LA CINETIQUE ENZYMATIQUE

PLAN DU COURS
 
I. INTRODUCTION

II. LA CONSTANTE DE MICHAELIS MENTEN

III.L’EQUATION  DE MICHAELIS MENTEN

IV.REPRÉSENTATION GRAPHIQUE DE LINE WEAVER ET BURKE 

V. EXPRESSION DE L’ACTIVITE ENZYMATIQUE

 
 
 I.INTRODUCTION

LA CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
consiste en l'étude de la vitesse de réaction et de
l'influence de différents paramètres susceptibles
de la modifier.
 A-LES PHASES DE LA RÉACTION ENZYMATIQUE 

(site de fixation S)

Etape 1: Etape 2: Etape 3:

-Association E +S -Réarrangement interne ES -Libération P
-Transformation S → P -Retrouve à l’état initial
-Lieu :site actif →entité 3D
-Association ES/liaisons de faibles : L H, interactions
hydrophobes, L ioniques…….
- Reconnaissance dynamique :adaptation induite
 B-LA VITESSE D’UNE REACTION
ENZYMATIQUE 

S E P

La vitesse instantanée R est:

La quantité de S disparue par unité de temps
V= - ds/dt
La quantité de P apparue par unité de temps 
V= dp/dt
Proportionnelle à la concentration du substrat
V= K [S]
 S’infléchit  Horizontale 
Linéaire ascendante 
E n’est + saturée /S l’↔ de la R est atteint
E saturée /S , V Cst
V décroit V =0

t→ v=tgα
t0→ vi=tgα0 ,vi vitesse initiale est maximale

Pour [E] et de [S] données, on mesure la quantité de P formé en Fx du Tps

La courbe [P] = f (t)
C-INFLUENCE DE LA CONCENTRATION DU SUBSTRAT SUR LA VITESSE
INITIALE :
 II.LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

1913, ont établi l’équation d’une R enzymatique

Médecin biochimiste Médecin biochimiste

allemand canadienne
II-LA CONSTANTE DE MICHAELIS-MENTEN

E
S P

1-formation du complexe enzyme-substrat : ES

Etape rapide et réversible
V1 , k 1
E+S ES
V2, k2

• V1 et K1 sont les vitesse et constante de formation du complexe ES

• V2 et K2 les vitesse et constante de dissociation du complexe ES
• 2-formation du produit P à partir du
complexe enzyme-substrat :

Étape plus lente

V3, k3
ES E+P
• V3 : vitesse de formation du P
• k3 : constante de formation du P
• la réaction globale devient:
K1 V1 K3 V3
E+S ES E+P
K2 V2
• La vitesse de disparition du substrat S (- ds/dt) = vitesse de
formation des produits de la réaction (dP/dt).
V = - dS/dt = dP/dt
 
• D’après la loi d’action des masses on a :
V1 = K1 [E] [S]
V2= K2 [ES]
Or - dS/dt = V1- V2
• La vitesse d’apparition des produits des réactions :
V3 = K3 [ES]
Or dP/dt = V3 = K3 [ES]
 KM = constante de Michaelis-Menten
KM =constante de dissociation du complexe ES

 KM est exprimée en mole/L

 KM : reflète l’affinité de l’E pour son S
Si KM faible → l’affinité E pour S ↑
Si KM ↑ → l’affinité E pour S ↓
 III-l’Equation de Michaelis-Menten :
[ ET ]= [ E] + [ ES] → [ E]= [ ET]- [ ES] …………..(1)

Or Km = [E] [ S]/ [ ES] ]…………………. [E] remplacée / (1)

Km=([ET ]-[ ES] ) [S]/ [ ES] = [ET] [S] / [ES] -[S]

d’où [ES]= [ ET] [ S]/ km + [ S] ………………….(2)

La vitesse de la réaction Vi est égale à V3, vitesse de la réaction la plus lente:

Vi = V3=K3 [ES]…………………. [ES] remplacée / (2)

D’où Vi=K3 [ ET ][ S]/ km + [ S] ………(3)

Or V max = K3 [ET]…………(4)
Rapport (3)/(4) : Vmax / Vi → l’équation de Michaelis Menten

Donc
Représentation graphique de MICHALEIS- MENTEN
 Vmax : vitesse maximale que
peut atteindre la R lorsque l‘E
est saturée de S
 Km : concentration de S qui
sature l‘E à 1/2
Constante de MICHALEIS- MENTEN
Représentation graphique
de MICHALEIS- MENTEN
K 3+K 2 [ E] [ S]
𝑲𝒎= =
K1 [ ES ]
IV- Représentation de Line Weaver et Burke :

Transformation
Equation de MICHALEIS- MENTEN Equation de Line Weaver et Burke

Vi=Vmax [ S]/ km + [ S] 1/Vi=km+[ S] /Vmax [ S]

Inversion
𝐕𝐦𝐚𝐱 [𝐒] 𝒌𝒎+[𝑺]
𝐕𝐢= 𝟏/𝑽𝒊=
𝒌𝒎 + [ S ]   Vmax  [ S ]  

𝒌𝒎 [𝑺]
𝟏/𝑽𝒊= +
𝑽𝒎𝒂𝒙[𝑺] 𝑽𝒎𝒂𝒙[𝑺]

Hyperbole Droite
La représentation graphique de Line Weaver et Burke 
Y Axe des ordonnées

Une droite

X Axe des abscisses

Equation de Line Weaver et Burke

Pente de la droite
• Cette représentation présente l'avantage
d'être plus facile à lire.

• En effet, on définit:
– Vmax  à partir : 1/Vmax = le point d'intersection
de la droite avec l'axe des ordonnés

– Km à partir :-1/Km = le point d'intersection de la

droite avec l'axe des abscisses
V-Expression de l'activité enzymatique

 katal "kat": - - -
Qtt d‘Enz qui catalyse la transformation 1 mole S / seconde

µkat =10-6 katal , nkat = 10-9 katal

 L'unité internationale"IU"International Unit ++++++

Qtt d‘Enz qui catalyse la transformation 1 µmole S/ minute
 Exercice 1
-On a étudié la constante de Michaelis d’une enzyme à plusieurs
substrats de structure voisines
-Les résultats sont les suivant :
Km
A 5X10-4 M
B 3X10-3 M
C 3,5X10-4 M
D 6X10-2 M
E 5,5X10-2 M

1-Donner la définition de la Km.

2-Indiquez, dans l’ordre décroissant l’affinité de l’enzyme pour
chacun des substrats.
 Corrigé exercice 1
1.KM :constante de Michaelis-Menten ou constante de
dissociation du complexe ES
• Définition Km : concentration de S qui sature l‘E à 1/2
• elle est exprimée en mole/L
• KM reflète l’affinité de l’E pour son S
– KM faible → l’affinité E pour S ↑
– KM ↑ → l’affinité E pour S ↓ Km
A 5X10-4 M
B 3X10-3 M
2.L’E qui a la plus grande affinité a la plus faible Km C 3,5X10-4 M
D 6X10-2 M
L’ordre décroissant (l’affinité la plus grande à l’affinité la plus
E 5,5X10-2 M
petite) d’affinité de l’enzyme pour chacun des substrats
est :C,A,B,E,D
 Exercice 2

• L’étude de la cinétique de la réaction catalysée par une

enzyme E montre que pour une concentration de substrat
égal à 0.25mM, la vitesse de réaction devient la moitié de la
Vmax.
• Est-il possible, à partir de ces seules donnés, de déterminer la
Km et de schématiser la courbe correspondante ?situer les
constantes de la cinétique sur ce tracé.
 Corrigé exercice 2
• Oui c’est possible de déterminer la Km car lorsque la vitesse de la
réaction est égale à Vmax/2
V = Vmax/2 → km=[S] =0.25mM
 Exercice3
• une enzyme catalyse la réaction S →P est dosée pour les concentrations
initiales suivantes :
[S]M V mole/min
1.10-2 75
1.10-3 74,4
1.10-4 60
7,5.10-5 56,25
6,25.10-6 15,0

1-Déduire KM et VMax.
2-Quelle serait la nouvelle valeur de KM si on doublait les concentrations de S.
3-Quelle serait la vitesse initiale si on doublait la concentration en enzyme.
4-Determinez la concentration de l’enzyme libre pour S= 10-2M.
 Corrigé exercice 3
1) Vmax =75 M/min sachant que et Vi =15 M/min [S]= 6,25.10-6M d’où Km
- 2,5.10-5 M

2) La Km est inchangée quel que soit la concentration du substrat S

3) Si on double la concentration en enzyme ,la vitesse initiale :Vi est doublée
4) Lorsque [S]= 10-2M ,Vi = Vmax L’enzyme est saturée, il n’y a pas d’enzyme
libre