Série 1 : Cinétiques Enzymatiques

Exercice 2 :

Exercice 3
Exercice 4
Exercice 5:

Exercice 6:
Série 2 : réacteurs enzymatiques
Série 3 : Cinétique microbienne
Série 4 : Les Fermenteurs
 Série 1 Cinétiques Enzymatiques

Exercice 1

En cinétique enzymatique, on note :

S : substrat (réactif) ; P: produit ; E : enzyme (catalyseur)

Le schéma réactionnel est le suivant :

Hypothèses de l'exercice:

[S]>> [E] (le substrat est en quantité très importante)

[ES] complexe intermédiaire instable

1. Les expressions des vitesses de S, ES et P:

Vs=?

Vs = - d[S]/dt et d'après le schéma réactionnel

Vs = k1 [E][S] - K-1 [ES] ...................(1)

VES=?

VES = d[ES]/dt = k1 [E][S] - k-1 [ES] - k2 [ES].........................(2)

VP=?

Vp=+d[P]/dt = k2 [ES]

VP=k2 [ES]...................................(3)

Les équations de conservation de substrat et de l'enzyme:

→Bilan substrat

[S0]=[S]+[ES]+[P] ...............................(4)

→Bilan Enzyme
[E0]=[Et]=[E]+[ES].................................(5)

2. La concentration de [ES]

(2)↔d[ES]/dt =0 (ES complexe intermédiaire instable ou hypothèse de l'état quasi-

stationnaire du complexe ES)

par conséquent:

k1 [E][S] - k-1 [ES] - k2 [ES]= k1 [E][S] - (k-1 + k2 )[ES]=0

donc : [ES]=k1 [E][S] /(k-1 + k2 ) = [E][S]/ ((k-1 + k2 )/k1)

si on note (k-1 + k2 )/k1 = KM la concentration de [ES] est égale à :

[ES]= [E][S] / KM ..........................................(6)

or (5)↔ [E]= [Et] - [ES] on remplace dans (6) :

[ES]= ([Et] - [ES]) [S] / KM

[ES]=( [ET] [S] / KM ) +( [ES] [S] / KM ) → [ES] (1+ [S]/KM) = [ET] [S] / KM

[ES] (KM +[S] / KM) = [ET] [S] / KM

[ES] = [ET][S] / KM+[S].................................(7)

3.La vitesse de la réaction:

V=k2 [ES] = k2 [ET][S] / KM+[S] (d'après l'équation 7)

Si on note Vmax = K2 [ET] V = Vmax [S] / KM+[S]

Exercice 3:

Dans un réacteur fermé agité, on a l’hydrolyse de la pénicilline par un

enzyme : Substrat=pénicilline

A partir de ces données représenter 1/V = f(1/[S]) et V = f(V/[S]); avec V la vitesse de la

réaction et S la concentration du substrat.

GRAPHE 1:
GRAPHE 2:

1- L’hydrolyse de la pénicilline est elle- conforme au modèle de Michaelis-Menten?

→Le tracé e 1/V =f(1/[S]) (Lineweaver-Burk) est une droite qui ne passe pas par l'origine

→Le tracé e V =f(V/[S]) (Eadie-Hofstee) est une droite qui ne passe pas par l'origine

→ Ce qui implique que l'hydrolyse de la pénécilline est une cinétique Michaelienne

2.Calculer les paramètres cinétiques de l’hydrolyse de la pénicilline selon les deux

linéarisations :

→Selon Lineweaver-Burk (ou méthode des double-inverses):

1/V= 7622 1/[S] + 109 (d'après l'équation du graphique)

Par identification : KM/VMax = 7622 , 1/VMax = 109 ↔

KM = 0.76 10-5 mol/L

VMax = 10-9 mol/ L.min

→ Selon Eadie-Hofstée:

Le tracé de V=f(V/[S]) donne une droite qui ne passe pas par l'origine de la forme y=a X
+ b avec :

par conséquent:

La pente = - KM et ordonnée.orgine = VMax

D'après le tracé , l'équation de la courbe de tendance est : y=5 10-6 x +7 10-10

(R2 = 0.999)

On aura donc : KM = 0.5 10-5 mol/L

VMax = 0.7 10-9 mol/ L.min

Quelle est la linéarisation la plus représentative des données expérimentales ?

→On doit calculer les vitesses théoriques pour chaque modèle, puis on calcul l'erreur:

Erreur = E =[ (Vexp _ Vthéo ) / Vexp ]

Le modèle qui présente une erreur faible est le plus représentatif.

Exemple de calcul des vitesses théoriques:

Vthéo pour le modèle Lineweaver-Burk:

S] Km Vmax Vtheo Vexp E%
0.1 10-5 0.76 10-5 10-9 0,116279 10-9 0.11 10-9 5.708
0.3 10-5 0.76 10-5 10-9 0.283019 10-9 0.25 10-9 13.20

Vthéo pour le modèle Eadie-Hofstée:

[S] Km Vmax Vthéor Vexp E%

0.1 10-5 0.5 10-5 0.7 10-9 0.116667 10-9 0.11 10-9 6.06
0.3 10-5 0.5 10-5 0.7 10-9 0.2625 10-9 0.25 10-9 5

D'après le calcul d'erreur, le modèle 'Eadie-Hofstée' est le plus représentatif es données

expérimentaux avec E≤ 6%

3.Comparer les résultats des régressions linéaire et non linéaire, quelle est la
méthode d’analyse la plus précise ?

Pour comparer entre R.L (Eadie-Hofstée) et R.N.L , il faut d'abord calculer les vitesses
théoriques pour chaque régression et:

→ de faire un calcul d'erreur

→ou de porter les vitesses calculées et expérimentales sur un même graphique

le calcul d'erreur pour chaque régression donne le tableau suivant:

Vexp Vtheor .L E% Vtheo N.L E%

0.11 10-10 0.1166 10-10 6.06 0.1123 10-10 2.12
0.25 10-10 0.2625 10-10 5 0.252 10-10 1.1
0.34 10-10 0.35 10-10 2.94 0.337 10-10 0.88
0.45 10-10 0.466 10-10 3.7 0.449 10-10 0.14
0.58 10-10 0.6 10-10 3.44 0.577 10-10 0.39
0.61 10-10 0.636 10-10 4.32 0.612 10-10 0.44
Conclusion:

La régression non linéaire (R.N.L) est la méthode la plus précise

 Série 2 : réacteurs enzymatiques

Exercice 1

1. t=? pour que [S] soit hydrolysé à 99%

Les données de cette question sont:

 Réacteur fermé à 40°C avec VR=1000L

 [S]0=1 mol/L et [E]0=1 g/L

 Cinétique sans inhibition
 Conversion x=99% : [S]f = 0.01[S]0

 KM = 35 mmol/L , Vmax=10µmol/min.mgE
Exercice 2
Exercice 3
 Série 3 : Cinétique microbienne

Exercice 1
Exercice 2
Exercice 3
Exercice 4
Organigramme cinétique microbienne
 Série 4 : Les Fermenteurs

Exercice 1
Exercice 3
Exercice 4
Exercice 2