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Pr Olivier Laprévote
olivier.laprevote@parisdescartes.fr
1
Principe de la Spectrométrie de
Masse Faible pression
Introduction Système de
Source d’ions Analyseur Détecteur
de traitement
l’échantillon M → M(+/-) M(+/-) →m/z m/z → I
des données
3 étapes essentielles:
Ionisation de l’échantillon
Analyse des ions formés
Détection du signal
Spectre de Masse
Le spectre de Masse est un graphe en deux dimensions qui
indique les valeurs d’intensité (relatives ou absolues) en
fonction des valeurs de m/z
IA
Intensité
IB
IC
filament ℓℓℓℓℓℓℓℓℓℓℓℓℓℓ 70 V
électrons
+
repousseur + vers
+ l’analyseur
+
+ ions
molécules
V0
anode
(trappe)
Notion de potentiel d’ionisation
Ionisation Chimique (IC)
Première étape: Ionisation d’un gaz réactif (exemple: l’ammoniac):
NH3 + e- → NH3+. + 2 e-
NH3+. + NH3 → NH4+ + NH2.
Lorsque l'on utilise un gaz réactif GH+, la réaction qui se produit avec la molécule M peut s'écrire de la
façon suivante:
M + GH+ → MH+ + G
Les enthalpies de ces deux réactions s'appellent "affinités protoniques" (respectivement du gaz et de la
molécule à analyser); elles correspondent au terme enthalpique de la basicité en phase gazeuse.
Concrètement, on choisira un gaz réactif adapté à la molécule étudiée (de plus faible AP), en général dans
le but de limiter les phénomènes de fragmentation.
Echelle d’affinité protonique
Ionisation par désorption-désolvatation: MALDI
(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionisation)
Mécanisme simplifié :
HO CO2H CH CH CO2H OH
OH N CO2H
4 CH3O OCH3 5 6
OH
NO2
CO2H
N N OH
7 8
OH O OH OH
O(CH2)7CH3
NO2
HO OH
COCH3
12 13 14
MALDI: Préparation de l’échantillon
• méthode « standard » (dried droplet)
MALDI: Structures des principales Matrices
cyano-4-hydroxy
cinnamic acid (HCCA)
Bonne matrice pour les
peptides et les protéines; CH C(CN)COOH
C10H7NO3, m/z 189.04.
HO
FAB (Fast-Atom Bombardment)
LSIMS (Liquid Secondary Ion Mass Spectrometry)
Exemple de spectre de masse FAB
Impureté
Pic de matrice
Electronébulisation (Electrospray)
Lentilles de focalisation
Gaz nébuliseur
Contre-électrode
Cône de Taylor
+
+ ++ +
+ +
+
+ + +
- + + + +
+ +
+ + + +
+
+
Capillaire porté à un
haut potentiel
Gaz rideau
(N2, 80°C)
Exemple de spectre de protéine
10+75
7 7566
11+68
9
9+
842
8+
946
7+
1082
m/z
Source ESI « pepperpot » (Micromass)
8000 V N2
Ion intact
Capillaire Fragment
N+
D transH+
C
N H
H H2N
H
H
H
N+
N H2N
N
N H
H H+
N cisH+
H
H
Effet de stéréochimie:
Andries BRUINS
Naphtalène et sulfure de diphényle: M+.
Andries BRUINS