Partie Pratique

Une étude descriptive et analytique .

Population de 34 patients diabétiques type 2 inclus les deux sexes.

Criteres d’exclusion

Criteres d’inclusion  Diabete type 1.

 Diabete gestational.
 Diabétiques type 2.  Diabete secondaire

Matériels et Méthodes
Les données étudiées ont été recueillies à l'aide d'une fiche d'exploitation
préétablie et détaillée .

Prélèvement

* ont été effectués au niveau de centre de diabétologie de Bab El Kantara.

* Pour chaque patient 2 tubes ont été prélevés : un tube hépariné pour le dosage
des différents paramètres lipidique : (cholestérol total, TG, HDL cholestérol et le
LDL cholestérol), dosage de GGT et de la glycémie , et un tube EDTA pour le
dosage de l'HbA1c (l'équilibre glycémique).

* Les prélèvement sont acheminés rapidement au laboratoire de biochimie et

hormono (chu Constantine).

* Aprés les prélèvements sur tubes héparinés ont été centrifugés (3000 tours
par minute). pendant 5 minutes, le plasma surnageant a servi pour les dosages.

Matriels

La centrifugeuse utilisée est de type DOMEL Centric 350

L'automate utilisé pour le dosage des paramètres lipidiques est : ADVIA 1800

L'automate utilisé pour le dosage de GGT est : ARCHITECT plus ci8200

Le dosage de l'HbA1c se fait par HPLC sur BIO-RAD D-10

Méthodes de dosage

1 GGT :

La GGT catalyse le transfert du groupe gamma-glytamyl provenant du substrat

donneur( L-gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide) vers l'accepteur
glycylglycine pour former du 3-carboxy-4-nitroaniline.

L'augmentation de l'absorbance à 412 nm (416 nm pour les analyseur c4000 et

c16000) est directement proportionnelle à la concentration en GGT dans
l'échantillon. La procédure GGT est une variante de la méthode décrite par
Theodorsen et coll.

Selon la reaction suivante 

GGT

L-gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide 3-carboxy-4-nitroaniline

2 Le cholestérol total

Les esters de cholestérol sont hydrolyses enzymatiquement par le cholestérol

éstérase qui les décompose en cholestérol et en acides gras libres.
 Cholestérol estérase

Esters de cholestérol + H2O Cholestérol libre + acides

gras

Le cholestérol libre, y compris celui initialement présent, est ensuite oxyde par
le cholestérol oxydase pour former ducholestene-4-one-3 et du peroxyde
d'hydrogène.

Cholestérol oxydase

Cholestérol + O2 Cholest-4-en-3-one + H2O2

Le peroxyde d'hydrogène se combine avec de l'acide hydroxybenzoique(HBA) et

de la 4-aminoantipyrine pour former un chromophore(quinone-imine) quatifié
à 500 nm.

Peroxydase

H2O2+ phenol+4-aminoantipyrine Quinone-imine+2H2O

Valeurs de références : CT<2 g/l

3 Les triglycérides

L'hydrolyse enzymatique des triglycérides est faite par la lipase a fin de libérer
les acides gras et le glycérol.

Lipase

Triglycérides + 3H2O Glycérol + acides gras

Le glycérol est phosphoryle par l'adénosine triphosphate(ATP) et le glycérol

kinase (GK) pour produire du glycérol-3-phosphate et de l'adénosine di
phosphate(ADP).

Le glyérol-3-phosphate est oxydé en dihydroxyacetone phosphate (DAP) par le

glycérol phosphate oxydase (GPO) en produisant du peroxyde
d'hydrogène(H2O2).

Glycérol kinase
Glycérol + ATP glycérol-3-phosphate (G3P) + ADP

G3P oxydase (GPO)

G3P+ O2 dihydroxyacétone phosphate +2H2O2

La quinoneimine est formée à partir de peroxyde d'hydrogène, de 4

aminophénazone et de 4-chlorophénol, sous l'action de la peroxydase ce qui
donne une coloration rouge.

H2O2+ 4-aminophénazone + 4-chlorophénol

quinoneimine + H2O

Accélérateur +CO

Chylomicron-C + VLDL-C + LDL-C + HDL-C Chylomicron-C

+VLD-C + LDL-C + HDL-C non réactifs DSBmT + POD

Détergent spécifique

HDL-C HDL-C solubilisé

CHE + CO

HDL-C solubilisé Cholesténone + acide gras + H2O2

POD

H2O2 + DSBmT + 4-AAP Coloration

Valeurs de références : TG < 1,50 g/l

4 Le HDL-C

Le premier réactif contient un accélérateur de la réaction provoquée par le

cholestérol oxydase (CO) qui réagit avec le cholestérol associé aux
chylomicrons, VLDL et LDL. Le peroxyde d'hydrogène formé réagit ensuite avec
le DSBmT en présence de peroxydase et donne une solution incolore. Dans un
deuxième temps, les HDL sont solubilisées par un détergent spécifique leur
permettant de réagir avec le cholestérol estérase et la cholestérol oxydase. La
présence de péroxydase entraine la coloration de la solution.

Valeur de références : HDL > 0.3 g/l

 5 Cholestérol LDL :

Le LDL a été calculés avec la formule de Friedwald :

LDLc = CT - (HDLc + TG/5)

Cette formule est inapplicable pour des taux deTG < 3.5 g/l .

Valeurs de références : LDL-c < 1.6 g/l .

4.3.6 Hémoglobine glyquée :

Le dosage est totalement automatisé grace à un analyseur D-10, il s'agit d'un

automate de chromatographie liquide haute performance (HPLC).

Valeurs de références : 4 – 6 %