Exploration du métabolisme

lipidique
 Les lipides circulants
Cholestérol
alimentation, synthèse hépatique
précurseur essentiel des acides biliaires
vitamine D, hormones stéroïdiennes
synthèse des membranes cellulaires
Triglycérides
alimentation, synthèse hépatique, tissu adipeux
forme de transport et stockage de l’énergie lipidique
constituant des membranes cellulaires
Phospholipides
Acides gras libres
Molécules lipidiques insolubles dans le plasma :
association avec des protéines : apoprotéines

lipoprotéines : forme de transport des lipides circulants 2

 Les apolipoprotéines
• 5 classes majeures
– A, B, C, D, E
– avec des sous classes
– AI, AII
– CI, CII, CIII
– B100, B48
– E parfois des isoformes : E2, E3, E4

• Structure parfaitement déterminée

– mutation à l’origine de certaines dyslipémies
Structure des lipoprotéines

4
 Structure des lipoprotéines
• Lipoprotéines : édifices pluri-moléculaires
• Noyau hydrophobe : cholestérol estérifié et
triglycérides
• Couche périphérique hydrophile :
– phospholipides et cholestérol libre
– partie protéique : apoprotéines
• 5 Classes : les lipoprotéines sont réparties en 5
classes différentes suivant leurs caractères
physico-chimiques :
–densité
–charge
 Caractéristiques physico-chimiques des
lipoprotéines plasmatiques

• Densité (ultra centrifugation)

croissante: Chylomicrons-VLDL-LDL-HDL
• Charge (électrophorèse)
- Chylo : pas de migration
- VLDL: préβ
- LDL : β (βlipoprotéines)
- HDL : α (αlipoprotéines)
 Structure des HDL

Surface Monolayer of
Phospholipids and Free
apoA-I Cholesterol

apoA-II
Hydrophobic Core
of Triglyceride and
Cholesteryl Esters

Rye KA et al. Atherosclerosis 1999;145:227-238.

 Structure des LDL
Surface Monolayer
of Phospholipids and
Free Cholesterol

apoB

Hydrophobic Core
of Triglyceride and
Cholesteryl Esters

Murphy HC et al. Biochemistry 2000;39:9763-970.

 Les 2 courants du cholestérol dans
l’organisme
VLDL IDL LDL

Afflux

CHYLO
Cellule
Efflux

HDL
Théorie lipidique de l’athérosclérose

Anomalie qualitative ou quantitative du récepteur

Augmentation durée de vie des LDL

Oxydation des LDL par les radicaux libres

Reconnaissance des LDL par les macrophages

Dépôt intra macrophagique de CE

Transformation des macrophages en cellules spumeuses

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Formation de la plaque d’athérome (d’après Jonasson et coll.)
Exploration du métabolisme lipidique
 Mode de prélèvement sanguin destiné au bilan lipidique

Réalisé après une nuit de jeûne (idéalement 12 h – 9 h

minimum)

Habitudes alimentaires conservées lors des 2 semaines

qui précèdent le prélèvement

Prise d’alcool à éviter la veille (cause

d’hypertriglycéridémie)

Différer le prélèvement en cas de maladie en phase aiguë

Après IDM / AVC, perturbation du métabolisme des
lipoprotéines pendant la période de convalescence
 Paramètres lipidiques
• 1- Dosage du cholestérol total

• 2- Dosage HDL

• 3-Dosage LDL

• 4-Dosage des Triglycérides

• 5- Dosage des apolipoprotéines A1 et B100

 Dosage du cholestérol total :
Test colorimétrique enzymatique

•Ester de cholestérol + H2O Cholestérol estérase Cholestérol + AG

Cholestérol oxydase 4- cholesténone + H2O2
•Cholestérol + O2

•2H2O2 + amino-4 phénazone + phénol peroxydase Dérivé coloré + 4H2O

Intensité de la coloration mesurée

par photométrie proportionnelle à la
concentration en cholestérol
Interférences :

1
Bili conjugué > 250 mg/l

Bili NC > 100 mg/l
2
Hémolyse
3
TG > 25 g/l
 Méthodes de dosage du cholestérol
Méthodes colorimétriques
 la réaction de Liebermann Burchard qui se
traduit par le developpement d’une coloration
verte lorsque le cholestérol est mis en présence
d’anhydrique acétique et d’acide sulfurique

 la réaction de Zak dans laquelle, le cholestérol, en

présence d’acide acétique, de perchlorure
ferrique et d’acide sulfurique, développe une
coloration rouge.
Dosage HDL

Test colorimétrique enzymatique en phase homogène : Procédé Kyowa

α-cyclodextrine MgCl2
Chylomicrons, VLDL, LDL

Complexes solubles insensibles à R2

HDL

Cholestérol estérase
Cholestérol oxydase
PEG modifiés
4-aminoantipyrine
Péroxydase

DOSAGE COLORIMETRIQUE
Dosage HDL (suite)

Dosage par précipitation :

1) Dosage du HDL :
- Sérum + sulfate de dextran + Mgcl2 => précipitation des LDL et VLDL
- HDL dans le surnageant dosé par méthode enzymatique

2) Dosage du HDL3 :
- Le surnageant traité par sulfate de dextran + chlorure de mg à C ↗
précipitation des HDL2
HDL3 dans le surnageant

HDL2 = HDL – HDL3

Dosage HDL (suite) : Les interférences

Triglycéride > 3,5 mmol/l (gêne la précipitation correcte des LDL

et LDL)
perturbe le dosage des HDL

Augmentation des HDL:

- Activité physique régulière, aliments riches en AG
insaturés, consommation modérée OH
- Œstrogène, antihistaminique

Diminution des HDL :

-Tabac
-Androgène, bêtabloquant, alphaméthyldopa
Dosage LDL

Calculé à partir de la formule de Friedewald si TG < 3,4 g/L (3,75 mmol/l) :
LDL- cholestérol (g/l) = cholestérol total (g/l) – HDL cholestérol (g/l) – Triglycérides (g/l)
5
LDL-cholestérol (mmol/l) = cholestérol total (mmo/l) – HDL – cholestérol (mmo/l) – Triglycérides (mmo/l)
2,2

Sur tube sec ou tube hépariné (pas EDTA : Valeurs plus faibles)

Test colorimétrique enzymatique en phase homogène

Dérivé glucidique Mgcl2

Interférences : R1
•Hb > 15 g/l
VLDL Chylomicrons
•Bili conj > 660 µmol/l
•Bili non conj > 1100 µmol/l
•Tg > 14 mmol/l Inhibition sélective

HDL R2 HDL insensibles aux

réactions enzymatiques

LDL Ch estérase
Dosage colorimétrique
Ch oxydase
Dosage des Triglycérides

Test colorimétrique enzymatique

LPL
• Triglycérides + 3H2O glycérol + 3RCOOH
Gk
• Glycérol + ATP Mg++ glycérol-3-phosphate + ADP
GPO

• Glycérol-3-phosphate + O2 dihydroxyacétone-phosphate+H2O2
peroxydase
• H2O2 + amino-4 phénazone + chloro-4 phénol (dérivé coloré rouge) + 2H2O + HCL

(toujours s’assurer, en cas d’hyperTGémie franche, que le plasma est opalescent; dans le cas
contraire, il s’agirait d’une hyperglycérolémie et non d’une hyperTGémie)
2.5 Dosage des apolipoprotéines A1 et B100

L’apo A1 estprésente dans les HDL, elle reflète donc la

concentration en lipoprotéines anti-athérogènes

L’apo B100 est présente dans les LDL, VLDL, c’est donc un
marqueur d’athérogenicité.

Dosage par immunoprécipitation en milieu liquide

(néphélémétrie et turbidimétrie).
 Valeurs Normales

Recommandations de l’AFSSAPS (mars 2005)


Bilan de première intention : Cholestérol total, Tg, HDL (LDL calculée par la formule
de Friedewald)

Pour un patient sans FdR, le bilan lipidique est normal si :

- LDL < 1,6 g/l (4,1 mmol/l)

- Tg < 1,55 g/l (1,7 mmol/l)
- HDL > 0,40 g/l (1 mmol/l)

Si valeurs anormales : confirmation indispensable

La répétition d’un BL plus d’une fois tous les 5 ans n’est pas justifié, en absence de
changement alimentaire ou d’interventions médicamenteuses spécifiques, d’un
contexte pathologique CV

La réalisation d’un BL de dépistage pour les plus de 80 ans n’est pas justifié

Les dosages de CRPus, de Lp(a) et Homocystéine ne sont pas justifiées de manière

systématique chez les patients dyslipidémiques asymptomatiques
 Pathologies du métabolisme lipidique

1- Les Hyperlipidémies primitives (génétiques)

1-1 Hypercholestérolémie familiale
1-2 Hyperlipidémie mixte familiale
1-3 Hypertriglycéridémie familiale

2- Les Hyperlipidémies secondaires

1- Les hyperlipidémies primitives

Quelques causes génétiques de dyslipidémie :

3 formes doivent être particulièrement connues en raison de leurs fréquences et de

leur potentiel athérogène :

Maladie Anomalie génétique Fredrickson Risque

Hypercholestéromie Nombre de récepteurs des LDL
familiale fonctionnels IIa Coronaropathie

Hypertriglycéridémie Possible anomalie d’un gène

familiale IV Coronaropathie, PA
unique
Hyperlipidémie mixte Possible anomalie d’un gène
familiale unique IIb Coronaropathie

Déficience en LPL Taux de LPL fonctionnelle I Pancréatite

Déficience en Apo C-II Incapacité de synthétiser l’Apo Pancréatite

C-II I

Incapacité de synthétiser l’Apo B Carences en vitamines

Abétalipoprotéinémie normal liposolubles, déficits
neurologiques
Analphalipoprotéinémie Incapacité de synthétiser l’Apo A normal Déficits neurologiques

Hypolipoprotéinémie
 1- Les hyperlipidémies primitives

Classification de Fredrickson (OMS) des dyslipidémies:

VLDL

Elle se fonde sur l’aspect du plasma à jeun après avoir laissé reposer l’échantillon pendant 12
heures à 4°C et sur l’analyse de sa teneur en cholestérol et Tg.
2 Hyperlipidémies secondaires

-Pathologies :

Insuffisance rénale

Syndrome néphrotique

Cirrhose hépatique

Hyperthyroïdie

Diabète sucré

Alcool

-Médicaments :

Diurétiques thiazidiques

Bêtabloquants

Corticoïdes

Progestatifs
Autres paramètres dans l’athérosclérose

1- CRPus
2- Hyperhomocystéinémie
3- Lp(a)
4- Facteurs génétiques
5- Facteurs infectieux
6- Facteurs prothrombotiques: inhibiteur de
l’activateur du plasminogène
 Lipoprotéine (a)
Découverte par Berg en1963
Lp (a) = LDL + apo (a)
Lp(a) : associée à un athérome prématuré
un facteur de risque indépendant
pas de corrélation avec les autres éléments du bilan lipidique
concentration sérique
stable, peu influençable , génétiquement déterminée
faibles variations intra-individuelle
fortes variations inter-individuelles
(< 10 mg/L  2 – 3 g/L)
 Principales maladies cardiovasculaires

Hypertension Insuffisance Infarctus du Accidents

artérielle cardiaque myocarde Vasculaires
Cérébraux

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 Principaux facteurs de risques cardiovasculaires

Tabagisme Hypertension
Diabète Dyslipidémies
artérielle
 Principaux facteurs prédisposants

1. Obésité

2. Sédentarité

3. Antécédents familliaux

4. Stress

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