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Chapitre IV

Fermenteurs
IV.1. Gnralits

Bien avant que Pasteur ait dmontr que la fermentation tait provoque par des
cellules vivantes, les microorganismes taient dj exploits par lhomme. Ainsi 7 000 ans
avant Jsus-Christ, les Sumriens utilisaient la plus ancienne fermentation connue, la
conversion du sucre en alcool, pour fabriquer de la bire. 4000 ans avant J C, les Egyptiens
employaient la levure pour faire lever la pate pain.
Le terme de fermentation est apparu au XVIme sicle, il vient du latin fervere : bouillir
(dgagement de CO2 dans un mout de vinification)
Pasteur la dfini comme la vie en absence doxygne .
Les premiers procds industriels de fermentation ont t les versions extrapoles de
ces recettes domestiques. Pour satisfaire les besoins de plus en plus importants, de nouvelles
dimensions se sont dveloppes partir de la capacit des microorganismes produire en
quantit importante, des mtabolites primaires ou secondaires dintrt industriel, intressant
la plupart des grands secteurs de lactivit conomique : chimie, pharmacie, nergie,
alimentation, agriculture et environnement.
Les ractions de fermentations est un processus qui fait appel des microorganismes
qui se dveloppent en consommant une partie dun ractif appel substrat et en transformant
lautre en divers produit. Les cuves ou le procd de prparation et de transformations est
mise en uvre, que a soit de dimension laboratoire (1 15 litres), lchelle pilote (1 5 m3)
ou industrielle (jusqu 300 parfois 500 m3), est appel Fermenteurs. Leur mode de
fonctionnement, comme pour les racteurs enzymatique est soit en discontinu (batch) , semi-
continu (fed- batch) ou en continu.

IV.1.1.Critres de conception dun fermenteur

Les critres de conception dun fermenteur industriel dcoulent de la raction


biologique de fermentation que lon souhaite mettre en uvre dans le but de produire soit de
la biomasse soit des molcules contenues dans le microorganisme ou produites par ce dernier
(acide organique, acides amins ). En fonction du mtabolisme slectionn, les critres de
strilit, de transfert de matire, de gaz et de transfert de chaleur imposent des conditions de
calcul qui gouvernent la conception du fermenteur.

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Chapitre IV

IV.1.2.Mesures, Contrles Rgulation

A limage de nombreux procds chimiques, lautomatisation et linformatisation sont


aujourdhui trs dveloppes sur les sites de production.
Les mesures courantes effectues sont les suivantes :
Vitesse dagitation
Aration (volume dair inject dans le racteur par unit de temps)
Temprature
pH
Pression
Dtection de mousse
Oxygne dissout
Gaz carbonique dissout
Oxygne dans la phase gazeuse en sortie du fermenteur
Gaz carbonique dans la phase gazeuse en sortie du fermenteur
Masse
Des mesures plus spcifiques peuvent tre rencontres
Turbidimtrie
Boucle de filtration avec analyse en ligne Glucose-Acides organiques HPCL
Mthane hydrogne (mthanisation
Plusieurs particularits sont mentionner compte tenu de la spcificit des cultures des
microorganismes
Maitrise des phnomnes de moussage
Evolution des gaz dissout dans le milieu de fermentation

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Chapitre IV

Schma typique dun fermenteur avec ses accessoires

IV.1.3.Les diffrentes chelles de travail

Echelle laboratoire pilote industrielle


Temps Recherche Dveloppement Production
objectif Etude de la faisabilit de la Etude / mise au point des Mise en uvre des
production (Collection des conditions industrielles conditions industrielles
souches et Prparation des
milieux)

IV.2.Rappels sur la formulation des paramtres fermentaire

Les ractions globales de croissance cellulaire et biotransformations peuvent tre caractrises


en termes cintiques et quantifies par les paramtres ci-dessus :

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IV.2.1.Taux de croissances

Le taux de croissance (h-1) mesure laccroissement de la population microbienne au cours


dune priode de temps t donne et dans des conditions dtermines, on a :
dX 1 dX
X X
dt dt
X symbolise la biomasse (exprime en g /l ou en nombre de cellule )

IV.2.2.Temps de doublement t d

Ce temps t d (h) est donn par :

Ln 2
td

IV.2.4.Nombre de gnrations

Au temps t de la f3ermentation, le nombre de gnration N est :


t
N
td

IV.2.4.Rendements

Aprs inoculation du milieu de culture, on observe successivement une phase de


latence pendant laquelle les micro-organismes sadaptent leur nouvel environnement, une
phase de croissance, souvent exponentielle, une phase de ralentissement suivie dune phase
stationnaire et une phase dclin et de mort des cellules. Le rendement est le rapport de
laccroissement de la biomasse sur la consommation du substrat S pour une priode donne.
Soit sur un intervalle de temps t, [S] (kg/m3) de substrats sont consomms pour former
[X] (kg/m3) de biomasse et [P] (kg/m3) de produit.
On dfinit donc les rendements :
X
De formation de biomasse par rapport au substrat : YX/S = -
S
P
De formation du produit par rapport au substrat : YP/S = -
S
Lorsque ces rendements peuvent tre supposs constants pendant une phase de culture,
la vitesse de consommation de substrat rS (kg m-3 s-1) et les vitesses de formation de
biomasse rX et de produit rP suivent les relations :

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Chapitre IV

rX r
rS P
YX / S YP / S
IV.2.5.Coefficient mtabolique q
Le coefficient mtabolique q mesure la vitesse de consommation du substrat par la biomasse
un instant t de la fermentation.
1 dS
q
X dt
Si on considre que, pour une priode courte, lenvironnement et la biomasse sont constant,
on a :
X
dS dt
YX / S
dS X
q
dt YX / S YX / S

IV.2.6.Cintique de croissance limite par un substrat

Selon les conditions de culture, il se peut quun substrat soit limitant, cest--dire quune
augmentation de la concentration en ce substrat entrane un accroissement de la vitesse de
croissance :
En culture discontinue anarobie, il peut sagir du substrat carbon ou de la source
azote, lorsquen fin de culture ces substrats sont puiss ;
En culture arobie, cest en gnral loxygne, faiblement soluble dans les milieux de
fermentation et apport en continu qui est le substrat limitant.
La relation cintique la plus connue, traduisant leffet de la concentration en substrat
limitant sur la vitesse de croissance dun micro-organisme, est la relation de Monod :
rX max S
=
X =
K M S
avec
(s-1) taux de croissance,
max (s-1) taux de croissance maximal,
KM (kg/m3) constante de Monod.
Cette relation est parfois justifie en disant que la croissance cellulaire repose sur un grand
nombre de ractions enzymatiques et quil est donc logique que la forme de la relation de
Monod soit identique celle de Michaelis et Menten .

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Chapitre IV

La relation de Monod permet la modlisation cintique des phases de croissance et de


ralentissement. Les constantes de Monod ont des valeurs numriques en gnral faibles
devant les concentrations usuelles de substrat
IV.3. Types de fermenteurs

IV.3.1. Cuve mcaniquement agite are

La cuve mcaniquement agite are est utilise pour la production de micro-organismes en


arobiose. Loxygne qui est trs peu soluble dans les milieux de fermentation (8 mg/L 25
C dans leau) est alors le substrat limitant.
La vitesse globale de formation des micro-organismes est la rsultante du couplage entre leur
vitesse propre de croissance et la vitesse de transfert de loxygne de la phase gaz disperse
vers le milieu de fermentation. La puissance mcanique consomme sert la fois mlanger
la phase liquide et gnrer une aire interfaciale importante entre les bulles de gaz et le milieu
de fermentation.
La configuration standard de cuve recommande est celle munie dun mobile
dagitation dont la hauteur de liquide est gale au diamtre de la cuve; on rencontre cependant
des cuves multiagitateurs de hauteur gale plusieurs fois leur diamtre.
Le gaz est inject dans la cuve sous le mobile dagitation, le plus souvent par un anneau
perfor. Le mobile dagitation a ici un double rle : il doit mlanger la phase liquide, mais
aussi, et surtout, disperser les bulles dair injectes dans la cuve et viter leur coalescence. Les
mobiles cisaillants sont les seuls utiliss, car les contraintes mcaniques quils gnrent
permettent, en cassant les bulles de gaz, dobtenir des bulles de petites tailles et donc une aire
dchange interfaciale gaz-liquide importante :
6g
a=
db
a (m2/m3) : aire spcifique volumique dchange
db (m) : diamtre de la bulle
g : rtention de gaz
volume de gaz
g =
volume de la suspension

Cuves multiagitateurs

Pour augmenter le temps de sjour du gaz dans le racteur, on utilise parfois des cuves non
standard dont la hauteur est gale plusieurs fois leur diamtre. Dans ces conditions, pour
assurer une dispersion convenable du gaz, plusieurs agitateurs sont placs sur le mme axe.

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La distance entre agitateurs la plus utilise est dc ; on peut alors considrer quil ny a pas
dinteraction entre les agitateurs.
Pour n agitateurs, la puissance mcanique requise est gale n fois la puissance consomme
par une cuve standard.

IV.3.2. Colonne bulles

La colonne bulles est un racteur galement utilis pour la production de micro-organismes


en arobiose. Les bulles dair injectes la base de la colonne apportent loxygne aux
microorganismes et mlangent la phase liquide au cours de leur mouvement ascendant.
Comme pour la cuve mcaniquement agite are, la vitesse globale de formation des micro-
organismes est la rsultante du couplage entre leur vitesse propre de croissance et la vitesse de
transfert de loxygne de la phase gaz disperse vers le milieu de fermentation.
Comparativement la cuve mcaniquement agite are, la colonne bulles ne comporte pas
de pices en mouvement et ne consomme pas de puissance mcanique dagitation. Sa fiabilit
est plus grande et son cot en investissement et en fonctionnement plus faible. Par contre, ses
performances de transfert doxygne sont nettement moins bonnes, car aucun effet mcanique
ne vient sopposer la coalescence des bulles de gaz, phnomne qui diminue laire
interfaciale entre les bulles de gaz et le milieu de fermentation.
La colonne bulles est aussi employe lors des fermentations anarobies, lagitation
pneumatique tant alors ralise par les bulles de gaz carbonique dgages in situ pendant la
fermentation. Exemple, les cuves de vinification.
Les caractristiques des colonnes bulles sont trs variables. Presque toujours de section
circulaire, leur diamtre peut aller de 0,1 m pour les pilotes de laboratoire jusqu plus de 5 m
pour les units industrielles.

Lascension du nuage de bulles de gaz induit un mouvement ascendant de la phase liquide au


centre de la colonne et descendant au voisinage de la paroi.

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Le mlange de la phase liquide est ralis par lascension des bulles de gaz, qui entranent
dans leur sillage du liquide, et par les mouvements ascendants et descendants de la phase
liquide, qui gnrent des boucles de recirculation.
Compte tenu des faibles vitesses des bioractions et du transfert de loxygne dans la phase
liquide, celle-ci peut tre valablement suppose parfaitement mlange.

IV.3.3. Le racteur airlift

Cest un appareil driv de la colonne bulles et est utilise pour les seules cultures arobies.
Un racteur airlift est une colonne bulle comportant soit un tube concentrique interne plac
au-dessus du distributeur de gaz, soit un tube de recirculation externe. Laddition de ces
dispositifs modifie considrablement la circulation de la phase liquide.
Le mouvement de la phase liquide est ici induit par la diffrence entre les masses volumiques
apparentes de la dispersion gaz-liquide situe dans la partie centrale du racteur et de la phase
liquide situe dans lautre partie.

IV.4. Hydrodynamique des Fermenteurs

IV.4.1. Puissance consomme

La puissance mcanique P (Watt) consomme se calcule par lintermdiaire du nombre de


puissance Np appel aussi coefficient de traine de lagitateur dans le fluide, reprsente le
rapport entre les forces externes et les forces dinertie :
P = Np N3 da5
: masse volumique du milieu exprim en kg/m3
Np . nombre de puissance sa valeur est dtermine partir de labaque de Rushton
reprsentant Np = f(Re)

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Chapitre IV

IV.4.2. Le nombre de Reynolds (Re)


Re reprsente le rapport entre les forces dinertie et de viscosit (sans dimension, caractrise
le type dcoulement ; axial ou radial) :

d a2 Nl
Re

avec da (m) diamtre de lagitateur,
N (tr/s) vitesse de rotation,
(kg/m3) masse volumique du liquide,
(Pa.s) viscosit du liquide.
En rgime laminaire, le produit Np*Re est constant ; en rgime turbulent, cest le nombre de
puissance qui est constant : Np = 6 pour la turbine et 0,4 pour lhlice marine. Lhlice marine
consomme donc moins de puissance que la turbine.

IV.4.3. Rgimes hydrodynamiques

Il existe trois rgimes hydrodynamiques dpendant de la vitesse de rotation du mobile et du


dbit de gaz inject dans le racteur :
Engorgement (les bulles de gaz ne sont pas affectes par lagitation) ;
charge (les bulles de gaz sont mlanges au-dessus de lagitateur) ;
Dispersion (les bulles de gaz sont casses et mlanges dans toute la cuve).
Les transitions entre ces rgimes sont caractrises par les valeurs de deux nombres sans
dimension :
le nombre daration Na
G
Na
N d a3

le nombre de Froude qui exprime le rapport des forces dinerties aux forces
de gravit caractrisant le phnomne de vortex:
N 2 da
Fr
g
avec
G (m3/s) : dbit volumique du gaz,
g : acclration de la pesanteur. g = 9,81 m/s2
Pour viter la formation du vortex, les cuves sont quipes de contre-pales (chicanes)

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Le rgime de dispersion est, bien entendu, le plus efficace et cest celui que lon choisira. Il
correspond, si le liquide est de leau, des nombres daration Na exprims par la relation :
0,5
d
N a 0,2 a Fr0,5
dc
Dans ce rgime la dispersion du gaz est assure par la formation de cavits larrire des
pales de la turbine. La meilleure efficacit est obtenue lorsque les cavits adhrent sur toute la
surface des pales, situation observe pour Na > 0,1.
Dans le domaine du gnie biochimique, laration est souvent caractrise par le taux
daration qui sexprime en volume de gaz introduit par minute par volume de liquide [VVM
ou VVH (Volume de gaz par Volume de liquide et par Minute ou par Heure)]
IV.4.4. Puissance mcanique en milieu ar
La puissance mcanique Pg (W) consomme par une cuve are est infrieure la
puissance P consomme par une cuve non are de mme configuration, agite la mme
vitesse et renfermant le mme liquide. Ce phnomne sexplique par la prsence des cavits
de gaz qui diminuent la trane des pales dans le liquide.
Pg
Le rapport diminue rgulirement avec le nombre daration et devient constant pour Na
P
> 0,1 ; il vaut alors :
Pg 0,022
0,27
P Fr
La relation empirique de Michel et Miller est couramment utilise dans les industries
de fermentation pour calculer Pg
0.45
P 2 N d a3
Pg = 0,34 nP
G 0.56

avec np nombre de pales de la turbine.
G (m3/s) dbit volumique de gaz

IV.4.5. Solubilit des gaz en phase liquide

A linterface gaz liquide, la concentration de lespce soluble en phase liquide est


gnralement dcrite par une relation dquilibre. Dans le cas de gaz peu solubles, comme
loxygne, la relation dquilibre est dcrite par la loi de Henry

P= H C

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Avec
P= Pression partielle de la phase gaz au dessus du liquide en atm
C = concentration de gaz dissout en mol/l
H= Constante de Henry l.atm/mol

IV.4.6. Coefficient volumique de transfert de matire gaz-liquide

Le transfert de matire gaz-liquide dun gaz peu soluble, comme loxygne, est caractris par
le produit du coefficient de transfert de matire K L (m/s) cot liquide (coefficient de transfert
de film liquide) par laire spcifique dchange par unit de volume de liquide a (m-1) . Ce
produit est par dfinition le coefficient volumique de transfert de matire gaz-liquide, not
K L a (s) et qui est en grande partie fonction du type de mobile de lagitation et de la

puissance dissipe .
En cuve mcaniquement agite are, le coefficient volumique de transfert est un paramtre
essentiel, car sa valeur doit tre suffisante pour que les besoins en oxygne du micro-
organisme soient satisfaits.

Pg
KL a k U g
VL
k : coefficient empirique qui dpend du systme
P/V : puissance volumique dissipe dans le milieu par lagitateur (kilowatt par unit de
volume)
Ug vitesse spcifique du gaz (m/s)
et dpendent du milieu coalescent ou non
0, 4
Pg
pour leau (milieu coalescent) : K L a 2,6 10 2
U g0,5
VL
Avec VL (m3) volume du liquide
Ug : vitesse superficielle du gaz
G
Ug (m/s)
A
A (m2) aire de section droite de la cuve
0, 7
Pg
pour les solutions salines (milieux non coalescents) : K L a 2,0 10 3
U g0, 2
VL

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Chapitre IV

IV.5.Echange gazeux doxygne

Lobjectif est de satisfaire les besoins des cultures au niveau des changes gazeux. Les
microorganismes utilisent loxygne dissout et rejettent le CO2 en quilibre avec la phase
gazeuse.
Deux notions essentielles apparaissent :
La capacit de transfert du racteur OTR
La demande en oxygne de la culture

IV.5.1. Capacit de transfert

Elle est dfinie par la relation suivante qui exprime la quantit doxygne transfre
par unit de temps OTR (oxygen Transfer Rate) ou vitesse de transfert (rO2) exprime en
moles de O2/l h:
dC L
OTR K L a (C * C L )
dt
Avec
CL : concentration en oxygne dans la phase liquide (mole/l)
C* : concentration en oxygne saturation (mole/l)
KL a (s-1) coefficient volumtrique de transfert,
Notons que (C* - CL) ne dpend pas de lagitation, mais de la nature du milieu, de la
temprature et de la pression partielle du constituant dissoudre.
La capacit de transfert des racteurs va dpendre de plusieurs variables :
La puissance dagitation et lefficacit du systme dagitation (la dispersion)
La solubilit du gaz dpendant de la pression, du dbit, de la composition, de la
temprature et de la composition du milieu liquide
Plusieurs critres sont aussi dfinir :
Le volume dexpansion du liquide li au gaz
Le dbit gazeux qui peut tre exprim sous plusieurs formes :
VL : volume dair (m3) par heures dans les CNTP
VVM : volume dair par volume de liquide par minute
VVH : volume dair par volume de liquide et par heure

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Chapitre IV

IV.5.2. Demande en oxygne

Elle mesure les besoins en consommation doxygne de la culture OUR (Oxygen Uptake
Rate) et sexprime en mole/l h
X max O2
OUR
YX / O 2 K O 2 O2

IV.5.3.Equilibre entre la raction biologique et le transfert de matire gaz-liquide

Ce couplage se rencontre lors de cultures arobies de micro-organismes. Loxygne


passe de la phase gaz, disperse sous forme de bulles, la phase liquide pseudo-homogne
renfermant les microorganismes, o il est consomm. Les deux phnomnes, transfert de
matire gaz-liquide et bioraction, sont successifs et la concentration en oxygne dissous dans
la phase liquide rsulte dun rgime quasi-stationnaire rapidement tabli et pour lequel la
vitesse de transfert de loxygne est gale sa vitesse de consommation par bioraction.
Compte tenu de sa trs faible solubilit, le substrat limitant est en gnral loxygne ; en
supposant que linfluence de la concentration en oxygne dissous sur la vitesse de croissance
obit la loi de Monod, on peut alors crire en rgime quasi stationnaire :
X X max O2

K L a O2* O2 rX
YX / O 2

YX / O 2 YX / O 2 K O 2 O2
Avec
(s-1) : taux de croissance
max (s-1) : taux de croissance maximal
rX (kg.m-3 s-1 ) : vitesse de formation de biomasse
O2 (kg/m3) : concentration en oxygne dissous,
O (kg/m3) : concentration saturante en oxygne dissous,
*
2

YX/O2 : rendement de la biomasse par rapport loxygne,


KO2 (kg/m3) : constante de Monod pour loxygne.
La croissance arobie des micro-organismes se droule en trois phases.
En dbut de culture, la concentration en biomasse [X] est faible et le flux doxygne
ncessaire la croissance est bien infrieur au flux limite de transfert. La
concentration en oxygne dissous [O2] nest donc pas trs petite devant la
concentration saturante. Le microorganisme se dveloppe son taux de croissance
max

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Chapitre IV

La concentration en biomasse augmentant de manire exponentielle, les besoins


en oxygne croissent de mme et la concentration [O2] diminue. Lorsque cette
concentration devient du mme ordre de grandeur que kO2, les deux phnomnes,
transfert de matire et bioraction, sont alors coupls. Les valeurs de kO2 tant trs
faibles, le flux limite de transfert est trs rapidement atteint.
La croissance est limite par le transfert doxygne, la vitesse de croissance est

constante et gale : rX = YX/O2 kL a O2*

IV.6. Fermentation continue et discontinue

Equation du bilan massique sur le fermenteur

Entre + Production = Sortie + Accumulation

Equation du bilan massique par rapport au substrat

d V S
QE S 0 rS V QS S
dt

Equation du bilan massique par rapport la biomasse

d V X
QE X 0 rX V QS X
dt

Equation du bilan massique par rapport au produit

d V P
QE P0 rP V QS P
dt
Avec
V : volume du liquide
Q : dbit volumique
S0, X0 et P0 concentration initiale respectives du substrat de la biomasse et du produit.
S, X et P concentration respectives linstant t du substrat de la biomasse et du produit

IV.6.1. Fermentation discontinu non aliment ou Batch

Bilan sur le fermenteur batch


Le racteur ne possde ni entr ni sortie QE = QS = 0 et le volume est constant
Bilan sur le substrat
d S
rS
dt
Bilan sur la biomasse

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Chapitre IV

d X
rX
dt
Bilan sur le produit
d P
rP
dt
La souche microbienne doit possder un comportement cintique connu, pendant la
fermentation on introduit aucun milieu de culture sauf pour les ractifs de neutralisation, ou
pour lantimousse introduit en quantit trs faible. De mme faon, on ne soutire pas de la
culture tant quelle nest pas termine. Le volume dans la cuve de fermentation est donc
constant. La concentration en biomasse (X) augmente inversement par rapport celle du
substrat (S) qui lui est consomm. Le produit recherch (P) apparait et sa concentration
augmente.
Le temps ncessaire pour passer de la concentration en substrat S0 la concentration S, aprs
consommation par le processus de fermentation est donn par la formule suivante :
S
dS
t
S0
r S

rS tant la vitesse de la raction de fermentation souvent modlis par lquation de Monod


Le temps ncessaire pour passer de la concentration cellulaire X0 , la concentration X est
donne par la formule suivante :
X
dX
t r
X0 X

rX dsigne la vitesse de croissance cellulaire


Par le mme raisonnement on peut crire, si rP est la vitesse dapparition du mtabolite
recherch (on nglige sa dgradation) le temps ncessaire pour obtenir une concentration
finale P de produit est donn par la relation suivante:
P
dP
t r
P0 P

IV.6.2. Fermentation discontinue alimente ou Fed Batch

Apres une phase rapide de dmarrage, correspondant la fermentation discontinu, on


introduit le milieu de culture on dit quon a atteint la phase exponentielle de croissance (2 me
phase). Le dbit dalimentation Q est rgl de faons ce que la concentration en substrat soit

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Chapitre IV

dS
constante dans le fermenteur 0 et corresponde une tape de la phase logarithmique de
dt
croissance cellulaire. Le fermenteur est aliment sans soutirage.
Bilan massique par rapport au substrat
d V S
QE S 0 rS V
dt
rX d V S SdV
Q S0 V
YX / S dt dt
Bilan massique par rapport la biomasse
d V X
rX V
dt
Bilan massique par rapport au produit
d V P
rP V
dt
Laugmentation du volume du liquide dans la cuve est donne par lexpression
suivante :
dV Q dt
Dans ces conditions, le volume de milieu en fermentation augment ainsi que celui de la
biomasse (XV), selon lexpression :
d X V dX dV
rX V X V V X
dt dt dt
d X V
dt
XV

X V X o Vo e t

Lquation de bilan sur le substrat devient :


rX d V S SdV
Q S0 V QS
YX / S dt dt rX
Q S 0 S
X
V V
YX / S YX / S
X V X 0 V0 t
1- Q e
Yx / s S o S Yx / s S o S
=

t
2- V V0 Qdt
0

X 0 V0 t

e
t
3- V V0
Yx / s S o S
dt
0

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Chapitre IV

En combinant les 3 quations, on dduit la concentration en biomasse linstant t:


X 0 e t
X

1
X0

e t 1
Yx / s S 0 S
La variation de la concentration en biomasse au cours du temps dans le milieu de culture est
exprime par :
dX Q
X
dt V
dX Q
Si 0 la concentration en biomasse dans la cuve reste constante, on dit que le
dt V
microorganisme est maintenu en phase exponentielle de croissance dans le fermenteur et
dV
m dt
V
Cette expression donne la loi dvolution du volume de milieu en fermentation ou dvolution
dans le temps du dbit dalimentation.
A la fin de cette phase on coupe lalimentation et la culture volue en phase de dcroissance
ou dite de ralentissement puis en phase stationnaire au cours desquelles on assiste
lpuisement en substrat du milieu.

IV.6.3. Fermentation Continue

Fermenteur continu infiniment (parfaitement) mlang


La suspension microbienne en fermentation est homogne en tout point du racteur.
En pratique on commence ensemencer la cuve contenant un volume V de liquide.
Lalimentation et le soutirage se pratiquent aux mmes dbits QE = QS =Q
Bilan massique par rapport au substrat
d V S
Q S 0 rS V Q S
dt
Bilan massique par rapport la biomasse
d V X
Q X 0 rX V Q X
dt
Bilan massique par rapport au produit
d V P
Q P0 rP V Q P
dt
Lorsque ltat dquilibre pour ce qui est de la biomasse est tabli, lquation de bilan devient:

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Chapitre IV

Q X 0 rX V Q X

le taux de dilution D X X 0 rX X
Q
Soit D
V
Le temps de sjour moyen pour que le taux de dilution soit gal au taux de croissance est :
1 X
Avec X0 = 0
D rX

IV.6.4. Le fermenteur gradient de concentration

Le concept du racteur piston peut tre appliqu la fermentation. Cest un racteur tubulaire
dans lequel le milieu de culture ensemenc (X0) se dplace en mme temps que la
fermentation se droule. La concentration en biomasse et produit augmente progressivement
le long du racteur alors que la concentration en substrat diminue.
Bilan sur la biomasse
Q X rX dV Q X dX rX dV Q dX
Le temps ncessaire pour passer dune concentration X0 biomasse une concentration X est
donn par lexpression:
X
V dX
t
Q
r
X0 X

IV.6.5. Fermentation avec recyclage de la biomasse

Le fermenteur parfaitement mlang est limit dans son fonctionnement par un taux de
dilution maximal : Dmax
SO
Dmax m
K S S0
Bilan massique par rapport la biomasse sur le racteur continu avec recyclage
Bilan
d V X
QE X 0 rX V QS X QR X R
dt
La variation de la quantit de biomasse dans la cuve :

V X Q X 0 QR X R X Q QR
VdX
dt
Le taux de recyclage est li deux paramtres :
QR
le rapport des dbits
Q

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Chapitre IV

XR
le rapport de concentrations cellulaire :
X
En remplaant on obtient :

X D X 1 D X
dX
dt
En posant 1 on obtient :

D X
dX
dt
On voit que pour que la biomasse soit constante dans la cuve, la condition est que D

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Chapitre IV

Srie de TD N4

Exercice 1

On utilise un fermenteur agit pour produire de la bire. On connat les


caractristiques gomtriques de ce fermenteur :
Nombre de pale Np = 6,5 ; diamtre de lagitateur = 94 inch; Vitesse de rotation = 1,8 rps ;
masse volumique du milieu de fermentation: = 1,15 g/cm3. Calculer la puissance dagitation P
en kilowatt (kW). On donne : 1 inch = 1 pouce = 2,54 cm

Exercice 2

Dans un bioracteur en opration dont KLa est de 300 h-1, la concentration en oxygne
dissous dans la culture est de 44,1 %. Si la concentration saturation dans le milieu la
temprature de fermentation est de 6,8 mg/L, quel est le taux (vitesse) de transfert doxygne
dans le racteur ce moment?

Exercice 3

Un fermenteur de 20.000 litres est utilis pour la production de levures. Les caractristiques
gomtriques sont les suivantes : diamtre de la cuve : 3 m; diamtre de l'agitateur : 1 m ;
hauteur de liquide : 2,83 m ; 1 agitateur turbine 6 pales ; vitesse d'agitation 85 tr/min ; dbit
d'aration 600 m3/h. Le milieu de fermentation a les caractristiques suivantes : milieu
newtonien, masse volumique = 1200 kg/m3,
1) Calculer la puissance d'agitation Po aux diffrentes vitesses d'agitation
2) Calculer la puissance d'agitation Pg (CV/m3) par la corrlation de Michel et Miller

Exercice 4

Un fermenteur est conu pour la production de levures partir de lactoserum. Ce


dernier contient 40 g/L de lactose sur lequel on peut faire pousser K. fragilis avec un
rendement de 0,52 et un taux de croissance spcifique maximal de 0,4 h-1. Afin dviter leffet
Pasteur et la formation dthanol, la concentration doxygne dissoute doit tre maintenue en
tout temps suprieure 50 % de la valeur de saturation.
a) Estimer la vitesse maximale de la consommation doxygne rO2 pour laquelle le systme
daration doit tre conu on donne rO2 = YO/X* rX avec YO/X = 0,028 mole/g
b) Estimer le kLa ncessaire pour y arriver, en admettant que lon barbote une telle quantit
dair travers le fermenteur, que la baisse de la concentration doxygne dans les bulles est
ngligeable. La constante de Henry pour loxygne (30 C) vaut 850 atm*l*mol-1

61
Chapitre IV

Exercice 5

Un fermenteur de forme cylindrique a les caractristiques gomtriques suivantes :


diamtre de la cuve (dc) = 3 m ; diamtre de lagitateur (da) = 1,5 m ; hauteur du liquide (h) =
5 m ; NP = 6 ; masse volumique du liquide ( ) = 1050 kg/m3, vitesse dagitation (N) = 40
tours / mn.
Calculer le volume du liquide VL puis le dbit volumique G (m3/s) de gaz. Dduire la vitesse
superficielle du gaz Ug ; on donne son expression : Ug = G / Surface de la cuve.
Calculer les puissances dagitation non ares (P) et ares (Pg)
Calculer le coefficient volumique de transfert doxygne kLa (h-1) pour ce fermenteur

Exercice 6

Un fermenteur est utilis pour la production de levures. Les caractristiques gomtriques de


ce fermenteur sont les suivantes:
1 agitateur turbine type 6 pales
Diamtre de la cuve = 7,32 m
Diamtre de lagitateur = 96 inch
Hauteur de liquide = 7,32 m
Vitesse de rotation =1,4 rps
Le milieu de fermentation a les caractristiques suivantes: Milieu newtonien, Masse
volumique = 1,15 g/cm3 , Viscosit = 12 000 cP
Calculer la puissance dagitation et le temps de mlange.

Exercice 7

Les caractristiques gomtriques d'un fermenteur sont les suivantes :


Diamtre de la cuve : 3 m
Diamtre de l'agitateur : 1,5 m
Hauteur de liquide : 5 m
4 contrepales
3 agitateurs turbine de Rushton 6 pales
Les constantes du milieu de fermentation sont: milieu newtonien, masse volumique = 1050
kg/ m3, viscosit = 0,003 kg/m.s. La vitesse d'agitation est de 40 tours/min et l'aration de 0,5
VVM (volume d'air par volume de liquide et par minute)
1) Calculer les puissances d'agitation non ares et ares.
2) Calculer le coefficient de transfert d'oxygne pour ce fermenteur.

62
Chapitre IV

Exercice 8

On produit un polysaccharide par fermentation avec Xanthomonas campestris. La


concentration en cellule est de 6 g/l.
1) Calculer la demande volumique en oxygne.
2) Quelle doit tre la valeur du coefficient de transfert d'oxygne pour que la concentration
d'oxygne dissous soit suprieure 0,02 at ?
3) Le moteur du fermenteur a une puissance de 720 chevaux. Est-il suffisant pour satisfaire la
demande en oxygne du micro-organisme ?
Donnes :
Taux de croissance = 0,042 h-1
Rendement : YX/O2 = 0,79 g/g
Volume du fermenteur = 40 m3
vitesse des gaz = 4,9 m/min
Pression partielle d'oxygne la sortie du fermenteur = 0,11 at
Masse volumique du milieu : 1300 kg/m3
Le milieu a un comportement non newtonien le fermenteur est de gomtrie standard avec 3
agitateurs,

Exercice 9

En utilisant le fermenteur dcrit dans l'exercice 2, on a mesur la vitesse d'utilisation de


l'oxygne (OUR) et la puissance d'agitation :
N (tr/min) Dbit air (m3/h) OUR (mmoleO2/l.h) Puissance mesure (CV)
50 200 16,7 6,8
70 200 19,4 10,3
85 200 23,7 11,7
50 320 21,8 9,9
70 320 26,3 13,3
85 320 27,8 14,7
85 600 39,0 20,5
Pendant les mesures, la concentration d'oxygne dissous tait nulle.
A l'aide d'un bilan oxygne, calculer la concentration d'oxygne dans les gaz de sortie
(temprature 30C). En dduire le coefficient de transfert d'oxygne dans les diffrentes
conditions ci-dessus.
Calculer la puissance par unit de volume et la comparer avec celle mesure.

63
Chapitre IV

Calculer l'efficacit de transfert d'oxygne dans les diffrentes conditions. Commenter.

Problme 1

Des essais de production d'antibiotiques ont t raliss sur un fermenteur pilote de


300 litres (volume liquide) de gomtrie standard:
Diamtre de la cuve : 0,65 m ; Diamtre de l'agitateur : 0,19 m ; Hauteur de liquide : 0,90 m.
Le fermenteur est muni de deux agitateurs turbine 6 pales, la vitesse de rotation est de 400
t/min. Le milieu de fermentation sera considr comme newtonien de masse volumique 1
g/cm3 et de viscosit 1 cp.
Les mesures suivantes ont t ralises
aration (VVM) 0,1 0,25 0,5 0,75
G (m3/s) : Dbit de gaz
Pg (Watts) : Puissance are
KLa (s-1)
titre en antibiotique (%) 10 60 100 95

1) Remplir le tableau. Tracer le titre en fonction du kLa et commenter la courbe.


2) Extrapolation :
On se propose d'utiliser ces donnes pour le calcul d'une installation de production
dindustrielle dantibiotique dans un fermenteur de volume liquide de 300 m3.
a) Quelle est la valeur de l'aration ncessaire pour maintenir la puissance par unit de volume
constante et le coefficient de transfert d'oxygne constant ? Quelle est alors la nouvelle vitesse
d'agitation ? Comparer les vitesses en bout de pales. Conclusions compte tenu de la nature du
micro-organisme.
b) Quelle est la nouvelle puissance par unit de volume et le nouveau coefficient de transfert
d'oxygne si on extrapole en maintenant la vitesse en bout de pales constante et en prenant
une aration de 0,5 VVM ?
On donne les expressions suivantes :
0,5
d N 2 da
0,2 a
Fr 0,5 G
Fr = Np
P
;
dc Nd a3 g l N 3 d a5
0,4
-2
P
Pg 0.0022
0.27 kL a = 2,6 10 g U g0,5 ; g = 9,81 m/s2
P Fr VL

64
Chapitre IV

Problme 2

Les essais de production de la vitamine B6 consistent en une fermentation de glucose


par la levure Schizosaccharomyces pombe dans un fermenteur (cuve mcaniquement agite
are) de laboratoire de volume liquide gal 10 litres, de forme cylindrique et de gomtrie
standard (un agitateur de type turbine de Rushton), les rsultats obtenus sont regroups dans
le tableau ci-dessous.
Calculer le diamtre dc du fermenteur, en dduire la hauteur du liquide et le diamtre de
lagitateur da. Quels sont le rendement en biomasse YX/S et le rendement en produit YP/S
Vous souhaitez dimensionner le transfert d'oxygne pour estimer les cots de production.
Aprs 28 h de fermentation, la concentration en oxygne C*O2 est de 0,186 atm, le rendement
YX/O2 est de 0,21 g/g pour un taux de croissance = 0,14 h-1, en dduire la demande
volumtrique en oxygne en mmole/ l. h.. Calculer le coefficient de transfert d'oxygne kL a
(h-1) qui permet de satisfaire la demande en oxygne de ce microorganisme.
Vous envisagez une production dans une unit industrielle de la vitamine B6 Le
fermenteur utilis, a les caractristiques gomtrique suivantes : diamtre de la cuve dc = 4 m,
diamtre de lagitateur da = 1,2 et une hauteur du liquide de 5,5 m. Calculer le volume V L du
liquide
b) En maintenant le coefficient kL a (h-1) constant, quelle puissance Pg est-elle ncessaire en
0,77
P
appliquant la relation de Fukuda suivante : kLa = 1,83 (2 + 2,3 np) g V g
0,67

VL
Avec V : volume du fermenteur, np = 3 et une vitesse superficielle du gaz Vg = 0,025 m/s

Tableau Croissance et production de produit

t (h) X (g/l) P (g/l)


0 0,05 0,8
4 0,08 1,9
28 1,16 6,4

Milieu de fermentation: Source de carbone: glucose 10 g/l (utilisation complte en 28 h).


Masse molaire de loxygne 32 g / mole. La concentration d'oxygne C L est de 0,02 atm , la
constante de Henry H = 850 atm litre mole-1

65
Chapitre IV

Problme 3

On se propose de produire des levures de boulangerie (saccharomyces cerevisiae) par culture


arobie sur glucose la temprature ambiante de 30 oC dans une cuve mcaniquement agite
are standard munie de 6 pales de diamtre dc = 1,08 m et de volume utile de liquide VL de 1
m3. Le mobile dagitation est une turbine Rushton. Quel est la vitesse en bout de pales de
lagitateur (m/s) si la vitesse de rotation de la turbine N est de 300 tr/min. Calculer le nombre
daration Na. A quelle hauteur du fond de la cuve doit-on placer lagitateur. En dduire da ?
La levure se dveloppe partir du substrat avec un rendement YX/S, de 0,5 kg de
levure par kilogramme de sucre (mtabolisme respiratoire), La concentration souhaite en fin
de culture est 50 kg/m3, et la concentration dinoculation de 1 kg/m3.
Si la concentration en glucose dpasse un certain seuil, la levure transforme une partie du
glucose en thanol (mtabolisme fermentaire), et le rendement de production chute. Pour y
remdier, un sucre dune concentration de 250 kg/m3, est apport dans le racteur de culture
au fur et mesure de sa consommation, ce qui permet de maintenir sa concentration en
dessous du seuil de bascule mtabolique. Ce mode de culture discontinu aliment entrane une
augmentation du volume de la phase liquide et une dilution de la biomasse forme. Dans ces
conditions, le rendement par rapport loxygne YX/O2 est voisin de 1 kg/kg. Le taux de
croissance maximal max de la levure en arobiose est de 0,3 h-1. Calculer le volume de
remplissage initial du milieu de culture. Calculer le dbit volumique G (m3/s) de gaz. Dduire
le taux daration en VVM, puis la vitesse superficielle du gaz Ug. Calculer la puissance
consomme par la cuve non are P pour une masse volumique de 103 kg/m3. Quelle est la
puissance consomme par la cuve en milieu ar Pg. Dduire la valeur du coefficient
volumique de transfert de matire gaz-liquide kL a

Ce type de culture se dcompose en trois phases.


1. Phase 1 de croissance (de dure t1(h)) exponentielle au taux de croissance maximal max,
2. Phase 2 trs courte (de dure t2 (h)) o raction de croissance et transfert de matire gaz-
liquide sont coupls
3. Phase 3 de croissance (de dure t3(h)) vitesse constante lorsque loxygne devient le
substrat limitant.
La dure de la deuxime phase est ngligeable devant celle des phases 1 et 3 et le volume
du milieu de culture varie au cours du temps.
Faite un bilan massique sur la biomasse, puis un bilan massique sur le substrat.

66
Chapitre IV

Le dbit dalimentation en substrat Q (m3/s) est une fonction du temps et gale dVL/dt . Si
on considre que [S] est constant et est trs petit devant [ So], reformuler lquation du bilan
sur le substrat en exprimant Q en fonction uniquement de rX , de YX/S, de [So] et de VL .
Soit ([X]VL)o la quantit de biomasse initiale gale 0,6 kg de la phase de croissance
exponentielle
(puisque Vo vaut 0,6 m3 et [X]o 1 kg/m3) . Reformuler lquation du bilan sur la biomasse,
intgrer la relation et montrer que le dbit dalimentation en substrat Q varie de manire
exponentielle avec le temps.
Exprimer la relation donnant la variation du volume VL par rapport au temps, avec VLo le
volume de remplissage initial du racteur (0,6 m3).
La phase exponentielle de croissance sarrtera lorsque la vitesse rX deviendra gale la
vitesse de limitation par loxygne. Calculer cette vitesse rX , pour une concentration O2* =
7,5 10-3 kg/m3, un taux de croissance maximal de 0,3 h-1 et un rendement YX/O2 de 1 kg/kg.
Dduire la concentration en biomasse [XL].
Si cette valeur [XL] est atteinte aprs un temps t, exprimer sa valeur en fonction de V L0, de
YX/S, de S0, du produit (X VL)0 et de expmaxt .
avec YX/S gale 0,5 kg de levure par kg de sucre (mtabolisme respiratoire)
Dduire la valeur de t (h). Que reprsente t-elle ?
Si le taux de dilution est constant et est de la forme Di = Q/VL calculer Di.
Montrer que la relation du bilan sur la biomasse crite prcdemment peut scrire, aprs son
intgration entre le dbut de la phase et t, sous la forme :

Log
r X Di X t
Di t 6.5
rX Di X 6,5
Calculer le temps t (h) et que reprsente t-il ?

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