes
urinaires. En pratique, on utilise l’uriline pour ensemencement.

Apres ensemencement, les divers milieux sont habituellement incubés dans une étuve ou une
chambre chaude à 37 degrés C en atmosphère ambiante (culture aérobie) ou en l’absence
d’oxygène (culture anaérobie en jarre plastique, par exemple).

Figure 6 : jarre et incubateur. Source : http://www.google.com

Délai d’incubation : De très nombreuses espèces bactériennes se cultivent après 18-24h

d’incubation à 37 degrés c.

Outre le délai d’obtention, les cultures sont examinées en notant la quantité de colonies
obtenues de manière : semi-quantitative (rares, peu nombreuses, nombreuses, très
nombreuses).

Quantitative (10^ 3 ,10^4, 10^5, 10^6, 10^7…/ml) pour les prélèvements urinaires. D’autres
éléments pris en compte sont :

 La culture en aérobie et /ou anaérobie.

 L’aspect des colonies :la taille, la bordure (lisse, rugueuses), la coloration (pigment
jaune pour staphylococcus aureus.

15
  La présence d’une hémolyse (a et b).

Identification et Antibiogramme : L’identification et l’antibiogramme de la majorité

des bactéries habituelles est alors précise dans un délai de 18 – 24h.
 À l’aide de tests d’orientation rapide : oxydase, catalase, coagulase.
 Par ensemencement de galerie biochimique adaptée : Identification de E coli et
Proteus mirabilis par un ensemble de réaction du métabolisme intermédiaire avec la
galerie commercialisé (API 10 ou API 20).
L’étape d’identification et de l’antibiogramme requiert souvent un délai
supplémentaire d’incubation de 24h. À l’heure actuelle, il existe des automates qui
effectuent dans un délai de quelques heures, l’identification et l’antibiogramme. EX :
VITEK-2 .

Figure7 :Vitek-2.Instrument automatises pour l’identification et antibiogramme.

Source : http://www.google.com

I.2.3- DIAGNOSTIC INDIRECT : Mise en évidence de la réponse de l’organisme à

l’infection par la présence d’anticorps spécifiques, le plus souvent sériques ou plus
rarement par une réponse d’hypersensibilité, dite allergique.

16
I.4 PLACE DES BETA LACTAMINES DANS L’ARSENAL THERAPEUTIQUE

I.4.1 Classification des β-lactamines

Selon la nature de l’hétérocycle accolé au cycle bêtalactame, on peut les classer en quatre
groupes : les pénicillines et les céphalosporines, les carbapénèmes et les monobactames,
auxquels on peut ajouter les inhibiteurs de bêtalactamases qui n’ont pas d’activité
antibactérienne formelle, mais préviennent la dégradation de la bêtalactamine qui leur est
associée.

a-Groupe des pénicillines

Ce groupe se subdivise en 4 sous – groupes :
 Sous -groupe des pénicillines G, avec pour spectre d’activité étroit parce qu’il est actif
sur les Cocci Gram positif, Cocci Gram négatif, et les bacilles Gram positifs.
Ex : Benzylpénicilline.
 Sous – Groupe des pénicillines M, même spectre d’activité que les pénicillines G,
mais elle n’est pas activée par la pénicilline. Ex : oxacilline.
 Sous-Groupe des pénicillines A, le spectre d’activité est dit étroit, parce qu’il agit sur
les CGP, BGP .Il peut parfois agir sur les BGN on dira qu’il est à spectre large, ils
sont des inhibiteurs de la B – lactamases .EX :L’Augmentin.
 Sous – Groupe des Acyle-uréide-pénicillines, tout comme la pénicilline A et M, ce
sont des antibiotiques à spectre étroit et large à certains BGN et sont actifs sur le
pseudomonas aeruginosa. EX :Amino-pénicilline.

b-Groupe des céphems (céphalosporines)

 Ce sont des antibiotiques à large spectre qui agissent sur les BGP et BGN, ils sont
classés en 4 catégories aujourd’hui (Générations). Ces antibiotiques sont inactifs sur
pseudomonas aeruginosa, ils résistent aux bactéries productrices de la
céphalosporinases .Ex :céfalexine ; cephacette ; céfadroxil qui sont de première
génération .
 Les antibiotiques de céphalosporines de 2ème génération sont à spectre large, la
pseudomonas ne résiste pas à la 2ème génération.
 Les céphalosporines de 3ème génération, sont des antibiotiques à spectre large qui
résistent aux bactéries productrices de la céphalosporinases. Ex : β– lactamases,
Sont des enzymes agissant sur la pseudomonas.

17
  Les céphalosporines de 4ème génération, l’antibiotique phare de cette génération est la
Cephe-surodoxine qui est à large spectre.
c-Groupes des carbapénèmes
Cette sous classe de béta-lactamine possède, de par sa très forte affinité pour les PLP
(pipéracilline), le spectre antibactérien le plus large existant chez les béta-lactamines.
Celui-ci couvre la majorité des bactéries pathogènes à Gram positif et à Gram négatif.
De plus, ces molécules possèdent une excellente résistance aux béta-lactamines et
seules les métallo-béta-lactamases sont capables de les hydrolyser. Ces antibiotiques
sont souvent utilisés en dernier recours et sont, de ce fait, réserver à la médecine
humaine.
Ex :Ertapénème,Imipénème,Méropénème .
 Groupes des monobactames
Cette sous classe de β-lactamine n’est composé que d’un seul agent commercialisé et
réservé à la médecine humaine : l’aztréonam. Son spectre antibactérien se limite aux
basiles à Gram négatif et sa voie d’administration est parentérale du fait de sa très
faible biodisponibilité par voie orale (inférieur à 1%).[ CITATION SEN29 \l 1036 ]
Ex :L’aztréonam .
 Inhibiteurs de bêtalactamases
Les inhibiteurs de bêtalactamases avec pour chef de file l’acide clavulanique
présentent uneanalogie structurale avec les bêtalactamines et agissent également
comme des substrats suicides des bêtalactamases.

I.4.2 MODE D’ACTION DES β LACTAMINES

Les bêtalactamines agissent sur la synthèse du peptidoglycane en inhibant les protéines liant
la pénicilline . Le peptidoglycane est le polymère majeur de la paroi bactérienne. Il permet
de maintenir la forme de la bactérie et de la protéger contre les forces osmotiques.

NB : Le peptidoglycane est le constituant majeur de la paroi des bactéries à Gram positif. À

l’inverse chez les bactéries à Gram négatif, le peptidoglycane est beaucoup moins épais et
enchevêtré entre deux membranes dans l’espace péri plasmique.

 Mécanisme d’action : L’unité de base du peptidoglycane est un disaccharide penta

peptide synthétisé dans le cytoplasme et constitué par des chaînes de N-acétyl
glucosamine (NAG) et d’acide N-acétyl-muramique (NAM) où est fixé un penta peptide
(L-alanine-D-glycine-L-lysine- D-alanine-D-alanine. Les PLP ont une activité

18
transglycosylase, Trans peptidase et carboxypeptidase. Les bêta lactamines bloquent les
activités Trans peptidase et carboxypeptidase, compte tenu de leur analogie structurale
avec le substrat de ces enzymes. Les bêta-lactamines sont caractérisées par un effet
bactéricide.
La sensibilité d’une bactérie est mesurée par la concentration minimale inhibitrice
(CMI) de l’antibiotique considérée. C’est la méthode de référence préconisée par
l’OMS. Cette CMI est la plus petite quantité d’antibiotique (ATB) capable d’inhiber
une croissance visible à l’œil nu. La CMI d’un germe donné peut être mesurée par
différents procédés de laboratoire :
CMI en milieu liquide ;
CMI en milieu solide.
La comparaison de la CMI de l’ATB à ces concentrations critiques permet donc de
classer la bactérie testée, dans la catégorie :
 Sensible : la CMI est la plus petite que la concentration critique minimale obtenu en
thérapeutique.
La souche peut être atteinte par un traitement à dose habituelle par voie générale.
 Résistance : la CMI est la plus grande que la concentration critique maximale
pouvant être atteinte in vivo sans dépasser le seuil toxique.
La souche ne pourra probablement pas être éliminée, quelques soit les modalités du
traitement.
Il existe deux types de résistances :
 La résistance naturelle : Une espèce bactérienne donnée à une résistance naturelle à
telle ou telle antibiotique, lorsque cette bactérie à l’origine n’est pas sensible à cet
antibiotique. Autrement dit, toute espèce bactérienne qui ne fait pas partie du spectre
d’activité d’un antibiotique est considéré comme ayant une résistance naturelle vis-à-
vis de cet antibiotique. Ex : des BGN (Bactéries Gram Négatifs) ont une résistance
naturelle à la pénicilline G.
 La résistance acquise : c’est lorsqu’une espèce bactérienne était naturellement
sensible à un antibiotique donné, et par la suite ce germe est résistant au même
antibiotique. C’est une résistance acquise.
 Intermédiaire : la CMI est comprise entre les deux concentrations critiques.

19
La souche pourrait être atteinte par un traitement local, de fortes doses par voie générale, ou
encore si l’antibiotique se concentre particulièrement bien au foyer infectieux (urine, salive,
tissu, prostatique…)

I.4.3 LES SPECTRES D’ACTIVITES

a- Les pénicillines du groupes G:

Ce groupe a un spectre étroit: les cocci et bacilles gram (+), pas d'action: bacilles gram (-)/
Staphylocoques producteurs de pénicillinases.

b- Les pénicillines du groupe M: En pratique, leur spectre est limité aux seuls
staphylocoques que l’on classe en deux grands groupes : les sensibles à ces molécules
(SASM ou meti-S) et les résistants (SARM ou meti-R). Soulignons que les SARM sont
résistants à toutes les bêtalactamines.

c-Les pénicillines du groupe A : spectre élargi vers certains bacilles gram (-).[ CITATION
SEN29 \l 1036 ].

Groupe des céphems (céphalosporines)

Les céphalosporines de 1ère génération : présentent une bonne activité sur les CGP,
exception faite des entérocoques et des staphylococcus aureus résistant à la méticilline (voir
ci-dessus). Elles possèdent une activité limitée sur certaines espèces de bacilles Gram (-) tels
que Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis. Les formes à usage parentéral
seront souvent limitées à l'usage en prophylaxie (voir ce chapitre).

Les céphalosporines de 2ème génération : ont un spectre élargi vers les bactéries à Gram
(-), en particulier Proteus et Enterobacter. Elles sont également bien actives sur Haemophilus
influenzae et sur les gonocoques.

Certaines céphalosporines de 3ème génération : sont moins actives que les molécules des
générations antérieures sur les Gram (+), notamment les streptocoques et pneumocoques. Par
contre, elles sont actives à des concentrations très faibles sur les entérobactéries. De même,
elles sont très actives sur Haemophilus et Neisseria.

20
Les céphalosporines de 4ème génération : couvrent les Gram (-), y compris Pseudomonas
aeruginosa, mais aussi les Gram (+).

Groupes des carbapénèmes

Spectre très large,y compris BGN producteur de β-lactamases à large spectre .

L’association β-lactamases et aminosides est le plus souvent synergique vis-à-vis des bacilles
Gram – et les cocci à Gram + .

Groupes des monobactames

Agit plus efficacement sur les bacilles gram négatifs aérobies . La classe est inactives contre
les Gram + et les anaérobies.

21
II. MATERIELS ET METHODES

II.1 TYPE ET PERIODE D’ETUDE

Notre étude expérimentale est de type prospectif, et s’est déroulé sur une période de trois
mois, c’est-à-dire du 09 aout 2021 au 09 novembre de la même année.

II.2 CADRE D’ETUDE

Cette étude a été réalisée au sein du laboratoire de microbiologie du Centre Hospitalier
Universitaire d’Owendo (CHUO), qui est un établissement sanitaire public de 3eme niveau,
c'est-à-dire de niveau central selon la classification de l’OMS. Ces missions sont dévolues à
un centre hospitalier universitaire (Soins, Formation, Recherche).

II.3 ECHANTILLONNAGE ET TAILLE DE L’ECHANTILLON

Le matériel biologique qui a servi à notre étude a été constitué de 66 échantillons issus
d’urine prélevée chez les femmes enceinte.

II.3.1 Critères d’inclusion et d’exclusion

II.3.1.1 Critères d’inclusion

Nous avons inclus dans notre travail toutes les femmes ayant présenté un bon d’examen
bactériologique délivré par un clinicien du CHU d’Owendo ou d’autres structures sanitaires
et ayant respecté les conditions et procédures de prélèvement pour un examen
cytobactériologique des urines (ECBU).

II.3.1.2 Critères d’exclusion

Toutes les femmes n’étant pas en grossesse n’ayant pas respecté les conditions de
prélèvement et n’ayant pas une demande d’examen prescrite par un médecin.

22
II.4 MATERIEL TECHNIQUE
II.4.1 Matériels pour la réalisation de l’examen.
Des prélèvements d’urines
- Des Gants Vinyle stérile ;
- Des Compresses stériles ;
- Une Solution antiseptique ;
- Un Pot de recueil stérile

II.4.2 Matériel pour l’isolement des souches bactériennes.

- L’uriline (dispositif constitué de gélose ordinaire de type CLED et de Mac Conkey).

- Gélose Chapman et Gélose EMB si possible.

Figure 8 :Uriline .Culture et numération des bactéries urinaires. Source :

http://www.google.com.

23
 II.4.3 Matériel pour la réalisation de l’identification et de l’antibiogramme
Nous avons utilisé ici deux types de matériels :

- Méthode automatisée.

- Méthode manuelle.

II.4.3.1 Méthode automatisée ( Identification et antibiogramme)

Pour l’identification et l’antibiogramme de manière automatisée, les tubes à hémolyse en
verres, les cassettes VITEK 2 GN, VITEK 2 GP, VITEK 2 AST GN, VITEK 2 AST GP, un
automate VITEK 2 (Bio Mérieux) ont été utilisés.

Les gram negatifs

II.4.3.2 Méthode manuelle

En ce qui concerne la méthode manuelle, la Galerie ATB UR, la solution NaCl 0,85 %
Medium 2 mL (Bio Mérieux, France), le Densitomètre (ATB 1550), une étuve (Incucell), des
écouvillons (Dutscher), un vortex (VelpScientifica), les tubes à hémolyse en verres, les
cassettes VITEK 2 GN, VITEK 2 GP, VITEK 2 AST GN, VITEK 2 AST GP, un automate
VITEK 2 (Bio Mérieux) ont servi à la réalisation de l’antibiogramme.

II.4.3.3 Autres matériels :

Microscope, Huile à immersion, Cellule de kova, Pipettes pasteur, Allume gaz ou allumettes,
Gaz à butane, Micropipettes (10, 145,280, 500, 1000), Papier pH, Poire, Tubes à hémolyse en
plastique, Kit de GRAM, Jarres, Giemsa, Balance de précision, Hans de platine.

Tableau I: Liste des antibiotiques utilisés dans cette étude.

Famille Groupes Antibiotiques

Pénicillines Amoxicilline, Ampicilline,Amoxicolline, Cloxacilline,
Oxacilline, Pénicilline G , Pipéracilline ,Pivampicilline,
ß-
Ticarcilline.
lactamin 1°génération:Céfadroxil/Céphalexine
es Céphalotine/Céfazone
Céphalosporines 2°génération:Céfalotine/Céfotétane/Céfoxitine/Cefprozil/
Céfuroxime
3°génération:Céfixime/Céfotaxime/Ceftazidime/
Ceftizoxime/ Ceftriaxone
4° génération : Céfépime
Monobactames Aztréonam

24
 Carbapénèmes Ertapénem ,Imipénem, Méropénem

II.5 PROCEDURE
II.5.1 PRELEVEMENT

II.5.1.1 Prélèvement de l’urine

 Condition de prélèvement
- Ne pas être sous antibiotique
- Ne pas être en période de menstrues
- Pas de rapports sexuels la veille
- Recueillir l’urine du matin

 Procédure de prélèvement
- Faire la toilette intime avec savon doux
- Laisser passer les premières urines
- Récolter les urines du milieu de miction
- Eviter de toucher l’intérieur du pot
- Déposer au Laboratoire au plus tard 9H 30

II.5.1.2 Réalisation du prélèvement

Il existe une possibilité de retrouver une flore bactérienne commensale de l’urètre si le
prélèvement est mal fait.

Chez la femme enceinte :

Chez l’adulte : Lavage des mains puis nettoyage soigneux du méat urinaire et chez la femme
des régions génitales externes, désinfection locale douce et enfin recueil du milieu du jet des
urines du matin de préférence, ou ayant séjourné au moins 4 heures dans la vessie.

Chez le Sondé à demeure : après clampage de la sonde, la ponctionner après désinfection à

l’alcool iodé.

Chez le Nourrisson : poche collectrice, à vérifier après 30 mn.

II.5.2 PROTOCOLE D’ANALYSE DE L’ECBU AU LABORATOIRE

II.5.2.1 PREMIERE ETAPE : Examen macroscopique
Aspect : À l’œil nu regarder si l’urine est : (Claire - Limpide - Trouble)

25
 Sédiments : Regarder s’il y’a des débrits des couleurs :blanchatre (phosphate),rouge
brique (acide urique),roses (uratres).

Odeur : (Inodore ou Nauséabonde).

Couleur : (Jaune citron - Orange - Hématique).

Tableau II : Aspect macroscopique de l’urine. Source : http://www.google.com

Clair Limpide Trouble

II.5.2.2 DEUXIEME ETAPE : Examen microscopique

a) L’examen direct de l’échantillon sans coloration : Etat frais

Il permet de faire une cytologie :

 Aspect quantitatif :
Technique : A l'aide d'un dispositif à numération type cellule de Kova à usage unique on
dénombre les différents éléments figurés contenus dans un volume donné de l'urine (10µl) à
étudier.
Remarque : A l'état physiologique, l'urine contient moins de 10 000 leucocytes et 5 000
hématies par µl

En cas d'infection urinaire, le processus inflammatoire se traduit le plus souvent par la

présence de :

26
Technique :

- Réaliser un frottis et le fixer : Nettoyer une lame à l’alcool,déposer une goutte

d’eau physiologique sur la lame,toucher une colonie à l’aide de l’anse de platine
pour prélever des bactéries.Il n’est pas nécessaire de prendre beaucoup de
bactéries.Frotter l’anse de platine dans la goutte d’eau.Laisser sécher à l'air .Passer
3 fois la lame dans la petite flamme du bec busen pour fixer l’échantillon à la
chaleur.
- Colorer le frottis au violet de gentiane phéniqué (pendant une minute) :Déposer
quelque goutte de solution de violet de gentiane sur le frottis fixé.Laisser agir 1
minute.Le violet de gentiane colore le cytoplasme des bactéries .Jeter l’excès de
colorant dans un bécher.
- Rincer à l’eau du robinet ;
- Recouvrir la lame du réactif de lugol encore appelé réactif iodo-ioduré : c’est le
mordançage qui permet de fixer le violet de gentiane dans les bactéries (pendant
une minute) ;
- Laver à l’eau du robinet ;
- Laver 3 à 4 fois dans de l’alcool à 70° : c’est l’épreuve alcoolo-résistante (pendant
30 secondes) ;
- Rincer immédiatement à l’eau du robinet.
- Recouvrir la lame d’une solution de fuschine diluée au 1/20 : c’est la contre
coloration (pendant une minute) ;
- Rincer à l’eau du robinet.

Figure 10 :Etapes de la coloration de GRAM. Source: http://www.google.com

28
Réaction :

Les bactéries à GRAM négatif (BGN) sont alcoolo-sensibles et donc sont décolorées. Elles
apparaissent roses. Par contre, les parois des bactéries GRAM positif ne laissent pas passer
l’alcool. Elles sont dites alcoolo-résistantes et reste colorées en violet.

II.5.2.3 La culture
La mise en culture de l’échantillon sur milieux spécifiques qui permet de réaliser la
quantification, l’identification et le profil de sensibilité aux antibiotiques (antibiogramme) du
germe éventuel. C’est cette seconde étape qui nécessite, selon les cas, 24h à 72 h avant de
pouvoir obtenir des résultats complets.

- Ensemencement :
L’uriline se prête bien à la culture des urines. Après 24 h d'incubation voire 48 h si besoin, la
poursuite de l'analyse microbiologique dépend de l'interprétation cytobactériologique, des
renseignements cliniques et d'éventuels examens antérieurs.

II.5.2.4 L’identification
Pour l'identification la technique à utiliser découle de la morphologie des colonies complétées
si besoin d'une coloration de GRAM et de la recherche de l'oxydase et de la catalase.

Interprétation

En théorie les combinaisons des trois paramètres :

Bactériurie, Pyurie et Symptômes Urinaires délimitent cinq entités nosologiques (Tableau).

Depuis les travaux de KASS (en pratique et de prime abord) l'interprétation des
cultures s'effectuait de la manière suivante : http://www.google.com

- Bactériurie < 100 CFU / ml : absence d'infection

- Bactériurie > 103 CFU / ml : Bacteriurie non significative

29
- Entre 104 et 105 CFU / ml : Identification

Le tableau ci-dessous précise les valeurs de ces critères purement microbiologiques en

fonction des circonstances anatomo-cliniques comme le propose STAMM. :
http://www.google.com

Ces critères (condition nécessaire mais pas suffisante) doivent être interprétés dans chaque
cas en fonction d'autres paramètres indispensables à prendre en compte :

- les données de l'examen direct ;

- le caractère mono ou pluri-microbien des cultures ;

- les renseignements cliniques fournis ;

- les résultats d'ECBU précédents ;

- les conditions de prélèvement.

Tableau III : Interprétation bactério-clinique liée à l'infection urinaire:

http://www.google.com

Interprétation bactério-clinique
Catégories Critères microbiologiques
Infection urinaire aiguë 10 000 GB / ml Infection urinaire aiguë 10 000 GB / ml
non compliquée de la femme 103 UFC / ml
uropathogènes reconnus
Pyélonéphrite aiguë simple 10 000 GB / ml
104 UFC / ml
ITU à risque ou compliquée 10 000 GB / ml
dont celle de l’homme 105 UFC / ml
uropathogènes reconnus
Bactériurie asymptomatique 10 000 GB / ml
(contrôlée sur 2 ECBU) 105 UFC / ml

II.5.2.5 Antibiogramme
La réalisation de l'antibiogramme dans le cadre de l'infection du tractus urinaire ne diffère pas
techniquement des méthodes traditionnelles de mesure in vitro de sensibilité aux
antibiotiques qu'elles soient manuelles ou automatisées.

Le choix des molécules à tester résulte d'un compromis entre le spectre attendu de sensibilité
de la bactérie incriminée et la diffusion de l'antibiotique au site de l'infection.

30
 es ichia lla acter acter a monas coccus occus
Tran coli pneum sp cloacae marces aerugin Streptoc
ches oniae cens osa occus
d’age
20-25 2 1 0 0 0 0 0 0
25-30 1 1 0 1 0 1 0 0
30-35 0 3 2 0 0 0 2 1
35-40 1 1 0 1 0 0 1 1

III.1.3 Répartition des souches en fonction des germes retrouvés

Tableau VI : Répartition des souches isolées en fonction des germes retrouvés.

Famille des Germes isolés Nbre des éch. Pourcentage

bactéries

Escherichia coli 4 20%

Klebsiella pneumoniae 6 30 %
Entérobactéries Citrobacter sp 2 10%
Enterobacter cloacae 2 10% 70 %
Serratia marcescens 0 0%
Opportunistes Pseudomonas 1 5%
aeruginosa 5%
CGP Staphylococcus 3 15 %
Streptococcus 2 10 % 25%
Total : 20 100 %

D’après les résultats obtenus, Escherichia coli et Klebsiella sp représentent a eu seul 50 %

des germes isolés dans les infections urinaires tandis qu’il y a absence de Serratia
marcescens.

III.1.4 Profil de résistances aux b lactamines des germes isolées aux antibiotiques chez la
femme enceinte.
Tableau VII : Profil de résistance globale des entérobactéries isolées aux antibiotiques n=14
Antibiotique R Pourcentage I Pourcentage S Pourcentage
Amoxicilline 11 78,57% 0 0% 3 21,43%
Céfazoline 8 57,14% 0 0% 6 42,86%
Ticarcilline 10 71,42% 0 0% 4 28,57%
Pipéracilline 6 42,86% 0 0% 8 57,14%
Imipénem 5 35,71% 0 0% 9 64,28%
Céfalotine 0 0% 3 21,43% 11 78,57%
Gentamicine 3 21,43 % 3 21,43% 8 57,14%
Amikacine 3 21,43% 1 7,14% 11 78,57%

32
 Acide 1 7,14% 0 0% 13 92,85%
nalidixique
Ciprofloxacine 1 7,14% 1 7,14% 12 85,71%
Ofloxacine 3 21,43 % 3 21,43% 8 57,14%
Ceftazidime 10 71,42% 0 0% 4 28,57%
Pipéracilline 10 71,42% 0 0% 4 28,57%

Le tableau VII indique que les souches d’entérobactéries isolées à partir des urines sont
résistantes à l’amoxicilline (AMX) avec un taux de résistance le plus élevé de 78,57% . Pour
la ticarcilline (TIC) et la pipéracilline (PIP), la résistance enregistrée est 71,42% .

Tableau VIII : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Pseudomonas

aéroginosa n=1
Antibiotique R Pourcentage I Pourcentage S Pourcentage
Amoxicilline 1 100% 0 0% 0 0%
Céfixime 1 100% 0 0% 0 0%
Ticarcilline 1 100% 0 0% 0 0%
Pipéracilline 0 0% 0 0% 1 100%
Imipénem 1 100% 0 0% 0 0%
Céfalotine 1 100% 0 0% 0 0%
Gentamicine 0 0% 1 100% 0 0%
Amikacine 0 0% 0 0% 1 100%
Acide 1 100% 0 0% 0 0%
nalidixique
Ciprofloxacine 0 0% 0 0% 1 100%
Ofloxacine 0 0% 0 0% 1 100%
Ceftazidime 0 0% 0 0% 1 100%
Pipéracilline 0 0% 0 0% 1 100%

Profil de résistance aux β-lactamines :

La souche de Pseudomonas aéroginosa isolée présente une résistance à l’amoxicilline , la
ticarcilline, la céfixime , Céfalotine .

Tableau IX : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Staphylococcus n=3

Antibiotique R Pourcentage I Pourcentage S Pourcentage
Pénicilline 3 100% 0 0% 0 0%
Oxacilline 3 100% 0 0% 0 0%
Kanamycine 3 100% 0 0% 0 0%
Gentamicine 3 100% 0 0% 0 0%
Lincomycine 0 0% 2 66,67% 1 33,33%
Pristinamycine 0 0% 0 0% 3 100%
Quinuoristine- 0 0% 1 33,33% 2 66,67%
Dalfopristine

33
 Tetracycline 0 0% 0 0% 3 100%
Levofloxacine 1 33,33% 0 0% 2 66,67%,
Ofloxacine 1 33,33% 0 0% 2 66,67%
Fosfomycine 0 0% 0 0% 3 100%
Cotrimoxazole 0 0% 1 33,33% 2 33,33%
Vancomycine 3 100% 0 0% 0 0%

Le tableau IX indique que la souche de Staphylococcus isolées à partir des urines ont une
résistances à la Pénicilline,Oxacilline,Kanamycine,Gentamycine,Vancomycine avec un
taux de 100% .

Tableau X : Profil de résistance aux antibiotiques des souches de Streptococcus n=2.

Antibiotique R Pourcentage I Pourcentage S Pourcentage
Pénicilline 2 100% 0 0% 0 0%
Erythromycine 2 0% 0 0% 0 0%
Clindamycine 2 100% 0 0% 0 0%
Pristinamycine 1 50% 1 50% 0%
Tetracycline 2 100% 0 0% 0 0%
Acide 2 100% 0 0%
Fusidique
Fosfomycine 2 100% 0 0% 0 0%
Cotrimoxazole 2 100% 0 0%
Vancomycine 0 0% 0 0% 2 100%

Les 2 souches de Streptococcus sp identifiées présentent une résistance totale vis-à-vis de la

pénicilline,,Erythromycine,Clindamycine, Fosfomycine,Cotrimoxazole ,Acide fusidique ,
tétracycline avec une sensibilité de 100% pour la vancomycine.

34
35
 IV. DISCUSSION
Notre étude a révélé que les entérobactéries sont majoritairement responsables des infections
urinaires avec (75%). Escherichia coli et Klebsiella sp représentent a eu seul 50 % des
germes isolés dans les infections urinaires tandis qu’il y a absence de Serratia marcescens,
par rapport aux Staphylococcus et Streptococcus (25%). Ces bactéries ont été prédominantes
chez les personnes de tranche d’âge comprise entre 30 - 40 ans soit ( 65% ). La répartition
selon l’âge montre que la femme enceinte est beaucoup plus exposée à l’infection urinaire à
partir de 30 ans (65%).( Tableau V ).

D’après notre étude, les souches de K.pneumoniae prédomine avec (30%), viennent ensuite,
par ordre décroissant les souches de E.coli (20 %), Staphylococcus (15%), Citrobacter sp
(10%), E.cloacae (10%), Streptococcus (10%), P.aeruginosa (5%) .(Tableau VI). Nos
résultats concordent avec ceux de l’étude menée par [ CITATION Bri17 \l 1036 ] qui ont noté que
les entérobactéries (particulièrement K.pneumoniae et E.coli) représentaient plus de 80% des
germes responsables des infections urinaires et [ CITATION ABD021 \l 1036 ], que les
entérobactéries restent toujours au premier plan et confirment l'origine fécale (digestive) des
germes de l'lU de la femme enceinte . La prédominance de K.pneumoniae et d’E.coli peut
probablement s’expliquer par le faite que cette espèce est la plus dominante de la flore
intestinale et qu’elle peut migrer vers l’intestin puis vers l’appareil urinaire. Aussi E.coli fait
partie des coliformes fécaux, donc un mauvais nettoyage de la partie intime peu facilement
provoquer l’entrée de la bactérie dans l’urètre.

Notre étude révèle que les souches des entérobactéries isolées à partir des urines sont
résistantes à l’amoxicilline (AMX) avec un taux de résistance le plus élevé de 78,57% . Pour
la ticarcilline (TIC) et la pipéracilline (PIP), la résistance enregistrée est 71,42% . Concernant
des céphalosporines de 1ère et 3ème génération, la céfazoline (CZ) présente une fréquence de
57,14% et une fréquence de 71,42% au Ceftazidime . On note 35,71% de résistance à
l’imipénem (IPM) (Tableau VII ).

La résistance de l’amoxicilline est proche de celle [ CITATION Ale12 \l 1036 ] avec un

pourcentage de 100%. L'excellente activité antibactérienne des carbapénèmes est liée en
particulier à la rapidité de leur pénétration transmembranaire à travers la paroi externe des
bacilles à coloration de Gram négative et à leur stabilité vis-à-vis de la plupart des lactamases
naturelles ou acquises[ CITATION Nor10 \l 1036 ] . L’imipénem reste une molécule précieuse

36
car elle est la dernière ligne de défense, il faut la préserver. La souche de Pseudomonas
aéroginosa isolée présente une résistance à l’amoxicilline , la ticarcilline, et les
céphalosporines tels que la céfixime , Céfalotine présente une excellente activité. La souche
présente une résistance associée à l’acide nalidixique et l’Imipénem faisant partit du groupe
de carbapénèmes (TableauVIII ).

la souche de Staphylococcus isolées à partir des urines ont une résistances à la

Pénicilline,Oxacilline,Kanamycine,Gentamycine,Vancomycine avec un taux de 100% .On
note aussi une forte sensibilité de la pristinamycine et fosfomycine .(Tableau IX).

Les 2 souches de Streptococcus sp identifiées présentent une résistance totale vis-à-vis de la

pénicilline,,Erythromycine,Clindamycine, Fosfomycine,Cotrimoxazole ,Acide fusidique ,
tétracycline avec une sensibilité de 100% pour la vancomycine.(Tableau X)
Il en découle que d’après nos résultats: la vancomycine reste l’antibiotique la plus actif sur
les streptocoques. Nous pouvons voir que les résistances naturelles sont éliminés, car
Erythromycine et la clindamycine était sensible aux Streptococcus démontré par [ CITATION
Wil18 \l 1036 ].ces résultats sont différents aux notre qui est à 100 % de résistance. Mais
également montrait une sensibilité totale chez les Staphylococcus contre la Gentamycine, nos
résultats montre qu’elles s’avèrent être résistants à des taux de 100% .

37
 CONCLUSION

A la lumière des résultats obtenus au cours de notre étude sur les infections urinaires chez la
femme enceinte , réalisée au niveau du laboratoire de Bactériologie du Centre Hospitalier
Universitaire d’Owendo, il en ressort que l’infection urinaire est fréquente chez les patientes
entre 30 et 40 ans . Favorisée en plus de la variation anatomophysiologies et hormonales
qu’elle subit en cette période de gestation par des facteurs de risque tels que le diabète,
l’hypertension, les risques d’avortement et d’accouchement prématuré.

Dans notre étude les microorganismes,les plus incriminés dans les IU des femmes enceintes
sont des bactéries appartenant à la famille des Enterobacteriaceae ; avec une prédominance
de l’espèce Klebsiella Pneumoniae (30%). Il semble que les facteurs de pathogénicité et de
virulence de ces bactéries ont joué un rôle primordial quant à leur fréquence d’isolement dans
l’urine. Une importante résistance à l’amoxicilline, , ticarcilline, céfixime , Céfalotine ,
l’acide nalidixique et l’Imipénem se fait remarqué dans la famille des enterobacteries.
Streptococcus sp dangereux pour la femme enceinte et son bébé, qui presente une forte
resistance (100%) et une sensibilité a la vancomycine (100%) . Quoique le traitement ne soit
prescrit que par un médecin. En fait il s’agit d’antibiotique appartenant à la famille des β-
lactamines, qui sont autorisés à tous les stades de la grossesse et ne présentent aucun danger
fœto-maternel. La sensibilité des entérobactéries peut être altéré par le développement d’une
résistance provenant de l’utilisation inconsciente des antibiotiques, surtout au sein des

38
établissements de santé le germe devient plus résistant ce qui nous oblige à trouver des
solutions afin de réduire cette résistance par l’application réglementaire des bonnes pratiques
d’hygiène et la suppression de la prescription aléatoire des antibiotiques pour au moins
diminuer le taux de ces infections. De même que l’antibioprophylaxie soit présente ou par la
prise en charge doit s’accompagner :

-d’un meilleur dépistage et traitement des facteurs de risque d’infection.

-d’une hygiène périnéale adaptée pour éviter la répétition d’une vigilance des infections. Le
respect des mesures d’hygiène, boire beaucoup d’eau, prescription de jus ou d’extraits de
canneberge, la propreté individuelle et collective ainsi que l’entretient de l’environnement
hospitalier (matériel médical, locaux) demeurent les principaux règles à prendre en
considération pour permettre une nette diminution des IU chez les femmes enceintes.

39
 RECOMMANDATIONS
Au vue de ces conclusions nous recommandons
Au laboratoire de bactériologie du centre hospitalier universitaire d’Owendo.
-Assurer le contrôle de qualité des antibiogrammes par l’utilisation de souches de références
Aux pharmacies
-Assurer la disponibilité et l’accessibilité des antibiotiques recommandés.
Aux femmes enceintes
-Réaliser un dépistage de l'lU systématiquement dès la première visite prénatale.
-Eviter l'automédication

40
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42
43
 ANNEXES

ANNEXE 1 : CODE DE DEONTOLOGIE EN BIOLOGIE MEDICALE (ASSITEB)

Bien que conscient du rôle qu’il joue dans le diagnos c médical et de sa responsabilité dans la
réalisa on technique des actes de biologie, le technologiste biomédical doit s’abstenir de toute
clinique, dans ses rela ons avec le pa ent ou les cliniciens. A tre excep onnel et pour des raisons
mo vées par l’urgence du diagnos c et la gravité de la pathologie, il pourra enfreindre ce e règle
après déléga on des autorités médicales compétentes et une forma on sanitaire complémentaire,
notamment lorsqu’une situa on économique, géographique ou naturelle crée un contexte sanitaire
cri que.

Le technologiste biomédical est tenu au secret professionnel, dans les mêmes condi ons que tous
les autres membres de la chaîne de santé et ne peut en être relevé que dans les condi ons légales
en vigueur dans son pays.

Dans l’exercice de sa profession, le technologiste biomédical doit tenir compte des limites de sa
compétence et des moyens mis à sa disposi on avant d’accepter la charge d’une fonc on.

Le technologiste biomédical ne doit en aucun cas modifier ou accepter de modifier les résultats des
examens qui lui sont confiés.

Il doit également assurer tous les contrôles indispensables à la fiabilité des résultats.

Le technologiste biomédical ne contribuera pas sciemment à des travaux dont l’objec f irait à
l’encontre de la préserva on de la santé et de qualité de vie de l’homme ou des recommanda ons
des comités éthiques.

Il doit contribuer dans la mesure de ses possibilités au perfec onnement des techniques u lisées.

Le technologiste biomédical doit également prendre une part ac ve à l’évolu on de sa profession

par l’intermédiaire d’échange avec ses collègues na onaux et interna onaux et doit, en fonc on des
moyens qui lui sont offerts, par ciper à des ac ons de forma ons ou d’informa ons
professionnelles.

44
ANNEXE 2 : Charte Interna onale du Technologiste Biomédicale (ASSITEB)

Nous, technologistes biomédicaux, appartenant au corps des Bio technologistes, chargés :

De l’exécu on des analyses de biologiemédicale, du contrôle de leur qualité et, le cas

échéant de leur mise au point ;
De la maintenance de l’appareillage ;
Du pélèvement et du recueil de matériel et de liquides organiques ;
De la réalisa on technique d’épreuves fonc onnelles ou d’actes liés à la procréa on
assistée,
Nous engageons à :

Respecter la légalisa on en vigeur concernant le mode d’exercice, et les condi ons

par culières imposées pour la direc on d’un laboratoire ;
Maintenir la compétence qu’exigent les standards de qualité par l’obliga on d’une
forma on ini al spécificique actualisée, et d’une forma on complémentaire pour toute
adapta on à une technologie nouvelle ;
Appliquer et faire appliquer les règles de bonnes exécu on des analyses garan ssant leur
fiabilité ;
Me re en commun les connaissances et l’expérience acquise pour une améliora on des
techniques ;
Aider à la forma on et à la promo on du personnel moins qualifié ;
Assurer ou faire assurer l’applica on des règles minimales d’hygène et de sécurité ;
Respecter le code de déontologie et contribuer à la reconnaissance et à la promo on de
notre profession.

45
ANNEXE 3 : FICHE D’INFORMATION POUR ECBU
Nom :
Condi ons de prélèvement :
- Ne pas être sous an bio que
- Ne pas être en période de
menstrues
- Pas de rapports sexuels la veille
- Recueillir l’urine du ma n
Date de dépôts :……/……/ 20………..
FICHE DE RENDEZ-VOUS ECBU
Prénom :
Procédure de prélèvement :
- Faire la toile e in me avec savon doux
- Laisser passer les premières urines
- Récolter les urines du milieu de
mic on
- Eviter de toucher l’intérieur du pot
Déposer au Laboratoire au plus tard 9H 30
NB : Toute urine apportée après 10h 00 sera
rejetée.
46
 Identification Patient : __________________ Date de prélèvement_______________
Noms et Prénoms : ____________________________________________________
Date de naissance : ____________________ Lieu de résidence________________
Nationalité____________________________ Assuré(e) ______________________
N° Téléphone______________________________
Renseignements cliniques______________________________________________
EXAMEN MACROSCOPIQUE
Aspect : ______________________ Ph ______________________________
Sédiments:_____________________________________________________
Odeur : ________________________________________________________
Couleur : ______________________________________________________

EXAMEN MICROSCOPIQUE

1- Etat frais
Leucocytes : ____________________________________________________
Hématies : _____________________________________________________
Cylindres : _____________________________________________________
Cellules : ______________________________________________________
ANNEXE 4 :Fiche de prélèvement d’ECBU

FICHE DE PRELEVEMENT D’EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE DES URINES

(ECBU)

MINISTERE DE LA SANTE PUBLIQUE ET DE LA FAMILLE

*********************

DIRECTION GENERALE
*********************
SERVICE MICROBIOLOGIEET PARASITOLOGIE
*********************

Cristaux : ______________________________________________________

47
 Parasites : _____________________________________________________
Bactéries : _____________________________________________________
Levures et filaments : _____________________________________________
2- Coloration de Gram : ______________________________________

CULTURE
1- Dénombrement des germes urinaires (DGU) :__________________
2- Coloration de Gram : ______________________________________
3- Identification : ____________________________________________
4- Interprétation et Conclusion :

ANTIBIOGRAMME
Fait à Owendo, le / / 20…..

48
ANNEXE 6 : PRESENTATION DU CHUO

Inauguré le Vendredi 8 juillet 2016 par le chef d’état Ali Bongo Ondimba, le Centre Hospitalier
Universitaire d’Owendo (CHUO) est situé dans la commune d’Owendo.

A l’instar des autres hôpitaux na onaux (CHU de Libreville, CHU d'Agondjé), le CHU d’Owendo érigé
en direc on générale est cons tué d’une direc on chargée de la ges on financière, du personnel et
des matériels, un service d’Urgence et de Réanima on, de Chirurgie, de Traumatologie,
d’Orthopédie, d’Ophtalmologie, de Maternité, d’Imagerie médicale, d’un service Dentaire, de
Maintenance, d’un Bloc Opératoire, d’une pharmacie Hospitalière et d’un Laboratoire de biologie
scindé en deux (2) services (Un service d’Immuno-hémato et biochimie et Un service de
Microbiologie et parasitologie).

Sous la Direc on du docteur Elise EYANG OBAME, le centre hospitalier universitaire d’Owendo
(CHUO), a pour mission de soins : la recherche, la forma on.

Elle assure également les soins courant et spécialisés cura fs, les soins d’urgence, les consulta ons,
les examens de diagnos c, les traitements ambulatoires ainsi que l’hospitalisa on des malades. Il
par cipe également aux ac ons de médecine préven ves.

Il organise les ac vés d’études et de recherche opéra onnelle et par cipe a la forma on pra que et
universitaire des personnels de santé.

IL est spécialisé dans le domaine de l’Orthopédie –Traumatologie et y reste l’établissement na onal

de référence.

Présenta on du laboratoire de microbiologie et parasitologie

Organigramme du service

Situé au premier étage du bâ ment principal, le laboratoire du CHUO est composé comme suit :

50
 Direc on des Affaires Médicales :

Pr MAKOUNGOU Alain
Chef de département diagnos que et pharmacie :

Pr BOUYOU AKOTET Marielle

Laboratoire d’Immuno-Hémato-Biochimie : Laboratoire de Microbiologie :

Chef de service :MrAGAMBOUET ISSOGUI Chef de service : Mr MOUENGOFOU
Franck Rodrigue KOUMBA Jean
(Ingénieur de Biologie Médicale) (Doctorant en Microbiologie)

Major :Mme TSOGOU Épouse

ANGOUE Charlo e

(Ingénieur de Biologie Médicale)

Major Adjoint:

BENGONE Maturin

Responsables d’Unités :

Parasitologie/ Sérologie : Hématologie : Biochimie:Mr Hygiène et

Bactériologie : Mr MrGUI RICHARD MrMABIALA KANDYÉphre Sécurité :
ETHO Jean Charles NDONG Biyoghé Léon m N. Wilfrid et
(TSBM) (TSBM) (TSBM) (Master de Hulda
Biochimie) (Master de

51
 Organisation du laboratoire du CHUO
- L’infrastructure
Le service de microbiologie et parasitologie est cons tué de :

- 1 salle de récep on
- 1 salle de prélèvement génital
- 1 salle d’examen microbiologique
- 1 Bureaux de chef de service
- Fonc onnement
Une fois au CHUO le pa ent doit passer par trois endroits :

L’accueil : il passe de par le service renseignement où le dossier médical lui est créé pour une
éventuelle autre presta on puis on lui délivre une fiche iden fica on.

La caisse : il passe à la caisse où on enregistre les presta ons et en suite il lui est délivré une
qui ance

Laboratoire ce dernier est par la suite admis au laboratoire s’il possède des presta ons qui
nécessitent des examens biologiques.

Le fonc onnement dans ce laboratoire est subdivisé en trois phases :

Une phase pré analy que qui débute parle ne oyage, la désinfec on de la paillasse, la maintenance
des appareils et de prépara on des réac fs. Ces derniers sont reçus par les infirmiers et les stagiaires
qui se chargent d’installer les pa ents, récupérer les bons d’examens,enregistreret diriger le pa ent
dans la salle de prélèvement correspondante

Pour les examens de bactériologie, plusieurs types de prélèvement sont réalisés :

 Prélèvement vaginaux, urétrales, les escarres et les urines

Phase analy que : une foi, au laboratoire, les écouvillons et les urines sont alors immédiatement
ensemencés, les états frais et colora on réalisé; l’analyse (Inden fica on et l’An biogramme) se fait
soit de manière manuelle soit sur automate ou par un kit pour examen. Chaque examen requiert un
temps de réac on ou d’analyse abou ssant un résultat valide.

Phase poste analy que : Les résultats sont confirmés par le biologiste programmé à cet effet qui
valide, signe et remet le résultat au pa ent. En cas de doute sur un résultat l’examen est vérifié par
le chef du laboratoire qui part demander de refaire l’examen en cas de nécessité.

- Le matériel

52
Le service de microbiologie et parasitologie dispose de :

- 4 étuves de marque Incucell,

- 1 centrifugeuse de marque Ro na 380,

- 2 réfrigérateur pour la conserva on des réac fs (+ 8 degrés Celsius),

- 1 microscope op que de marque Leica,

- 1 congélateur pour la conserva on des milieux de culture préparés (+8 degrés Celsius),

- 1 Automate de bactériologie de type VITECK 2

- Les ressoures humaines

Le personnel est composé de :

- 1 Chef de service de microbiologie et parasitologie,

- 2 Secrétaire,
- 2 Filles de salles,
- 2 Infirmières assistantes
- 10 Biologistes
- 10 Technicien supérieurs de biologie médicale.
- Les ac vités
Les ac vités techniques

- l’examen cytobactériologique des urines,

- l’examen cytobactériologique des sécré ons génitales,

- l’examen cytobactériologique des pus de diverses origines,

- l’examen cytobactériologique des liquides de ponc ons

- l’examen cytobactériologique des différents écouvillonnages tels que gorge, crachats, langue,
sperme…

Les ac vités de forma on

Les élèves et étudiants en biologie médicale, les médecins et pharmaciens y sont formés au cours de
leurs stages pra ques.

Les ac vités de recherche

53
Plusieurs thèses et mémoires de médecine, de pharmacie et biologie, ainsi que des publica ons y
sont souvent réalisés.

ANNEXE 7 :U lisa on d’une lame de comptage de KOVA

54
ANNEXE 8 :TABLE DE VALEUR POUR URINE

55
ANNEXE 9 : CRISTAUX URINAIRES

56
ANNEXE 10 :Cylindres urinaires

57