TP N°01

TECHNIQUES D’ANALYSE BIOLOGIQUE

PRÉPARATION DE SOLUTION
TAMPON

Enseignante : L3 Biochimie
Dr. BOUDIAF K. 2020/2021
 La solution tampon : Définition

Une solution tampon est une solution dont le pH varie

peu lorsqu’on ajoute de petites quantités d’acide ou de
base forts, ou lorsqu’on dilue la solution.

Elle est préparée en mélangeant des quantités

équimolaires d’acide faible et de sa base conjuguée
 Objectif du TP
1) Préparer 45ml de tampon acétate (0,25M) à
pH de 4,86.
2) Tester le pouvoir tampon de la solution
préparée par ajout de 0,1ml de HCl 0,2M.
Matériel et réactifs
Matériel :
Bécher
de 100ml

Eprouvettes
(25 et 50ml) Balance Agitateur magnétique pHmètre
 Réactifs et solutions
1) Solution d’acide acétique
(CH3COOH) à concentration de
0,2M.

2) Acétate de sodium (CH3COONa

sloide).
(masse molaire CH3COONa = 82 g/mol)
DONNÉES À UTILISER DANS LA PRÉPARATION DE LA SOLUTION
TAMPON :
1) L’acide faible (AH) : acide acétique (CH3COOH) → disponible sous
forme de solution de 0,2M.
2) La base conjuguée : (A-) : acétate de sodium (CH3COONa) →
disponible sous forme solide (MM = 82 g/mol).
3) pKa du couple CH3COOH/CH3COONa = 4,76.
4) Volume final du tampon à préparer = 45ml.
5) Concentration du tampon à prépare = 0,25M.
NB: La concentration finale du tampon = [CH3COOH]f+[CH3COO-]f = 0,25M
(f = concentrations finales)
DONNÉES À UTILISER DANS LA PRÉPARATION DE LA SOLUTION
TAMPON :
6) Appliquer l’équation de Henderson-Hasselbalch dans les calculs:
−
[𝐴 ]
pH = pKa + log
[𝐻𝐴]
−
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]
pH = pKa + log
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂𝐻]

7) Calculer le volume en (ml) de CH3COOH à prendre, et la quantité

en (g) de CH3COONa à peser, dans un volume final de 45ml afin
d’avoir une solution tampon de 0,25M à pH 4,86
CALCULS : 1) Calculer [CH3COOHf] et [CH3COO-f] (dans Vf de 45ml)
[CH3COOH]f+[CH3COO-]f = 0,25M => [CH3COOH]f = 0,25 - [CH3COO-]f
−
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]
- On substitue les données dans l’équation : pH = pKa + log
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂𝐻]
−
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]
4,86 = 4,76 + log − −
0,25−[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] 2,26 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 = 0,315
−
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]
0,1 = log −
0,25−[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] − 0,315
− 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 = = 0,139
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] 2,26
− = 100,1 = 1,26
0,25−[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] −
𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶 = 0,139M
− −
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] = 1,26 (0,25 − [𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]
𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂𝐻 = 0,25 - 0,139 = 0,111
− −
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ] = 0,315 − 1,26 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂
𝑪𝑯𝟑𝑪𝑶𝑶𝑯 = 0,111M
− −
[𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 ]+1,26 𝐶𝐻3𝐶𝑂𝑂 = 0,315
CALCULS :
2) Calculer le volume d’acide acétique
qu’il faut prendre pour avoir une
concentration de 0,111M dans un
volume final de 45ml
[CH3COOHf] = 0,111 M
Appliquer la loi de dilution:
𝐶𝑖𝑉𝑖 = 𝐶𝑓𝑉𝑓
3) Calculer la quantité en g de
CH3COONa à peser pour avoir une
concentration de 0,139M dans un
volume final de 45ml
[CH3COO-f] = 0,139 M
Nbre de moles dans 45ml (0,045L) :
−3
𝑛 =0,045 × 0,139 = 6,255 × 10 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠

Donc : Masse molaire du CH3COONa =

𝐶𝑓𝑉𝑓 82g/mol :
𝑉𝑖 = 1 mole → 82g
𝐶𝑖
0,111×45 6,225 x 10-3 moles → m?
𝑉𝑖 = = 25ml
0,2 m = 6,225 x 10-3 x 82 = 0,51g
 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.
 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.

2) Verser dans un bécher.

 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.

2) Verser dans un bécher.

3) Peser 0,51g d’acétate de sodium.

 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.

2) Verser dans un bécher.

3) Peser 0,51g d’acétate de sodium.

4) Mélanger à l’aide d’un agitateur magnétique.

 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.

2) Verser dans un bécher.

3) Peser 0,51g d’acétate de sodium.

4) Mélanger à l’aide d’un agitateur magnétique.

5) Transférer à une éprouvette de 50ml.

 Préparation du tampon :
1) Mesurer 25ml d’acide acétique (CH3COOH)
de la solution de 0,2M, à l’aide d’une
éprouvette.

2) Verser dans un bécher.

3) Peser 0,51g d’acétate de sodium.

4) Mélanger à l’aide d’un agitateur magnétique. Conserver dans un

flask étiqueté =>
mesure du pouvoir
5) Transférer à une éprouvette de 50ml. tampon

6) Compléter le volume à 45ml par de l’eau distillée.

 Mesurer le pouvoir tampon de la
solution préparée
1) déterminer la variation du pH du tampon acétate préparé
après ajout de 0,1ml de HCl 0,2M

2) Calculer le pouvoir tampon de la solution tampon préparée

 Travail à réaliser à domicile, à remettre le mardi

09/02/2021 à 10h00