Module d’Enzymologie FSTT- 2020-2021

Travaux Dirigés N 5 (10 points)

Exercice N°1:

1. On suit la cinétique d'hydrolyse d'un substrat, respectivement en absence d'inhibiteur

et en présence d'un inhibiteur I. Les valeurs des vitesses initiales, en UA.min-1, sont les
suivantes :

[S0] (mM) VSans I V[I] (5.5 µM)

0,083 0,080 0,051
0,122 0,110 0,072
0,195 0,150 0,106
0,238 0,170 0,122
0,340 0,200 0,150
0,580 0,260 0,200
0,870 0,290 0,240
1,170 0,300 0,270

1. Déterminez VMax, KM à l'aide de la représentation des double inverses sur le même

graphe. Exprimez ensuite les concentrations en molarité. Ne pas tracer les courbes de
saturation.

2. Déterminez les paramètres cinétiques VMaxapp et KMapp en présence de chaque

inhibiteur. Calculez les constantes KI. Indiquez le type d'inhibition.

Données: [E0] = 7,3 pM - εMproduit = 17000 M-1.cm-1 ; l = 1 cm

3. Compléter le tableau ci dessous :

1
Module d’Enzymologie FSTT- 2020-2021

Paramètres Sans Inhibiteur Avec Inhibiteur

1/VM ou 1/VMapp (UA-1.min )

VM ou VMapp (µM.min-1) ou (M.s-1)

kcat (min-1) ou (s-1)

-1/KM ou -1/KMapp (mM-1)

KM ou KMapp (mM)

Type inhibition

KI (µM)

Réponse

[S]0 étudiée la plus faible = 8,3 10-5 M et [E]0 = 7,3 10-12 M, donc [S]0 >>
[E]0 : on est en conditions de substrat saturant.

Expression de de VMax

On passe de ΔA.min-1 à µM.min-1 avec la relation de Beer-Lambert :

2
Module d’Enzymologie FSTT- 2020-2021

Vmax (ΔA.min-1)
VMax (µM.min-1) = -------------------
εM . l

VMax = 23,5 µM.min-1

VMax = VMaxapp et KM ≠ KMapp , donc l'inhibiteur est compétitif.

kcat = VMax / [E]0 = 3,2 106 min-1 = 5,4 104 s-1

KI = (KM x [I]) / (KMapp - KM) = 6,7 µM

A λ = 248 nm : la fonction carbonyle conjuguée du produit (Δ4-androstene-

3,17-dione) absorbe alors que le substrat (Δ5-androstene-3,17-dione)
n'absorbe pas.