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Etude de prévalence sur laVariation de la flore vaginales des femmes en ages de procrées venues

effectuer un prelevement cervico-vaginale à l’hopital militaire de yaoundé

DEDICACE

À
Ma famille pour ses peines et
grands sacrifices pour mes études

Mémoire de LICENCE, rédigé par KAMGOUE POUASSI Abel i


Etude de prévalence sur laVariation de la flore vaginales des femmes en ages de procrées venues
effectuer un prelevement cervico-vaginale à l’hopital militaire de yaoundé

REMERCIEMENTS
Au terme de ce travail, nous tenons à exprimer notre profonde gratitude envers tous ceux qui
ont contribué à sa réalisation.

Nos remerciements vont particulièrement à :

 Professeur MOHAMADOU BOUBA ADJI Directeur de l’IUT de l’université de


N’Gaoundéré pour avoir mis tous les moyens nécessaires pour le bon déroulement de
ma formation ;
 colonel medecin AYANGMA CÉLESTIN, colonel du laboratoire d’analyse médicale de
m’avoir accepté dans son hôpital ;
 Professeur …..qui a accepté avec un cœur ouvert de m’encadrer grâce à lui, ce mémoire a
pris une bonne direction ;
 Monsieur NGOTOM HADOU Jonathan mon encadreur de l’hôpital pour son assistance et
ses conseils ;
 Mes parents qui n’ont cessé de me soutenir tout au long de mes études ;
 Tous le personnel du laboratoire de l’HOPITAL MILITAIRE DE REGION 1 de m’avoir
orienté dans mon travail ;
 Le corps Enseignants et le personnel administratif de l’IUT de Ngaoundéré, en
particulier ceux de la filière Génie biologique, qui laisse à jamais leurs
grandes traces ineffaçables à ma formation ;
 Mes camarades de promotion pour les échanges qu’on a eu à avoir sur mon thème ;
 Tous ceux qui ont contribué de près et de loin à la réalisation de mon mémoire ;

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LISTE DES ABREVIATIONS

ADN : Acide Désoxyribonucléique


ARN : Acide Ribonucléique
ATP : Adénosine Triphosphate
CA : Corps Aberrant
CE : Corps Elémentaire
CR : Corps Réticulaire
IEA : Immuno-Enzymatic Assay
IST : Infection Sexuellement Transmissible
MOMP : Major Out Membrane Protein
OMP : Outer Membrane Protein
PCV : Prélèvement Cervico-Vaginal
PV : Prélèvement Vaginal
OMS : Organisation Mondial de la Santé
WHO : World Health Organization

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LISTE DES TABLEAUX

Tableau 2 : Types des infections du tractus génitales (OMS, 2005).......................................................7

LISTE DES FIGURES


Figure 1: Cartographie de l’unité de bactériologie de l’HMR 1...............................................................x
Figure 2: Généralités sur l’appareil génital féminin (microbiologiemedicale.fr)....................................5
Figure 7: Flore lactobacillaire normale : Coloration de Gram................................................................6
Figure 8: Schéma synoptique du travail effectué..................................................................................13

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TABLE DE MATIERES
DEDICACE.............................................................................................................................................i
REMERCIEMENTS..............................................................................................................................ii
LISTE DES ABREVIATIONS.............................................................................................................iii
LISTE DES TABLEAUX.....................................................................................................................iv
LISTE DES FIGURES..........................................................................................................................iv
Article I. PRESENTATION DE L’ENTREPRISE.....................................................................................vii
Section 1.01 PRESENTATION GENERALE........................................................................................vii
(a) HISTORIQUE.....................................................................................................................viii
Section 1.02 SITUATION GEOGRAPHIQUE....................................................................................viii
1. PHILOSOPHIES ET MISSIONS................................................................................................viii
Article II. PRESENTATION DU LABORATOIRE D’ANALYSE MEDICALE..................................................x
Section 2.01 Présentation générale.................................................................................................x
RESUME.............................................................................................................................................16
INTRODUCTION................................................................................................................................16
PREMIERE PARTIE : REVUE DE LITTERATURE.........................................................................18
I. Appareil génital de la femme.................................................................................................18
I .1. Généralités............................................................................................................................18
I.2. Anatomie et physiologie.........................................................................................................18
II- Flore Vaginale Normale............................................................................................................20
III- Evolution de flore vaginale...................................................................................................22
IV- LES INFECTIONS GENITALES FEMININES..............................................................23
IV.1 Généralités...........................................................................................................................23
IV.2 Les pathologies des voies génitales......................................................................................23
Article III. III- GENERALITE SUR CANDIDA ALBICANS.........................................................................27
Section 3.01 III-1- Définition de Candida Albicans.........................................................................27
Section 3.02 III-2- Structure...........................................................................................................28
Section 3.03 III-3- Morphogenèse.................................................................................................28
Section 3.04 III-5- Facteurs de virulence de Candida albicans.......................................................29
(a) III-5-1- Le Dimorphisme....................................................................................................29
(b) III-5-2- L’adhérence aux surfaces......................................................................................29
(c) III-5-3- les Enzymes Secrétées...........................................................................................29

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(d) III-5-4- L’interférence avec la Phagocytose.......................................................................30
Section 3.05 III-6- Identification de Candida albicans....................................................................30
(a) III-6-1- Examen à l’état frais..............................................................................................30
(b) III-4-2- Culture..................................................................................................................30
(c) III-4-3- Identification des levures......................................................................................31
(d) ( http://www.med.univmontp)........................................................................................35
Article IV. III- GENERALITE SUR LES ANTIFONGIQUES.......................................................................36
Section 4.01 III-1- Les azolés..........................................................................................................36
Section 4.02 III-2- Les échinocandines...........................................................................................37
Section 4.03 III-3- Les polyènes.......................................................................................................1
Section 4.04 III-4- Les analogues nucléosidiques.............................................................................1
Section 4.05 III-5- Les allylamines....................................................................................................1
Section 4.06 III-6- Les morpholines.................................................................................................2
DEUXIEME PARTIE : MATERIEL ET METHODES.........................................................................1
I. Matériel.....................................................................................................................................1
I .2) Examens gynécologiques.......................................................................................................1
II. METHODE...........................................................................................................................1
II.1. Accueil des patientes et collecte des données....................................................................5
(b) Accueil et enregistrements.................................................................................................5
(c) II-2-7- Collecte des données sur les patients......................................................................5
(d) II-2-8- Prélèvement.............................................................................................................5
(e) II-2-9- Méthodes d’analyse.................................................................................................7
(f) II-2-10- Antifongigramme.....................................................................................................11
Analyse des données.......................................................................................................................12
RESULTATS ET DISCUSSION.........................................................................................................13
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES..............................................................................................14
Sites internet :.......................................................................................................................................15

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Article I. PRESENTATION DE L’ENTREPRISE
Section I.01 PRESENTATION GENERALE.
L’HMR1 est un centre hospitalier de la capitale accueillant aussi bien patients civils que
militaires, et situé au cœur même du ministère de la défense à Yaoundé. Il dispose de
différents services rassemblés en bloc :

 BLOC A : Stomatologie ; Audiologie ; ORL ; Ophtalmologie ; Cardiologie-ECG.


 BLOC B : Pédiatrie ; Salle de Conférence ; Service diététique ; Gynéco-Obstétrique ;
Accueil – Renseignements ; Consultations ; Accueil office Supérieur ; Bureau cession.
 BLOC C : Bloc Opératoire ; Réanimation ; Service spécialisé d’analyses et de
biologie médicale ; Radiologie.
 BLOC D : Neurologie ; Hospitalisation ; Médecine ; Chirurgie ; Kinésithérapie ;
Cantine ; Buanderie ; Pharmacie ; CTA : Hospitalisation ; CTA : Psychologie.

Il emploie prioritairement et majoritairement un personnel militaire, mais reçoit également


des étudiants civils ainsi que des agents d'entretien civils. Il assure en tout temps la prise en
charge sanitaire des personnels des Forces de Défense, leurs familles et la population en
général. Il est aussi assigné à cette institution sanitaire, des missions d’Hôpital d’Instruction
des Armées pour la recherche et l’encadrement des stagiaires.

(a) HISTORIQUE.
Au fil des années l’Hôpital Militaire de Région N°1 a connu, plusieurs appellations.
Auparavant, il était dénommé « Infirmerie de la Garnison », puis Centre Médical Militaire
de Yaoundé au milieu des années 80. C’est le décret présidentiel n°93/213 d’août 1993, qui
érige finalement le Centre Médical Militaire de Yaoundé en Hôpital Militaire de Yaoundé.
Ce n’est qu’en juillet 2001, que le dernier décret présidentiel N° 93/185 transforme l’Hôpital
Militaire de Yaoundé en Hôpital Militaire de Région N°1.
C’est une formation hospitalière d’une capacité de 140 lits, s’étendant sur une superficie de
5000m2 et abritant 08 bâtiments. Comprend 22 services spécialisés, un bloc administratif
et une morgue en annexe au quartier EKOUNOU à Yaoundé.

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Section I.02 SITUATION GEOGRAPHIQUE.
L’Hôpital Militaire de Région N°1 est situé à quelques encablures du centre-ville de
Yaoundé, sur l’axe du monument de la Réunification, limité à l’Est à 200 mètres, par le lieu-
dit « Mess des officiers », et à l’Ouest par l’entrée principale du Ministère de la Défense.

1. PHILOSOPHIES ET MISSIONS.
Les missions de l’HMR1 sont nombreuses et variées :
 La médecine préventive et l’éducation pour la santé ;
 Le diagnostic et le traitement avec ou sans hospitalisation ;
 L’enseignement et la formation au profit du personnel des services de santé des
armées et la collaboration avec les établissements du Ministère de la Santé
Publique ;
 la préparation des équipes médicales et chirurgicales destinées au soutien des
forces de défenses ou d’intervention dans le cadre d’une mission de protection
civile, d’assistance humanitaire ou de mise à disposition des moyens militaires
de secours.

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Article II. PRESENTATION DU LABORATOIRE D’ANALYSE MEDICALE.


Section II.01 Présentation générale.
Le Laboratoire de HMR1 est organisé comme suit : d’un chef de service (médecine
biologiste) le LT/Col AYANGMA C., d’un directeur technique (major) le AT FOTSING,
d’un secrétariat avec à sa tête A/CM MATENE et des services du personnel d’appui (chef de
palliasse).

Le laboratoire est constitué :

 D’une unité de bactériologie ;


 D’une unité de biochimie ;
 D’une unité d’hématologie ;
 D’une unité d’immunologie ;
 D’une unité de parasitologie ;
 D’une banque de sang ;
 De 2 salles de prélèvement (sanguin et gynécologique).

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CHEF SSBAM

Col AYANGMA C.

CST MAJOR

SECRETARIAT SSBAM

A/CM MATENE AT FOTSING

CST
CST
PRELEVEMENT
BANQUE DE SANG
A/CM TCHAGADICK
AT NGOLLE NGOUA

CUT/CST CUT/CST CUT/CST CUT/CST

BACTERIOLOGIE BIOCHIMIE HEMATOLOGIE IMMUNOLOGIE


CUT/CST
CNE TCHOUAMO A/C ELOUTE S/C ABOUBA CNE MFOPET
PARASITOLOGIE

A/CM MENGUE

Figure 1 : ORGANIGRAMME DU LABORATOIRE DE L’HMR1

1.1. Présentation de l’unité de bactériologie.

C D
B

E
F
Mémoire de LICENCE
A , rédigé par KAMGOUE POUASSI Abel x

Figure 1: Cartographie de l’unité de bactériologie de l’HMR 1


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Le service de bactériologie est constitué de 6 postes reparti de la comme suit (fig 1) :

 A : le poste de réception et enregistrement des échantillons ;


 B : le poste d’ensemencement (sous hotte a flux laminaire) et de coloration
(GRAM, Ziehl-Neelsen…) ;
 C : le poste étiquetage des milieux de culture, identification et d’antibiogramme;
 D : le poste de microscopie ;
 E : le poste de préparation des milieux de culture ;
 F : le poste de stérilisation de la verrerie.

Pour parvenir à ces fin le service dispose d’un personnel de 5 techniciens de laboratoire
militaire et civil avec à leur tête le CNE TCHOUAMO. Le service dispose également des
équipements de pointe (hotte a flux laminaire, incubateur a O2, incubateur a CO2, autoclave,
microscope optique a fluorescence…) pour la réalisation des différents examens
bactériologiques et activités du service.

i. Examen réalises dans l’unité de bactériologie

L’unité de bactériologie de l’HMR1 réalise avec une forte demande des ECBU, PU, PCV,
Coproculture, mycoplasme et Recherche de BAAR. Avec un pourcentage réduit
Spermoculture, Hémoculture, Spermogramme, ECB des liquides de ponction, ECB des
Pus/Plaies.

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Prévalence des infections génitales chez les femmes reçues au Centre Médical EXACT

DEDICACE

Je dédie ce modeste
travail à :
MES PARENTS

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INTRODUCTION
Les infections génitales sont de plus en plus reconnues comme étant un problème
majeur de santé publique. Ces infections sont causées par des virus, des bactéries, des
parasites ou des champignons qui sont transmis ou acquis de plusieurs manières, généralement
lors des rapports sexuels avec une personne infectée ; ces infections peuvent être subdivisées
chez les femmes en deux en fonction de leur localisation : les infections génitales hautes et les
infections génitales basses.

On enregistre chaque année dans le monde plus de 340 millions de nouveaux cas
d’infections bactériennes et protozoaires sexuellement transmissibles (OMS, 2008).
L’organisation Mondiale de la Santé estime que 92 millions de nouveaux cas d’infection à
Chlamydia trachomatis surviennent chaque année dans le monde (OMS, 2008).

Le tractus génital féminin est un milieu naturellement sain composé de deux secteurs
microbiologiques séparés par l’utérus qui est très efficace contre l’ascension des bactéries
cervico-vaginales. La flore bactérienne dominante est composée d’une diversité de
lactobacilles en majorité joue un rôle de contrôle par le phénomène d’exclusion mutuelle qui
empêche qu’une espèce se multiplie aux dépends d’une autre. Cette régulation s’opère par des
mécanismes variés et complexes qui conduisent à l’établissement d’un environnement
écologique équilibré particulier (Quentin et al, 2006).

Certaines études sur les infections génitales féminines ont pu être réalisées en Afrique
notamment une étude réalisée au Cameroun par (Koanga et al, 2016) ayant objectivé des
résultats tels que la prédominance des Bactéries à Gram positif avec un taux de 71,62% et les
Staphylocoques étant l’espèce pathogène prédominante. Le taux d’isolement de Candida était
de 44,59%. (WHO, 2008).

Les infections génitales féminines causent beaucoup de dégâts dans la santé des
femmes en général et des femmes dans des zones sous développées en particulier. Ces dégâts
peuvent être entre autre : la stérilité, les grossesses extra-utérines, les douleurs pelviennes
chroniques et les fausses couches.

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Devant la grande diversité des infections du tractus génital chez les femmes et la
diversité de manifestations cliniques de ces infections, la gravité de leurs impacts sur ces
femmes, il nous a semblé intéressant de nous poser la question de savoir :

Quelles peuvent être les principaux germes responsables de ces infections chez les femmes
dans la ville de Garoua?
C’est dans l’optique de répondre à cette question que nous nous sommes fixé comme
objectif général de cette étude :

Evaluer la prévalence sur la variation de la flore génitale des femmes en age de


procréer venues effectuer un prélevement cervico-vaginal à l’hopital militaire de yaoundé et
plus spécifiquement de :

 Ressortir la prévalence des germes responsables de ces infections génitales attaquant


les femmes dans la ville de yaoundé.

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PREMIERE PARTIE : REVUE DE LITTERATURE


I. Appareil génital de la femme

I .1. Généralités
L’appareil génital féminin intervient dans les fonctions reproductives et sexuelles de la
femme. L’appareil génital a pour fonction non seulement le plaisir sexuel mais aussi la
procréation. Ainsi connaître le fonctionnement de son appareil génital c’est aussi connaître sa
capacité de procréer (Charlotte, 2016).
Le milieu vaginal est composé d’une phase liquide, riche en eau et en substances
d’origine plasmatique complétées par les composantes de la glaire cervicale. Les éléments
solides et figurés du milieu vaginal consistent en cellules vaginales exfoliées, leucocytes et
bactéries dont la concentration varie de 106 à 1012 bactéries par gramme de sécrétion vaginale
selon que cette flore est normale ou pathologique (Quentin, 2006).

I.2. Anatomie et physiologie


L’appareil génital féminin est composé de deux secteurs microbiologiques. Le premier
secteur comporte la vulve, le vagin, et l’exocol. Il est largement colonisé par les flores
commensales. Inversement, le second secteur, composé de l’endocol, la cavité utérine, la
cavité tubaire et le pelvi-péritoine, est stérile. Ces deux secteurs sont séparés par le col de
l’utérus qui peut être considéré comme un véritable « verrou » microbiologique très efficace
contre l’ascension des bactéries cervico-vaginales (Quentin, 2006).

Il comprend:
 Les ovaires (gonades féminines)
 Le tractus génital
○ Trompes utérines
○ Utérus
○ Vagin
○ Organes génitaux externes
 La glande mammaire (Chantal, 2011).

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I.2.1 Ovaires
Deux ovaires qui libèrent les ovocytes et sécrétion des hormones stéroïdes sexuelles.
Entourés par un épithélium formé d’une seule couche de cellules cubiques…Au centre tissu
conjonctif lâche très vascularisé (artères et veines tortueuses qui irriguent le cortex) :
médullaire (Chantal, 2011).

I.2.2 Tractus génital


 Les trompes utérines qui sont deux conduits musculo membraneux d’environ 12 cm de
long composé de quatre portions (Le pavillon, l’ampoule, l’isthme, le segment intra-
mural ou espace interstitiel) dont les fonctions sont : l’acheminement de l’œuf vers
l’utérus, la nutrition de l’œuf, la migration et la survie des spermatozoïdes depuis la
cavité utérine jusqu’au lieu de la fécondation (Chantal, 2011).
 L’utérus est un organe creux, vascularisé, musculeux avec des parois épaisses, voué à
accueillir, héberger et nourrir l’œuf fécondé. On le localise dans le bassin, entre le
rectum et la base de la vessie. Sa base, très étroite, dévoile le col de l’utérus qui fait
saillie dans le vagin (Delalande, 2017).
 Le vagin est un organe aux parois minces, s’étend du col de l’utérus jusqu’à l’extérieur
du corps au niveau de la vulve. Il est situé entre le rectum en arrière, l’utérus en haut et la
vessie en avant, peut mesurer jusqu’à 10 cm et est capacité à une très grande élasticité.
Propice au développement des bactéries, il leur fournit des éléments nutritifs, de l’humidité
et de la chaleur pour favoriser leur condition de vie. Le milieu auquel il appartient est
liquide, riche en eau et en substances d’origine plasmatique de la glaire cervicale,
d’éléments solides tels les leucocytes. Il dispose de plusieurs rôles : nous avons en exemple
le passage du fœtus et des annexes lors de l’accouchement, le passage des sécrétions
tubaires et cervico-utérines, il est une voie d’exploration gynécologique et chirurgicale
ainsi qu’un récepteur hormonal particulièrement sensible aux sécrétions oestrogéniques.
(Delalande, 2017)

I.2.3 Organe génitaux externes


La vulve regroupe un ensemble d’organes externes au vagin. Cette partie interne est
secondaire dans les infections vaginales d’où le nom de vulvo-vaginal (Delalande, 2017). Ces
organes externes comprennent le vestibule avec les glandes de Bartolin, les petites lèvres, les
grandes lèvres et le clitoris (Chantal, 2011).

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La glande mammaire est une glande exocrine dont l’activité est hormono-dépendante.
Glande tubulo-alvéolaire formée de 10 à 20 lobes entourés de tissu conjonctif et de tissu
adipeux. Chaque lobe est drainé par un canal excréteur : canal galactophore qui convergent
vers le mamelon et s’ouvrent au niveau de l’area cribosa. Sont ramifiés en canaux de plus en
plus fins qui recueillent le produit de sécrétion des glandes tubulo-acineuses (Chantal, 2011).

Figure 2: Généralités sur l’appareil génital féminin (microbiologiemedicale.fr)

II- Flore Vaginale Normale


Le vagin est un écosystème dynamique où chaque femme possède de 8 à 10 germes en
équilibre (Figure 4). La flore vaginale féminine est particulièrement importante par sa dimension, sa
diversité, son évolution en fonction de l’âge et son rôle. Elle joue un rôle majeur dans la protection
de la muqueuse vis-à-vis de l’infection et le maintien de l’équilibre physiologique de l’appareil génital
féminin. Cette flore est sous la dépendance de l’imprégnation oestrogénique ce qui rend compte de
ses variations. La flore vaginale normale, ou flore de Doderleïn, est un milieu en constante évolution,
qui peut subir des modifications importantes physiologiques sous l’influence de nombreux facteurs
tels que : âge, imprégnation hormonale, activité sexuelle, contraception, conditions hygiéniques.
Présente dès les premiers jours de vie de la petite fille, elle reste pauvre jusqu’à la puberté ; puis les
œstrogènes vont induire la sécrétion de glycogène, substrat favori des lactobacilles qui s’y
développent dès lors.

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Figure 4:Aspect d'une sécrétion vaginale normale

Au sein de la flore vaginale normale, trois groupes de bactéries peuvent être distingués :
Le groupe 1 : est composé de la flore dominante, ou flore de Doderleïn. A l’état physiologique,
elle est cohabitée par différents bactéries commensales inoffensives est constituée
principalement du genre Lactobacillus, bacilles à coloration de gram positive, avec plus de
107 (germes/ ml) de sécrétions vaginales appelées leucorrhées. Les espèces les plus
rencontrées sont Lactobacillus jensenii, L. crispatus, L. gasseri et L. iners (Cocho., 2012 ;
Bohbot., 2007). Les Lactobacillus adhérent à la muqueuse vaginale et créent un biofilm
protecteur. Ils assurent ainsi un rôle de protection contre les agressions par des micro-
organismes pathogènes grâce à différents mécanismes d’action (Lepargneur et al., 2002).

 Inhibition de croissance du pathogène : au niveau vaginal, le glycogène est une source


carbonée importante. L’activation hormonale des œstrogènes lui permet de se déposer
dans l’épithélium vaginal. Les Lactobacilles hydrolysent le glycogène contenu dans les
cellules vaginales et conduisent à la formation d’acide lactique, cette acidité est
indispensable pour lutter contre l’infection. Ils maintiennent ainsi l’acidité naturelle
vaginale. Ils sont acidotolérents contrairement aux pathogène vaginaux qui sont
sensibles au PH acide à l’exception de C albicans. Le pH vaginal normal varie entre 3.8 et
4.5 et augmente pendant les menstruations. De plus, les Lactobacillus sécrètent du
peroxyde d’hydrogène H2O2, par mécanisme d’oxydation ou par production de
composées toxiques, induisant la mort de certaines bactéries. Tous les Lactobacillus ne
possèdent pas la même capacité de production de peroxyde d’hydrogène. Ils
synthétisent également des bactériocines qui sont des substances protéiques
antimicrobiennes, ces dernières forment des pores au niveau de la membrane
cytoplasmique d’une cellule cible. (Foughhali et Tafer., 2021).
 Inhibition de l’adhésion du pathogène : les Lactobacillus adhérent aux cellules
épithéliales vaginales en se fixant sur des récepteurs cellulaires. Un biofilm se crée et
protège ainsi la muqueuse vaginale.

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Le groupe 2 : comprend des espèces bactériennes issues de la flore digestive : streptococcus


agalactiae, Enterococcus, des entérobactéries (E. coli, proteus, klebsiella), des bactéries
anaérobies (Prevotella spp. Bacteroides spp. Clostridium spp), G. vaginalis, des mycoplasmes,
C. albicans.
Le groupe 3 : est caractérisé par des bactéries de portage exceptionnel, issues de la flore
cropharyngée, avec le plus souvent : Haemophilus sinfluenzae et H. parainfluenzae,
streptococcus pyogènes.

III- Evolution de flore vaginale


La flore vaginale évolue en fonction des différents stades de la vie génitale (Bergogne.,
2007) :

Dès la naissance, le vagin est rapidement colonisé par des bactéries fécales et cutanées.

Cette flore reste quantitativement pauvre jusqu’à à la puberté.

A la puberté débute la phase d’imprégnation oestrogénique. Le vagin est


progressivement colonisé par une flore d’adulte, la flore de Doderleïn. La synthèse
d’œstrogènes favorise l’accumulation de glycogène dans les cellules vaginales. Cette synthèse
de glycogène, qui constitue le substrat préférentiel des Lactobacillus, entraine la production
d’acétate et de lactate, donnant ainsi un PH acide et empêchant la multiplication de bactéries
pathogènes.

Chez la femme adulte, les menstruations, la grossesse, les rapports sexuels et d’autres
facteurs locaux fragilisent l’écosystème vaginal. Au cours de la grossesse, le taux élevé
d’œstrogènes induit une production plus importante de glycogène au niveau de la muqueuse
vaginale, ce qui fournit une source de carbone pour les candidas et favorise ainsi leur adhérent
aux cellules épithéliales.
Après la ménopause, l’imprégnation oestrogénique diminue, le PH vaginal augmente et
une atrophie vaginale s’installe, ce qui favorise l’apparition de vaginites infectieuses.
L’œstrogènothérapie permet de restaurer la flore lactique (Figure 5).

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Figure 5:Rôle des œstrogènes et des lactobacilles dans l’équilibre de la flore normale vaginale

IV- LES INFECTIONS GENITALES FEMININES

IV.1 Généralités
Les infections sexuellement transmissibles constituent un véritable problème de Santé
publique, en particulier dans les pays en voie de développement. La fréquence des infections
génitales et leurs séquelles, au premier rang desquelles la stérilité, justifie leur prise en charge
précoce et adéquate, qui passe par un diagnostic précis (Sow et al, 1999).

IV.2 Les pathologies des voies génitales


Les perturbations rapportées dans la composition de la flore vaginale, qui sont à
l’origine de la majorité des pathologies vaginales, semblent être en rapport avec une
modification des récepteurs cellulaires. Ces modifications rendent les bactéries habituelles(les
Lactobacilles) inaptes à adhérer aux cellules pour maintenir l’équilibre.
La plupart de ces récepteurs sont connus ; ils concernent essentiellement :
Gardenerella vaginalis, Mobilincus curtisii et mullieris mais aussi Candida albicans,
Neisseria gonorrhoeae, Clamydia trachomatis (CATALAN et al, 2000).

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IV.3 Autres infections génitales féminines


La flore vaginale féminine est particulièrement importante par sa dimension, sa
diversité, son évolution en fonction de l’âge et son rôle. Elle joue un rôle majeur dans la
protection de la muqueuse vis-à-vis de l’infection et l’équilibre physiologique de l’appareil
génital féminin (Rajaà, 2018).
La flore vaginale normale est principalement composée de lactobacilles (genre
Lactobacillus spp, au moins 8 espèces). Le pouvoir acidifiant de ces derniers est à l’origine
d’un pH vaginal entre 3,8 et 4,5 et permet ainsi d’écarter toute multiplication de la plupart des
agents pathogènes.

Figure 3: Flore lactobacillaire normale : Coloration de Gram

Un processus inflammatoire localisé au niveau de la cavité vaginale, peut être


consécutif à la présence d’un ou plusieurs agents infectieux associés : bactéries, parasites,
virus…
La vaginite et la vulvo-vaginite sont des motifs de consultation très fréquents en
gynécologie. Les vulvo-vaginites se définissent par des symptômes cliniques divers dominés
par les phénomènes inflammatoires. Elles se différencient ainsi des vaginoses bactériennes
dans lesquelles, par définition, l’inflammation est inexistante ou mineure (Rajaà, 2018).
Les infections du tractus génital se rapportent à trois différents types d’infections qui
affectent le tractus génital (Tableau) :

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Tableau 1 : Types des infections du tractus génitales (OMS, 2005).

Types d’infections Origines Mode de propagation Exemples courants


Infections Micro-Organismes Une prolifération peut Candidose, vaginose
endogènes normalement engendrer des bactérienne
présents dans le symptômes
vagin
Infections Micro-organismes Lors d’actes médicaux ou Maladie
iatrogènes exogènes ou suite à un examen, inflammatoire
normalement l’infection peut remonter pelvienne suite à un
présents dans par le col utérin avortement
l’organisme jusqu’aux voies génitales (provoqué ou
 Endogène hautes, et causer une spontané) ou à
(vagin) infection grave de d’autres actes
 IST l’utérus, des trompes de transcervicaux.
Fallope et d’autres Egalement,
organes pelviens. La nombreuses
transmission d’une complications
infection par le biais des infectieuses de la
instruments chirurgicaux grossesse et du post-
qui n’ont pas été partum.
correctement stérilisés
est possible

IST Partenaires sexuels Contact sexuel avec un Gonococcie,


porteurs d’IST partenaire infecté chlamydia, syphilis,
chancre mou,
trichomonas, VIH

II.4 Agents responsables


 La Vaginose Bactérienne : La cavité vaginale est colonisée à l’état normal par des
Lactobacilles. La disparition des Lactobacilles au profit d’une flore pluri microbienne,
essentiellement des Anaérobies, mais aussi d’autres micro-organismes comme
Gardnerella vaginalis conduit à la vaginose bactérienne. La VB est due à un
déséquilibre de la flore vaginale dont les causes sont multiples : douches vaginales,
excès d’hygiène, carences œstrogéniques, antibiotiques… Les rapports sexuels
peuvent être en cause, non par transmission de germes (la VB n’est pas une Infection
Sexuellement Transmissible), mais par action mécanique ou chimique (contact avec le
sperme très alcalin). Le déséquilibre de cette flore aboutit à une disparition quasi

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complète des lactobacilles au profit de la flore anaérobie. La prolifération de cette


flore anaérobie est polymorphe même si Gardnerella vaginalis est très fréquemment
retrouvé. Cette pathologie fut aussi appelée «syndrome de la malodeur vaginale» en
raison de leucorrhées d’odeur désagréable. Les leucorrhées observées au cours de cette
pathologie ne s’accompagnent pas d’inflammation comme en témoigne l’absence de
leucocytes dans les sécrétions vaginales.
 La candidose vulvo-vaginale est l’une des infections les plus fréquentes en
consultation gynécologique. Elle occupe le second rang après la vaginose bactérienne.
La candidose vulvo-vaginale est une atteinte infectieuse de la vulve et du vagin par des
levures du genre Candida. L’agent pathogène est généralement Candida albicans,
une levure commensale de la muqueuse vaginale. Les agents en cause les plus
fréquents sont Candida albicans (85 à 90% des cas), Torulopsis glabrata (femme
enceinte++) et Candida tropicalis. Elle évoque une réaction allergique (œdème, prurit,
hyperdesquamation) ;
 Infection àTrichomonas vaginalis est un protozoaire flagellé, mobile, extracellulaire,
anaérobie. Un parasite strictement humain. Le développement de Trichomonas
vaginalis est encouragé par le déséquilibre en oestrogènes qui favorise l’atrophie
épithéliale vaginale, le développement d’un milieu alcalin et la disparition de la flore
lactobacillaire.
 Les vaginites bactériennes qui sont dues à des bactéries généralement d’origine
exogène, mais parfois liées à la flore locale. Streptocoque B, Staphylocoques,
Escherichia coli, Proteus mirabilis ou autres Entérobactéries, représentent la
majorité des germes incriminés (Rajaà, 2018).
 Gonococcie : Chez la femme, l’infection à gonocoque est asymptomatique dans 70 %
des cas. En effet, Neisseria gonorrhoeae colonise essentiellement l’endocol, mais
parfois, également, l’urètre féminin (Rajaà, 2018). A la suite d’un contact sexuel avec
une personne infectée, l’infection généralement au niveau du col d’où elle peut
s’étendre vers les régions voisines (urètre, vagin, anus), les organes annexes (trompes
de Fallope, endomètre, péritoine) provoquant une inflammation pelvienne source
d’obturation tubulaire et de stérilité. Certaines souches particulières de Gonocoques
ont une tendance marquée à disséminer dans l’organisme et provoquer des arthrites
voire une septicémie qui justifie l’hospitalisation (CATALAN et al, 2000) ;

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II.5 Causes de ces infections


Les infections féminines sont généralement réponses d’un déséquilibre de la flore
vaginale c’est-à-dire la colonisation et l’élimination des lactobacilles par ces agents infectieux
pour leur propre profit.
Ce déséquilibre de la flore vaginale peut être causé par :
 Le système hormonal : la fréquence à laquelle les hormones sont produites peut
influencer la survie et la croissance des lactobacilles ;
 La fréquence sexuelle : les lactobacilles ne peuvent pas résister à un choc dans un
intervalle de temps court et la présence des spermatozoïdes également affectent le pH
de l’écosystème vaginal, et donc la survie des lactobacilles ;
 La toilette intime : les produits utilisés pour la toilette intime peuvent altérer les
bactéries de la flore vaginale. Lorsque la femme introduit sa main dans son vagin,
elle dépose ainsi ces bactéries commensales qui peuvent se transformer en
pathogènes avec les facteurs de vie dans le milieu vaginal ;
 Le pH du vagin : le pH du vagin est naturellement acide. Mais en présence de
certains facteurs défavorisant, le milieu peut se transformer en milieu basique et ainsi
la mort des lactobacilles sera conséquence d’un déséquilibre de la flore normale.
 La nature de l’acte sexuel : l’acte sexuel peut être soit anal ou frontal. On peut donc
de ce fait avoir des possibles contaminations puis altération de la flore. D’où
déséquilibre.

Article III. III- GENERALITE SUR CANDIDA ALBICANS


Section III.01 III-1- Définition de Candida Albicans
Candida albicans est une levure appartenant à la famille des mycètes. Ces champignons
unicellulaires (eucaryotes) se reproduisent par bourgeonnement ou par fission binaire (Kurtz et al.,
1990).

Candida albicans est une levure polymorphique associée à la microflore indigène vaginale et oro-
gastrointestinale de plusieurs espèces animales (Odds., 1988). Le genre Candida comporte 200
espèces (Kurtz et al., 1990) dont une dizaine seulement possèdent la faculté de s’adapter à une
température de 37°C et peuvent donc être occasionnellement pathogènes pour l’homme ; ce sont C.
albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. pseudotropicalis, C. guiÏlierrnodii, C. krusei, C parapsilosis, C
zeylanoides, C. stellatoïdea, C. dubliniensis et C. brumptii..., (Dotto., 1984) (Samson., 1990) ;
(McCullough et al., 1996).

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Section III.02 III-2- Structure


C. albicans est un organisme eucaryote composé d’un noyau et d’une membrane plasmique
formée de protéines, de phospholipides, de glycolipides et de stérols estérifiés, ces derniers sont
spécifiques aux champignons. Par conséquent la membrane est une cible de choix pour les
antifongiques appartenant à la classe des polyènes. De plus, C. albicans est entouré d’une paroi
composée de mannan, de glucan et de chitine, qui agit comme barrière de protection. La paroi est le
site d’interaction entre la levure et l’environnement (McCullough et al., 1996).
Section III.03 III-3- Morphogenèse
C. albicans est un microorganisme capable de croître sous plusieurs formes morphologiques
afin de s’adapter à diverses conditions nutritives et environnementales. (Odds., 1988) Les différents
morphotypes sont les suivants :

levure (blastospore ou blastoconidie)


hyphe (Mycélium vrai) pseudo-hyphe
(Pseudo-mycélium) chlamydospore

Figure 10:Aspect macroscopique du Can- Figure


9:Aspect microscopique du Candida dida albicans état saprophyte albicans état pathogène

Plusieurs facteurs peuvent influencer la morphogenèse : la température, le pH, la source de carbone,


la source de l’azote, la présence d’un senseur de quorum (quorum sensing), le contact physique avec
une surface, le stade de croissance, la composition du milieu de culture, la taille de l’inoculum, la
lumière visible et certains produits chimiques (Ernst., 2000) ; (Bensen et al., 2002).

De nombreuses classifications ont vu le jour. Elles se modifient avec l’évolution des


connaissances et l’application récente à la mycologie des techniques de biologie moléculaire. Pour
des raisons de simplicité, nous avons retenu celle de (Bennet et Kwon-Chung., 1992) représentée ci-
dessous :

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Tableau 01 : La Classification du Candida albicans :


Règne Champignons

Division Eumycota
Phylum (sous-division) Deuteromycotina

Classe Blastomycète (levures asexuées)


Ordre Moniliales

Famille Moniliaceae
Genre Candida

Espèce Candida albicans

Le genre candida compte 196 espèces, dont seulement une dizaine ont été reconnues
pathogènes pour l’homme, en raison de leur faculté d’adaptation à la température de 37°C
(CARDENES P et CARMEN D., 2009).

Section III.04 III-5- Facteurs de virulence de Candida albicans


(a) III-5-1- Le Dimorphisme
Le dimorphisme correspond à la transition de la forme levure à la forme hyphale induite par un
grand nombre de stimuli comme la température, le pH, la composition du milieu. Les tubes
germinatifs (structures intermédiaires) entre le blastospore et le mycélium augmentent l’adhérence
aux cellules épithéliales et favorisent ainsi la colonisation en induisant l’endocytose du pathogène.
Par la suite, la production d’hyphes augmente l’invasion et la destruction tissulaire. (Ferroni et al.,
2010)

(b) III-5-2- L’adhérence aux surfaces


Elle peut se faire au niveau des muqueuses, mettant en jeu des interactions spécifiques de
type ligand/récepteur avec les mannoprotéines de la paroi de la levure. On parle d’adhésines, telles
que celles de la famille de Als1. L’adhérence peut se faire aussi à partir de la formation de biofilms.
De plus, l’hydrophobicité de la paroi du champignon favorise une interaction non spécifique avec les
épithéliums. Il a été montré que la nature et le degré de glycosylation des protéines de la paroi
altèrent cette hydrophobicité. Ceci pourrait expliquer en partie le fait que certaines souches ou
sérotypes de Candida albicans soient plus adhérents à un type cellulaire donné de l’hôte qu’à
d’autres. (Lagane., 2007).

(c) III-5-3- les Enzymes Secrétées


C. albicans possède toute une gamme d'enzymes hydrolytiques qui s’expriment
différemment selon l'environnement qui favorise la virulence en dégradant les surfaces des
muqueuses de l’hôte ainsi que ses défenses immunitaires, On peut citer par exemple les enzymes de
la famille SAP (secreted aspartyl proteinase), qui compte actuellement dix membres et dont les rôles

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sont variés: dégradation de protéines, dégradation des structures cellulaires et tissulaires de l'hôte,
dégradation du système immunitaire. Leur expression dépend du pH, de la localisation de C. albicans
et de sa forme morphologique. C. albicans possède encore des phospholipases (A, B, C et D) et des
lipases (1 à 10). (Lagane., 2007)

(d) III-5-4- L’interférence avec la Phagocytose


Candida albicans est capable de produire des peptides acides pouvant inhiber la liaison aux
phagocytes et le métabolisme oxydatif. Aussi, la levure peut induire l’apoptose des macrophages et
des neutrophiles échappant ainsi aux cellules du système immunitaire. (Lagane., 2007).

Section III.05 III-6- Identification de Candida albicans


(a) III-6-1- Examen à l’état frais
Il consiste à observer, entre lame et lamelle, des leucorrhées dans une goutte d’eau
physiologique permettant ainsi de mettre en évidence :

 Des levures avec des bour-  Des pseudo filaments ; geons polaires, une paroi
mince ;  Des filaments vrais.

Figure 11: Aspect microscopique des levures à l’état frais.

(b) III-4-2- Culture


La culture des champignons se fait à l’incubateur entre 25 et 37οC pendant 24 à 48 h. La
culture peut se faire sur différents milieux :

 Le milieu gélosé de Sabouraud : ce milieu permet l’isolement des champignons pathogènes


et saprophytes, mais aussi des bactéries ;

 Le milieu Sabouraud-Chloramphénicol (SC) : le chloramphénicol empêche la pousse de


certaines bactéries associées ;

 Le milieu Sabouraud-Actidione-Chloramphénicol (SAC) : l’addition de l’actidione permet déjà


un début d’identification des levures, car elle empêche le développement de certaines
espèces fongiques.

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(c) III-4-3- Identification des levures

a) III-4-3-1- examen macroscopique des colonies


Les colonies de levures présentent un aspect blanchâtre, crémeux, visqueux, mât ou brillant.

Figure 12:Aspect macroscopique des colonies de levures de Candida sur milieu Sabouraud
chloramphénicol.

b) III-4-3-2- Identification
La réalisation des tests d’identification ne peut être envisagée qu’en présence de colonies
bien individualisées, en pratique courante. L’identification de l’espèce candida Albicans fait appel à la
détermination de caractères morphologiques, physiologiques et plus récemment immunologiques.
On distingue :

2) III-4-3-2-1- Test de Blastés

 Principe

Candida albicans et candida dubliniensis sont les seules espèces qui produisent des tubes germinatifs
en 3 heure a 37°C dans du sang au-delà de 4heures, la germination est plus spécifique pour Candida
albicans que pour candida dubliniensis.

3)  Technique

Appelé aussi test de filamentation, il consiste à émulsionner une pointe de pipette de levures dans 1
ml de sérum de lapin ou humain, puis laisser incuber à 37 C° pendant 3 à 4 heures. Lorsqu'il s'agit de
candida albicans, on observe dans presque 90% des cas un tube germinatif partant de levure sans
présence de constriction à la base, visible au microscope optique.

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4) III-4-3-2-2- Le test de Chlamydosporulation

 Principe

C’est un milieu sélectif et différentiel pour l’isolement et l’identification des champignons. Du


fait qu’il comporte des substrats chromogéniques, les colonies de C. albicans, de C. tropicalis et de C.
krusei y produisent des couleurs distinctes, permettant ainsi de détecter directement ces espèces de
levure sur la boîte de Pétri d’isolement. Les colonies de C. albicans sont d’un vert clair à moyen,
celles de C. tropicalis sont bleu verdâtre à bleu métallisé, et celles de C. krusei sont rose pâle,
blanchâtre en périphérie.

Ce test a pour objectif de favoriser chez certaines levures, et plus particulièrement chez candida
albicans, l’apparition de structure morphologique particulièrement appelées Chlamydospores. Dans
ce test on utilise le milieu PCB (pomme de terre-carotte-bile) pour l’identification.

Figure 13:Les Chlamydospores de Candida albicans sur milieu


pomme carotte bile (RAT ou PCB)

 La méthode de travail est comme la suit :

- Couler le milieu PCB sur une lame propre présente dans une boite de pétrie ;

- Faire deux stries dans les deux côtés de milieu par une lamelle propre ;

- Ensemencer les colonies prélevées à partir d’un milieu d’isolement par des stries sur les
côtés de milieu PCB à l’aide d’une pipette pasteur ;

- Recouvrir la lame par une lamelle propre ;

- Incubés la boite à l’étuve à 25-28°C pendant 24-48h.

5) III-4-3-2-3- Test agglutination Bichro-latex albicans (Fumouze Diagnostics)

Le Principe de ce test sur lame repose sur l’agglutination, en présence de blastospores de C.


albicans, de particules de latex sensibilisées par un anticorps monoclonal spécifique d’un antigène de

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la paroi de cette levure. Ces particules de latex colorées en rouge sont en suspension dans un contre-
colorant vert.

Ce test permet de distinguer l’espèce C. albicans par agglutination de particules de latex


sensibilisées par un anticorps monoclonal qui lui est spécifique. Ainsi, s’il s’agit de C. albicans,
l’agglutination des particules de latex par les blastospores se traduira par la formation d’agglutinat
rouge sur un fond vert (figure14).

Figure 14:Bichro_latex® albicans

6) III-4-3-2-4-La Réduction des sels de tétrazolium


Ce test repose sur la réduction du chlorure de 2, 3,5-triphényltétrazolium incorporé dans le milieu
de culture en un produit coloré qui confère aux colonies de levures une coloration allant du blanc au
rouge selon l'espèce. (Bouchara et al., 2010).

7) III-4-3-2-4- É tude de l’assimilation des sucres

Elle se fait à l’aide des galeries commercialisées. Parmi les plus utilisées nous citerons:

 API 20C Aux (Bio Mérieux) : elle est fondée sur l’assimilation de 19 sucres différents, avec
l'assimilation de la xylose et le α-méthyl-D-glucoside chez C. albicans.

Figure 15: Galerie API 20 C pour l’identification de Candida albicans

8) III-4-3-2-5- Tests Enzymatiques


● Le fongiscreen 4H (Biorad) : permet d’identifier en quatre heures la levure la plus
pathogène et les plus fréquente : C. albicans, Elle est fondée sur la recherche de cinq
enzymes spécifiques.

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● Immunofluorescence directe : Elle utilise des anticorps anti-C. albicans. La révélation se


fait par un conjugué anti-IgG conjugué à la fluorescéine.

9) III-4-3-2-6- Auxanogramme
C'est un milieu synthétique qui permet d'étudier le comportement des levures vis à vis des
glucides utilisés comme seule source de carbone organique. Il contient des acides aminés, des
vitamines et des ions minéraux. Seules les levures capables d'utiliser le sucre comme substrat
carboné vont se développer et former des colonies (Chabasse et al., 1999) (Grillot., 1996).

10) III-4-3-2-7- Zymogramme ou test de fermentation


Les cultures de levures se font en microaérobie. La fermentation se traduit par le
dégagement de CO2 après incubation à 37°C pendant 24 à 48 heures et une acidification du milieu
par formation d'acides au cours de la fermentation, l'utilisation des glucides se traduit par un virage
de l'indicateur de pH. Ce test a un intérêt taxonomique (Chabasse et al., 1999) (Grillot., 1996).
II.1.4.1 Infection a Gardnerella

vaginalis : Vaginose

bactérienne i. Description

La vaginose bactérienne (VB) est une des affections génitales les plus fréquentes (Keane
et al., 2000), résultant d'un profond déséquilibre de l'écosystème vaginal (Bergogne,
2007 ). Elle est due à la diminution ou la disparition des bactéries lactiques au profit d'une
flore pluri microbienne (Émile, 2009 ; Menard & Bretelle, 2012), essentiellement des
anaérobies, mais aussi d'autres micro-organismes comme Gardnerella vaginalis et
Mycoplasma hominis peuvent entrainer une vaginose bactérienne (Judlin, 2003 ; Keane
et al., 2000). Si l'écoulement vaginal et l'odeur sont les symptômes les plus fréquemment
associés au diagnostic de la VB, 50 % des femmes ayant une VB ne présente pas de
symptômes (Klebanoff et al., 2004). Parmi ces bactéries, Gardnerella vaginalis et
Atopobium vaginae sont les plus incriminées (De Backer et al., 2007 ; Bradshaw et al.,
2006).

ii. Diagnostic

Il existe deux méthodes de référence pour le diagnostic de la VB : le diagnostic clinique et le


diagnostic microbiologique.

a. Critères cliniques
Le diagnostic clinique repose sur le score d'Amsel, pour lequel la vaginose bactérienne est

avérée si trois paramètres au moins sont positifs parmi quatre (Émile, 2009 ; Bohbot 2011) : -
leucorrhées blanc-grisâtre, fluides, homogènes et adhérant à la muqueuse vaginale ;

- odeur de « poisson pourri », soit spontanée, soit après addition d'une goutte de potasse à

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10 % aux secrétions vaginales (sniff-test) ;

- pH vaginal supérieur à 4,5 ;

- présence de clue-cells à l'examen direct des sécrétions vaginales.

b. Critères microscopiques

Comme nous pouvons le voir ci-dessous, la photo de droite correspond à une flore évocatrice d'une
vaginose bactérienne ce qui signifie qu'il y a un réel déséquilibre au niveau de l'écosystème
microbien vaginal se traduisant par le remplacement de la flore lactobacillaire par une flore
anaérobie.

Figure 5: Frottis de flore vaginale normale contre une flore de vaginose bactérienne

(d) ( http://www.med.univmontp)
L'examen complémentaire développé pour le diagnostic de la vaginose bactérienne est l'examen au
microscope d'un étalement sur lame des secrétions vaginales après coloration de Gram ; il permet
d'établir le score de Nugent (Émile, 2009 ). L'établissement de ce score tient compte pour
l'essentiel de la corrélation inverse entre la densité en lactobacilles et celle de deux autres
morphotypes bactériens (Gardnerella vaginalis et Mobiluncus spp.). Un score supérieur ou égal à
7 définit une vaginose bactérienne (Menard et Bretelle, 2012). Pour chaque morphotype, on établit
un score de 0 à 4 par le calcul du nombre de bactéries par champ selon le tableau 1.

Tableau 1score
: de nugent (Émile, 2009).

ScoreMorphotype
Lactobacillus
Morphotype des espèces
Gardnerell
a et bacteroides
Morphotype
Mobiluncus
0 +4 0 0
1 +3 +1 +1 ou +2
2 +2 +2 +3 ou +4
3 +1 +3

0 = absence ; 1+ = < un morphotype présent (par champ), 2+ = un à quatre morphotypes présents, 3+


= cinq à trente morphotypes présents, 4+ = > trente morphotypes présents.

Il est nécessaire d'additionner les scores des trois morphotypes pour obtenir le score de Nugent.

- 0 à 3 points : flore normale

- 4 à 6 points : flore intermédiaire

- ? 7 : flore évocatrice d'une vaginose

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Figure 6: Image d'une vaginose près du col (Delacroix ;1994).

Article IV. III- GENERALITE SUR LES ANTIFONGIQUES


Section IV.01 III-1- Les azolés
La découverte de l'activité antifongique des dérivés azolés fut une avancée majeure dans le
traitement antifongique.

1) Structure et activité

La structure de base des dérivés azolés est constituée d'un pentacycle azoté N-substitué par un
radical à chaîne plus ou moins longue. On peut distinguer deux classes : les imidazolés et les triazolés.
Ils se différencient par le nombre d'atomes d'azote sur le pentacycle (Optimed., 2003). Ainsi, les
molécules originales comme le miconazole ou le kétoconazole sont toutes composées d'un noyau
imidazolé substitué de plusieurs groupements lipophiles, le plus souvent aromatiques (par exemple
phényl substitué en 2 et 4 par des halogènes). Les dérivés comme le fluconazole et l'itraconazole ont
un ou deux noyaux triazolés, ce qui apporte une meilleure stabilité et des propriétés
pharmacocinétiques plus favorables. (Optimed., 2003).

2) Mécanisme d’action

Les antifongiques azolés agissent par liaison et inhibition de la lanostérol 14α déméthylase :
Erg11 ou CYP51, enzyme responsable de la conversion du lanostérol en ergostérol, composé
indispensable de la membrane des cellules fongiques. Il en résulte une altération membranaire, ainsi
qu’une accumulation de stérols méthylés toxiques pour la cellule fongique parmi lesquels le 14α
méthylergosta-8,24 dien-3β,6α-diol. Ils inhiberaient également un autre cytochrome P450 impliqué
dans la biosynthèse de l’ergostérol : Erg5. Toutefois, il s’agirait d’une cible mineure puisque située en
aval de Erg11 dans cette voie biosynthétique (Coste et al., 2009).

Ces antifongiques sont fongistatiques sur Candida spp. : ils permettent d’inhiber la croissance des
levures, sans les supprimer.

Les différents antifongiques azolés sont :

o Les imidazolés constitués de :

 bufonazole,  isoconazole,  sertaconazole,


 butoconazole  kétoconazole,  sulfoconazole,
 clotrimazole,  miconazole,  tioconazole

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 econazole,  omoconazole,
 fenticonazole,  oxyconazole,

o Les triazolés constitués de :


 fluconazole,
 itraconazole,

Section IV.02 III-2-


Les échinocandines

 ravuconazole,
 voriconazole
 posaconazole,

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effectuer un prelevement cervico-vaginale à l’hopital militaire de yaoundé

Trois molécules de cette famille sont commercialisées et indiquées dans le traitement des candidoses
invasives : la caspofungine (CANCIDAS®, MSD), l’anidulafungine (ECALTA®, Pfizer) et la micafungine
(MYCAMINE®, Astellas).

1) Mécanisme d’action
Les échinocandines inhibent l’action de la Béta-(1,3) -D glucane synthase, une enzyme fongique
responsable de la synthèse du Béta-(1,3) -D glucane. Ce sucre est un constituant majoritaire et
spécifique de la paroi fongique, il est absent des cellules mammifères. Les échinocandines exercent
un effet fongicide indirect par inhibition de la synthèse de la paroi fongique (Bart-Delabesse et
Datry., 2006).

Section IV.03 III-3- Les polyènes


L’antifongique utilisé dans la classe des polyènes est : L’amphotéricine B, La nystatine,

1) Mécanisme d’action
L’amphotéricine B exerce une action fongicide en se fixant et en altérant directement l’ergostérol,
principal composant stéroïdien de la paroi des champignons. La fixation de la molécule à la paroi
fongique génère une perméabilité anormale via la formation de pores dans cette paroi. Ceci génère
une fuite des composants intra cytoplasmiques du champignon et entraine sa mort (Delaunay et
Fissore, 2006).

Section IV.04 III-4- Les analogues nucléosidiques


La seule molécule antifongique de cette classe est la 5-Flucytosine (ANCOTIL®). ANCOTIL® est
disponible sous la forme de comprimés pour voie orale ou de poudre pour usage parentéral.

1) Mécanisme d’action
Il s’agit d’un analogue synthétique d’une base nucléosidique ; la cytosine. Elle exerce une activité
fongistatique sur certaines espèces en pénétrant dans la cellule fongique. Il coexiste ensuite deux
voies de métabolisation dans la cellule fongique : l’une conduisant à une inhibition de la synthèse de
l’acide nucléique fongique, l’autre consistant en une inhibition de la synthèse protéique fongique
(Dankert et al., 2000). Il est indispensable d’utiliser ANCOTIL® en association systématique avec un
autre ATF et de ne jamais l’utiliser en monothérapie afin de limiter le risque de sélection de mutants
résistants. L’association de Flucytosine est synergique avec l’amphotéricine B (Dankert et al., 2000).

Section IV.05 III-5- Les allylamines


Cette classe d’antifongiques, comprend la naftifine et la terbinafine (LAMISIL®). Le mode
d’action des allylamines repose sur l’inhibition de la synthèse de l’ergostérol par un mécanisme
distinct de celui des azolés qui implique l’inhibition de la squalène époxydase.

L’effet antifongique qui en résulte est fongistatique. La terbinafine est quasi exclusivement utilisée
pour la prise en charge des infections candidosiques superficielles mais peut aussi trouver sa place
dans la prise en charge des infections invasives notamment réfractaires aux traitements habituels en

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association avec d’autres antifongiques (Blain., 2012). La naftifine, réservée à la prise en charge des
dermatophyties.

Section IV.06 III-6- Les morpholines


Le seul composé de cette famille utilisé en clinique est l’amorolfine (LOCERYL®). Elle possède
une activité fongistatique qui repose sur l’inhibition de la C14 stérol réductase (Erg24) et de la C8
stérol isomérase (Erg2), deux enzymes impliquées dans la biosynthèse de l'ergostérol. L’utilisation de
l’amorolfine est limitée à la prise en charge des infections superficielles (onyxis) (Morio., 2012).

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DEUXIEME PARTIE : MATERIEL ET METHODES


I. Matériel

I .2) Examens gynécologiques

a) -1-2-1- Matériel Didactique


Afin d’établir un lien probable entre les signes cliniques et les facteurs pouvant favoriser
la prolifération des candidoses cervico-vaginales nous avons établi une fiche d’enquête (Annexe
1) constituée de plusieurs questions dont chacune d’entre elles est susceptible d’être un facteur
pouvant favoriser la prolifération des candidoses cervico-vaginales.

I.2.1) Matériel biologique


Nous avons utilisé le liquide vaginal prélevé au niveau du vagin et au niveau du col de l’utérus.

I.2.2) Matériel fourni


 Les milieux de culture systématiques (Sabouraud + chloramphenicol, chocolat+VCN , mac conkey, GS
pour les femmes enceintes) :

I.2.3) Matériel et équipements requis


 Etuve bactériologique ;
 Micropipette de 0-200µl ;
 Ecouvillons (02) de prélèvement ;
 Une fiche de paillasse ;
 Un vortex ;
 Boites de pétri ;
 Lames et lamelles ;
 Les colorants pour la coloration de Gram (violet de gentiane, lugol, alcool, fuschine).

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II. METHODE

Lieu et cadre d’étude


Notre étude a été faite à l’hopital militaire de Yaoundé sur les femmes recommandées simultanément
pour des examens de PCV.

Type d’étude
Nous avons effectué une étude prospective transversale et descriptive.

Période d’étude
Notre travail au HMY a duré 2 mois : de la période du 02 Avril 2023 au 30 Juin 2023.

Population étudiée
Notre étude portait sur toutes les femmes recommandées pour examen du PCV à l’hopital militaire de
yaoundé.

Critères d’inclusions
Etaient inclues de l’étude toutes patientes :

• Femmes présentant un examen de PCV à l’hopital militaire des yaoundé .

Critères d’exclusions
Etaient exclues de l’étude toutes patientes :

 Femmes présentant simultanément un examen de mycoplasma et/ou trichomonas vaginalis à l’hopital


militaire des yaoundé.

Taille de l’échantillon
Nous avons effectué un échantillonnage exhaustif. Au total 82 femmes ont constitué la taille de notre
échantillon.

Section 1 :profil socio-démographiques


- L’âge.

- enceinte (oui ou non, si oui age gestationnel)

-ethnie

- niveau d’étude

-profession

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-Statut matrimonial

-revenus financiers

Section 2 : antécédents et facteurs comportementaux


- Motif du prélevement
- Fréquence de lexamen
- Source d’eauutilisée pour la toilette intime
- Utilisez-vous des produits éclaircissants ?
- Combien de partenaires sexuels avez-vous ?
- Fréquence des rapports par semaine
- Quelle méthode contraceptive utilisez-vous ?
- Avez-vous des antécédents d’IST ?
- Avez-vous déjà fait un frottis cervico vaginal ?
- Utilisez-vous des produits pour votre hygiene intime ?
- Consommez-vous du tabac ?
- Consommez-vous de l’alcool ?
- Portez-vous des pantalons serrés ?
- Portez-vous des sous-vetements en coton ?

Section 3 : Analyse du prélevement

- Macroscopie ;
- Microscopie (etat frais ,apres coloration de gram) ;
- Mise en culture et identification
- Germe isolé

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prelevement cervico-vaginale à l’hopital militaire de yaoundé

Pour mener à bien notre travail, nous avons suivi le plan synoptique suivant :

Accueil des patientes et collecte des données

Prélèvement gynécologique

Analyses microbiologiques

Macroscopique Microscopique Culture

Etat frais
Etat coloré

Résultats et Interprétations

Figure 4: Schéma synoptique du travail effectué

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II.1. Accueil des patientes et collecte des données


Les patientes sont reçues au niveau de l’accueil et appelées par ordre d’arrivée. Une secrétaire se charge
de noter sur un coupon d’examen le nom de la patiente, le numéro d’ordre de passage, la date de naissance,
inscrits sur l’ordonnance. Ensuite, la patiente se dirige à la caisse pour des procédures de paiement et où on lui
remet une facture. La fiche d’examen est acheminée jusqu’à la salle de prélèvement. Enfin Un biologiste
appellera la patiente pour la conduire à la salle de prélèvement. Afin d’avoir ces renseignements
sociodémographiques et cliniques concernant les patientes, nous nous sommes servis des fiches de paillasse.
Nous avons également élaboré une de base de données avec le logiciel Microsoft Excel pour collecter ces
données et les analyser statistiquement.

(b) Accueil et enregistrements


Il était assuré par un réceptionniste (personnel ou stagiaire) qui était chargé de prendre les bulletins d’examen
et les reçus des patientes et de les enregistrés dans un registre en relevant l’âge, le code, le quartier, le nom du médecin
prescripteur, sans oublié un numéro ; ensuite, un deuxième enregistrement se fait dans la salle de bactériologie où
l’âge, le sexe, le quartier, le numéro de téléphone du patient, le code du reçu, le nom du médecin prescripteur, sont
relevés et enfin un cachet contenant l’aspect macroscopique et microscopique est mis devant l’identité de la patiente.
Par convenance aux vues des difficultés liés au temps et aux finances nous avons recenser les données de 619 patientes
pour l’étude rétrospective et de 100 patientes pour l’étude prospective.

(c) II-2-7- Collecte des données sur les patients


Il s’agissait ici de recueillir sur tous nos patientes les différents paramètres (âge, lieu de résidence, noter si elle
est enceinte, toilette intime profonde, entretien des sous-vêtements, eau utilisée, utilisation des toilettes publiques,
traitement antifongique, période menstruel, rapports sexuels durant les 24 heures) à l’aide d’une fiche d’enquête
préétablie (voir annexe 1) qui leur était attribués pendant la durée de stage.

La réalisation de l’examen du PCV est basée sur deux principales méthodes : l’analyse macroscopique et une analyse
microscopique.

(d) II-2-8- Prélèvement

Conditions de prélèvement

o La patiente ne doit pas avoir fait de toilette intime : introduction d’antiseptiques à l’intérieur du vagin

o La patiente doit avoir passé les 24 heures précédant le prélèvement sans avoir eu de rapport sexuel avec
pénétration
o La patiente ne doit pas être en période menstruelle

o La patiente ne doit pas être sous traitement antifongiques


o Noter si femme enceinte

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o Si fillette ou patiente pucelle, le prélèvement sera vulvaire


Etapes techniques du prélèvement

Tous les prélèvements vulvo-vaginaux doivent se faire avec une bonne visualisation donc sur table gynécologique et
avec un spéculum. Les étapes sont telles que :

o Accueillir la patiente et étiquetage des écouvillons o Il est essentiel que la patiente soit détendue car, si elle
est crispée, le col de l'utérus bascule vers l'arrière et il sera impossible de visualiser son orifice.
o Pour ce faire on laissera la patiente s'installer elle-même, tranquillement, sur la table d'examen
o Faire plier les genoux en écartant les cuisses o Dégager le sphincter vaginal et engager délicatement le
spéculum stérile fermé (à usage unique)
o Le spéculum sera doucement poussé en avant et progressivement ouvert o Lorsqu'on aura dépassé la
première moitié du vagin on le fera tourner d'un quart de tour

o Modifier l’enfoncement ou l’inclinaison jusqu’à ce que le col soit visible o Bloquer le spéculum. o Décrire
l’aspect macroscopique du col : observer et noter l’aspect du col, et la quantité de leucorrhées.
o Effectuer les écouvillonnages à deux endroits : au niveau de la paroi utérine avec le premier écouvillon et au
niveau du col de l’utérus avec le deuxième écouvillon o Retirer le speculum en commençant par le dévisser
un peu. (Si l’on le dévissait jusqu’au bout, l’on risquerait de prendre des bouts de muqueuse entre les mors.
Ce serait très douloureux pour la patiente). Tirer le speculum.
o Après le retrait du spéculum, donner le rendez-vous au patient avant son le départ.
Le schéma ci-dessous décrit la réalisation d’un prélèvement cervico-vaginale

Figure 28: Réalisation du PCV

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(e) II-2-9- Méthodes d’analyse

a) II-2-9-1- Analyse macroscopique

Cette étape consiste à faire une observation physique de l’échantillon, de donner l’aspect du col, et des leucorrhées
puis noter. Observer l’aspect des sécrétions vaginales à travers des paramètres tels que :

 Quantité  Couleur
 Consistance  Odeur

II-2-9-2- Analyse microscopique

2) II-2-9-2-1- Examen direct à l’Etat frais


L’examen direct du prélèvement est la première étape réalisée au laboratoire et permet une orientation rapide
du diagnostic. Le prélèvement est acheminé rapidement au laboratoire de bactériologie de l’HDE. Un examen
microscopique à l’état frais est pratiqué immédiatement pour apprécier soit la mobilité, soit la morphologie et soit
l’agencement des Trichomonas vaginalis, des levures avec ou sans des filaments mycéliens, de cellules épithéliales, des
hématies et de leucocytes altérés.

3) protocole

Figure 29: Protocole de l'examen à l'état frais

4) II-2-9-2-2- COLORATION DE GRAM


La coloration de gram permet d’évaluer la flore vaginale et de retrouver des levures à coloration de gram
positive lors d’une candidose.

5) Procédure de la coloration

 utiliser une lame propre. Ecrire le nom du patient et l’identification du spécimen sur la lame avec un crayon
de papier. Ne pas utiliser de stylo à bille.

 étaler l’échantillon en un frottis mince sur la lame de verre. Permettre au frottis de sécher à l’air libre ou
fixer la lame en la passant 3 fois dans la flamme.
 Déposer la lame sur les supports du bac de coloration

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 recouvrir le frottis de lame avec le violet Gentiane pendant 60 secondes.


 verser le surplus de la solution de Violet de Gentiane et rincer la lame avec un jet d’eau faible. Egoutter
l’excès d’eau. Utiliser un faible jet d’eau pour laver la lame, sinon le spécimen se détache de la lame.
 recouvrir le frottis avec la solution Iode- iodure (Solution de Lugol) pendant 60 secondes.
 verser la solution de Lugol de la lame et la rincer avec un faible jet d’eau. Egoutter l’excès d’eau.
 Décolorer avec la solution Alcool- acétone tout en maintenant la lame inclinée.
 immédiatement après, rincer la lame avec un faible jet d’eau. Egoutter l’excès d’eau. NOTE : si la solution
alcool- acétone reste trop longtemps sur la lame, les micro-organismes Gram positif pouvaient apparaître
comme Gram négatif.
 recouvrir le frottis avec la solution de safranine (ou la fuchsine basique) pendant 60 secondes.
 verser la fuchsine, rincer la lame en la tenant sous un faible jet d’eau. Egoutter l’excès d’eau.
 sécher la lame ;
 Observez les résultats de la coloration sous immersion dans l’huile. Examiner au microscope, objectif X100 ;

6) Résultat des observations microscopiques


Apres observation de la coloration de gram on peut observer :
 Observer les bacilles gram- et/ou de Cocci Gram+
 Noter la présence de Mobiluncus : bacilles gram+ fins incurvées en coup d’ongles
 Rechercher la présence de levures et/ou de filaments mycéliens
 Rechercher la présence de clue-cells indicatrices d’une vaginite à Gardnerella
 Observer les bacilles gram+ (coloration violette)
 Observer des levures (en forme ovale coloration violette)
Cette observation nous permet de typer les différents types de flore parmi lesquelles :
 FLORE DE TYPE 1 : qui est une bonne flore et qui se caractérise par la présence unique des bacilles gram+
 FLORE DE TYPE 2 : qui est également une bonne flore et qui se caractérise par une prédominance des bacilles
gram + et présence de quelque Cocci gram+, bacilles gram- et les Cocco
 FLORE DE TYPE 3 : qui est une mauvaise flore et se caractérise par la prédominance des bacilles gram- et
d’autres bactéries, avec de rare bacilles gram+. Cette flore est évocatrice d’une Vaginose bactérienne
 FLORE DE TYPE 4 : qui est une mauvaise flore et se caractérise par l’absence totale des bacilles gram+ et
présence des autres bactéries.

a) II-2-9-3- Test à la potasse


Pratiqué par ajout de quelques gouttes de potasse (KOH à 10%) sur le speculum chargé de secrétions vaginales
(leucorrhées). Le test est positif avec une odeur nauséabonde de poisson pourri en cas de Vaginose bactérienne et
négatif en cas de CVV.

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b) II-2-9-4- Mesure de PH Vaginal


Le pH vaginal était mesuré à l’aide d’un kit comprenant un rouleau de papier pH test (Le laborantin) et un code
de couleurs pour déterminer le résultat. Celui-ci était obtenu en appliquant pendant quelques secondes le papier pH
contre la partie du spéculum chargé de leucorrhées. La couleur du papier pH test était comparée à l'échelle de couleurs
pour obtenir la valeur correspondante du pH. il demeure normal en cas de CVV et supérieur à 4,5 en cas de trichomonas
et de Vaginose à Gardnerella vaginalis.

II-2-9-5- Interprétation de l’examen macroscopique et microscopique du PCV L’interprétation des


résultats est réalisée suivant le tableau ci-dessous :

Tableau 4: Interprétation des résultats

PCV Observations
Aspect col
Leucorrhées
Test potasse
pH
Etat frais
Cellules épithéliales
Leucocytes
Levures
Trichomonas
Gram
Cocci
Bacilles
Flore type

c) II-2-9-6- Culture
Elle est absolument nécessaire pour l’isolement et l’identification de la levure. La culture se fait sur milieu
gélosé de Sabouraud, additionné d’un antibiotique, le chloramphénicol et /ou la gentamicine, afin d’inhiber la vitesse de
croissance de la flore bactérienne qui est plus rapide que des levures.

Avant d’ensemencer, on écrit la date, le nom du patient et l’examen demandé sur la boite de gélose ; ensuite à l’aide
des écouvillons contenant les secrétions on effectue des stries qui permettent d’obtenir des colonies distinctes. Les
boites de pétri ensemencé sont incubé à 37°C pendant 24h, voir 48 heures. Sur le milieu de Sabouraud, les colonies
apparaissent blanches, crémeuses et lisses (Figure 30). après incubation dans une étuve entre 35 et 37 C° pendant 24 à
72 heures.

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d) II-2-9-6-1- Identification des levures


Cette étape consiste à l’examen macroscopique des colonies sur le milieu SC, à l’examen microscopique du
Gram de contrôle qui permettra l’identification des levures à l’état colorés et par un test de filamentation ou de blastés
qui permettra de déterminer le germe en cause (candida albicans ou candida spp).

7) II-2-9-6-1-1- Examen macroscopique


Après 24h à 48h de culture, en cas de positivité des cultures, il y a poussé des colonies dont l’aspect blanchâtre,
crémeux, visqueux, mat ou brillant.

Figure 30: colonie de candida albicans sur milieu de Sabouraud

8) II-2-9-6-1-2- Coloration de GRAM de contrô le


Cette méthode permet de colorer les levures et de les distinguer à l’examen direct par leur aptitude à fixer le
violet de gentiane (gram+) ou la fuchsine (gram-).

Mode opératoire

Déposer sur une lame propre une goutte d’eau physiologique et une petite colonie, faire des mouvements
circulaires de façon à obtenir un étalement mince et homogène, sécher et fixer le frottis au-dessus de la flamme du
bec bunsen sans trop le chauffer ; ensuite réaliser une coloration de GRAM selon les étapes décrites plus haut à la
partie (II-3-4-2-2-). Puis observer au microscope à l’objectif x100.

Figure 31: levure à l’état colorée

9) II-2-9-6-1-2- Test de blastése

Le développement des tubes germinatifs à partir d’une blastospore confirme la présence de l’espèce C. albicans.
La sensibilité et la spécificité de ce test sont respectivement 86,3 % et 100 % (Chabasse et al., 1999 ; Koenig., 1995).

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Appelé aussi test de filamentation, il consiste à émulsionner une pointe de pipette de levures dans 1 ml de sérum
humain dans un tube a hémolyse stérile bouchée, puis laisser incuber à 37°C pendant 3 à 4 heures. Au bout des 3heurs,
observer au microscope une goutte de suspension et noter la filamentation des levures.

10) Filamentation positive : Candida Filamentation négative : Candida albicans Spp

Figure 32: Test de filamentation positif (Can- Figure 33: Test filamentation négatif (candida spp) dida albicans)

(f) II-2-10- Antifongigramme


Les Bactéries ainsi isolées et identifiées sont soumises à un test antifongique pour déterminer leur profil de
sensibilité aux antifongiques. La technique utilisée dans notre cas est la technique d’écouvillonnage.

1) MODE OPERATOIRE
 Couler la gélose Sabouraud dans des boites de pétri
 Laisser prendre en masse
 Préparer une suspension mycologique
 A l’aide d’un écouvillon prélever la suspension puis faite des stries serrer sur la gélose
 S’assurer que la surface de la gélose est bien séchée, et y déposer des disques de celluloses imprégnées
d’antifongique

 Laisser la boite reposer durant quelques minutes pour permettre aux antifongiques de bien diffuser
 Placer les boites retourner dans un incubateur a température optimale de croissance du germe à étudier
(25°C) pendant 24Heures
Après incubation et croissance du champignon, il apparaît une zone d’inhibition symétrique centrée sur le disque. La
CMI (Concentration Minimum Inhibitrice) est lue au niveau de l’intersection entre l’ellipse d’inhibition et le disque. Dans
le cas de notre étude il s’agit d’un Test qualitatif.

Les différents antifongiques utiliser sont :

NYSTATINE FLUCONAZOL
KETOCONAZOL ITRACONAZOL
ECONAZOL AMPHOTERCIN
MYCONAZOL

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Figure 34: rayon d'inhibition des antifongiques

Analyse des données


Les données obtenues ont été traités par le logiciel Microsoft Excel 2010, logiciel utilisé pour le tracé des
graphes et des tableaux. Les différentes prévalences ont été obtenues par la formule :

P= n / N x 100

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RESULTATS ET DISCUSSION

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- http://www.urofrance.org
- https://www.mmt-fr.org/mst/chlamydia

Mémoire de LICENCE, rédigé par KAMGOUE POUASSI Abel 15


Etude de prévalence sur laVariation de la flore vaginales des femmes en ages de procrées venues effectuer un
prelevement cervico-vaginale à l’hopital militaire de yaoundé

Mémoire de LICENCE, rédigé par KAMGOUE POUASSI Abel 16

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