Détermination des indices physico-chimiques

III- DETERMINATION DES INDICES PHYSICO-CHIMIQUES

De nos jours, les propriétés physiques (densité, indice de réfraction, pouvoir rotatoire)
et chimiques (solubilité dans l'alcool, indice d'acide, d'ester…) sont exigées pour l’évaluation
commerciale des huiles essentielles.

III-1- Détermination des indices physiques

III-1-1 Caractéristiques organoleptiques

L’huile d'Ajowan est un liquide de couleur jaune claire, d’odeur caractéristique semblable à
celle du thym

III-1-2 Densité relative

La densité de l’HE correspond au rapport entre la masse d’un certain volume de

l’essence et la masse du même volume d’eau pris à la même température.

Protocole expérimental :
La mesure de la densité de l’HE a été réalisée à l’aide d’un pycnomètre et calculée à
partir de la formule (a) suivante :

m2 – m0
D20 = (a)
m1 – m0

Dans laquelle :
m0 : la masse en gramme du pycnomètre vide
m1 : la masse en gramme du pycnomètre rempli d'eau distillée
m2 : la masse en gramme du pycnomètre rempli d'huile

III-1-3 Indice de réfraction

L’indice de réfraction symbolisé par nλt est le rapport entre le sinus de l’angle
d’incidence du rayon lumineux dans l’air et le sinus de l’angle de réfraction du rayon réfracté
dans le milieu considéré.

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Rayon d’incidence
Sin i
nλt =
i
Sin r
r

Rayon réfracté

Cet indice permet de mesurer le pouvoir réfringent des huiles à 20°C par rapport à la
raie «D» du sodium (λ=589 nm) d’où la notation nλt.

Protocole expérimental :
Nous avons effectué la mesure de l’indice de réfraction de l’HE à l’aide d’un
réfractomètre classique de marque BIOBLOCK ATAGO POLYSTAT 5A. Il est donné par
lecture directe sur le réfractomètre à température fixée à 20°C. Pour cela, on a opéré comme
suit :
-Etalonner l’appareil à l’aide d’une substance d’indice de réfraction connu à la température
fixée à 20°C.
-Nettoyer les prismes et déposer quelques gouttes d’HE entre les deux faces des prismes.
-Regarder dans l’oculaire et tourner le bouton de réglage de l’indice de réfraction pour amener
les zones sombres et éclairées au centre du réticule.
-Supprimer les irisations pour obtenir une ligne nette entre les deux zones.
-Noter la valeur de l’indice par l’échelle de lecture.

III-1-4 Pouvoir rotatoire

Le pouvoir rotatoire est la propriété que possèdent certaines substances chimiques de

dévier le plan de vibration de la lumière polarisée. Cette déviation est due à la présence d’un
carbone asymétrique dans la molécule.
Le pouvoir rotatoire ou rotation spécifique d’un échantillon mesuré à 20°C, en utilisant la raie
D du sodium (Na) λ=589 nm comme source lumineuse, est exprimé par la loi de Biot :

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20 α
[α ] D =
L . C
(b)

Dans laquelle :
α : valeur de l’angle de déviation de la lumière polarisée lue sur le polarimètre.
L : longueur de la cellule exprimée en dm.
C : concentration de la solution à examiner exprimée en g/100mL.

Protocole expérimental :
Nous avons mesuré l’angle de rotation de l’essence d’A.v. à l’aide d’un appareil KARL
COLB muni d’une cellule de 1 dm de longueur.
Nous avons préparé une solution éthanolique à partir de 0,20g d’essence dans 100mL
d’éthanol.

L’angle de rotation observé est lu directement sur l’appareil ; ce qui nous a permis de
déterminer la valeur du pouvoir rotatoire de L’HE à l’aide de l’équation (b)

III-1-5 Miscibilité à l’éthanol

Une huile essentielle est dite miscible à un volume et plus d’éthanol de titre
alcoométrique déterminé, à la température de 25C°, lorsque le mélange de un (01) volume
d’huile essentielle considérée avec V volumes de cet éthanol est limpide et le reste après
addition graduelle d’éthanol de même titre, jusqu’à un total de 20 volumes.

Protocole expérimental :
Dans un erlen contenant 1 mL d'HE, on verse de l'éthanol à 70% par fraction de 0,2 mL à
l'aide d'une burette de 20mL en agitant après chaque ajout. Lorsqu'une solution limpide est
obtenue on note le volume d'alcool ajouté. 20mL d’alcool ont été nécessaires.

III-2- Détermination des indices chimiques

En plus des caractères physiques, on peut par des méthodes chimiques doser les
fonctions (acide, ester, alcool, carbonyle,….) présentes dans les HE. Ces dernières permettent

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non seulement de mettre en évidence la présence des fonctions organiques mais aussi de
mesurer leurs proportions dans le mélange que sont les essences.

III-2-1 Indice d'acide

La teneur en acides gras libres d'une HE s'exprime de deux façons : l'acidité et l'indice
d'acide qui sont déterminés expérimentalement de la même manière et seul le mode
d'expression est différent.
L'indice d'acide Ia est le nombre de milligrammes de potasse (KOH) nécessaire pour
neutraliser les acides libres renfermés dans un (01) gramme d’HE.
La neutralisation d’un monoacide par la potasse se traduit par la réaction chimique
suivante :

O O
R C + KOH R C + H2O
OH OK

Protocole expérimental :
1g d’HE, 5mL d’éthanol à 96% et environ 5 gouttes d’indicateur coloré (phénophtaléine) sont
introduits dans un erlen. Le mélange ainsi formé est titré par une solution alcoolique de
potasse (KOH) 0,1N jusqu’à ce jour ce que la solution vire au rose.

Expression des résultats

L'indice d'acide Ia est déterminé par la formule (c) :

56,11
Ia = V.C. (c)
m

Dans laquelle :
V : volume en mL de la solution de KOH utilisée pour le titrage.
C : concentration en mole/L de la solution de KOH
m : masse en g de la prise d’essai

III-2-2 Indice d'ester

L’indice d’ester est le nombre de milligramme de potasse (KOH) nécessaire pour

neutraliser les acides libérés par hydrolyse en milieu basique (saponification) des esters

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contenus dans lg d’essence. La potasse réagit sur les esters selon une réaction dite de
saponification :

R-CO2-CH2-R' + KOH RCO2K + R'-CH2-OH

Savon
Protocole expérimental :
Dans un ballon de 100mL, on introduit 1g d’HE et 25 mL d’une solution alcoolique de
potasse (KOH) 0,5 M à l’aide d’une burette, ainsi que quelques fragments de pierre ponce. On
adapte au ballon un réfrigérant et on porte le mélange au reflux pendant une (01) heure. Après
refroidissement de la solution, on ajoute 20 mL d’eau distillée et 5 gouttes de phénophtaléine.
Puis, l’excès de KOH est titré avec une solution d’acide chlorhydrique (HCI) 0,5N jusqu’à la
disparition de la couleur rose.
Parallèlement, une opération à blanc est réalisée dans les mêmes conditions que
précédemment en utilisant les mêmes réactifs.

Expression des résultats

L’indice d’ester (Ie) est calculé à l’aide de la relation (d) :

28,05
Ie = (V0 - V1) - Ia (d)
m

Dans laquelle :
V0 : Volume en mL de la solution d’HCl (0,5N) mesuré pour l’essai à blanc.
V1 : Volume en mL de la solution d’HCl (0,5N) mesuré pour le calcul de Ie.
m : Masse en g de la prise d’essai.
Ia : Valeur d’indice d’acide.

III-2-3 Indice de saponification

L’indice de saponification est le nombre en milligrammes de potasse caustique

(KOH), nécessaire pour transformer en savon les acides gras et les triglycérides d’un (01)
gramme de corps gras.

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Le principe consiste à titrer l'excès d'hydroxyde de potassium en solution par l'acide

chlorhydrique.
La réaction de saponification est une réaction lente et incomplète. Pour l'accélérer et la
rendre aussi complète que possible, il faut opérer dans un milieu alcoolique, à température
élevée et en présence d'un excès de base.

CH2-COOR CH2-OH

CH-COOR + 3KOH CH-OH + 3R-COOK

CH2-COOR CH2-OH

Protocole expérimental :
Mettre 2g d’huile dans une fiole muni d’un réfrigérant puis ajouter 25mL de solution
éthanolique de KOH (0,5N), ensuite on porte le mélange à ébullition en agitant de temps en
temps pendant 1h. Ensuite, on ajoute 3 gouttes de phénolphtaléine. La solution savonneuse
est titrée avec HCL (0,5N). Parallèlement, on a effectué un essai à blanc dans les mêmes
conditions

Expression des résultats

L'indice de saponification est donné par la formule (e) :

N.(V0 - V)
Is = (mg KOH / g d'H.E)
P (e)

Dans laquelle :
V0 : volume en mL de la solution d’acide chlorhydrique pour l'essai à blanc
V : volume en mL de la solution d’acide chlorhydrique utilisé pour la prise d'essai
N : normalité exacte de la solution chlorhydrique
P : poids en gramme de la prise d'essai

III-2-4 Indice de carbonyle

L’indice de carbonyle d’une huile essentielle est le nombre de milligrammes

d’hydroxyde de potassium par gramme d’huile essentielle nécessaire à la neutralisation de

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l’acide chlorhydrique libéré dans la réaction d’oximation avec le chlorure

d’hydroxylammonium.
La fonction carbonyle se transforme en oxime selon la réaction suivante :

H3N OH , Cl NH2 OH + HCl

R
R1 C R + H N OH C N OH
2
R1
O
Protocole expérimental :
Introduire au moyen d’une éprouvette 25 mL de la solution de chlorure d’hydroxylammonium
dans le récipient contenant la prise d’essai (0,5g d’HE) et laisser reposer 10minutes le temps
spécifié dans la norme relative à l’huile essentielle considérée. Puis titrer avec la solution
d’hydroxyde de potassium jusqu’à ce que la couleur soit identique à celle d’un volume égal de
réactif. Poursuivre l’addition de la solution d’hydroxyde de potassium jusqu’à obtention de la
coloration bleu persistant pendant 5 min.

Expression des résultats

L’indice de carbonyle est exprimé en milligrammes d’hydroxyde de potassium par gramme
d’huile essentielle, est donné par la formule (f) :

V
Ic =56,1 C (f)
m

Dans laquelle :
V : volume en mL de la solution d’hydroxyde de potassium utilisé pour la détermination
m : masse en g de la prise d’essai.
C : concentration exacte, en moles par litre, de la solution d’hydroxyde de potassium

III-2-5 Indice d'iode

L'indice d'iode est le nombre de grammes d'iode que peuvent fixer les doubles liaisons
de 100 grammes de substance. Quel que soit le réactif halogène utilisé, le principe est le
même. Les liaisons éthyléniques fixent les halogènes d'après la réaction suivante:

R-CH=CH-R' + X2 R- CHX-CHX-R'

X = Cl, Br, I

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Cette réaction d'addition peut être utilisée pour déterminer quantitativement l'insaturation
globale des constituants de l’essence. Il est indispensable, pour obtenir une addition
quantitative, d'utiliser un excès de réactif pendant un temps de contact suffisamment long, ou
en présence de catalyseur et de titrer ensuite l'excès de réactif (iode non fixé) par un réducteur
(par exemple, le thiosulfate). On détermine ainsi la quantité d'iode fixé par l’HE.

2Na2S2O3 + I2 2NaI + Na2S2O6

Protocole expérimental :
On introduit 1g d’HE, 20mL de tétrachlorure de carbone (CCI4) et 25mL d’une solution
d’iode (1N) dans un erlenmeyer. Ensuite, la solution est laissée à l’abri de la lumière
pendant 2 heures. Après ce temps, 20 mL d’une solution d’iodure de potassium (KI) à 50% et
20mL d’eau distillée sont ajoutés. Ensuite, l’excès d’iode est titré par une solution de
thiosulfate de sodium (Na2S2O3) 0,1N en présence d’empois d’amidon comme indicateur
coloré. Un essai à blanc a été réalisé dans les mêmes conditions que précédemment.

Expression des résultats

L'indice d'iode est calculé par la formule (g) :

(V0 - V1)
Ii = NT (g)
m

Dans laquelle :
NT : Normalité de la solution de thiosulfate de sodium.
V0 : Volume en mL de la solution de Na2S2O3 utilisée pour l’essai à blanc.
V1 : Volume en mL de la solution de Na2S2O3 utilisée pour la détermination de Ii.
m : Masse en g de la prise d’essai.

III-2-6 Indice de peroxyde

On définit l'indice de peroxyde comme étant le nombre de milliéquivalent d'oxygène par

kilogramme de corps gras et oxydant l’iodure de potassium avec libération d’iode.

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En présence de l'oxygène de l'air, les acides gras insaturés entrant dans la composition des
essences s'oxydent en donnant des peroxydes :

R-CH=CH-COOH + O2 R-CH CH-COOH

Le principe repose sur le traitement d'une prise d'essai, en solution dans l'acide acétique et du
chloroforme, par une solution d’iodure de potassium, puis le titrage de l'iode par une solution
titrée de thiosulfate de sodium. Le dosage des peroxydes formés se fait indirectement en
présence d'iodure de potassium.

2 KI + O2 du peroxide I2 + R-CH=CH-CH2-COOH

Protocole expérimental :
On pèse 2g d’huile dans un flacon de 100mL puis 10 mL de chloroforme sont ajoutés. On
agite pour dissoudre et on ajoute ensuite au mélange 15mL d’acide acétique pur et 1mL
d’une solution d’iodure de potassium saturée.
Après avoir fermé le flacon, on laisse reposer 5 min à l’obscurité et on ajoute 75 mL d’eau
distillée et quelques gouttes d’empois d’amidon. L’iode libéré est titré par la suite avec une
solution de thiosulfate de sodium (Na2S2O3) 0, 01N. Parallèlement, un essai à blanc est réalisé
dans les mêmes conditions.

Expression des résultats

L'indice de peroxyde est donné par la formule (h) :

V0 - V
Ip = X 10 (méq. O2 /kg d'H.E) (h)
P

Dans laquelle :
V : volume de la solution de thiosulfate de sodium utilisé pour l'essai
V0 : volume de la solution de thiosulfate de sodium utilisé pour l'essai à blanc
P : prise d'essai en gramme

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